Клинико-диагностическое значение и методики определения общих липидов и фосфолипидов в сыворотке крови
advertisement
Пятигорский филиал федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации Реферат на тему: «Клинико-диагностическое значение и методики определения общих липидов и фосфолипидов в сыворотке крови» Подготовила студентка Пятигорского медико-фармацевтического института Специальности медицинская биохимия 5 курса 2 группы Григорьянц Полина Гургеновна Пятигорск 2020 г. Содержание ВВЕДЕНИЕ ................................................................................................ 3 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ ............................................. 4 .1 Характеристика параметров липидного обмена ......................... 4 1.2 Обмен липидов .................................................................................. 8 1.3 Общая характеристика липопротеидов .................................... 10 1.4 Определение «нормальных» значений липидов сыворотки крови ....................................................................................................... 11 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ............................................................. 14 2.1 Преаналитическая стадия исследования липидного обмена 15 2.2 Аналитическая стадия при лабораторном исследовании липидов ................................................................................................... 16 2.3 Определение показателей общего холестерина ....................... 16 2.4 Определение содержания триглицеридов ................................. 17 2.5 Определение содержания липопротеидов высокой плотности .................................................................................................................. 18 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ ........................................ 19 ЗАКЛЮЧЕНИЕ ....................................................................................... 20 СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ ................................ 21 ВВЕДЕНИЕ Изучение состава и характера метаболизма липидов занимает значительное место в современной биохимии. Такое внимание к вопросу обмена липидов связано с их участием во многих физиологических процессах протекающих в клетках и тканях организма. Многочисленными клиническими и эпидемиологическими исследованиями установлено, что повышение уровня холестерина в крови - один из основных факторов риска атеросклероза и ишемической болезни сердца (ИБС). Согласно меморандуму ВОЗ, ведущим фактором патогенеза атеросклероза являются нарушения (генетически детерминированные и приобретённые) метаболизма липопротеинов (ЛП). При этом наиболее ярким интегральным индикатором этих нарушений служат дислипопротеинемии (ДЛП). Те или иные варианты дисбаланса липопротеинового спектра крови свидетельствуют о различной степени риска формирования атеросклероза у конкретного больного. Однако, в любом случае, выявление и детальный анализ (фенотипирование) ДЛП, наряду с изучением других параметров ЛП, составляет основу лабораторной диагностики ранних стадий атеросклеростического поражения. Более того, как показывает опыт ведущих стран Европы и США, профилактика атеросклероза и обусловленной им сердечно - сосудистой патологии должна быть направлена именно на коррекцию нарушения обмена ЛП. Таким образом, изучение показателей липидного обмена имеет исключительное диагностическое значение при оценке факторов риска развития атеросклероза и сердечно-сосудистой патологии у пациентов разных возрастных групп, в том числе и при диспансерных обследованиях. 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ 1.1 Характеристика параметров липидного обмена Слово «холестерин» в переводе с греческого означает «твёрдая желчь» (холе - желчь, «стерос» - твёрдый). В чистом виде холестерин впервые был выведен в 1789 году французским врачом и аптекарем Фуркруа из желчных камней. Оказалось, что камни, образующиеся в желчном пузыре из - за нарушения его работы вследствие увеличения слишком жирной пищей, состоят в основном из твёрдого воскоподобного вещества жёлтого цвета, жирного на ощупь. Это вещество и есть холестерин. Только в 1929 году французский учёный Машбеф во Франции установил, что холестерин и другие липиды крови жироподобные вещества (фосфолипиды) и жиры (триглицериды), действительно нерастворимые в воде, соединяются в печени с белковыми компонентами (протеинами) и образуют комплексы липопротеины (или липопротеиды), которые хорошо смешиваются с кровью. Кровь транспортирует холестерин и другие липиды в составе липопротеидов во все органы и ткани. За это открытие Машбеф был удостоен звания лауреата Нобелевской премии.Он выделил из лошадиной плазмы методом многократного высаливания сложный белок, содержащий 59% белка и 41% липидов. Проведённые почти сорок лет спустя исследования показали, что сложный белок Мабефа представляет собой не что иное, как один из классов плазменных (ЛП), а именно липопротеиды высокой плотности (ЛПВП), уровень, которого в крови лошади особенно высок. Со времени выделения белка Машбефа, первого плазменного ЛП, прошёл более чем полувековой период. В течение этого времени знания о ЛП далеко продвинулись вперёд, а в последние два десятилетия пополнились фундаментальными открытиями, как в области структуры, их синтеза, метаболических превращений и взаимодействия ЛП частиц с клетками, так и функции этого класса соединений Липиды представляют собой обширную неоднородную группу соединений, существенно различающихся по своей химической структуре и выполняемым функциям. Поэтому трудно дать единое определение, которое подошло бы для всех соединений, относящихся к этому классу. Недаром в одном из руководств по биохимии говорится, что «все определения, данные классу соединений, называемому липидами, были либо беспредельно сложными, либо полностью запутанными». Поэтому, не пытаясь дать общее определение термину «липиды», отметим, что они представляют группу веществ, которые характеризуются следующими признаками: природными органическими соединениями (жиры и жироподобные вещества); нерастворимостью в воде, поэтому они транспортируются в крови в ассоциации с белками; растворимостью в неполярных растворителях, таких как эфир, бензол, хлороформ или ацетон; содержанием в своём составе высших алкильных радикалов; распространённостью в живых организмах, жирные кислоты в крови ассоциированы с альбумином, другие липиды транспортируются в составе липопротеидов. Под это определение попадает большое количество веществ, в том числе и такие, которые обычно причисляются к другим классам соединений, например, жирорастворимые витамины и их производные, каротиноиды, высшие углеводороды и спирты. Включение всех этих веществ в число липидов в известной степени оправдано, потому что в живых организмах они находятся вместе с липидами растворителями. и вместе с ними экстрагируются неполярными С другой стороны, имеются представители липидов, которые довольно хорошо растворяются в воде (например, лизолецитины) и по этому признаку не подходят под определение «липиды». Термин «липиды» является более общим, чем термин «липоиды», объединяющий группу жироподобных веществ, таких как фосфолипиды (ФЛ), стерины, сфинголипиды и воски. Липиды разделяются на 2 группы по принципу гидролитического расщепления. Первая группа - это липиды, которые не подвергаются гидролизу и к ним относят некоторые углероды, например, сквален и каротиноиды, высшие альдегиды, кетоны и хитоны (витамины группы К), жирные кислоты (ЖК) и простагландины (ПГ). Во вторую группу включены липиды, гидролиз которых приводит к «освобождению» двух и более индивидуальных соединений. В эту группу входят в основном вещества, содержащие сложноэфирную и /или амидную связь, а также связь типа простого эфира ацеталя или полуацеталя. Это - воски, эфиры стеринов, в том числе холестерина (ХЛ), и многоатомных спиртов (например, глицериды, ФЛ, включая сфингомиелины), гликолипиды, серусодержащие липиды и липиды, имеющие в своём составе аминокислоты. В зависимости от химического состава липиды подразделяются на несколько классов. Если оставить в стороне ряд соединений, которые по отдельным признакам подходят к определению «липиды» или являются их предшественниками (например, жирные кислоты) или производными (например, простагландины), то можно использовать следующую классификацию липидов, основанную на их структурных особенностях: глицериды; воски; фосфолипиды: гликосфинголипиды, сфингомиелины; гликолипиды (гликосфинголипиды): цереброзиды, ганглиозиды; другие сложные липиды (сульфолипиды, аминолипиды); стерины и их эфиры с жирными кислотами. Различают простые, липиды, представляющие собой эфиры жирных кислот и спиртов, и сложные липиды, характеризующиеся наличием дополнительных компонентов. Выделяют также группу нейтральных липидов. Это - не несущие электрического заряда глицериды, воски и эфиры стеринов Простые липиды включают вещества, молекулы которых состоят только из остатков сложных эфиров жирных кислот (или альдегидов) и спиртов. К простым липидам относятся глицериды и воски. Сюда же можно условно отнести и эфиры стеринов с жирными кислотами. Жирные углеводородные кислоты (ЖК) цепи, которые СН3(СН2)пСООоканчиваются представляют карбоксильной собой группой. Нумерация углеродных атомов в жирно - кислотной цепи начинается с атома углерода карбоксильной группы. Важной характеристикой ЖК является длина углеводородной цепи. Из адипоцитов человека выделено 52 ЖК, включая короткоцепочечные (n, число атомов углерода=2-4), средние (n=5-12) и длинноцепочечные (n=13-20). В природе обнаружено свыше 200 ЖК, однако в тканях человека и животных в составе простых и сложных липидов найдено около 70 ЖК, причём половина из них в минорных или следовых количествах. Практическое значение имеет немного более 20 ЖК. Все они содержат чётное число углеродных атомов, главным образом от 12 до 24. Жирные кислоты свободные, или неэтерифицированные - основной поставщик энергии в организме. В крови человека присутствуют также насыщенные, мононенасыщенные и полиненасыщенные жирные кислоты. Насыщенные жирные кислоты, когда соединение не содержат двойных связей (все атомы углерода насыщены атомами водорода) и оказывают атерогенное действие: СН3 - СН2 - СН2 - СН2 СООН Жирные кислоты могут быть ненасыщенными, когда не все атомы углерода насыщены водородом, в результате в структуре молекулы образуется одна (мононенасыщенная кислота) или несколько двойных связей (полиненасыщенная жирная кислота) и обладают антиатерогенным действием: СН3 - СН = СН - СН2 - СН = CН СООН 1.2 Обмен липидов Жир является важной составной частью пищи. Он служит источником энергии, содержит незаменимые ЖК, является носителем жирорастворимых витаминов. Кроме того, пищевой жир придаёт пище вкус и обеспечивает чувство сытости в процессе её переедания. В организм взрослого человека с пищей ежесуточно поступает 60 - 80 г жиров (ТГ) животного и растительного происхождения. Из этого количества подавляющая часть (более 85%) подвергается расщеплению в желудочно кишечном тракте. В пожилом возрасте, а также при малой физической нагрузке потребность в жирах снижается. В условиях холодного климата при тяжёлой физической работе потребность в жирах у человека повышается. В полости рта ТГ не подвергаются никаким изменениям, так как слюна не содержит расщепляющих жиры ферментов. С желудочным соком выделяется липаза, однако её роль в гидролизе пищевых ТГ у взрослого человека невелика. Расщепление жиров, входящих в состав пищи, происходит у человека преимущественно в верхних отделах тонкого кишка, под действием липазы панкреатического сока. Панкреатическая липаза, как и другие пищеварительные ферменты (пепсин, трипсин, химотрипсин), поступает в верхний отдел тонкой кишки в виде неактивной пролипазы. Превращение пролипазы в активную липазу происходит при участии желчных кислот и ещё одного белка панкреатического сока - колипазы. Липаза действует на эмульгированные жиры. Наиболее мощным эмульгирующим действием на жиры, обладают соли желчных кислот, попадающие в двенадцатиперстную кишку с желчью в виде конъюгатов с глицином или таурином (гликохолевая, таурохолевая и другие кислоты). В двенадцатиперстную кишку вместе с пищевой кашицей заносится небольшое количество желудочного сока, содержащего соляную кислоту, которая нейтрализуется в основном бикарбонатами, содержащимися в панкреатическом соке и желчи. Одновременно начинается эмульгирование жира (ТГ), в результате чего резко увеличивается поверхность жиров, что облегчает взаимодействие их с липазой, т. е. ускоряет ферментативный гидролиз. Основная масса липидов пищи представлена ТГ, меньше ФЛ и стероидами. Липаза, воздействуя на ТГ пищи, расщепляет их на бета - моноглицерид, глицерин и ЖК и используется стенкой кишечника и на ресинтез ТГ. Подавляющая часть ФЛ содержимого тонкой кишки приходится на фосфатидилхолин (лецетин), основная масса которого поступает в кишечник с желчью (11 - 12 г/сут) и меньшая (1 - 2 г/сут) - с пищей. Расщепление ФЛ происходит при участии ферментов: фосфалипаз. ФЛ гидролизируются на составные компоненты: спирт, ЖК, азотистое основание и фосфорную кислоту, которые в таком виде могут поступать в стенку кишечника. Таким образом, продукты расщепления пищевых жиров, образовавшиеся в полости кишечника и поступившиеся в его стенку, снова используются для ресинтеза жиров. Биологический смысл этого процесса сводится к тому, что в стенке кишечника синтезируются жиры, более специфичные для данного вида животного и отличающиеся от пищевого жира. Смесь всосавшихся и ресинтезированных в стенке кишечника липидов поступает в лимфатическую систему, а затем через грудной лимфатический проток в кровь и с током крови распределяется в организме. ТГ, ФЛ, ХС практически не растворимы в воде, в связи, с чем они не могут транспортироваться кровью или лимфой в виде одиночных молекул. Перенос всех этих соединений осуществляется в виде особым образом организованных надмолекулярных агрегатов - липопротеидных комплексов или просто липопротеидов. В транспорте экзогенных липидов, т. е. липидов, поступающих во внутреннюю среду организма из кишечника. Принимают участие главным образом хиломикроны (ХМ) и липопротеиды очень низкой плотности (ЛПОНП). Благодаря большим размерам, хиломикроны неспособны проникать в кровеносные капилляры Они диффундируют в лимфатическую систему кишечника, а из неё через грудной лимфатический проток в кровяное русло, т. е. с их помощью осуществляется транспорт экзогенных ТГ, ХС и частично ФЛ в печень и жировую ткань. В клетки жировой ткани ХМ не способны проникать, в связи с чем, ТГ гидролизуются на поверхности эндотелия капилляров жировой ткани при участии фермента липопротеинлипазы (ЛПЛ). ЛПЛ расщепляет ТГ до ЖК и МГ. ЛПЛ способна гидролизовать триглицериды ЛПОНП. ХМ, потеряв большую часть ТГ, под действием ЛПВ превращаются в ремнантные ХМ. В лимфе, а особенно в крови, пре - ХМ при взаимодействии с ЛПВП обогащаются апопротеинамиС и превращаются в зрелые хиломикроны. 1.3 Общая характеристика липопротеидов Исходя из современных представлений, само понятие «липопротеиды» («липопротеины») можно определить следующим образом: липопротеиды - это высокомолекулярные водорастворимые частицы, представляющие собой комплекс белков и липидов, образованных нековалентными связями, в котором белки совместно с полярными липидами формируют поверхностный гидрофильный слой, который окружает и защищает внутреннюю гидрофобную липидную сферу от водной среды и обеспечивает транспорт липидов в кровяном русле и доставку их в органы и ткани. Одним из признаков ЛП является наличие в них наружного гидрофильного белково - липидного слоя и липидной гидрофобной сферы (ядра). Липиды играют важную роль в процессах жизнедеятельности. Будучи одним из основных компонентов биологических мембран, липиды влияют на проницаемость клеточных мембран по отношению к ионам и органическим соединениям, служат предшественниками стероидов, с выраженным биологическим воздействием: желчных кислот, витаминов группы D, половых гормонов, гормонов коры надпочечников. Липиды участвуют в передаче нервного импульса и создании межклеточных контактов, а также в процессах терморегуляции, предохранении жизненно важных органов от механических воздействий, потери белка, в создании эластичности кожных покровов, защите от избыточного удаления влаги. ЛП плазмы крови являются уникальной транспортной формой липидов в организме человека и животных. Они осуществляют транспорт липидов, как пищевого происхождения, так и заново синтезированных в печени и стенке тонкой кишки (т. е. эндогенного происхождения) в систему циркуляции и далее к месту утилизации или депонировании. Известно, что отдельные ЛП осуществляют «захват» избыточного ХС из клеток периферических тканей и его «обратный» транспорт в печень для окисления в желчные кислоты и выведения с желчью. ЛП осуществляют транспорт жирорастворимых витаминов, гормонов, соединений обладающих в отношении липидов антиоксидатной активностью. Основными липидами, транспортируемыми в токе крови в составе липопротеидных комплексов, являются ТГ, НЭХ, ЭХС, ФЛ и небольшое количество НЭЖК. 1.4 Определение «нормальных» значений липидов сыворотки крови При рождении концентрация холестерина в сыворотки крови очень низкая - ниже 2,6 ммоль/л, ХС - ЛПВП - меньше 1,0 ммоль/л. Затем уровень общего холестерина с возрастом повышается, до 55 лет концентрация ХС обычно у мужчин выше, после 55 лет - у женщин. Для установления гиперлипидемии необходимы чёткие биохимические критерии. В настоящее время существуют два подхода к этому вопросу. Долгие годы нормальный уровень ХС и ТГ сыворотки крови, а также ХС - ЛПНП и ЛПВП устанавливали по результатам эпидемиологических исследований. Для каждой популяции определяли свои критерии нормы показателей липидного обмена в зависимости от 5 - 10% минимальных и максимальных значений при Гауссовом распределении. Гиперлипидемией в этом случае считали, такую концентрацию ХС и ТГ, которая превышала 90 или 95% отрезную точку в соответствии с полом и возрастом. Именно эти критерии значения нормы положены в основу классификации ГЛП, предложенной Фредриксоном и соавт. и после некоторых дополнений принятой ВОЗ. При таком определении критериев «нормы» верхняя граница нормальных значений для общего ХС составляет 6,50 ммоль/л. Однако исследования показали, что риск ИБС увеличивается при уровне общего ХС выше 5,20 ммоль/л. Таким образом, фактически «нормальные» значения перекрываются с уровнем холестерина, способствующего развитию атеросклероза. Учитывая, накопленные данные о взаимосвязи повышенного уровня ХС и риска ИБС была предложена классификация ГЛП. Нарушение липидного обмена (дислипидемия), в первую очередь повышенное содержание в крови ХС, ТГ и атерогенных ЛП являются важнейшим фактором риска атеросклероза и патогенетически связанных с ним заболеваний сердечно - сосудистой системы (инфаркта миокарда, хронических форм ИБС, мозгового инсульта, облитерирующего атеросклероза артерий нижних конечностей и др.). Содержание общего ХС ниже 5,20 ммоль/л считается оптимальным или, точнее, “желательным” уровнем (таб. № 1). Содержание общего ХС значительно повышается при атерогенных типах гиперлипопротеинемии (ГЛП) 2а, 2б, 3 типов при ДЛП 1, 4 и 5 типов увеличения уровня ХС менее выражено Следует подчеркнуть, что для липидов существенное значение имеют «индивидуальные нормы», ориентировка на которые часто более значима, чем сопоставление с референтными значениями, выделенными для популяции. Отчасти это связано с тем, что достаточно много физиологических факторов влияет на базальный уровень липидов в организме. Гиперхолестеринемия (ГХС) - наиболее документированный фактор коронарного атеросклероза и риска ИБС. Другими факторами риска являются гипертензия, курение, сахарный диабет, ожирение, наследственная предрасположенность и др. Многочисленными клиническими и эпидемиологическими исследованиями установлено, что повышение уровня холестерина (ХС) в крови является одним из основных факторов риска атеросклероза. Это патологическое состояние связано с нарушениями в стенках крупных сосудов - аорты или крупных артерий, вызываемых избыточным накоплением в них ХС. 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Исследования проводились на базе Медикосанитарной части поликлиники УФСБ России по Камчатскому краю г. Петропавловска - Камчатского. Обследовали 68 человек - 33 женщины (49,2%) и 36 мужчин (53,7%). Было сформировано 2 возрастные группы: от 35 до 50 лет - 16 женщин и 18 мужчин, от 50 до 60 лет - 17 женщин и 18 мужчин. Все пациенты долгое время проживали на Камчатке (более 20 лет). Все пациенты находились на обследовании и лечение в поликлинике, не имели сопутствующих заболеваний, таких как заболевания печени, почек, гипотиреоз ожирение, при которых также нарушен обмен липидов. Исследование производили с развёрнутой липидограммой определения общего ХС, ТГ, ХС - ЛПНП, ХС - ЛПВП стандартными наборами реагентов фирмы ООО «Ольвекс диагностикум». Концентрацию ХС - ЛПОНП и коэффициента атерогенности определяли расчётным способом. Сыворотка крови, полученная методом центрифугирования, исследовалась визуально и химически. Внешний вид сыворотки. Оценка внешнего вида сыворотки крови позволяет ориентировочно определить содержание в ней ТГ. Если сыворотка крови прозрачная, уровень триглицеридов не превышает 2,2 ммоль/л. Выраженная опалесценция сыворотки крови характерна для гипертриглицеридемии порядка 3 - 6 ммоль/л, которая уже не прозрачная. Наличие хиломикрон в крови можно выявить при проведении «теста стояния»: на основании появления «крема» на поверхности сыворотки при стоянии в течение 16 часов при температуре + 40 С. Это часто связано с тем, проба взята не натощак. 2.1 Преаналитическая стадия исследования липидного обмена Взятие крови для определения показателей липидного обмена проводят после 12 - 16 ч. голодания. Концентрация ХС в крови не меняется до и после приёма пищи, однако выраженная опалесценция сыворотки крови, обусловленная наличием хиломикронов и ЛПОНП, может мешать определению. Желательно, чтобы в течение по мере двух недель до взятия крови, пациент не менял привычного питания. Накануне нельзя принимать алкоголь, это частая причина гипертриглицеридемии, даже после продолжительного голодания. На уровень липидов крови может оказывать положение пациента при взятии крови (сидя, стоя, лёжа), длительность и интенсивность перетягивания руки жгутом при взятии крови из вены. Пробы крови нужно брать в одном положении пациентов (лучше сидя) и не допускается стаз крови (>1 мин пережимать сосуды). Для определения ХС и ТГ можно использовать сыворотку или плазму крови, но необходимо знать. Что значения ХС и ТГ, определённые в плазме крови, на 2 4% ниже таковых в сыворотке. Это обусловлено разведением за счёт жидкости, теряемой эритроцитами под действием антикоагулянта. Лучше использовать один тип антикоагулянта ЭДТА. При определении показателей липидного обмена необходимо проведение стандартизации и контроля качества лабораторных исследований не только на аналитическом, но и на преаналитическом этапе. Доставка крови в лабораторию, центрифугирование и отделение сыворотки крови от кровяного сгустка рекомендуется проводить в течение 2 ч после взятия крови для предотвращения динамического обмена свободного ХС между сывороткой крови и мембраной эритроцитов. При интерпретации анализов показателей липидного обмена необходимо учитывать, что уровень липидов и апопротеинов в сыворотки крови у мужчин и женщин, изменяется с возрастом, при определённых физиологических состояниях (беременности), наличии заболеваний (хирургические вмешательства) и т. д. 2.2 Аналитическая стадия при лабораторном исследовании липидов Алгоритм диагностики нарушений липидного обмена (патология системы липопротеидов) включает три последовательных этапа. Первый этап - скрининг включает определение в крови содержания общего ХС и ТГ в состоянии сытости или натощак. В случае констатации гиперхолестеринемии и гипертриглицеридемии следует провести второй этап исследования. Второй этап - фенотипирование ГЛП предусматривает повторное определение уровня в крови ХС и ТГ и с целью исключения алиментарного влияния на уровень липидов (обязательное голодание в течение 12 ч), электрофорез ЛП на ацетате целлюлозы (агарозе) и определение ХС - ЛПВП. Фенотипирование позволяет провести дифференциальную диагностику между отдельными формами ГЛП. 2.3 Определение показателей общего холестерина Холестерин из состава эфиров освобождается под действием фермента холестеринэстеразы (ХЭ). При участии фермента холестериноксидазы (ХО) холестерин окисляется до 4 - холестен - 3 она. Образующаяся перекись водорода, при участии фермента пероксидазы, способствует окислительному азосочетанию - аминоантипирина (4 - ААП) и фенола с образованием окрашенного соединения (хинониминовый краситель). Интенсивность окраски реакционной среды пропорциональна содержанию холестерина в исследуемом материале и определяется фотометрически при длине волны (490 - 520) нм. Исследуемый материал: свежая сыворотка без следов гемолиза. Состав набора: Монореагент Калибратор - раствор холестерина 5,17 ммоль/л. Дата изготовления, серия и номер по каталогу указаны на упаковке. Таблица Соотношение основных реагентов при применении методики анализа общего холестерина Компоненты реакционной среды Монореагент, мл Сыворотка, мл Калибратор, мл Вода дистилл.,мл Опытная проба Калибровочная проба Контрольная проба 2,0 0,02 2,0 2,0 0,02 0,02 Реакционную смесь тщательно перемешать и инкубировать при комнатной температуре не менее 15 минут. После инкубации измеряли оптическую плотность опытной и калибровочных проб против контрольной (холостой) пробы при длине волны 520 нм, в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм, на фотометре биохимического анализатора Roki. 2.4 Определение содержания триглицеридов Липаза катализирует гидролиз липидов до глицерина и жирных кислот. Глицерин запускает ряд сопряжённых ферментативных реакций с участием ферментов глицерокиназы а присутствии АТФ и глицеролфосфатоксидазы. Образующаяся в ходе данных реакций перекись водорода при участии фермента пероксидазы способствует окислительному азосочетанию 4 аминоантипирина и фенола с образованием окрашенного соединения (хинониминовый краситель). Интенсивность окраски реакционной среды пропорциональна содержанию триглициридов в исследуемом материале, определяемая фотометрически. 2.5 Определение содержания липопротеидов высокой плотности Хиломикроны липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП) и липопротеиды низкой плотности (ЛПНП) осаждаются при добавлении к сыворотке фосфорновольфрамовой кислоты и ионов магния. После центрифугирования в супернатане остаются только холестерин ЛПВП, концентрация которого определяется так же, как концентрация общего холестерина. Исследуемый материал: сыворотка гепаринизированная. Состав набора: Осаждающий реагент. Калибратор (только для каталога № 013. 004. (50 мг/100мл и 1,29ммоль/ь). 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Атерогенные ЛПНП у мужчин, достигали патологического уровня 4,4 ± 0,3, у женщин этот показатель был несколько снижен 3,7 ± 0,6 и находился в пограничных пределах. При сравнении показателей липидного обмена у мужчин и женщин в первой возрастной группе (от 35 до 50 лет) можно отметить, что уровень общего холестерина у женщин находится в пределах пограничного уровня 5,8 ± 0,7, у мужчин значения общего холестерина несколько выше и достигают в отдельных случаях патологических значений (6,2 ± 0,8). ЛПНП в сыворотке мужчин представлены значением 4,4 ± 0,3, что является высоким (патологическим) уровнем. В свою очередь, у женщин этот показатель был несколько снижен 3,7 ± 0,6 и находился в пограничных пределах. Концентрации ТГ в крови у мужчин оказывается выше, достигая патологических значений (1,9 ± 0,9), у женщин этот показатель ниже 1,6 ± 0,4, что тоже превышает нормальные значения. Отмечено, что концентрация ТГ у мужчин на протяжении всей жизни оказывается выше, чем у женщин. ЛПОНП у мужчин достигают значения 1,0 ± 0,5, у женщин этот показатель немного ниже 0,7 ± 0,3 и превышает физиологическую норму. Важно отметить, что при небольших отличиях уровня общего ХС крови у женщин и мужчин этого возраста, содержание ЛПВП у мужчин были значительно сниженными (0,8 ± 0,3), а у женщин приближались к норме (1,3 ± 0,2). Коэффициент атерогенности у мужчин превышает границу патологии (6,8 ± 1,2), у женщин незначительно превышает норму (3,1 ± 0,6). ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, установлено, что своевременный контроль уровня липидов в сыворотке крови правильной диагностикой необходимой для назначения адекватного лечения, коррекции и профилактики нарушений липидного обмена. Выявлены статистически значимые различия уровня липидов и липоротеидов. У женщин с высоким коронарным риском в различных возрастных группах. У женщин с возрастом проявляются более высокие уровни, ХС ЛПНП. Статистически не различаются уровни ТГ и ХС ЛПВП в обеих возрастных группах. Малоизученным остается в настоящее время вопрос о состоянии липидного обмена и возможности его ранней коррекции у женщин репродуктивного возраста. С возрастом доля ЛПВП-ХС в общем количестве ХС снижается. У женщин лет соотношение общий ХС/ЛПВП-ХС составляет 3,4, к 75-89 годам оно повышается до 4,7. Когда это соотношение превышает 7,5, риск ИБС у женщин становится таким же, как у мужчин. Оптимальным считают соотношение 3,5, а при величинах 5 и более риск значительно возрастает. Имеются определенные особенности липидного обмена у мужчин и женщин разных возрастов: в группе 35 - 50 лет у мужчни отмечается превышение всех показателей липидного обмена до патологического уровня, кроме ЛПОНП, который имеет пограничные значения, у женщин отмечаются пограничные значения показателей; в группе 50 - 60 лет отмечается выравнивание содержания ХС и его липидных фракций, значительно увеличивается КА у женщин; При анализе показателей липидограмм у мужчин с возрастом отмечается незначительное увеличение содержания ХС, ЛПВП и снижение ЛПНП, ЛПОНП и ТГ, незначительное снижение КА; у женщин - повышение ХС, ТГ, ЛПОНП, ЛПНП, снижение ЛПВП, резкое увеличение КА. СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 1. Азизова Д. Ш. Состояние липидного обмена у мужчин. - Москва - 2013, С.:189.; 2. Богацкая Л. Н., Новикова С.Н. Липиды крови у больных пожилого и старческого возраста. - Киев. - 2010, С.:215; 3. Бурлакова Е. Б. Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. Москва. 2014, С.:221; 4. Галлер Г., Генефельд М., Яросс В. Нарушение липидного обмена. - Москва. Медицина. 2011, С.:336; 5. Горячковский А. М. Справочное пособие по клинической биохимии. - Одесса. 2014, С.:416; 6. Долгов В. В. лабораторная диагностика нарушений обмена липидов. Учебное пособие. 2010, С.:148; 7. Иоффе Д. В. Стерины как комплексообразователи. Успехи химии. - 2009, С.:361; 8. Камышников В. С. О чем говорят медицинские анализы. - Минск. 2008, С.: С.:224; 9. Карпищенко А. И. Справочник по медецинской лабороторной диагностике ( программы и алгоритмы ). - Санкт-Петербург 2011. 10. Климов А. Н. Липопротеиды плазмы крови, их функция и метаболизм. Москва. Медицина. 2011, С.:112.
