разработка микробиологического метода снижения
advertisement
ISSN 0202-5493.МАСЛИЧНЫЕ КУЛЬТУРЫ. Научно-технический бюллетень Всероссийского научно-исследовательского института масличных культур. Вып. 2 (151–152), 2012 _____________________________________________ _________________________________________________________________________________ РАЗРАБОТКА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА СНИЖЕНИЯ ВРЕДОНОСНОСТИ ФУЗАРИОЗА НА СОЕ Л.В. Маслиенко, доктор биологических наук Д.А. Курилова, научный сотрудник ГНУ ВНИИМК Россельхозакадемии Россия, 350038, г. Краснодар, ул. Филатова, д. 17 тел.: (861) 275-85-19, e-mail: biometod@yandex.ru Ключевые слова: фузариоз, соя, антагонисты, грибы, бактерии, микробиопрепараты, скрининг, штаммы, ростостимуляция, антибиотическая активность, периодическое культивировоние УДК 632.937:633.853.52 Введение. Соя поражается грибными, бактериальными и вирусными болезнями. В нашей стране особой вредоносностью отличаются болезни всходов и увядания растений, одним из возбудителей которых является Fusarium spp. [1; 2; 3]. На посевах сои фузариоз встречается повсеместно. Согласно литературным данным использование живых культур микроорганизмов в борьбе с фузариозными заболеваниями растений является наиболее интересным подходом. Этот метод микробиозащиты не только менее опасен с точки зрения защиты окружающей среды, но и более обоснован с позиции эволюционного осмысления соотношения паразитических и сапрофитных свойств фузариев. Поскольку грибы рода Fusarium являются почвообитающими факультативными паразитами, способными длительное время вести сапрофитное существование, то интродукция антагонистов должна создавать дополнительное давление в сторону элиминирования агрессивных рас [4; 5]. Стратегия биологического метода защиты растений от болезней не ставит задачу полного уничтожения вредных организмов, а ориентируется на регулирование популяции патогена на уровне ниже экономического порога вредоносности [6]. Грамотное и своевременное применение микробиологических средств защиты растений на фоне высокой агротехники может значительно улучшить фитосанитарную обстановку посевов и значительно увеличить урожай, поскольку микробиологические средства защиты растений оказывают положительное влияние на растения и других членов агроценозов. Целью данной работы являлась разработка эффективного и экологически допустимого микробиологического метода снижения вредоносности фузариоза на сое. Материалы и методы. Объектом исследований служили: штаммы грибов и бактерий-антагонистов возбудителей болезней масличных культур, тест-культура возбудителя фузариоза сои, лабораторные образцы микробиопрепаратов. Грибы и бактерии, проявляющие антагонизм в отношении патогенных фузариозных грибов, были взяты из коллекции микроорганизмов лаборатории биометода ВНИИМК. В качестве тест-объекта для испытания антагонистической активности штаммов грибов и бактерий был выбран наиболее патогенный и агрессивный для сои изолят гриба Fusarium sporotrichiella Bilai var. poae (Pk.) Wr. emend Bilai, выделенный из корневой системы сои. Определение антагонистической активности грибных и бактериальных штаммов проводили методом двойных (встречных) культур [7; 8] на картофельно-сахарозном агаре (КСА) или среде Кинга В, при двух температурных режимах: 25 и 10 оС. Изучали характер взаимоотношений антагониста и патогена: наличие или отсутствие стерильных зон, их размер, изменение цвета, плотности, толщины и направления роста мицелия патогена. Все активные штаммы грибов при совместном культивировании с возбудителем фузариоза изучали по пяти типам взаимоотношений [9]. Взаимоотношения бактерий с возбудителем фузариоза изучали по образованию стерильных зон антибиотического действия или обладающих высоким показателем подвижности [10]. Определение фитотоксичности штаммов проводили методом обработки семян сои опытными партиями микробиопрепаратов и методом погружения подрезанной корневой системы здоровых 7-дневных проростков сои в суспензию штаммов антагонистов. Для изучения ростостимулирующего влияния перспективных штаммов на проростки сои, семена обрабатывали опытными партиями микробиопрепаратов и помещали на проращивание в рулоны из фильтровальной бумаги (в течение 7 дней при температуре 25 оС). Параметрами для последующего анализа служили длина и масса корня и побега. Защитный эффект жидких культур (ЖК) и водных суспензий (ВС) штаммов антагонистов прорастающего семени и подбор оптимальных норм их применения определяли на фоне искусственного заражения семян сои F. sporotrichiella var. poae в лабораторных условиях во влажной камере методом агаровых блоков [11]. Контроль – чистые семена без нанесения инфекции и с нанесением инфекции. Опыт проводился при 25 оС. Активные штаммы антагонистов наращивали на подобранных средах. Перед обработкой семян определяли титр микробиопрепаратов. Титр ЖК и ВС во всех опытах определяли методом Коха [12]. Биологическую эффективность биопрепарата определяли по формуле [13]: C= , где C – биологическая эффективность; a – количество больных растений в контроле; b – количество больных растений в варианте. Для определения колонизирующей активности и защитного эффекта штаммов антагонистов корней проростков сои использовали методические рекомендации по оценке и отбору растений подсолнечника на устойчивость к фузариозной корневой гнили [14]. Оценку степени поражения проростков возбудителем фузариоза производили согласно разработанной нами 6-балльной шкале. Для создания искусственного фона заражения почвы фузариозом в лабораторных условиях на основе общепринятых методик [15; 16] нами были испытаны различные способы и нормы внесения инфекционного начала фитопатогена [17]. Учеты производили на 7 и 10-й день после посева. Изучение физиологических особенностей перспективного штамма антагониста 14-3 Pseudomonas sp. проводили на жидкой питательной среде Кинга В. Культивирование микроорганизма осуществляли глубинным способом на качалке со скоростью вращения 195 об./мин, в колбах Эрленмейера (750 мл) при объеме среды 150 мл. Оптимальные параметры физиологических признаков определяли по количеству колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1,0 мл жидкой культуры (титр). Повторность в каждом опыте – 3-кратная. Для определения оптимальной температуры культивирования, штамм бактерии выращивали при температурах 20, 25, 30 и 35 °С. Для определения оптимальной кислотности среды, pH устанавливали в пределах 3, 5, 6, 7, 8, и 10, добавляя лимонную кислоту или щелочь (4Н раствор NaOH). Устанавливали оптимальные источники углеродного и азотного питания. Источниками углеродного питания служили глюкоза, сахароза, глицерин и меласса. Источниками азотного питания служили азотнокислый натрий, пептон, дрожжевой и кукурузный экстракты. При подборе оптимальных питательных сред для выращивания перспективного штамма бактерии испытывали ряд сложных питательных сред: мясо-пептонный бульон (МПБ), Кинга В, Чапека для бактерий, пептонодрожжевая, в состав которых вхо- дят минеральные соли, сахара, микроэлементы, кукурузный и дрожжевой экстракты. Для изучения динамики периодического роста, глубинное культивирование штамма бактерии осуществляли при оптимальных условиях в течение 4 суток, с предварительным внесением посевной (маточной) культуры (2 % от объема питательной среды). Для выращивания культуры использовали питательную среду Кинга В. Пробы для анализа брали через 8, 16, 24, 36, 48 и 72 часа после начала культивирования. Антибиотическую активность определяли методом диффузии в агар [8]. Определение совместимости штаммовпродуцентов микробиопрепаратов с перспективными пестицидами проводили, используя модифицированный метод диффузии в агар, разработанный для определения антибиотической активности микроорганизмов [18; 19]. Результаты и обсуждения. На первом этапе скрининга тестировали 20 грибных штаммов из коллекции перспективных штаммов антагонистов фитопатогенов масличных культур лаборатории биометода ВНИИМК, представленных родами Trichoderma, Penicillium, Chaetomium, Trichothecium, Sordaria, Talaromyces и классом Basidiomycetes; и 26 бактериальных штаммов, представленных родами Bacillus и Pseudomonas. В результате первичного скрининга штаммов грибов и бактерий антагонистов к возбудителю фузариоза сои F. sporotrichiella var. poae при двух температурных режимах 25 и 10 ºС наибольшую эффективность показали 12 штаммов антагонистов, среди которых 5 штаммов грибов: Tk-1 Trichoderma koningii, T-4 Trichoderma sp., Sm-1 Sordaria macrospora, A-1 Basidiomycetes, Хk-1 Chaetomium olivaceum, и 7 штаммов бактерий: 12-2 Pseudomonas sp., 14-3 Pseudomonas sp., Sgrc-1 P. fluorescens, Far 8 Bacillus sp., 111 Bacillus sp., Б-5 B. liche-niformis, Б-12 B. licheniformis [20]. Следующим этапом скрининга стало исследование возможного токсического воздействия активных штаммов антагонистов на культуру сои. Анализ данных показал, что тестируемые штаммы не оказывают негативного влияния на всхожесть семян и не вызывают увядания проростков. Более того, отмечено повышение всхожести семян по сравнению с контролем на 9,0–20,0 % [21]. Изучение ростостимулирующего влияния перспективных штаммов антагонистов на проростки сои показало, что наиболее сильное влияние штаммы оказывали на длину и массу корня. Максимальное увеличение длины корня (на 22,0–25,2 %) наблюдалось у штаммов грибов Xk-1 Ch. olivaceum, Tk-1 T. koningii. Максимальное увеличение массы корня (на 13,3–20,0 %) наблюдалось в вариантах с грибом Xk-1 Ch. olivaceum и бактериями 12-2 и 14-3 Pseudomonas sp. Влияние штаммов антагонистов на длину и массу стебля также отмечено, но в меньшей степени (2,6–11,5; 8,5–9,8 % соответственно) [21]. Определение защитного эффекта перспективных штаммов антагонистов прорастающего семени сои от фузариоза, а также отработку оптимальных норм расхода опытных образцов биопрепаратов проводили во влажной камере, используя метод агаровых блоков. Для бактериальных штаммов испытывались нормы от 0,5 до 3,0 л/т, для грибных штаммов от 2,0 до 4,0 л/т. Оптимальными были признаны: для бактериальных штаммов рода Pseudomonas 12-2 и Sgrc-1 – 1,0 л/т, для 14-3 – 2,0 л/т; для грибных штаммов Хk-1 Ch. olivaceum и Pv-3 P. verrucosum – 3,0 л/т; для Sm-1 S. macrospora, Tk-1 Tr. koningii и А-1 Basidiomycetes – 4,0 л/т. Максимальная биологическая эффективность на фоне поражения фузариозом в контроле 58,6 % установлена у штаммов: 12-2 Pseudomonas sp. (65,9 %), Хk-1 Ch. olivaceum (59,0 %), 14-3 Pseudomonas sp. (52,2 %), Tk-1 T. koningii (49,8 %), Sm-1 S. macrospora и Sgrc-1 Pseudomonas sp. (47,6 %). Изучение колонизирующей активности, а одновременно и защитного эффекта, показало, что на жестком (100 %) фоне заражения F. sporotrichiella var. poae максимальную эффективность проявили штаммы: 14-3 Pseudomonas sp., Pv-3 P. verru- cosum, Б-5 B. licheniformis, Sgrc-1 P. fluorescens, 12-2 Pseudomonas sp., Sm-1 S. macrospora и Xk-1 Ch. olivaceum. В этих вариантах от 40,0 до 100 % проростков оказались жизнеспособными, тогда как в контрольном варианте жизнеспособных проростков не обнаружено. Максимальная биологическая эффективность на фоне искусственного заражения семян сои фузариозом в почве отмечена у штаммов Xk-1 Ch. olivaceum (33,9 %), Tk-1 T. koningii (27,2 %) и 14-3 Pseudomonas sp. (20,3 %), при поражении в контроле 79,7 % [17]. Принимая во внимание положение о том, что успешный биоагент должен обладать комплексом положительных свойств на растение [22; 23], мы объединили весь спектр данных, полученных по скринингу активных штаммов антагонистов (рис. 1). защиты растений сои от фузариоза были отобраны штаммы Xk-1 Chaetomium olivaceum Cook et Ellis и 14-3 Pseudomonas sp. Данные штаммы не только обеспечивали эффективную защиту семян и проростков сои на жестком фоне искусственного заражения возбудителем фузариоза, но и активно колонизировали корень, одновременно оказывая ростостимулирующее действие на культуру сои. Согласно видовой идентификации штамма 14-3 Pseudomonas sp., проведѐнной в Центре «Биоинженерия» (г. Москва), изолят 14-3 является штаммом вида Pseudomonas chlororaphis. Так как гриб Ch. olivaceum является продуцентом микробиопрепарата Хетомин, разработанного ранее в лаборатории биометода, основная часть дальнейших исследований проводилась по изучению бактериального штамма 14-3 P. chlororaphis. Существенное значение для роста микроорганизмов имеет такой фактор внешней среды, как температура (табл. 1). Таблица 1 Рисунок 1 – Защитный эффект и колонизирующая активность на фоне искусственного заражения Fusarium sporotrichiella var. poae, а также ростостимулирующее действие микробиопрепаратов на основе перспективных штаммов антагонистов при обработке семян сои: – защитный эффект во влажной камере; – колонизирующая активность во влажной камере; – защитный эффект в почве; – ростостимулирующее действие перспективных штаммов антагонистов на проростки сои. В результате анализа полученных экспериментальных данных в качестве продуцентов микробиопрепаратов для Влияние температуры на рост штамма бактерии-антагониста 14-3 P. chlororaphis в процессе периодического культивирования Титр ЖК, КОЕ/мл Штамм маточная культура 14-3 P. chlororaphis 6,2х1010 температура, °С 20 25 30 35 1,4х109 2,9х1012 5,7х1012 2,3х1010 Максимальный титр клеток отмечен при 25 и 30 °С (2,9–5,7 × 1012). Следовательно, данный температурный диапазон является оптимальным для роста штамма 14-3 P. chlororaphis. Одним из важных факторов, определяющих нормальный рост бактерий, является реакция рН среды. При изменении ее в неблагоприятную сторону микроорганизм перестает расти даже в тех случаях, если все остальные условия окружающей среды будут оптимальными [25]. Максимальный титр штамма 14-3 отмечался при рН среды 5,0 (5,3 × 1014), достаточно высокий при рН 6,0–10,0 (от 3,2 × 1012 до 2,1 × 1013) (табл. 2). Лимитирующим оказалось значение реакции среды 3,0, при котором выживали лишь единичные клетки. Следовательно, для штамма 14-3 P. chlororaphis оптимальным является достаточно широкий диапазон реакции среды – 5,0–10,0. высокий титр штамма 14-3 наблюдался при использовании пептона и дрожжевого экстракта (2,1–4,4 × 1012 КОЕ/мл) (табл. 4). Таблица 4 Влияние источников азота на рост штамма бактерии-антагониста 14-3 P. chlororaphis в процессе периодического культивирования Таблица 2 Влияние реакции рН среды на рост штамма бактерии-антагониста 14-3 P. chlororaphis в процессе периодического культивирования Штамм маточная культура Титр ЖК, КОЕ/мл рН 3,0 5,0 6,0 7,0 8,0 10,0 14-3 P. chlo4,7 × 1014 8,0×103 5,3×1014 2,1×1013 6,0×1012 8,4×1012 3,2×1012 roraphis Для определения оптимальных источников углеродного и азотного питания штамм 14-3 P. chlororaphis выращивали при температуре 25,0 °С и рН среды 5,0. Максимальный титр штамма-продуцента отмечен в вариантах с добавлением глюкозы, глицерина и сахарозы (2,8–8,3 × 1012 КОЕ/мл). Также хорошее развитие культура бактерии получила в варианте с мелассой (2,1 × 1010 КОЕ/мл) (табл. 3). Таблица 3 Влияние источников углерода на рост штамма бактерии-антагониста 14-3 P. chlororaphis в процессе периодического культивирования Штамм Титр ЖК, КОЕ/мл источник углерода маточная культура глицерин глюкоза сахароза меласса 14-3 P. chloro- 4,9×1014 raphis 4,0×1014 2,8×1014 8,3×1014 2,1×1012 При испытании источников азота установлено, что добавление кукурузного экстракта в среду приводит к полной гибели клеток. На питательной среде с добавлением азотнокислого натрия отмечен низкий титр штамма (3,5 × 103 КОЕ/мл). Тогда как Штамм маточная культура Титр ЖК, КОЕ/мл источник азота дрожже азотно-вой пептон кислый экснатрий тракт 14-3 P. chloro- 2,9×1014 2,1×1014 4,4×1014 raphis 3,5×105 кукурузный экстракт 0 Определение оптимальных питательных сред для культивирования штамма 14-3 P. chlororaphis проводили на сложных синтетических и органосинтетических средах (табл. 5). Таблица 5 Влияние питательных сред на рост штамма бактерии-антагониста 14-3 P. chlororaphis в процессе периодического культивирования маточная культура Титр ЖК, КОЕ/мл среда Кинга В Чапека для бактерий пептонодрожжевая мясопептонный бульон 14-3 P. chloro- 3,2×1014 3,5×1012 raphis 2,2×1010 4,8×1012 2,9×107 Штамм Максимальный титр отмечен при культивировании бактериального штамма на пептон-дрожжевой и среде Кинга В (3,5– 4,8 × 1012 КОЕ/мл). Также хорошее развитие культура получила на среде Чапека для бактерий (2,2 × 1010 КОЕ/мл). На МПБ был получен низкий титр (2,9 × 107 КОЕ/мл). При этом, принимая во внимание титр маточной культуры (3,2 × 1014 КОЕ/мл) и посевной объем (3,0 мл на 150 мл стерильной питательной среды), можно сделать вывод о том, что бактерии не размножались, а находились в состоянии покоя, сохраняя жизнеспособность. Изучение кинетики роста штамма 14-3 P. chlororaphis показало, что лучшими сроками культивирования данной бактерии являются 36–48 часов. Образцы жидкой культуры биопрепарата в этот период характеризовались высоким титром (1,6– 1,7 × 1013 КОЕ/мл) (табл. 6). Таблица 6 Рост штамма бактерии-антагониста 14-3 P. chlororaphis в процессе периодического культивирования Время культивирования, час 8 16 24 36 48 72 96 Титр жидкой культуры штамма, КОЕ/мл 3,0 × 106 4,2 × 109 7,8 × 1012 1,6 × 1013 1,7 × 1013 1,8 × 1012 4,3 × 1010 Антибиотическую активность штаммапродуцента определяли в зависимости от срока периодического культивирования методом диффузии в агар. Установлено, что максимальная антибиотическая активность штамма 14-3 P. chlororaphis к возбудителю фузариоза сои, которая оказывала стойкое сдерживающее действие на патоген, наблюдалась через 72–96 часов культивирования (табл. 7). Продолжение таблицы 7 1 Контроль 14-3 P. chlororaphis Контроль 14-3 P. chlororaphis Контроль 14-3 P. chlororaphis 2 3 2 4 5 5 6 6 7 6 6 8 6 9 6 10 6 2 3 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 2 3 4 6 5 6 5 5 6 6 5 6 5 6 5 6 2 4 4 5 5 5 5 5 48 72 96 Примечание: 2 балла – рост мицелия патогена на 15,0–25,0 % площади питательной среды; 3 балла – рост мицелия патогена на 30,0–40,0 % площади питательной среды; 4 балла – рост мицелия патогена на 45,0–60,0 % площади питательной среды; 5 баллов – рост мицелия патогена на 65,0–80,0 % площади питательной среды; 6 баллов – рост мицелия патогена на 85,0–100,0 % площади питательной среды. Таким образом, для штамма 14-3 P. chlororaphis установлены оптимальные условия (t – 25–30 оС, рН – 5–10) и сроки культивирования (с учетом синтеза максимальной концентрации антибиотических веществ) – 72 часа. Для установления возможности совместного применения грибного штамма Xk-1 Ch. olivaceum и бактериального штамма 14-3 P. chlororaphis определяли их совместимость методом встречных культур (рис. 2). Таблица 7 Антибиотическая активность штамма бактерии-антагониста 14-3 P. chlororaphis к возбудителю фузариоза F. sporotrichiella var. poae при периодическом культивировании Вариант 1 Контроль 14-3 P. chlororaphis Контроль 14-3 P. chlororaphis Контроль 14-3 P. chlororaphis Контроль 14-3 P. chlororaphis Срок культивирования штамма, час 2 Срок выращивания Fusarium sporotrichiella var. poae, сут. рост мицелия патогена, балл 2 3 4 5 6 7 10 15 3 4 5 6 7 8 9 10 2 5 6 6 6 6 6 6 8 2 2 6 5 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 2 2 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 2 2 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 3 6 6 6 6 6 6 6 16 24 36 Рисунок 2 – Совместимость перспективных штаммов-продуцентов микробиопрепаратов на 10 сутки инкубации: а – штамм 14-3 P. chlororaphis; б – штамм Xk-1 Ch. olivaceum. На 7-е сутки инкубации наблюдалась явная антагонистическая активность штамма 14-3 P. chlororaphis по отношению к штамму Хk-1 Ch. olivaceum, которая выражалась в образовании антибиотической зоны (14 мм), тогда как в чистой культуре гриб занял всю площадь питательной среды чашки Петри. На 10-е сутки совместного культивирования расстояние между штаммами сократилось до 8 мм, однако вблизи зоны мицелий штамма Xk-1 был тонкий, паутинистый, плодовые тела отсутствовали. На 14-е сутки инкубации изменений не произошло. Таким образом, нами установлено, что штаммы Xk-1 и 14-3 несовместимы между собой, что исключает их совместное применение. Следующим этапом исследований стало определение совместимости разработанных лабораторных образцов микробиопрепаратов и химических фунгицидов, разрешѐнных к применению на сое, с целью определения возможности их совместного применения в интегрированной системе защиты сои от комплекса болезней. Установлено, что штамм 14-3 P. chlororaphis совместим со всеми фунгицидами, рекомендуемыми в настоящее время для обработки семян сои: ТМТД, ВСК (тирам, 400 г/л), Максим, КС (флудиоксонил, 25 г/л), Фундазол, СП, (беномил, 500 г/кг). Это делает возможным его применение в сложных композиционных составах для обработки семян сои. Грибной штамм Xk-1 Ch. olivaceum оказался совместим только с ТМТД, ВСК (тирам, 400 г/л), который оказывал на него незначительное ингибирующее действие. Такие препараты, как Максим, КС (флудиоксонил, 25 г/л) и Фундазол, СП, (беномил, 500 г/кг) существенно задерживали рост гриба, что исключает их совместное применение [26]. Выводы. По итогам ступенчатого скрининга отобраны перспективные штаммы-продуценты микробиопрепаратов: Хк-1 Ch. olivaceum и 14-3 P. chlororaphis, обеспечивающие эффективную защиту семян и проростков сои на жѐстком фоне искусственного заражения фузариозом во влажной камере и в почве, активно колонизирующие корень, одновременно оказывающие стимулирующее влияние на культуру сои. Для штамма 14-3 P. chlororaphis установлены оптимальные условия (температура 25,0–30,0 оС, рН 5–10) и сроки культивирования (с учетом синтеза максимальной концентрации антибиотических веществ) – 72 часа, элементы питания (источники углерода – глюкоза, глицерин, сахароза и меласса; источники азота – пептон и дрожжевой экстракт), питательные среды (пептон-дрожжевая и Кинга В). При изучении совместимости лабораторных образцов микробиопрепаратов и химических фунгицидов была определена возможность их совместного применения в интегрированной системе защиты сои от комплекса болезней (14-3 P. chlororaphis – с ТМТД, ВСК, Максим, КС, Фундазол, СП; Хк-1 Chaetomium olivaceum – с ТМТД, ВСК). Совместное же применение штаммов Xk-1 и 14-3 не представляется возможным. Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РФФИ № 09-08-00726-а и программы У.М.Н.И.К., государственный контракт №14046. Список литературы 1. Соя / Под ред. Ю.П. Мякушко, В. Ф. Баранова. – М: Колос, 1984. – 332 с. 2. Подкина, Д.В. Использование комбинированных инфекционных фонов при оценке устойчивости сои к корневой гнили / Д.В. Подкина, И.А. Котлярова // Научн.-техн. бюл. ВНИИМК. – Краснодар, 1988. – № 3. – С. 25–27. 3. Заостровных, В.И. Вредные организмы сои и система фитосанитарной оптимизации еѐ посевов / В.И. Заостровных, Л.К. Дубовицкая (под ред. В.А. Чулкиной). – Новосибирск, 2003. – 528 с. 4. Ван дер Планк, Я.Е. Устойчивость растений к болезням / Я.Е. Ван дер Планк. – М.: Колос, 1972. – 255 с. 5. Калько, Г.В. Биологическое обоснование создания биопрепаратов, эффективных в отношении фузариозных заболеваний сельскохозяйственных культур / Галина Валентиновна Калько // Автореф. дис. … канд. биол. наук. – СПб, 1996. – 22 с. 6. Cook, R.J. The nature and practice of biological control of plant pathogens / R.J. Cook, K.F. Baker // St. Paul (Minn.): Amer. Phytopathol. SoCh. – 1983. – 539 р. 7. Егоров, Н.С. Выделение микробовантагонистов и биологические методы учета их антибиотической активности / Н.С. Егоров. – М.: Изд-во Московского университета, 1957. – 79 с. 8. Егоров, Н.С. Основы учения об антибиотиках / Н.С. Егоров. – М.: Изд-во МГУ; Наука, 2004. – 528 с. 9. Пестинская, Т.В. О взаимоотношениях грибов обитающих в почве / Т.В. Пестинская // Ботан. журн. – 1958. – Т. 43, № 9. – С. 1270–1277. 10. Асатурова, А.М. Скрининг штаммов бактерий, проявляющих антагонизм к возбудителям фузариоза подсолнечника / А.М. Асатурова, Л.В. Маслиенко // Болезни и вредители масличных культур (сб. науч. работ ВНИИМК). – Краснодар, 2006. – С. 82–89. 11. Зайчук, В.Ф. Об устойчивости подсолнечника к гнилям / В.Ф. Зайчук // Масличные культуры. – М., 1983. – № 1. – С. 16–17. 12. Практикум по микробиологии / Ф.И. Нетрусов, М.А. Егорова, Л.М. Захарчук [и др.]. – М.: Издательский центр «Академия», 2005. – 608 с. 13. Груздев Г.С. Практикум по химической защите / Г.С. Груздев– М.: Колос, 1983. – 230 с. 14. Антонова, Т.С. Методические рекомендации по оценке и отбору растений подсолнечника на устойчивость к фузариозной корневой гнили, вызываемой Fusarium sporotrichiella var. sporotri- chioides Sherb / Т.С. Антонова, С.Л. Саукова. – Краснодар: ВНИИМК, 2005. – 20 с. 15. Подкина, Д.В. Вопросы защиты сои от болезней и вредителей и создание устойчивых сортов / Д.В. Подкина // Науч.-техн. бюл. ВАСХНИЛ. – Новосибирск, 1987. – № 29. – С. 16–20. 16. Корнейчук, Н.С. Методические аспекты оценки однолетних кормовых люпинов на устойчивость к фузариозу и антракнозу / Н.С. Корнейчук // Тезисы докладов. – Минск, 1991. – С. 222. 17. Курилова, Д.А. Создание искусственного фона заражения почвы в лабораторных условиях для определения эффективности перспективных штаммов антагонистов возбудителей фузариоза сои / Д.А. Курилова // Сборник материалов 6-й Международной конференции молодых учѐных и специалистов «Инновационные направления исследований в селекции и технологии возделывания масличных культур» (24–25 февраля 2011 г.) – Краснодар, 2011. – С. 153–157. 18. Егоров, Н.С. Выделение микробовантагонистов и биологические методы учета их антибиотической активности / Н.С. Егоров. – М.: Изд-во МГУ, 1957. – 79 с. 19. Маслиенко, Л.В. Биологический метод защиты подсолнечника и других сельскохозяйственных культур от болезней / Л.В. Маслиенко // Агро ХХI. – 1999. – № 8. – С. 9. 20. Маслиенко, Л.В. Первичный скрининг штаммов грибов и бактерий антагонистов к возбудителю фузариоза сои / Л.В. Маслиенко, Д.А. Курилова, А.М. Асатурова, Е.Ю. Шипиевская // Масличные культуры: Науч.-техн. бюл. ВНИИМК. – Краснодар, 2009. – Вып. 1 (140). – С. 114–119. 21. Маслиенко, Л.В. Влияние лабораторных образцов биопрепаратов на основе перспективных штаммов антагонистов фитопатогенов на проростки сои / Л.В. Маслиенко, Д.А. Курилова, А.М. Асатурова, Е.Ю. Шипиевская // Масличные культуры: Науч.-техн. бюл. ВНИИМК. – ISSN 0202-5493.МАСЛИЧНЫЕ КУЛЬТУРЫ. Научно-технический бюллетень Всероссийского научно-исследовательского института масличных культур. Вып. 2 (151–152), 2012 _____________________________________________ _________________________________________________________________________________ Краснодар, 2010. – Вып. 1 (142–143). – С. 104–108. 22. Боронин, А.М. Ризосферные бактерии рода Pseudomonas, способствующие росту и развитию растений / А.М. Боронин // Соросовский образовательный журнал. – 1998. – № 10. – С. 25–31. 23. Биопрепараты в защите растений / М.В. Штерншис, Ф.С. Джалилов, И.В. Андреева [и др.]. – Новосибирск: АгроЛит, 2003. – 140 с. 24. Свешникова, Е.В. Новые бактерии рода Pseudomonas – антагонисты фитопатогенов и перспективы их использования в сельскохозяйственной практике / Елена Витальевна Свешникова // Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Уфа, 2003. – 22 с. 25. Ваксман, З.А. Антагонизм микробов и антибиотические вещества / З.А. Ваксман. – М.: Гос. изд-во иностр. лит., 1947. – 391 с. 26. Маслиенко, Л.В. Влияние микробиопрепаратов на основе перспективных штаммов антагонистов возбудителей фузариоза на культуру сои в полевых условиях / Л.В. Маслиенко, Д.А. Курилова, Е.Ю. Шипиевская, В.Л. Махонин // Масличные культуры: Науч.-техн. бюл. ВНИИМК. – Краснодар, 2011. – Вып. 2 (148–149). – С. 145–148.
