Влияние ацетилсалициловой кислоты на реакцию

Федеральное государственное автономное
образовательное учреждение
высшего профессионального образования
«СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»
Институт Фундаментальной Биологии и Биотехнологии
Кафедра Медицинской биологии
Выполнила:
Столяр Марина Александровна
Руководители:
канд. биол. наук, проф. Н.М. Титова,
канд. мед. наук, доц. И. А. Ольховский
Красноярск 2012
Клетки крови под
электронным
микроскопом: эритроцит,
тромбоцит и лейкоцит
Гранулы тромбоцитов, их
компоненты
тромбоцит
Аспирин
ЦОГ2
Схема тромбоцитарного гемостаза
*
*здесь и далее АСКацетилсалициловая кислота
выявление оптимальных способов и
методов диагностики резистентности к
ацетилсалициловой кислоте.
В качестве объекта исследования
использовалась цельная кровь пациентов
больницы КНЦ СО РАН и добровольцев.
В работе использованы следующие методы
измерения агрегации тромбоцитов:
 Оптический;
 Импедансный;
 Люминесцентный.
Агрегометр CHRONOLOG
Цельная кровь
Центрифугирован
ие
Плазма (бедная и
богатая
тромбоцитами)
Анализ
агрегации
Анализ
агрегации
Оптический метод
• является "золотым"
стандартом в агрегометрии;
• длительный и трудоёмкий
процесс подготовки плазмы;
• механические воздействия на
клетки.
Импедансный и
люминесцентный
методы
• не нарушается
естественное окружение
тромбоцитов;
• не снижается
концентрация лабильных
медиаторов к моменту
измерения;
• можно проводить
измерения агрегации даже в
гемолизированных,
липемичных образцах;
• относительная быстрота;
• при люминесцентном
измерении одновременно с
агрегацией тромбоцитов
можно исследовать и другие
процессы, например,
процессы секреции гранул.
 степень агрегации – максимальный процент светопропускания
образца или сопротивления электродов, зарегистрированный
прибором;
 скорость агрегации – увеличение светопропускания образца или
сопротивления электродов за 1 мин;
 площадь графика – произведение максимальной амплитуды
агрегации на время её достижения.
амплитуда
скорость
Площадь графика
Определение антитромботического
эффекта АСК в цельной крови
Определение антитромботического
эффекта АСК в плазме крови
1) Люминесцентный метод определения
аспиринорезистентности в цельной крови
40
2.5
Амплитуда
агрегации до
инкубации с АСК
2
амплитуда
агрегации после
инкубации с АСК
35
25
1.5
20
1
15
АТФ, нмоль
Амплитуда, Ом
30
10
0.5
5
0
0
0
1
2
3
4
5
6
Номер пробы
7
8
9
10
11
12
Рисунок 1 – Изменение функциональной активности и секреции гранул
тромбоцитов после инкубации с АСК в цельной крови
высвобождение
АТФ до инкубации
с АСК
высвобождение
АТФ после
инкубации с АСК
2) Импедансный метод определения
аспиринорезистентности в цельной крови
20
Амплитуда агрегации
до инкубации с АСК
18
16
амплитуда агрегации
после инкубации с
АСК
Амплитуда, Ом
14
12
10
8
6
4
2
0
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
Номер пробы
Рисунок 2 – Изменение функциональной активности тромбоцитов после
инкубации с АСК в цельной крови
3) Изменения других параметров агрегации тромбоцитов после
инкубации проб с АСК (а именно: а, б, в – амплитуды, угла
наклона касательной и площади под графиком соответственно)
100
1.8
90
1.6
80
1.4
120
1.2
1
50
0.8
40
0.6
30
20
0.4
10
0.2
0
100
угол, tg
60
0
до инкубации с АСК
400
7
350
6
300
5
250
4
200
3
150
2
100
50
1
0
0
до инкубации с АСК после инкубации с АСК
в
после инкубации с АСК
б
площадь, мм^2
(люминесценция)
площадь, мм^2
60
20
после инкубации с АСК
а
80
40
0
до инкубации с АСК
импедансный метод
140
нмоль, АТФ
амплитуда, %/Ом
70
оптический метод
люминесцентный метод
оптика
60
50
40
30
20
10
0
люминесценция
КИА, % *
КИС, % *
импеданс
Рисунок 3 – Индивидуальная диаграмма степени «аспиринорезистентности»
** КИА и КИС – коэффициенты
ингибирования агрегации и
скорости соответственно
КИА =
Àí  Àê
 100% , где
Àí
À и À - амплитуды агрегации до и после инкубирования с АСК
í
ê
соответственно.
Определение агрегации
Индуктор
Амплитуда %
угол
площадь
АДФ
87
140
444
норма
Коллаген
85
142
389,8
норма
Адреналин
85
75
384,5
норма
метод
амплитуда угол площадь КИА, % КИС, % КИП,%
оптика
87
125
357,5
26,4
38,4
37,7
импеданс
20
10
73
55,0
60,0
64,0
1,61
68
6,5
57,1
41,2
58,5
люминесценция
Точный
диагноз
Комплексная
диагностика,
индивидуаль
ный подход
ВЧЕРА
Экспериментальное
назначение лечения
Препарат
А
ДИАГНОСТИКА
Препарат
В
Препарат
А
Препарат
С
Препарат
D
Препарат
В
Препарат
D
Препарат
С
Личный опыт врача
Затраты: время, деньги и
здоровье
Экономия: время, деньги и
время болезни
1.
2.
3.
4.
Ацетилсалициловая кислота in vitro снижает как
агрегацию тромбоцитов, так и интенсивность реакции
высвобождения АТФ из их гранул.
Ацетилсалициловая кислота in vitro уменьшает, наряду с
амплитудой, другие параметры агрегации тромбоцитов.
Отмечаются индивидуальные особенности в
характеристиках кривых оптического поглощения,
импеданса и интенсивности люминесценции.
Необходимо комбинированное использование оценки
параметров агрегационных характеристик и динамики
секреции содержимых гранул тромбоцитов для оценки
степени «аспиринорезистентности» конкретного
индивидуума.
«Лекарство – яд в руках невежды»
Древнее индийское изречение
Ваши вопросы