На правах рукописи ЛОПИНА Евгения Олеговна ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ
advertisement
На правах рукописи ЛОПИНА Евгения Олеговна ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ У КОРОВ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ В КАЧЕСТВЕ СТИМУЛЯТОРА ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНОЙ ФУНКЦИИ БИОКОРРЕКТОРА ТИМОГЕН 03.00.13 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Белгород 2007 2 Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» Научный руководитель: Заслуженный ветеринарный врач РФ, доктор биологических наук, профессор Безбородов Николай Васильевич Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Семенютин Владимир Владимирович; кандидат биологических наук, профессор Липунова Елена Андреевна Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет» Защита состоится «____» _________ 2007 г., в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 220.004.01 в ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» по адресу: 308503, Россия, Белгородская р-н, пос. Майский, ул. Вавилова 1. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Белгородской государственной сельскохозяйственной академии. Автореферат разослан «____» __________ 2007 г. Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук Ю.Н. Литвинов 3 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. При промышленном ведении животноводства основным технологическим вопросом является воспроизводство стада, интенсификация которого предусматривает, прежде всего, максимальное использование биологических особенностей коров путем создания для них оптимальных условий кормления и содержания. Вместе с тем, интенсивному развитию молочного животноводства препятствует ряд факторов, обусловленных нарушениями работы репродуктивной системы самок. Ветеринарная практика в настоящее время располагает значительным арсеналом средств фармакопрофилактики и лечения основных заболеваний воспроизводительных органов сельскохозяйственных животных, но изучение физиологии воспроизводства, причин, снижающих оплодотворяемость, и на их основе изыскание и внедрение новых средств борьбы с бесплодием и яловостью коров, является весьма актуальной проблемой животноводства. Эффективным и физиологически оправданным за последнее время, при активизации воспроизводительной функции у самок, следует считать применение различных биологически активных средств (биокорректоров). Подобный подход основан на использовании существующей в организме универсальной системы биорегуляции, действующей посредством клеточных медиаторов, представляющих собой относительно короткие аминокислотные последовательности (Арион В.Я, 1981; Загородняя Э.Д. 1990; Гомазков О.А., 1992; Жоголев К.Д., 1992; Гречко А.Т., 1998; Забродский П.Ф., 1999; Смирнов В.С., 2004). Основной функцией этих молекул в последующем является селективная передача информации при взаимодействии клеток иммунной, нервной и эндокринной систем. Цель и задачи исследований. Целью работы было определение механизмов активизации функциональных связей органов нейро-эндокринной регуляции половой цикличности у коров глутамил-триптофаном и эффективности его применения для повышения воспроизводительной функции. 4 Для достижения цели были поставлены следующие задачи: – определить динамику стероидных гормонов в крови коров с гипофункцией яичников до и после введения дипептида глутамил-триптофана (тимоген); – изучить влияние дипептида глутамил-триптофана на морфологические и биохимические показатели крови подопытных коров; – выявить характер гистоморфологических изменений в половых и вторичных иммунокомпетентных органах у подопытных животных; – определить динамику показателей естественной резистентности до и после применения тимогена; – определить эффективность применения тимогена, как биотехнологического метода повышения оплодотворяемости коров с функциональной недостаточностью яичников. Научная новизна работы. Впервые комплексными исследованиями гематологического, гормонального и иммунологического статуса установлена иммуно-гормональная активность пептидного биокорректора тимоген, способствующая стимуляции гипофизарно-гонадальных связей в системе нейро-эндокринной регуляции половой цикличности у коров. Определена степень и направленность действия глутамил-триптофанового комплекса, способствующая опосредованной индукции кортикостероидов и дальнейшей стимуляции воспроизводительной функции. Теоретическая и практическая значимость работы. В работе дано научное и практическое обоснование к использованию в ветеринарной практике биотехнологического метода стимуляции половой функции у коров с гипофункцией яичников на фоне стимулируюшего действия глутамил-триптофанового комплекса. Результаты проведенных исследований расширяют существующие представления о механизмах иммунногормональной регуляции половой цикличности пептидными регуляторами, как имеющих максимально физиологическую направленность действия и являющихся экологически чистыми для организма животных. 5 Предложенные производству способы стимуляции половой цикличности и повышения оплодотворяемости, при недостаточной функции яичников препаратом тимоген, обеспечивают повышение рентабельности молочного скотоводства и рекомендуются к применению во время проведения акушерско-гинекологической диспансеризации животных. Положения, выносимые на защиту. 1. Глутамил-триптофан (тимоген) обладает глюкокортикоидной активностью, индуцирующей нейроэндокринные связи половой цикличности у коров с гипогонадотропной гипофункцией яичников. 2. Активизация процессов метаболизма под воздействием тимогена, способствует повышению уровня естественной резистентности и запуску нейро-эндокринной регуляции половой цикличности у коров. 3. Картина гистоструктурных изменений в тканях половых и вторичных иммунокомпетентных органах коров с пониженной гипофизарногонадальной активностью свидетельствует о выраженном биокорригирующем влиянии дипептида тимоген. 4. Применение тимогена коровам с гипофункцией яичников способствует индукции половой цикличности и последующей оплодотворяемости. Апробация работы. Материалы диссертации были представлены: на научно-производственной международной конференции Белгородской ГСХА «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения», 2007 г.; Всероссийской научно-практической конференции Карачаево-Черкесской ГТА «Молочное и мясное скотоводство: состояние и перспективы в Южном Федеральном округе», 2007 г.; Первом съезде ветеринарных фармакологов России, ГНУ ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии, г. Воронеж, 2007 г. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 работы. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 156 страницах печатного текста. Список литературы включает 258 отечественных и 6 60 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 20 рисунками. 1. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Научно-производственные опыты и основные исследования на коровах черно-пестрой породы проведены в ОАО «Агро-Стрелецкое» Белгородского района на поголовье с годовым удоем 4800 кг, находящихся в условиях МТФ на привязи в зимний период года и с выгоном на летний период в открытые прифермские загоны. Рацион кормления животных был не всегда сбалансирован по основным питательным компонентам. Формирование опытных групп коров осуществляли на основе данных зоотехнического учета их физиологического состояния и после клинического и гинекологического обследования по принципу пар-аналогов. Группы формировали из числа коров, находящихся в состоянии анафродизии (через 60 суток после отела), по причине гипофункции яичников. Наличие данной дисфункции определяли на основании ректальных исследований (отсутствии фолликулов и желтых тел в яичнике) половых органов и данных учета техника-осеменатора на ферме. В качестве средства активизации гипофизарно-гонадальной взаимосвязи у коров использовали синтетический биокорректор тимоген (ТУ 10.07.169-91), который представляет собой дипептид, являющийся индивидуальным иммуноактивным компонентом препаратов тимуса. В его состав входят глутаминовая кислота и триптофан. В качестве сравниваемого средства активизации гипофизарно-гонадальных связей использовали базисно применяемый препарат сурфагон. Основные лабораторные исследования проведены на кафедре диагностики болезней, терапии, акушерства и хирургии ФГОУ ВПО БелГСХА, в Белгородской областной ветеринарной лаборатории, вирусологической лаборатории Центра Госсанэпиднадзора Белгородской области и паталогоанатомической лаборатории гор. больницы №2 г. Белгорода. Всего в опытах было использовано 107 коров, на которых были проведены исследования по следующей схеме (рис. 1). 7 1. Для выявления физиолого-биохимических изменений, происходящих в организме коров, были подобраны 4 группы животных. Коровам с гипофункцией яичников 1-й опытной группы (n=5), вводили внутримышечно тимоген 0,01% раствор, в дозе 20 мл/гол/сут., в течение 10 суток; 2-й опытной группе (n=5) вводили тимоген в аналогичной дозе и сурфагон – 50 мкг/гол., внутримышечно, однократно на 9-й день обработки, 3-й (n=5) группе (контроль) вводили один сурфагон в аналогичной дозе, а животные 4-й (n=5) группы (контроль) с гипофункцией яичников были интактные. В периферической крови коров по общепринятым методикам исследовали: эстрадиол– 17 ; прогестерон; кортизол; общий белок; альбумины; глобулины , , ; иммуноглобулины; триглицеролы; – липопротеиды; холестерол; АсАТ (аспартатаминотрансферазу); АлАТ (аланинаминотрансферазу); ЩФ (щелочную фосфатазу); гемоглобин; эритроциты; лейкоцитарную формулу; бактерицидную, лизоцимную активности и фагоцитарную активность нейтрофилов. Кровь на исследование отбирали из яремной вены до начала введения препаратов, на 5-е, 10-е и 18-е сутки. 2. Изучение гистоструктурных изменений в половых и вторичных иммунокомпетентных органах проводили после забоя на гистопрепаратах девяти коров, имеющих гипофункцию яичников и подвергнутых обработке препаратами. Первой группе (n=3) коров вводили тимоген в дозе 20 мл/гол/сут., внутримышечно – 10 суток. Второй группе (n=3) животных вводили сурфагон внутримышечно, в дозе 50 мкг/гол., однократно (контроль). Третья группа (n=3) – интактные коровы. Были исследованы органы: яичники, матка, селезенка, печень. Консервацию отобранного патматериала производили 10%–ным раствором нейтрального формалина. Окрашивание гистосрезов осуществляли гематоксилин-эозином согласно методам классической гистотехники. Микроскопическое исследование, фотодокументирование материалов проводили на микроскопе ЛОМО Микмед-2 при помощи компьютерной программы «Видео Тест-Мастер морфология». 8 Выявление механизма действия и биокорригирующих свойств глутамил-триптофанового комплекса при активизации половой цикличности у коров Тимоген Гипофункция яичников Опытные группы тимоген Контрольные группы Тимоген + сурфагон сурфагон Изучаемые показатели Динамика стероидных гормонов в крови коров Показатели белкового и липидного обменов в крови коров Активность индикаторных ферментов в крови животных Показатели естественной резистентности в крови животных Морфологические показатели крови коров Гистоструктурные изменения в репродуктивных и вторичных иммунокомпетентных органах Показатели воспроизводительной функции коров Предложения производству Рис. 1 - Алгоритм исследований интактные животные 9 3. Изучение эффективности применения препарата тимоген как самостоятельно, так и в комплексе с базисно применяемыми средствами для активизации половой цикличности у коров с гипофункцией яичников, проводили на шести группах коров. Первой группе (n=15) вводили тимоген в дозе 10 мл/гол/сут., внутримышечно – 10 суток, второй группе (n=12) вводили тимоген в дозе 20 мл/гол/сут., внутримышечно – 10 суток, третьей группе (n=12) вводили тимоген в дозе 30 мл/гол/сут., внутримышечно – 10 суток. Коровам четвертой (n=14), пятой (n=12) и шестой (n=13) групп вводили тимоген в соответственно аналогичных дозах совместно с сурфагоном на 9-е сутки. Согласно общепринятым методикам клинического исследования у коров определяли появление признаков половой цикличности, индекс осеменения и наличие стельности после введения стимулирующих препаратов. 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Биохимические и морфологические показатели крови после введения глутамил-триптофанового комплекса Полученные данные по динамике стероидных гормонов в крови коров до и после введения глутамил-триптофанового комплекса (1-я группа) свидетельствуют о наличии определенных изменений за период исследований 18 суток (табл. 1). Тенденция повышения уровня кортизола к 5-м суткам после введения глутамил-триптофанового комплекса с одновременным снижением уровня прогестерона в крови коров свидетельствует об активизации гипофизарнонадпочечникового звена нейро-эндокринной регуляции репродуктивной функции. Учитывая то, что регуляция функции коры надпочечников осуществляется адренокортикотропным гормоном (АКТГ), а его секреция в свою очередь стимулируется релизинг-гормоном (РГ) гипоталамуса, то действие глутамил-триптофанового комплекса, очевидно, начинается с верхних этажей гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси регуляции половой цикличности. Снижение концентрации кортизола на 10-е сутки после введения тимогена связано с увеличением продукции АКТГ (обратная связь), ко- 10 торый в свою очередь увеличивает синтез и высвобождение кортизола. В дальнейшем кортизол, активируя, как известно, аденилатциклазу и цАМФ, способствует усилению активности протеинкиназы А и посредством фосфорилирования активирует холестерилэстергидролазу, участвующую в синтезе стероидных гормонов. Учитывая то, что прогестерон секретируется яичниками и корковым веществом надпочечников, следует полагать, что индуцированные тимогеном гонадотропины вызывают по прямой связи секрецию прогестерона. Высокий уровень последнего тормозит (обратная связь) дальнейший выброс гоТаблица 1 - Содержание стероидных гормонов в крови коров после введения тимогена № Исследуемые п/п показатели, n=5 Время исследования До Через Через Через обработки 5 сут. 10 сут. 18 сут. 0,279±0,05 0,228±0,02 0,226±0,02 0,29±0,07 2,74±1,12 1,37±0,34 1,59±0,18 1,86±0,45 Эстрадиол–17 , 1. 2. 3. нмоль/л Прогестерон, нмоль/л Кортизол, нмоль/л 70,5±5,03 104,7±34,64 59,12±4,81* 61,41±0,25 _______________________ * – достоверно при р<0,01, ** – при р<0,001. надотропных гормонов. Гиперреакция к 5-м суткам гестагенных органов у коров 1-й группы после введения глутамил-триптофанового комплекса, повышение у коров 2-й группы и практически неизменное содержание прогестерона у животных контрольной группы, очевидно, связано с секрецией фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов гипофизом. Возможно у коров контрольной группы, набор специфических рецепторов, характерный для белковых и пептидных рецепторов отсутствовал, а это обу- 11 славливало неизменное содержание прогестерона на протяжении 18 суток исследований. Исследования показателей белкового обмена в крови коров 1-й группы показало, что до начала введения глутамил-триптофана содержание общего белка было 76,42±0,64 г/л, альбуминов - 38,38±2,6%, –глобулинов – 10,88±1,78%, –глобулинов – 23,08±0,85% и –глобулинов - 27,68±–1,17%, что соответствовало нижней границе физиологических значений. На 5-е сутки исследований отмечено достоверное повышение (на 10%) количества общего белка до 84,04±1,3 г/л, уровень альбуминов остался без изменений – 38,3±1,98%, –глобулины имели тенденцию повышения (на 27,4%) и составили 13,76±1,25%, –глобулины наоборот снизились (на 22,2%) и были равны 17,9±1,13%, р<0,001, а уровень –глобулинов повысился незначительно (на 8,6%) и составил 30,04±1,71%. Содержание иммуноглобулинов находилось в пределах 18,36±1,1 ед., что было меньше предыдущего показателя на 6,4%. Изменения показателей белкового обмена к 10-м суткам исследований характеризовались практически неизменным уровнем общего белка – 85,16±1,3 г/л. Количество альбуминов составило 41,8±2,1%. Уровень глобулиновых фракций был равен: – 13,84±1,45%; – 20,1±1,5%; (увеличение на 11,7%); и –24,26±0,5%, р<0,05 (снижение на 19,2%). Содержание иммуноглобулинов не изменилось – 18,11±0,46 ед. На 18-е сутки исследований картина белкового обмена изменилась следующим образом: общий белок – 84,56±0,8 г/л; альбумины – 38,12±1,46% (снижение на 9,0%); –глобулины – 11,0±1,41% (снижение на 20,6%); –22,06±1,3%, –глобулины – 28,82±1,08%; р<0,05% (повышение на 19,0%). Количество иммуноглобулинов составило 17,94±0,6 ед. Отмеченные изменения биохимических показателей крови характеризуют иммуномодулирующий характер действия тимогена, который выражается в достоверном снижении: –глобулинов на 5-е сутки исследований; – глобулинов на 10-е сутки и последующим повышением последних к 18-м 12 суткам. Повышение –глобулинов отмечено у коров 2-й группы и в контроле, но уже к 18 сут, а иммуноглобулины были без изменений. Такие изменения, очевидно, связаны с наличием во фракции –глобулинов липопротеидов, которые в это время достоверно повышаются в крови коров этой группы почти в два раза. Увеличение уровня –глобулинов связано с иммунотропными свойствами тимогена. В связи с тем, что глобулины трансформируют липиды, каротиноиды, стероидные гормоны, жирорастворимые витамины, ферменты и другие вещества, следует считать, что тимоген обладает выраженной иммунотропной активностью с проявляющимся иммуномодулирующим эффектом. Изменения показателей липидного обмена у коров 1-й группы отражены в таблице 2. Таблица 2 - Содержание липидных компонентов в крови коров после введения тимогена № Исследуемые п/п показатели, n=5 Время исследования До Через Через Через обработки 5 сут. 10 сут. 18 сут. 1,42±0,07 2,16±0,11* 1,62±0,15* 1,52±0,27 0,12±0,002 0,15±0,007 0,19±0,01* 0,15±0,004* 4,39±0,22* 4,9±0,33 –липопротеиды, 1. 2. 3. г/л Триглицеролы, ммоль/л Холестерол, ммоль/л 4,82±0,21 5,4±0,02* Полученные данные изменения уровня липидов в крови коров после введения глутамил-триптофанового комплекса характеризовались достоверными изменениями по большинству показателей. Наиболее характерные изменения так же отмечены на 5-10-е сутки исследований. Аналогичная динамика показателей отмечена у коров 2-й, 3-й и 4-й групп. 13 Показатели активности индикаторных ферментов крови у коров 1-й группы до начала введения глутамил-триптофана составили: ЩФ – 127,4±17,66 U/L; АсАТ – 80,36± 4,55 U/L и АлАТ – 30,18±2,59 U/L. На 5-е сутки соответственно: ЩФ – 136,8±14,4 U/L; АсАТ – 85,9± 3,11 U/L и АлАТ без изменений – 30,72±2,1 U/L. Через 10 суток значения показателей были следующими: ЩФ – 134,8±16,2 U/L; АсАТ – 86,02± 5,93 U/L и АлАТ – 28,28±2,33 U/L. Через 18 суток изменения активности составили: ЩФ – 116,9±7,03 U/L; АсАТ – 21,24± 10,1 U/L, р<0,001 (снижение на 75,4%) и АлАТ – 30,28±2,48 U/L. Таким образом, достоверное снижение уровня АсАТ в сыворотке крови к 18-м суткам исследований после введения глутамил-триптофанового комплекса свидетельствует, очевидно, о снижении процессов проницаемости клеточных мембран и биокорригирующих свойствах глутамил- триптофанового комплекса. У коров 2-й группы уровень АсАТ оставался неизменным, а АлАТ наоборот повышался к 5-м сут. В 3-й и 4-й группах активность АсАТ и АлАТ оставалась на протяжении периода исследований практически без изменений. Гематологические показатели у коров после введения тимогена отражены в таблице 3. Пониженный изначально в 2 раза процент эозинофилов от физиологического значения после введения глутамил-триптофанового комплекса возрастает к 5-м суткам достоверно в 3,7 раза (эозинофилия). Таким образом создаются предпосылки для активного фагоцитоза этими клетками. Кроме того индуцируется при этом нейтрализация гистамина, который накапливается при анафродизии из-за гипофункции яичников. Немаловажную роль в этом плане играет и накопление гистамина вследствие возникновения аллергической реакции на длительные алиментарные факторы, приводящие в основном к гипогонадотропной гипофункции яичников у коров при несбалансированных рационах и других нарушениях технологии содержания. Таким образом, очевидно эозинофилы переносят продукты распада белков, обладающих ан- 14 тигенными свойствами, предупреждая тем самым накопление агентов в большом количестве. Следовательно, адаптационно-метаболические изменения, вызванные тимогеном, носят биокорригирующий характер и способствуют развитию окислительно-восстановительных процессов и тканевой регенерации, в том числе и в репродуктивных органах. У коров 3-й и 4-й групп уровень эозинофилов колеблется без особых изменений в течение исследуемого периода, а во 2-й группе животных процент эозинофилов меняется так же, как и в 1-й группе, что указывает на влияние тимогена. Исследования бактерицидной, лизоцимной и фагоцитарной активности сыворотки крови после введения глутамил-триптгофана, свидетельствуют о достаточно выраженной иммунокорригирующей активности препарата. Так, до начала обработки уровень бактерицидной активности сыворотки крови был равен 8,09±2,98%, лизоцимной активности – 15,37±1,6% и фагоцитарной активности нейтрофилов 56,8±1,85%. На 5-е сутки после начала введения тимогена бактерицидная активность составила 9,58±3,41%, лизоцимная – 1,86±0,64%, р<0,001 и фагоцитарная – 62,8±3,07%. На 10-е сутки исследований бактерицидная активность была равной 12,53±4,28%, лизоцимная – 6,91±2,28% и фагоцитарная активность – 74,8±1,62%, р<0,01. На 18-е сутки изменения показателей были следующими: бактерицидная активность – 22,27±5,47%; лизоцимная – 6,19±2,55% и фагоцитарная активность – 72,0±4,56%. Учитывая то, что снижение лизоцимной активности сыворотки крови у коров опытной группы происходит при определенной тенденции повышения к 18-м суткам уровня бактерицидной и фагоцитарной активности нейтрофилов, в противоположность показателям за этот период у животных контрольной группы, то, очевидно, следует считать, что это происходит вследствие активизации глутамил-триптофановым комплексом связывания лизоцима со структурами бактериальной стенки микроорганизмов репродуктивных органов и последующему лизису их клеточных стенок. У коров 2-й группы изменение лизоцимной активности было незначительно, а в 3-й и 4-й ее уровень 15 наоборот повышался в течение исследований. Бактерицидная активность так же имела противоположную направленность изменений у коров 2-й, 3-й и 4-й групп. Фагоцитарная активность у животных 2-й группы так же достоверно повышалась, начиная с 5-х сут исследований, в противоположность показателям у коров 3-й и 4-й групп, где изменений не отмечено. Гистоморфологические исследования половых и вторичных иммунокомпетентных органов исследуемых коров показали, что в яичниках всех животных имеются первичные, малые и большие зреющие фолликулы, и отсутствуют желтые тела. Слизистая матки у коров 1-й группы имеет набухший железистый эпителий, высокий цилиндрический с овальными ядрами, что практически отсутствует у коров 2-й группы и нет у коров 3-й группы. Отмеченная картина изменений в матке коров 1-й группы характерна для прегравидарного состояния животных. Селезенка у коров всех групп имеет хорошо различимую белую и красную пульпу с характерными этому органу образованиями, которые соответствуют его физиологическому состоянию. Печень у всех исследуемых животных имеет четкой рисунок долек, балок и центральных вен. Имеющиеся малокровие печени, гидратическая и баллонная дистрофия гепатоцитов, отражают нарушение белково–водно–электролитного обмена, ведущее к изменению коллоидно–осмотического давления в клетке, что, очевидно, является следствием несбалансированности рационов и нарушений технологии содержания животных, приведших, в том числе, и к возникновению гипогонадотропной гипофункции яичников. Показатели воспроизводительной функции у коров с гипофункцией яичников после ее активизации биокорректором тимоген характеризовались наименьшим индексом осеменения и лучшей оплодотворяемостью при обработке в дозе 20 мл/гол/сут., в течение 10 суток. Время наступления половой цикличности так же было наименьшим в этой группе коров. В опытах, где применяли комплексную обработку животных тимогеном и сурфагоном, были получены лучшие результаты оплодотворяемости коров при введении ти- 16 Таблица 3. Гематологические показатели у коров после введения тимогена № Исследуемые п/п показатели, n=5 1. Гемоглобин, г/л 2. Эритроциты 3. Лейкоциты Время исследования До Через Через Через обработки 5 сут. 10 сут. 18 сут. 119,0±12,89 113,9,0±9,0 114,2±6,72 116,0±5,81 3,6 1012±0,3 3,43 1012±0,2 3,36 1012±0,1 3,48 1012±0,1 7 5 7 7 5,8 109±0,8 6,1 109±0,25 6,3 109±0,9 6,0 109±0,07 Лейкоцитарная формула 4. базофилы, % 0 0 0 0 5. эозинофилы, % 1,6±0,68 6,0±0,95* 3,6±0,75 1,8±0,86 6. лимфоциты, % 47,2±8,85 43,2±4,51 47,0±3,44 38,4±2,09 7. моноциты, % 8,2±0,86 9,6±0,93 8,4±2,09 5,4±1,5 Нейтрофилы: 8. миелоциты, % 0 0 0 0 9. юные, % 0 0 0 0 0 1,0±0,45 2,8±1,16 1,2±0,49 43,0±7,92 40,2±4,32 38,2±5,31 52,8±3,64 10 палочкоядерные, . % 11 сегментоядер- . ные, % могена в той же дозе – 20 мл/гол/сут., в течение 10 суток – 75%. Индекс осеменения 17 так же был наименьшим в этой группе – 1,2, а появление половой цикличности было в те же сроки , что и у коров в первой серии опытов, где применяли один тимоген. Исходя из вышеприведенных результатов лабораторных и клинических методов исследования физиологического состояния органов и систем, после воздействия глутамил-триптофанового комплекса на коров с гипофункцией яичников, можно заключить, что дипептидный биокорректор тимоген способен активизировать гипофизарно-гонадальные связи при нейро-эндокринной регуляции половой цикличности. Этому способствует уровень обмена веществ в организме, определяющим который будет гормональный баланс, степень протекания его реакций, а так же формирование иммуногормональных взаимоотношений при этом. По своей направленности действия влияние тимогена на процессы метаболизма было нормализующим, что так же характеризует глутамилтриптофановый комплекс препарата, как регуляторный дипептид. Возможно, разнообразные эффекты этого дипептида объясняются не его непосредственным действием, а модуляцией эффектов нервной и гуморальной регуляции, что требует дальнейшего изучения, но регуляторные пептиды и сопряженные с их функцией ферменты следует рассматривать, как сложную систему организма, определяющую реализацию приспособительных реакций на всех уровнях ее интеграции. ВЫВОДЫ 1. Глутамил-триптофан (тимоген) обладает иммуно-гормональной активностью, способствует активизации нейро-эндокринных связей и стимуляции половой цикличности у коров. 2. Гормонокорригирующее действие дипептида глутамил-триптофана, при введении коровам с гипогонадотропной гипофункцией яичников в дозе 20 мл/гол/сут. – 10 суток, проявилось на 5-е сутки исследований тенденцией снижения уровня прогестерона в 2 раза и повышения кортизола на 49,5%, с последующим достоверным снижением концентрации кортизола к 10-м сут- 18 кам на 16,2% от изначального уровня, против повышения этих показателей в контроле. 3. Динамика белковых показателей в крови коров после введения глутамил-триптофанового комплекса характеризовалась: а) на 5-е сутки тенденцией повышения –, –глобулинов, общего белка и достоверным снижением (на 22,2%) –глобулинов; б) на 10-е сутки тенденцией повышения альбуминов, –глобулинов и достоверным снижением (на 20,0%) –глобулинов; в) на 18-е сутки тенденцией повышения –глобулинов, достоверным увеличением (на 19,0%) –глобулинов и снижением –глобулинов и альбуминов. 4. Уровень липидных показателей после введения глутамил- триптофанового комплекса составил: а) на 5-е сутки достоверное повышение –липопротеидов, триацилглицеролов и холестерола на 52,1; 25,0 и 12,5% соответственно. б) на 10-е сутки достоверное снижение –липопротеидов и холестерола (на 25,0 и 18,7%), а так же повышение триацилглицеролов (на 26,6%); в) на 18-е сутки достоверное снижение триацилглицеролов (на 21,1%) и неизменное состояние –липопротеидов и холестерола. 5. Ферментативная активность крови коров после курса обработки глутамил-триптофановым комплексом характеризовалась достоверным снижением к 18-м суткам уровня АсАТ от изначального в 3,7 раза. 6. Активизация гипофизарно-гонадальных связей глутамил- триптофановым комплексом способствовала достоверному повышению к 5-м суткам содержания в крови количества эозинофилов в 3,7 раза, тенденции повышения к 18-м суткам уровня нейтрофилов сегментоядерных на 22,7%, нейтрофилов палочкоядерных в 1,2 раза и снижения содержания лимфоцитов на 18,7%, при противоположных изменениях этих показателей у коров контрольной группы. 19 7. Изменения гуморальных показателей неспецифической резистентности коров, после введения глутамил-триптофанового комплекса составили: а) достоверное снижение к 5-м суткам лизоцимной активности в 8,2 раза и тенденцией подъема ее к 18-м суткам до значения, составляющего 40,4% от изначального уровня; б) тенденции равномерного повышения к 18-м суткам уровня бактерицидной и фагоцитарной активности соответственно в 2,7 раза и 26,7%, против снижения или неизменного состояния этих показателей у коров контрольной группы. 8. Гистологическая картина половых и вторичных иммунокомпетентных органов коров после введения глутамил-триптофанового комплекса характеризовалась процессами активизации фолликулогенеза в яичниках, активности маточных желез и морфофункциональными изменениями в тканях, отражающими иммунотропную активность органов. 9. Эффективность применения глутамил-триптофанового комплекса (тимоген) в качестве средства, стимулирующего гипофизарно-гонадальные связи нейро-эндокринной регуляции полового цикла у бесплодных коров с гипофункцией яичников составила: а) при введении 20 мл/гол/сут., внутримышечно, в течение 10 суток – 66,6% оплодотворений через 18 суток, при индексе осеменения 1,2; б) при введении 20 мл/гол/сут., внутримышечно, в течение 10 суток совместно с введением сурфагона на 9-е сутки, в дозе 50 мкг/гол., внутримышечно, однократно – 75,0% оплодотворений, через 16 суток, при индексе осеменения 1,2. 10. Экономическая эффективность применения тимогена в качестве стимулирующего половую цикличность средства составила 11,78 рубля на 1 рубль затрат. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 20 Биокорректор тимоген рекомендуется в качестве стимулирующего половую цикличность средства у коров с гипогонадотропной гипофункцией яичников , в дозе 20 мл/гол/сут., внутримышечно, в течение 10 суток самостоятельно или в комплексе с сурфагоном на 9-е сутки, в дозе 50 мкг/гол., внутримышечно, однократно. Список опубликованных работ 1. Черепченко Е.О. (Лопина Е.О.) Оценка биологической активности тимогена при восстановлении половой цикличности у коров с гипофункцией яичников / Е.О. Черепченко, Н.В. Безбородов // Ж. Ветеринарный врач. – Казань, 2007. – С. 65-67. 2. Черепченко Е.О. (Лопина Е.О.) Некоторые иммунологические тесты сыворотки крови с гипофункцией яичников после применения иммунокорректора тимоген / Е.О. Черепченко, Н.В. Безбородов // Мат. Всерос. науч. конференции. – Черкесск, 2007. – С. 258. 3. Черепченко Е.О. (Лопина Е.О.) Влияние сурфагона на показатели естественной резистентности у коров с гипофункцией яичников / Е.О. Черепченко, Н.В. Безбородов // Мат. XI межд. конференции. – Белгород, 2007. – С. 145. 4. Черепченко Е.О. (Лопина Е.О.) Адаптационно-компенсаторные механизмы запуска половой цикличности у коров с гипофункцией яичников, после введения иммунокорректора тимоген / Е.О. Черепченко, Н.В. Безбородов // I-й съезд фармакологов, ВНИВИПФиТ.– Воронеж, 2007. – С. 622-628.
