Видовой состав и биологические свойства грибов рода Candida

БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
2. Кокряков, В.Н. Очерки о врождённом иммунитете / В.Н. Ко
кряков. СПб.: Наука, 2006. 261 с.
3. Бухарин, О.В. Антимикробный белок тромбоцитов / О.В. Бу
харин, В.А. Черешнев, К.Г. Сулейманов. Екатеринбург,
2000. 200 с.
4. Effects of chicken intestinal antimicrobial peptides on humoral
immunity of chickens and antibody titres after vaccination with
infectious bursal disease virus vaccine in chicken / Yurong Y.,
Yibao J., Ruiping S. et al. // Z. Arch. Anim. Nutr. 2006. No.
60(5). Р. 427–435.
5. Бухарин, О.В. Природа и биологическая роль тромбоци
тарного катионного белка / О.В. Бухарин, К.Г. Сулейманов
// Успехи современной биологии. 1997. № 3. С. 10–15.
чески синтезированных гомологов этих соедине
ний. Последние могли бы найти применение в
медицине и ветеринарии не только в качестве
антимикробных средств, но и в качестве имму
номодулирующих и даже химиотерапевтических
препаратов.
Литература
1. Jenssen, H. Peptide antimicrobial agents / H. Jenssen, P. Hamill,
R.E.W. Hancock // Clinical Microbiology Reviews. 2006. Vol.
19. No 3. P. 491–511.
Видовой состав и биологические свойства
грибов рода Candida, выделенных из разных
биотопов тела человека
О.А. Капустина, Оренбургский ГАУ; Л.Е. Логачева, Орен
бургская ЦРБ; О. Л. Карташова, д.биол.н., Институт
клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН
Грибы рода Candida являются уникальными
микроорганизмами, имеющими огромный диа
пазон адаптационных возможностей, позволяю
щих им существовать как в различных биотопах
организма хозяина, так и во внешней среде.
Кроме того, грибы рода Candida регистрируются
как этиопатогены при различных местных и ге
нерализованных процессах [7]. Несмотря на то,
что грибам и вызываемым ими инфекциям по
священо большое количество работ, весьма про
тиворечивы сведения о биологических свойствах
изолятов, выделенных из разных биотопов орга
низма человека при патологии.
В настоящее время обоснована настоятельная
необходимость проведения постоянных исследо
ваний этиологической структуры микозов и рас
пространение устойчивости среди их возбудите
лей к антимикотикам [5]. Все вышеизложенное
и определило цель нашей работы – изучение
видового состава и биологических свойств гри
бов рода Candida, выделенных из разных биото
пов тела человека.
Материалы и методы. Материалом для иссле
дования послужили 127 штаммов дрожжеподоб
ных грибов рода Candida, полученных из лабора
тории дисбиозов ИКиВС УрО РАН и бактерио
логической лаборатории ЦРБ Оренбургского
района. 31 штамм выделен из фекалий лиц с
дисбиозом кишечника, 47 штаммов из мокроты
при воспалительных заболеваниях верхних и
нижних дыхательных путей, 49 штаммов из реп
родуктивного тракта женщин при воспалитель
ных заболеваниях. Выделение и идентификацию
грибов проводили по Р.Н. Ребровой [6]. Для ха
рактеристики биологических свойств у выделен
ных микроорганизмов определяли способность
к инактивации лизоцима (АЛА) по методике
О.В. Бухарина с соавтором [3], антиоксидант
ную активность [9], фосфолипазную активность
[2], гемолитическую, каталазную и протеолити
ческую активности по М.О. Биргеру [1]. Чув
ствительность к флуконазолу, итраконазолу,
кетоконазолу, амфотерицину В, нистатину, клот
римазолу определяли методом диффузии в агар с
помощью бумажных дисков. Достоверность по
лученных различий оценивали с помощью кри
терия Стьюдента.
Результаты исследований. Первоначально был
изучен видовой состав выделенных микроорга
низмов (рис. 1).
Оказалось, что наиболее часто из всех биото
пов выделялась C. albicans, которая регистриро
валась в кишечнике в 69,4% случаев, репродук
тивном тракте – в 75% и дыхательной системе –
в 88% случаев; C. glabrata выделяли в 5,5; 18,8;
6,0% случаев соответственно; C. tropicalis и
C. kefyr выделяли только из кишечника (в 13,9 и
8,3% соответственно) и дыхательной системы
(2,0% и 4,0% соответственно); тогда как C. krusei
– из кишечника (2,9%) и репродуктивного трак
та (6,2%).
Изучение факторов патогенности у выделен
ных штаммов грибов показало отсутствие у них
гемолитической и протеолитической активнос
ти, а фосфолипазная активность была характер
на лишь для 49,0% штаммов C. albicans.
Впервые в данной работе у дрожжеподобных
грибов рода Candida определена антиоксидант
ная активность (способность инактивировать
свободные радикалы), которая обусловлена на
личием в клетке таких ферментов, как каталаза,
супероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза и
других, обеспечивающих её защиту от свободно
радикальных реакций. Все исследуемые штам
мы продуцировали каталазу и обладали антиок
сидантной активностью (АОА), причем наибо
179
БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
1 00
90
80
70
60
% 50
40
30
20
10
0
киш е ч ник
C. a lbic a ns
ре про д у ктив ный тра кт
C. g la bra ta
C. k e fy r
C. k rus e i
д ых а те л ь на я с ис те м а
C. tro pic a lis
Рис. 1 – Видовой состав грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов тела человека
100
90
80
70
60
% 50
40
30
20
10
0
Флуконазол
C .krusei
Интраконазол
C .glabrata
C .tropicalis и C .
С. kefyr
Кетоконазол
Амфотерицин В
C .albicans
Нистатин
Клотримазол
Рис. 2 – Чувствительность грибов рода Candida к антимикотикам
лее высоким уровнем данного признака характе
ризовались штаммы C. glabrata (1,61±0,225 ед.
кв.), значения АОА у С. albicans составили
1,24±0,067 ед. кв., C. tropicalis – 1,11±0,195 ед.
кв., у С. kefyr и C. krusei – 0,91±0,001 ед. кв. и
0,96±0,121 ед. кв. соответственно.
На следующем этапе работы у грибов рода
Candida была определена антилизоцимная ак
тивность. Проведенные исследования показали,
что способность инактивировать лизоцим хо
зяина регистрировалась в 100% случаев, при
этом высокие значения признака отмечены у
C. glabrata (1,49±0,031 мкг/мл . ОП), минималь
ные – у С. albicans (0,45±0,018 мкг/мл . ОП), для
С. kefyr, C. tropicalis, C. krusei были характерны
следующие средние значения АЛА: 0,59±
0,067 мкг/мл . ОП, 0,76±0,018 мкг/мл . ОП,
0,77±0,090 мкг/мл . ОП соответственно. Таким
образом, уровень антилизоцимной активности
микроорганизмов нарастал в ряду: С. albicans <
С. kefyr < C. krusei < C. tropicalis < C. glabrata.
Данные о распространенности и выраженно
сти антилизоцимной активности у разных видов
грибов рода Candida свидетельствуют, что спо
собность к инактивации лизоцима широко пред
ставлена среди микроорганизмов данного рода.
При изучении чувствительности дрожжепо
добных грибов Candida к противогрибковым пре
паратам были получены следующие результаты
(рис. 2): у штаммов C. tropicalis и C. kefyr в 100%
случаев отмечена чувствительность к нистатину
и клотримазолу, в 67% – к кетоконазолу, в 33%
к флуконазолу и резистентность к итраконазолу
и амфотерицину В. Штаммы С. albicans проявля
ли наибольшую чувствительность к нистатину
(в 94% случаев), клотримазолу (77%), кетокона
золу (74%) и были менее чувствительны к амфо
терицину В, флуконазолу и итраконазолу (54;
45 и 33% соответственно). Штаммы C. krusei
были чувствительны только к клотримазолу,
штаммы C. glabrata – к нистатину и клотримазо
лу и резистентны к остальным изученным пре
паратам.
Результаты проведенных исследований по
казали, что наиболее распространенным и
присутствующим во всех исследуемых биотопах
180
БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
оказался вид C. albicans, частота выделения
которого составила более 65%, а также вид
C. glabrata, который наиболее часто (18,8%)
выделялся из репродуктивного тракта женщин.
Наряду с данными микроорганизмами выделяли
также C. tropicalis, C. kefyr, C. krusei.
Изучение у выделенных видов грибов рода
Candida факторов патогенности (гемолитическая,
протеолитическая, фосфолипазная активности)
показало, что только C. albicans в 49% случаев
обладала фосфолипазной активностью. С высо
кой внеклеточной фосфолипазной активностью
связывают повреждение мембран клеток макро
организма. Напротив, антиоксидантной актив
ностью и способностью к инактивации лизоци
ма характеризовались все изученные виды гри
бов, при этом максимальное значение признаков
отмечено у C. glabrata.
Следует предположить, данные свойства спо
собствуют выживанию микроорганизма в орга
низме хозяина, поскольку у этого вида не суще
ствует гифальной формы, являющейся важней
шим фактором патогенности. Полученные дан
ные подтверждают результаты других авторов,
показавших, что у дрожжеподобных грибов рода
Candida в 100% случаев регистрируется АЛА, а
ее выраженность зависит от вида микроорганиз
ма [4]. Сообщается также об антиоксидантной
активности экстрактов мицелия у некоторых
ксилотрофных базидиомицетов [8], тогда как у
грибов рода Candida данный признак определен
нами впервые.
Изучение чувствительности к антимикотичес
ким препаратам показало, что Candida non
albicans в 100% случаев были чувствительны к
клотримазолу, C. glabrata, C. tropicalis, C. kefyr –
нистатину и в 100% случаев резистентны к итра
коназолу и амфотерицину В. Природную резис
тентность некоторых представителей грибов рода
Candida, в частности, C. krusei и C. glabrata, от
мечает Н.В. Дмитриева [5]. Среди штаммов
C. albicans не обнаружено абсолютно резистент
ных к изученным препаратам культур.
Проведенный мониторинг этиологической
структуры изученных заболеваний и распрост
ранения устойчивости грибов рода Candida к
антимикотикам имеет не только теоретическое
значение, связанное с изучением биологических
свойств этих микроорганизмов, выделенных из
разных биотопов тела человека, но и несомнен
ную значимость для практических врачей.
Литература
1. Биргер, М.О. Справочник по микробиологическим и виру
сологическим методам исследования / М.О. Биргер. М.:
Медицина, 1982. 455 с.
2. Богомолова, Т.С. Морфобиологические свойства и пато
генность Candida albicans / Т.С. Богомолова. Ленинград,
1990. 25 с.
3. Бухарин, О.В. Антилизоцимный тест как маркер персис
тенции микроорганизмов / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов //
Теоретическая и прикладная иммунология: тезисы докла
дов I Всесоюзной конференции. М., 1982. С. 87–88.
4. Валышев, А.В. Факторы персистенции дрожжеподобных
грибов рода Candida / А.В. Валышев [и др.] // Успехи ме
дицинской микологии: сб. ст. Т. 1. М.: Национальная ака
демия микологии, 2003. С. 53.
5. Дмитриева, Н.В. Кандидозные инфекции у онкологичес
ких и онкогематологических больных / Н.В. Дмитриева //
Антибиотики и химиотерапия. 2007. № 4/5. С. 43–48.
6. Реброва, Р.Н. Грибы рода Candida при заболеваниях
негрибковой этиологии / Р.Н. Реброва. М.: Медицина,
1989. 182 с.
7. Сергеев, А.Ю. Кандидоз. Природа инфекции, механизмы
агрессии и защиты, лабораторная диагностика, клиника и
лечение / А.Ю. Сергеев, Ю.В. Сергеев. М.: ТриадаХ, 2001.
472 с.
8. Шишкина, Л.Н. Антиоксидантная активность липидов
ксилотрофных базидиомицетов / Л.Н. Шишкина, А.Н.
Капич // Успехи медицинской микологии: сб. ст. Т. 7. М.:
Национальная академия микологии, 2006. С. 262–263.
9. Яшин, А.Я. Методика выполнения измерений антиокси
дантной активности БАД, напитков, экстрактов растений
/ А.Я. Яшин [и др.]. М., 2004. 5 с.
Влияние микроорганизмов с разным уровнем
экспрессии факторов патогенности на активность
антиоксидантных ферментов эритроцитов
Е. А. Щуплова
Щуплова,ê.áèîë.í., Б. Я. Усвяцов
Усвяцов, ä.ìåä.í., ïðîôåññîð,
Èíñòèòóò êëåòî÷íîãî è âíóòðèêëåòî÷íîãî ñèìáèîçà ÓðÎ ÐÀÍ;
С . И. Красиков
Икрянникова,
Красиков, ä.ìåä.í., ïðîôåññîð, С . В. Икрянникова
ê.áèîë.í., Îðåíáóðãñêàÿ ÃÌÀ
Супероксиддисмутаза (СОД) и каталаза яв
ляются внутриклеточными антиоксидантами и
играют важную роль в защите гемоглобина и
мембраны эритроцита от повреждающего дей
ствия активных форм кислорода (АФК) [1].
Ранее показано, что одним из механизмов
антигемоглобинового действия микроорганиз
мов является усиление под их влиянием процес
сов окислительной деградации гемоглобина [2].
Вместе с тем состояние систем, ответственных
за устойчивость гемоглобина к такой деграда
ции, в частности ферментов антиокислительной
защиты (СОД и каталаза), изучено недостаточно
полно.
В связи с этим целью работы явилось изуче
ние действия факторов патогенности S.epidermidis
и E.coli на антиоксидантную систему эритроци
тов (СОД и каталазу) при экспериментальной
инфекции.
181