Набор реагентов для иммуноферментного определения

Набор реагентов для иммуноферментного определения антител класса IgG
к вирусу простого герпеса 1 типа в сыворотке крови
(ИммуноФА-IgG-ВПГ1)
Номер по каталогу ИФ-20-02
Набор ИммуноФА-IgG-ВПГ1 предназначен для качественного и
полуколичественного определения наличия видоспецифических IgG-антител к
вирусу простого герпеса 1 типа в сыворотке крови человека методом
иммуноферментного анализа на стрипованных полистироловых планшетах.
В природе распространены два
варианта вируса простого герпеса,
которые
имеют
различные биологические и
эпидемиологические
характеристики. У людей оба типа вируса вызывают инфекционные заболевания
разной степени остроты - от характерных высыпаний на коже и слизистых до
энцефалитов. Вирус простого герпеса 1 типа инфицирует слизистые глаз, рта и
места перехода эпидермиса в эпителий слизистой оболочки на лице, а также
является одной из наиболее распространенных причин острых неэпидемических
энцефалитов у взрослых. Вирусом простого герпеса 1 типа инфицировано 70-85%
населения. Специфические IgG-антитела обычно появляются через две-три
недели после первичного заражения. У пациентов с рецидивирующим
заболеванием часто не обнаруживается увеличение концентрации IgG-антител.
Быстрая и точная диагностика герпетической инфекции необходима,
чтобы уточнить этиологию, оценить динамику заболевания и гарантировать
своевременное назначение селективной антивирусной химиотерапии с целью
ограничения распространения инфекции.
Принцип метода – непрямой двухстадийный ИФА
Е
Е
Е
Е
Е
Иммобилизованный
антиген
Анализируемый
образец
Иммобилизованные
иммунокомплексы
Конъюгат
вторичных
антител с
пероксидазой
S
Е
Иммобилизованные
иммунокомплексы
с мечеными
антителами
Р
Субстратная
реакция
СХЕМА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА
1. Подготовка исследуемых образцов: по 10 мкл каждого образца смешать с 1 мл РРС
(разведение 1+100), тщательно перемешать пипетированием.
1. Внесение в лунки планшета: по 0,1 мл положительной, пороговой и
отрицательной контрольных сывороток, подготовленных образцов исследуемых
сывороток крови и инкубация (30 мин, +37оС).
2. Промывка лунок планшета.
3. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл конъюгата и инкубация (30 мин, +37оС).
4. Промывка лунок планшета.
5. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл раствора субстрата и инкубация (15 мин,
37оС).
6. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл стоп-реагента.
7. Измерение оптической плотности (=450 нм), интерпретация результатов.
ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
Чувствительность набора относительно ОСО 42-28-373-04 (утверждена ГИСК им.
Л.А. Тарасевича), а также относительно набора SERION ELISA classic Herpes
Simplex Virus 1 IgG (фирма Virion\Serion GmbH) составляет 100%.
Специфичность набора относительно ОСО 42-28-373-04 (утверждена ГИСК им. Л.А.
Тарасевича), а также относительно набора SERION ELISA classic Herpes Simplex
Virus 1 IgG (фирма Virion\Serion GmbH) составляет 100%.
Предварительное разведение: по 10 мкл каждого образца смешать с 1 мл РРС
(раствор для разведения сывороток) (разведение 1:100).
Интерпретация результатов:
Качественная оценка результатов. При качественной оценке результат анализа
исследуемых образцов следует считать:
положительным при ОП выше 1,1х ОПпор (исследуемый образец содержит IgG к
ВПГ-1),
отрицательным при ОП ниже 0,9х ОПпор (исследуемый образец не содержит IgG к
ВПГ-1).
Результаты при ОП в диапазоне 0,9хОПпор – 1,1хОПпор являются сомнительными, в
этом случае необходимо провести повторное исследование вновь полученных
сывороток.
Полуколичественная оценка результатов основана на определении титра антител в
исследуемых положительных образцах сыворотки крови. При полуколичественной
оценке результатов на бланке с полулогарифмической системой координат отложить
значения титров К+ (указан на этикетке флакона) и Кпор (1:100) по оси абсцисс, а
соответствующие им значения оптических плотностей – по оси ординат. Соединить
две точки прямой линией. Титр исследуемого образца найти, отложив на полученной
прямой значение оптической плотности и опустив перпендикуляр на ось абсцисс.
Длина волны измерения: 450 нм.
Субстрат: 3,3`,5,5`-тетраметилбензидин (ТМБ).
Условия инкубации (время, tоС):
- 1-ая инкубация 30 мин при +37оС;
- 2-ая инкубация 30 мин при +37оС;
- инкубация с ТМБ 15 мин при +37оС.
Время проведения анализа: 1 час 20 минут.
Объем пробы: 100 мкл.
Количество анализируемой сыворотки: 10 мкл (для анализа сыворотка разводится в
101 раз и анализируется 100 мкл разведенной сыворотки).
Количество анализов: набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая
контрольные образцы.
Планшеты: стрипованные, разделяющиеся на отдельные лунки.
Срок годности набора: 12 месяцев.
Все реагенты набора представлены в жидком виде.