Прогностические критерии реализации риска внутриутробного

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
УТВЕРЖДАЮ
Первт ~ еститель Министра
_ Д.Л. Пиневич
«20»
12
2012г.
Регистрационный № 224-1212
ПРОГНОСТИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ РЕАЛИЗАЦИИ РИСКА
ВНУТРИУТРОБНОГО ИНФИЦИРОВАНИЯ В РАННЕМ НЕОНАТАЛЬНОМ
ПЕРИОДЕ.
(инструкция по применению)
УЧРЕЖДЕНИЕ-РАЗРАБОТЧИК: Государственное учреждение образования
«Белорусская медицинская академия последипломного образования»
АВТОРЫ: д.м.н., профессор Шишко Г.А., к.м.н. Крастелева И.М., к.м.н. доцент
Устинович Ю.А., к.б.н. Акалович С.Т
Минск, 2012
Настоящая инструкция по применению (далее - инструкция) описывает
метод
прогнозирования
риска
реализации
внутриутробных
инфекций
и
прогнозирования объемов энтерального жидкостного обеспечения и инфузионной
терапии в раннем неонатальном периоде у недоношенных детей с риском
реализации внутриутробного инфицирования на основании исследования уровня
рецептора фактора некроза опухолей альфа (ФНО-а)- Р 55. Определение уровня
рецептора ФНО-а - р55 базируется на выявлении концентрации цитокинов в
образцах мочи новорожденных, которое проводится с помощью «сэндвич»-ИФА
на основе моноклональных антител по методикам, разработанным ранее в
лаборатории
клеточной
трансфузиологии
и
и
молекулярной
медицинских
технологии»
иммунологии
под
ГУ«РНПЦ
руководством
д.м.н.
профессора Н.Н. Войтенка. Для прогнозирования реализации и тяжести течения
внутриутробной инфекции у недоношенных детей проводится определение в 1 -3
сутки жизни уровня растворимого рецептора ФНО-а р55 в моче, что является
информативным неинвазивным методом, отражающим наличие и
выраженность системного воспаления.
Инструкция предназначена для врачей-неонатологов, врачейанестезиологов-реаниматологов, врачей лабораторной диагностики.
ПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ
1.
недоношенные новорожденные в 1-3 сутки жизни;
2.
новорожденные дети с высоким риском инфицирования в 1 -3
сутки жизни.
ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ
1. недоношенные дети, имеющие противопоказания к энтеральному
кормлению (врожденные пороки желудочно- кишечного тракта,
парез кишечника, патологическое содержимое в желудке).
ПЕРЕЧЕНЬ НЕОБХОДИМОГО ОБОРУДОВАНИЯ
«Сэндвич»-вариант
количественного
твердофазного
определения
иммуноферментного
растворимого
рецептора
анализа
для
ФНО-а
р55,
разработанный в лаборатории клеточной и молекулярной иммунологии «РНПЦ
гематологии и трансфузиологии» под руководством д.м.н. Н.Н. Войтенка и
описанный ранее (TNF receptor р55 and IL-872 and IL-877 isoforms: blood and urine
levels in breast cancer patients / Shichkin V.P., Lon A.D., Yugrinova L.G., Grinevich
Y.A., Belova O.B., Berezhnaya N.M., Akalovich S., Pashkova O., Voitenok N.N. //
Journal of Immunotoxicology. - 2009. - Vol. 6. - P. 235-242).
ОПИСАНИЕ МЕТОДИКИ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
1.1 Определение растворимого рецептора ФНО-а р55 в первой
порции
мочи
в
течение
первых
суток
жизни
недоношенного
новорожденного ребенка.
Моноклональные антитела (МКА) В5, специфичные к растворимому рецептору
ФНО-а р55, сорбируют на твердой фазе в концентрации 5 мк г/мл в 0,1 М
карбонатном буфере, pH - 9,6 в течение 12-18 часов при +4°С.
В лунки вносят двукратные разведения растворимого р55 в качестве стандарта и
разведения образцов биологических жидкостей в 10 шМ фосфатно -солевом
буфере, pH - 7,4, содержащим 0,05% Твин-20 и 0,5% бычьего сывороточного
альбумина (ФСБ-Т-БСА), и инкубируют при 18- 20°С в течение 50 мин при
встряхивании.
Биотинилированные МКА АП, специфичные к растворимому рецептору ФНО -а
р55, а затем и конъюгатстрептавидин- полипероксидазы хрена в ФСБ-Т-БСА
вносят и инкубируют в течение 30-40 мин аналогично предыдущему этапу.
После каждого этапа инкубации планшеты промывают три раза 10 тМ фосфатно солевым
буфером,
Ферментативную
pH
-
7,4,
активность
содержащим
пероксидазы
0,05%
Твин-20
измеряют
в
(ФСБ-Т).
присутствии
тетраметилбензидина при длине волны 450 нм.
1.2
Прогнозирование риска реализации внутриутробных инфекций у
недоношенных детей на основании исследования уровня рецептора ФНО а р55.
Повышение уровня растворимого рецептора ФНО-а р55 в моче на 1-3 сутки жизни
у недоношенных новорожденных более 28,9 нг/мл является прогностич ески
значимым критерием реализации внутриутробной инфекции и критерием тяжести
течения раннего постнатального периода.
1.3
Прогнозирование энтерального жидкостного обеспечения и объемов
инфузионной терапии в раннем неонатальном периоде у недоношенных
детей
с
риском
реализации
внутриутробного
инфицирования
на
основании исследования уровня рецептора ФНО-а р55.
При
уровне
содержания
р55
в
моче
<28,9
нг/мл
рекомендуется
режим
последовательного наращивания энтерального обеспечения (Таблица 1). Таблица
1
- Режим наращивания энтеральной нагрузки у
недоношенных новорожденных при низких уровнях содержания р55 в моче (<
28,9нг/мл)
Сутки жизни
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
18
18
35
35
52
68
90
120
132
140
150
153
153
Рекомендуемый
энтеральный
суточный объем,
мл/кг
4
:
Если уровень р55 в моче больше 28,9 нг/мл (повышенное содержание), что
ассоциируется с активностью системного воспалительного ответа, то имеется
риск срыва энтерального обеспечения и развития некротического энтероколита. В
этих случаях энтеральная нагрузка не должна превышать следующие величины
(Таблица 2).
Таблица 2
- Режим наращивания энтеральной нагрузки у
недоношенных новорожденных при высоких уровнях содержания р55 в моче
(>28,9нг/мл)
Сутки жизни
Рекомендуемый
энтеральный
суточный объем,
мл/кг
1.4
1
15
3
22
2
18
4
33
5
44
6
57
7
58
8
63
9
84
10
97
11
120
12
118
13
133
14
139
Оценка результата
Недостающий жидкостной объем назначается в виде инфузионной терапии с
элементами частичного парантерального питания в зависимости от возможностей.
Но непременным условием является дотация базовых электролитов и, при
энтеральном
кормлении
в
объеме
менее
50%
жидкости
поддержания
-
аминокислот. Повышение уровня растворимого рецептора ФНО -а р55 в моче
недоношенных
новорожденных
на
1—3
сутки
жизни
более
28,9
нг/мл
сопровождается нарушением энтерокинетики, проявляющимся в виде срывов
энтеральной нагрузки и потребности в больших объемах и длительности
инфузионного
обеспечения;
снижением
обеспечения менее 17% от суммарного
5
объемов
возможного
энтерального
необходимого количества жидкости при отсутствии увеличения энтеральной
нагрузки к 3-4 суткам жизни.
ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ И ОСЛОЖНЕНИЯ
Отсутствуют.
6