Кузнецова Метод NASBA
advertisement
Метод NASBA в алгоритме обследований пациентов Ирина А. Кузнецова Специалист по продукции Метод NASBA Более 5 лет в клинической практике Предназначен для выявления только живых микроорганизмов Выявляет возбудителей в количествах недостаточных для проведения альтернативных методов диагностики Принцип метода NASBA – амплификация РНК ПЦР Плазмиды, ДНК рибосомальная РНК – маркер жизнеспособности микроорганизма Хромосома, ДНК 1 копия/клетка NASBA 103-104 копий/клетка 5-20 копий/клетка очень высокая чувствительность метода ПЦР и метод NASBA Сходство с ПЦР: • прямой метод выявления возбудителя; • можно использовать то же самое оборудование; • те же этапы проведения анализа, процедура получения клинического материала • очень высокие чувствительность и специфичность Отличия от ПЦР: • мишень – рибосомальная РНК • выявляются живые возбудители (РНК деградирует при гибели микроорганизма); • аналитическая чувствительность выше чем у ПЦР • контаминационная опасность ниже чем у ПЦР(основной продукт – быстро деградирующая РНК) Выявление методом NASBA целесообразно только для облигатных патогенов Возбудители ИППП, выявление которых является основанием для назначения лечения N.gonorrhoeae C.trachomatis T.vaginalis M.genitalium Основная целевая группа : Пациенты со стертой клинической симптоматикой Спорные диагностические случаи Ранний контроль терапии Беременные женщины Новорожденные дети Подготовка и ведение беременности Экстренная диагностика после незащищенного полового акта РНК очень нестабильна во внешней среде после гибели микроорганизма его РНК быстро деградирует рРНК содержится только в клетках живых микроорганизмов метод NASBA обнаруживает только живых возбудителей ограничения по хранению РНК и высокие требования к условиям работы и квалификации лаборантов (как при работе с ВИЧ и HCV) Применение NASBA-real-time для контроля эрадикации возбудителя Лица после проведенной этиотропной терапии (контроль лечения) ДНК «…» НЕ обнаружена Эрадикация ПЦР – «…»: N.gonorrhoeae C.trachomatis T.vaginalis M.genitalium РНК «…» НЕ обнаружена ≤ 1 недели – не полная элиминация ≥ 1-2 недель – рецидив инфекции ≥ 1-3 мес – рецидив инфекции-? реинфекция-? ДНК «…» обнаружена NASBAисследование РНК «…» обнаружена NASBA и контроль эрадикации микроорганизмов • Если микроорганизмов мало, но они живые (хроническая инфекция, неэффективное лечение) - результат NASBA положительный • В случае гибели микроорганизмов (результат аутосанации или лечения) – результат NASBA - отрицательный даже при избытке ДНК погибших клеток Проблема: расхождение результатов ПЦР с результатами «традиционных» методов • Высокая чувствительность ПЦР → несовпадение с результатами «традиционных методов» • Отсутствие специфических признаков инфекции • Бессимптомное или малосимптомное течение инфекций Как подтверждать/опровергать результаты ПЦР в таких случаях? Применение NASBA-real-time для анализа дискордантных результатов Микроскопия (бак. посев) – «не обнаружено», ПЦР – «обнаружено» Screening Tests To Detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae Infections --- 2002 … Because of the greater sensitivity of NAATs, a NAAT is the only recommended additional test to verify a result from another NAAT… … В связи с высокой чувствительностью МАНК верификацию их результатов следует проводить на основе альтернативных МАНК- тестов… Тесты с аналитической чувствительностью меньшей, чем у метода ПЦР (ПИФ, бак. посев) не корректно использовать для подтверждения его результатов! Анализ несовпадающих результатов МАНК предполагает введение проверочного метода • Аналитическая чувствительность проверочного метода сопоставима с исследуемым методом • Другая мишень для амплификации • Другой принцип амплификации NASBA NASBA-real-time (NASBA в реальном времени) – наиболее современная модификация метода • Результат в течение 4 часов • Опасность контаминации минимальна • Удобство протоколирования результатов NASBA-Real-Time Тест-системы • «АмплиСенс Chlamydia trachomatis РИБОТЕСТ» • «АмплиСенс Neisseria gonorrhoeae РИБОТЕСТ» • «АмплиСенс Mycoplasma genitalium РИБОТЕСТ» • «АмплиСенс Trichomonas vaginalis РИБОТЕСТ» «АмплиСенс Mycoplasma genitalium РИБОТЕСТ» «АмплиСенс Trichomonas vaginalis РИБОТЕСТ» «АмплиСенс Chlamydia trachomatis РИБОТЕСТ» «АмплиСенс Neisseria gonorrhoeae РИБОТЕСТ» Оборудование : ПЦР лаборатория, оснащенная амплификатором Rotor-Gene и инкубатором Спасибо за внимание! Вопросы?
