Серологическая диагностика ревматоидного артрита Антитела к циклическому

Серологическая
диагностика
ревматоидного артрита
Антитела к циклическому
цитруллиновому пептиду:
высокоспецифичный
маркер заболевания
«Окно возможностей»
Терапия ревматоидного артрита
Начало терапии
Первый визит к ревматологу
Идеальный курс
Время
Первые
симптомы
Начало деструкции
сустава
Через 2 года: Эрозивное поражение суставов у 90% больных
Через 5 лет: Инвалидность у 40% больных
2
Ревматоидный артрит:
специфические аутоантигены
Антитела к цитруллинированным пептидам или
белкам:
 Анти-перинуклеарный фактор (АПФ)
 Кератин
 Филаггрин
 ЦЦП (циклические цитруллиновые пептиды)
 Sa-антиген, MCV (цитруллинированный виментин)
 Фибриноген, фибрин
 -Енолаза
 CEP-1 (цитруллиновый пептид 1 альфа-енолазы)
3
Классификация РА
Критерии ACR/EULAR, 2010 год
Aletaha et al, Ann Rheum Dis, 2010
A Поражение суставов
• 1 большой сустав
• 2-10 больших суставов
• 1-3 малых суставов (в т.ч. без поражения больших суставов)
• 4-10 малых суставов (в т.ч. без поражения больших суставов)
• > 10 суставов (с поражением по крайней мере 1 малого сустава)
0
1
2
3
5
B Серология (как минимум одно из перечисленного)
• РФ отрицательный и анти-ЦЦП отрицательный
• РФ или анти-ЦЦП слабо положительный
• РФ или анти-ЦЦП высоко положительный
0
2
3
C Маркеры острой фазы (как минимум одно из перечисленного)
• СРБ и СОЭ в норме
• СРБ за пределами нормы
0
1
D Продолжительность симптомов синовита
• < 6 недель
• ≥ 6 недель
04
1
Специфические аутоантитела:
анти-филаггрин
Анти-перинуклеарный
фактор (1964 г.)
Антитела к кератину,
1979 г.
Клетки
эпителия
щеки
Эпителий
слизистой
щек
Аутоантитела к
филаггрину
Чувствительность:
35-80%
Специфичность:
70-99%
ЭПИТОПЫ?
5
Цитруллин
Дезиминирование остатков аргинина
Аргинин
АНТИГЕННЫЙ
ЭПИТОП
Цитруллин
6
Антигенный эпитоп: цитруллин
Цитруллин – важная составляющая часть эпитопов
аутоантител, выявляемых при ревматоидном артрите
Walther J. van Venrooij
Department of Autoimmune Biochemistry
University of Nijmegen, Nijmegen, The Netherlands
7
Цитруллинированные пептиды:
история ИФА тест-системы
Выявляемые при ревматоидном артрите антитела распознают
цитруллин-содержащие пептиды (ЦП)
Выявление аутоантител к линейному ЦП
Специфичность > 98%, но чувствительность 35-49%
Выявление аутоантител к циклическому ЦП
Специфичность > 98%, чувствительность > 70%
Поиск оптимальных пептидов – тест-система 2 поколения – Anti-CCP2
8
Цитруллинированный пептид
Линейный пептид (из молекулы
филаггрина:)
Чувствительность
для РА:
49%
Циклический пептид:
68%
= Цитруллин
Schellekens et al., Arthritis Rheum, 2000
CCP = Cyclic
Citrullinated
Peptide
Table 1 Specificity and sensitivity of the CCP2 test for RA
van Venrooij, W. J. et al. (2011) Anti-CCP antibodies: the past, the present and the future
Nat. Rev. Rheumatol. doi:10.1038/nrrheum.2011.76
Антитела к ЦЦП: выявляются
задолго до появления симптомов РА
83 больных РА,
все бывшие
доноры крови
70%
Образцы
сыворотки
получены из банка
крови – вплоть до
10 лет до
появления первых
симптомов
50%
60%
40%
30%
20%
10%
anti-CCP2-positiv
Анти-CCP2
положит.
80%
0%
10
8
6
4
2
0
Время
до появления
Jahre
vor erstenсимптомов,
Symptomenгоды
Rantapäa-Dahlqvist et al., Arthritis Rheum, 2003
11
Анти-ЦЦП, тест 2 поколения:
чувствительность и специфичность
Панель
Anti-CCP2 ELISA
n
Положит.
Чувствительность для РА
419
329 (78.5%)
Доноры крови
400
2 (0.5%)
Псориатрический артрит
28
0
Другие формы артрита
35
3 (8.6%)
Системная красная волчанка
108
3 (2.8%)
Синдром Шегрена
106
2 (1.9%)
Системная склеродермия
98
3 (3.1%)
Аутоиммунный тиреоидит
159
4 (2.5%)
Грануломатоз Вегенера
25
1 (4.0%)
Положительные на антитела к
парвовирусу B19
126
3 (2.4%)
Вирусные гепатиты
54
0
ВИЧ-положительные
5
0
1144
21 (98.2%)
Специфичность для РА
12
ИФА тест-система фирмы EUROIMMUN
КАЛИБРОВКА : НАДЕЖНО И ЭКОНОМИЧНО
О
Калибратор 1 - верхняя граница
измеряемого диапазона
Калибратор 2 - верхняя граница
нормальных значений
Калибратор 5 - граница чувствительности
теста
EUROIMMUN
ИФА тест-система фирмы EUROIMMUN
МЕТОДИКА : УДОБНО И БЫСТРО
- калибратор 1
- положительный контроль
- калибратор 2
- отрицательный контроль
- калибратор 3
- калибратор 4
- калибратор 5
Инкубация:
EUROIMMUN
60 30  15 мин.
(комн. темп.)
Серологическая диагностика РА
Схема, принятая в Германии
 При подозрении на РА: определение антител к ЦЦП (AntiССP-2)
Рекомендуется: дополнительно – определение
ревматоидного фактора, особенно класса IgM
 Определение анти-ЦЦП полезно:
 для прогнозирования эрозивного течения РА
 Определение анти-ЦЦП не слишком пригодно:
- для мониторинга прогрессирования РА
- для мониторинга ответа на терапию
Может быть, более полезны:
Anti-MCV?
Anti-Sa?
15
Серологическая диагностика РА
Исследование
N
РА
H.Bang
Arthritis Rheum
2007
C. Dejaco
Контрол.
группа
Anti-MCV
Чувств. Специф.
Anti-CCP
Чувств. Специф.
1151
232 дон.
257 CTD
82 %
98 %
79 %
72%
96%
-
Arthritis Res
Therapy 2006
D. Coenen
Clin Chem 2007
L. Soos
J Rheumatol 2007
L. Mathsson
Arthritis Rheum
2008
R. Sghiri
164
303
70 %
91 %
70 %
99 %
102
196
75 %
90 %
73 %
97 %
119
118
76 %
92 %
66 %
98 %
273
100 дон.
71 %
95 %
58 %
96 %
Rheumatol Int
2008
170
309
74 %
79 %
72 %
96 %
16
Anti-MCV: чувствительность несколько выше, специфичность ниже
Серологическая диагностика РА
(Bizzarro et al., Clinical Chemistry, 2007)
Тест-система
Антиген
Чувств.[%]
(n=100
больных РА)
EUROIMMUN
CCP
72
98.5
0.919
73
Phadia
CCP
73
98.5
0.896
74
Axis Shield
CCP
70
97
0.862
70
Eurodiagnostica
CCP
75
97
0.912
73
Inova 2.
Generation
CCP
65
97
0.865
64
Inova 3.
Generation
CCP
73
96
0.891
67
Inova 3.1.
Generation
CCP
89
64.9
0.889
67
Genesis
Цитруллин.
филаггрин
61
94.6
0.787
41
Orgentec
MCV
72
93.1
0.822
62
Цитруллин.пептид
ВЭБ
61
92.6
0.839
47
IgG
54
86.1
0.631
17 17
Цитруллин. IgG
82
53
0.805
44
Astra
RF-Test
Aesku
Специф. [%]
(n=202)
AUC
Чувств. [%] при
98%
специфичности
Серологическая диагностика РА
Что дает определение антител к ЦЦП?
 Диагностика РА: высокая специфичность и
чувствительность
 Прогнозирование появления симптомов (у
асимптоматических доноров крови, при
недифференцированных артритах и т.д.)
 Прогнозирование эрозивных форм
Но:
 Низкая степень корреляции с активностью процесса
 Sa-антиген?
18
Sa-антиген
Стрипы 3-4 –
анти-Sa-антиген
Kindly provided by H. Ménard
19
Анти-SA:
тест-система EUROIMMUN
Сходимость:
98.5%
Lora et al., 9th Dresden
Symposium on Autoantibodies,
Germany, 2.-5. September 2009
20
Анти-Sa и анти-CCP:
чувствительность и специфичность
Выборка
n
Anti-Sa
Anti-CCP2
РА
237
114 (48.1%)
157 (66.2%)
Ранний РА
74
28 (37.8%)
44 (59.5%)
ЮИA
56
1 (1.8%)
2 (3.6%)
Чувствительность
для РА
237
48.1%
66.2%
СКВ
190
2 (1.1%)
8 (4.2%)
Псориатический
артрит
181
0
3 (1.7%)
Специфичность
371
99.5%
97.0%
Доноры
408
3 (0.7%)
2 (0.5%)
21
Исследование: проф. Й. Венковски, Пражский университет / EUROIMMUN
Анти-Sa:
прогностический маркер при раннем РА
Выборка
Anti-Sa positive
(n=10)
Anti-CCP positive
(n=20)
Anti-MCV positive
(n=39)
RG 1
0 (0%)
1 (5%)
7 (18%)
RG 2
0 (0%)
1 (5%)
8 (21%)
RG 3
1 (10%)
2 (10%)
5 (13%)
RG 4
9 (90%)
16 (80%)
19 (49%)
Группы риска (модифицированный счет Виссера):
RG 1: благоприятный прогноз (вероятность эрозивного РА <25%)
RG 2: умеренный прогноз(25% to <50%)
RG 3: неблагоприятный прогноз (50% to <75%)
RG 4: плохой прогноз (75% to 100%)
Langer et al., 7th International Congress on Autoimmunity, Ljubljana, May 5-9, 2010
22
Анти-Sa:
прогностический маркер при раннем РА
Положительное прогностическое
значение (PPV) для плохого
прогноза:
анти-Sa
90%
анти-CCP
80%
анти-MCV
49%
Langer et al., 7th International Congress on Autoimmunity, Ljubljana, May 5-9, 2010
23
Анти-Sa:
прогностический маркер при раннем РА
РЕЗЮМЕ
•
Анти-Sa обнаружены только у больных с неблагоприятным и
плохим прогнозом (10% в группе риска 3, 90% в группе риска 4)
•
PPV для плохого прогноза (группа риска 4):
90% анти-Sa, 80% анти-CCP, 49% анти-MCV
•
20% положительных на анти-Sa образцов были отрицательны как
на анти-CCP, так и на анти-MCV.
 1) Анти-Sa: преимущество в прогнозировании тяжелого течения РА
2) Анти-Sa позволяет выявить ряд больных, отрицательных на
анти-CCP и анти-MCV
Langer et al., 7th International Congress on Autoimmunity, Ljubljana, May 5-9, 2010
Анти-CCP и анти-Sa
Выводы
Чувствительность: анти-ЦЦП>> анти-Sa
Специфичность: анти-Sa > анти-ЦЦП
Прогноз тяжелого течения: анти-Sa > анти-ЦЦП
Анти-ЦЦП– основной диагностический маркер
Анти-Sa – дополнительный показатель
ИФА наборы EUROIMMUN
для выявления IgG к ЦЦП и Sa-антигену
25
СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!
Зайко Сергей Дмитриевич
Сентябрь 2011 г.