C.glabrata

Клинико-диагностические проблемы
при урогенитальных кандидозах и
задачи современных лабораторных
методов
Иванова Т. А., Гущин А.Е., Шипулина О.Ю.,
ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Москва
1
Кандидоз
• микотическая инфекция, вызываемая
дрожжеподобными грибами рода
Candida.
• преимущественно эндогенная
инфекция.
• высокая частота выделения Candida у
новорожденных (до 58%).
2
Кандидозы: клинические формы
• Кандидоз кожи и слизистых оболочек
(поверхностный кандидоз – слизистые оболочки
полости рта и гениталий)
40-50% в структуре инфекционной патологии
нижнего отдела гениталий.
(Шевченко Е.А.,2007)
• Глубокий кандидоз – оппортунистические
глубокие микозы (пищеварительного тракта,
дыхательных путей, мочевыводящих путей и
почек, диссеминированный кандидоз)…
код МКБ-10: B37.
3
Кандидозы слизистых оболочек гениталий
Вагинальный
Кандидоз (B37.3)
Кандидозный
баланит/баланопостит (B37.4)
(у 20% партнеров, больных ВК)
4
Кандидозы слизистых оболочек гениталий
• Заболеваемость за последние 20 лет резко
возросла
• В США 75% женщин – один эпизод, 50% женщин повторно.
• Распространенность вагинального кандидоза и
носительства – 10-20%
• У беременных частота ВВК возрастает до 30-40%
Сергеев А.Ю., 2001
5
Кандиды –многообразие видов
Частые
Редкие
С.albicans
C.tropicalis
C.parapsilosis
C.glabrata
C.krusei
C.kefir
C.guilliermondii
C.lusitaniae
Единичные
случаи
C.catenulata
и др.
6
Факторы, способствующие развитию кандидоза
• Беременность;
• Использование гормональных
средств контрацепции
(препараты с высоким
содержанием эстрогенов) и
спермицидов;
• Лечение антибиотиками;
• Сахарный диабет.
Группа
(количество)
Беременные, III
триместр
Частота
Candida sp.
28.7%
(90)
Профосмотр
8.9%
(180)
Пациентки КВД
первичные (213)
12.2%
7
дата
29
.3
27
.3
25
.3
23
.3
21
.3
19
.3
17
.3
15
.3
13
.3
11
.3
9.
3
7.
3
5.
3
Концентрация, lg
Лечение антибиотиками
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
Bact
Lacto
Gv
Av
Can
Распределение видов Candida у женщин с ВВК и
здоровых женщин
Женщины с ВВК
Здоровые
женщины
Вид
Candida albicans
не-albicans виды
%
70-90%
10-30%
Вид
Candida albicans
не-albicans виды
%
9-30%
2-50%
Савичева А.М., 2009
Распределение не-albicans видов Candida у
женщин с ВВК
Вид
%
C.glabrata
15-35%
C.krusei
1-26%
C. tropicalis
5-27%
C. parapsilosis
1-14%
Анкирская А. С., 2006
Мирзабалаева А.К, 2007
Прилепская В.Н.,2010
Частота выявления штаммов, чувствительных к
антимикотикам
С.а.
C.g.
C.k.
C.p.
C.t.
Флуцитозин
97.3
98.0
0
90.5
95.5
Амфотерицин В
100
100
100
100
100
Миконазол
92.9
70.0
28.1
90.5
50.0
Кетоконазол
80.4
74.0
53.1
90.5
68.2
Итраконазол
84.8
24.0
31.3
81.0
54.6
Флуконазол
92.0
76.0
15.6
100
63.6
Анкирская А. С., 2006
Частота выявления дрожжеподобных грибов,
чувствительных к 6 антимикотикам одновременно
Вид
%
С.albicans
48-96%
C.glabrata
0-36%
C.krusei
0-25%
C.parapsilosis
60-100%
C.tropicalis
0-100%
Анкирская А. С., 2006
Чувствительность отдельных видов к
антимикотикам
Виды
Полиеновые
Азоловые
Другие
Амфотерицин
В
Флу
коназол
Итра
коназол
Кето
коназол
5фторурацил
S
I
I
S
S
S-DD
R
S
S
S-DD
S-DD-R
S
S
S
S
S
I-R
S
S
S
S
S
S
C.albicans
C.glabrata
C.krusei
C.parapsil
osis
C.tropicali
s
S-чувствительные; DD-ДЗЧ; I – недостаточно данных; R - устойчивые
Савичева А.М.,2009
«Необходимо проводить видовую или хотя
бы ориентировочную идентификацию до
начала лечения»
Сергеев А.Ю.,2008
Совершенствование лабораторной диагностики:
• Единый способ исследования (любой
клинический материал, дифференциальная
диагностика с другими инфекциями)
• Увеличение чувствительности и специфичности
• Возможность количественной оценки результата
• Дифференциация видов
• Снижение себестоимости
• Быстрота исполнения
15
Микроскопия в диагностике ВВК
• псевдомицелий не имеет
общей оболочки и
перегородок.
• некоторые non-albicans
разновидности не
формируют pseudohyphae
или hyphae и не
распознаются при
световой микроскопии.
• аналитическая
чувствительнсть световой
микроскопии –
105 – 106 МК/мл
16
Культуральная диагностика
• длительный срок
исследования
• сложный процесс видовой
дифференцировки
• отсутствие рутинных
стандартных методик для
определения резистентности к
антимикотикам
• дорогостоящий метод
• метод рекомендован для
диагностики инвазивных
микозов (системное лечение)
Савичева А.М.,2009
…количественные исследования делают культуральный метод
надежной опорой в диагностике кандидоза
(Реброва Р.Н.,1989)
17
ПЦР-диагностика
• «Целесообразность применения современных,
неколичественных модификаций ПЦР в диагностике ВВК
невелика» (Сергеев А. Ю.,2000)
• Выявление С.spp
некорректные результаты (Candida широко
распространены в окружающей среде)
• Выявление С.albicans
низкая чувствительность (пропускает
не-albicans)
• Высокая чувствительность метода
выявление клинически
незначимых концентраций
Необходимо выявлять только клинически значимые виды
Candida в количественном формате
АмплиСенс Candida albicans/Candida
glabrata./Candida crusei - МУЛЬТИПРАЙМ-FRT
МУЛЬТИПРАЙМ
в режиме реального времени
C.albicans
C.glabrata
C.crusei
Fam C.a.
Joe
C.g.
STI
Rox C.k.
Cy5 STI
АмплиСенс C.albicans/C.glabrata./C.crusei - МУЛЬТИПРАЙМ-FRT
20
Аналитические характеристики
• Аналитическая чувствительность – не менее
500 ГЭ/мл образца
• Аналитическая специфичность - не выявляет Candida
других видов, а также другие виды облигатных и
условных патогенов
• Чувствительность – 89.6% (относительно посева)
• Специфичность – 96.8%
• Линейный диапазон 103-107 ГЭ/мл
21
Чувствительность микроскопии при различных
концентрациях возбудителя в образцах
Концентрация
(ГЭ/мл)
МС с окраской по
Граму
МС с окраской по
Р-Г
<103
103-104
104-105
105-106
>106
0%
20%
50%
71%
80%
0%
15%
20%
33%
83%
Чувствительность и специфичность методов в
сравнении с посевом
• ПЦР VS Посев
 Чувствительность 89,6% *
 Специфичность 96,8%
• Микроскопия VS Посев
 Чувствительность 83,8%
 Специфичность 91,4%
*включая клинически незначимые концентрации; разные заборы материала
Диагностичечкая чувствительность
67 женщин с клиническим диагнозом «вульвовагинальный кандидоз» (ВВК)
Посев:
97% pos
Микроскопия:
80.5% pos
ПЦР:
92.5% pos
? Качество забора
материала
? Candida
parapsilosis/tropicalis
Заключение
Современный вариант ПЦР в реальном времени с
количественной оценкой возбудителя позволяет:
• выявлять и дифференцировать основные виды Candida,
имеющие клиническое значение
• проводить количественную оценку возбудителя в образце
• определять наличие возбудителя с высокой
чувствительностью и специфичностью
• сокращать временные и материальные затраты на
исследование за счет тестов в формате мультипрайм
Спасибо за внимание!