Правила надлежащей лабораторной практики (GLP

Презентация подготовлена при поддержке гранта BII-GAP-20606 по программе
БиоПромышленная Инициатива (BII) Государственного Департамента США
Правила надлежащей лабораторной
практики (GLP - Good Laboratory
Practice)
Лабораторные животные
Мурашев Аркадий Николаевич
Зав. лабораторией биологических испытаний
ФИЛИАЛ ИНСТИТУТА БИООРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ
имени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова
РАН
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
1
ЛАБОРАТОРНЫЕ ЖИВОТНЫЕ
• Условия проведения исследований на животных
должны исключать воздействие внешних
факторов, способных повлиять на качество
получаемых результатов
• Доклинические исследования проводятся на
здоровых животных
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
2
Использование животных в научных
исследованиях в Европе
По данным за 2002 г European Biomedical Research Association
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
3
ВНЕШНИЕ ФАКТОРЫ,
ВЛИЯЮЩИЕ НА ЖИВОТНЫХ
Физические
Химические
Биологические
ТЭМП
Социальные
GLP: Основы доклинических исследований
4
4
ФИЗИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ,
ВЛИЯЮЩИЕ НА ЖИВОТНЫХ
РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ МЫШЕЙ И КРЫС
Температура:
18-26 °С
Влажность:
30-70 %
Освещение:
до 325 люкс на расстоянии 1 м от
пола,
12-часовой фотопериод
Шум:
до 85 дБ
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
5
ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ,
ВЛИЯЮЩИЕ НА ЖИВОТНЫХ
Воздух
(10-15-кратная смена в течение часа)
Корм
Вода
Подстил
не должны содержать токсичных агентов
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
6
СОЦИАЛЬНЫЕ ФАКТОРЫ,
ВЛИЯЮЩИЕ НА ЖИВОТНЫХ
Клетки должны обеспечивать нормальные социальные
взаимоотношения и удовлетворять нормальным
физиологическим и поведенческим потребностям животных
Животные
Масса тела, г
Площадь пола
Высота, см
на одно животное, кв.см
Мыши
до 25
> 25
Крысы
ТЭМП
77
13
97
13
до 200
148
18
до 400
258
18
GLP: Основы доклинических исследований
7
БИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ,
ВЛИЯЮЩИЕ НА ЖИВОТНЫХ
À Вирусы
À Бактерии, микоплазма, грибы
À Эктопаразиты, эндопаразиты
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
8
ТЕХНОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОРУДОВАНИЕ КОРПУСА
БИОМЕДИЦИНСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
9
ВНУТРЕННИЕ ФАКТОРЫ,
ВЛИЯЮЩИЕ НА ЖИВОТНЫХ
Животные SPF (Specific
Pathogen Free) статуса
свободны от патогенной
микрофлоры
Использование животных
SPF статуса является
одним из гарантов
воспроизводимости
результатов
доклинических
исследований
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
10
ПИТОМНИК ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
ФИЛИАЛА ИБХ РАН
Питомник «барьерного» типа,
общая площадь 2700 кв.м.
Поставщики племенных
животных:
CHARLES RIVER LABORATORY
(США)
HARLAN (Великобритания)
TACONIC FARMS (США)
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
11
БИОЭТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РАБОТЫ С
ЛАБОРАТОРНЫМИ ЖИВОТНЫМИ
гуманное отношение и
рациональное использование
животных - основополагающий
принцип биоэтики
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
12
Правила 3Rs
The Principles of Humane Experimental Technique
W.M.S. Russell and R.L. Burch, 1959
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
13
Правила 3Rs
1. Reduction (Уменьшение количества животных)
• Минимальное количество животных
• Использование адекватных методов статистики
• Контроль вариабельности признаков
2. Refinement (Улучшение)
• Планирование эксперимента, анализ литературных данных
• Избежание лишней траты животных
• Создание необходимых условий содержания животных
• Уменьшение/предотвращение боли и дискомфорта
• Применение эвтаназии
• Знания и опыт, позволяющие уменьшить вариабельность
параметров и ошибку и, в итоге, число животных
• Знания и опыт использования животных в эксперименте.
Соответствующие квалификация и обучение персонала
3. Replacement (Замещение)
• Альтернативы использованию животных
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
14
Регулирование использования животных в науке
Нормативные акты США
9
9
9
9
9
Animal Welfare Act of August 24, 1966
Animal Welfare Act Amendments of 1970
Animal Welfare Act Amendments of 1976
Food Security Act of 1985, Subtitle F - Animal Welfare
Food, Agriculture, Conservation, and Trade Act of
1990, Section 2503 - Protection of Pets
… to insure that certain animals intended for use in research
facilities are provided humane care and treatment, it is essential
to regulate the transportation, purchase, sale, housing, care,
handling, and treatment of such animals by persons or
organizations engaged in using them for research or
experimental purposes …
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
15
Регулирование использования животных в науке
Европейские нормативные акты
9 European Convention for the Protection of Animals during
International Transport
N 65 of 13 December 1968
9 European Convention for the Protection of Animals Kept for Farming
Purposes
N 87 of 10 March 1976
9 The Protocol of Amendment to the European Convention for the
Protection of Animals Kept for Farming Purposes
N 145 of 6 February 1992
9 European Convention for the Protection of Animals for Slaughter
N 102 of 10 May 1979
9 European Convention on the Protection of Pet Animals
N 125 of 13 November 1987
9 European Convention for the Protection of Vertebrate Animals Used
for Experimentation and other Scientific Purposes
N 123 of 18 March 1986
9 Protocol of Amendment to the European Convention for the
Protection of Vertebrate Animals used for Experimental and other
Scientific Purposes
Strasbourg, 22 June 1998
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
16
Российские нормативные акты,
регулирующие исследования на животных
Закон «О животном мире»
Закон «О ветеринарии»
Закон «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения»
УК РФ Статья 245. Жестокое обращение с животными
1. Жестокое обращение с животными, повлекшее их гибель или
увечье, если это деяние совершено из хулиганских побуждений,
или из корыстных побуждений, или с применением садистских
методов, или в присутствии малолетних, - наказывается
штрафом в размере до восьмидесяти тысяч рублей или в
размере заработной платы или иного дохода осужденного за
период до шести месяцев, либо исправительными работами на
срок до одного года, либо арестом на срок до шести месяцев.
2. То же деяние, совершенное группой лиц, группой лиц по
предварительному сговору или организованной группой, наказывается штрафом в размере от ста тысяч до трехсот тысяч
рублей или в размере заработной платы или иного дохода
осужденного за период от одного года до двух лет либо
лишением свободы на срок до двух лет.
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
17
Российские нормативные акты,
регулирующие исследования на животных
Федеральный Закон «О лекарственных средствах»
Статья 36. Доклинические исследования лекарственных
средств
4. Доклинические исследования лекарственных средств на
животных проводятся в соответствии с международными
правилами.
Контроль за соблюдением правовых и этических норм
использования животных при проведении доклинических
исследований лекарственных средств осуществляется
соответственно федеральным органом контроля качества
лекарственных средств и территориальными органами
контроля качества лекарственных средств.
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
18
ОРГАНИЗАЦИИ, РЕГЛАМЕНТИРУЮЩИЕ
РАБОТУ С ЛАБОРАТОРНЫМИ ЖИВОТНЫМИ
AAALAC –Association for Assessment and Accreditation of Laboratory
Animal Care
ICLAS - International Council for Laboratory Animal Science
FELASA - Federation of European Laboratory Animal Science Associations
LASA - Laboratory Animal Science Association
AALAS – American Association for Laboratory Animal Science
AFSTAL - Association Française des Sciences et Techniques de Animal de
Laboratoire
AISAL - Associazione Italiana per Scienze degli Animali da Laboratorio
Balt-LASA - Baltic Laboratory Animal Science Association
BCLAS - Belgian Council for Laboratory Animal Science
CLASA - Czech Laboratory Animal Science Association
CCAC - Canadian Council on Animal Care
NVP - Nederlandse Vereniging voor Proefdierkunde
Scand-LAS - Scandinavian Society for Laboratory Animal Science
SECAL - Sociedad Española para las Ciencias del Animal de Laboratorio
SGV - Schweizerische Gesellschaft für Versuchstierkunde
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
19
Альянс за права животных
Поводом для акции послужил тот факт, что в питомнике Института
биоорганической химии Российской академии наук разводят
мышей, крыс и хомяков для использования в жестоких
экспериментах.
Животным вживляют в мозг электроды, их разрезают живьем,
вскрывают черепные коробки, вводят в желудок ядовитые
вещества, заставляют умирать мучительной смертью.
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
20
Association for Assessment and Accreditation of
Laboratory Animal Care (AAALAC)
AAALAC создана в 1965 г. с целью обеспечения
высокого качества содержания и использования
животных в биомедицинских исследованиях
путем добровольного аккредитования
Аккредитование осуществляется на основании
заявления учреждения и отчета о результатах
инспекции экспертами из AAALAC
Аккредитованное учреждение получает
сертификат, удостоверяющий, что работа с
животными в данном учреждении
осуществляется в соответствии с требованиями
«Руководства по содержанию и использованию
лабораторных животных»
www.aaalac.org
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
21
ИНСТИТУТСКАЯ ПРОГРАММА ПО СОДЕРЖАНИЮ И
ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
Институтская политика
Контроль за содержанием и использованием животных
Комиссия по контролю за содержанием и использованием
лабораторных животных (Institutional Animal Care and Use
Committee - IACUC)
Среда обитания животных и их содержание
Физические факторы среды
Температура, влажность, вентиляция, освещенность
Обеспечение естественного поведения животных
Обеспечение жизнедеятельности
Пища, вода, подстил, санитария
Ветеринарная помощь
Боль, страдание, анальгезия и анестезия
Устройство помещений для животных
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
22
AAALAC АККРЕДИТАЦИЯ
www.aaalac.org
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
23
ИНСТИТУТСКАЯ КОМИССИЯ ПО КОНТРОЛЮ ЗА
СОДЕРЖАНИЕМ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЖИВОТНЫХ
В состав Комиссии должны входить не менее 5
членов, среди них в обязательном порядке как
минимум один:
ƒ врач ветеринарной медицины, имеющий
опыт работы с лабораторными животными,
который несет прямую ответственность за
работу с животными
ƒ научный сотрудник, имеющий большой
опыт работы с лабораторными животными
ƒ сотрудник, непосредственно не
участвующий в научных исследованиях
ƒ член Комиссии, представляющий
интересы общественности в отношении
должного содержания и использования
животных, не являющийся сотрудником
учреждения
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
24
ИНСТИТУТСКАЯ КОМИССИЯ ПО КОНТРОЛЮ ЗА
СОДЕРЖАНИЕМ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЖИВОТНЫХ
Компетенция Комиссии
контроль и оценка институтских программ работы с лабораторными
животными в отношении их гуманного содержания и рационального
использования
рассмотрение, утверждение или не утверждение протоколов-заявок на
работу с лабораторными животными
инспекция работ с животными по утвержденным протоколам-заявкам
инспекция помещений, в которых осуществляются работы с животными
оценка подготовленности персонала, работающего с животными
Комиссия вправе приостановить работу с животными в случае
существенного отклонения от утвержденного протокола-заявки
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
25
ГУМАННЫЙ МЕТОД ИЛИ НЕТ?
Известия РАН. Серия биологическая. 2006. № 6
ИНГИБИТОР СВОБОДНО-РАДИКАЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ
СНИЖАЕТ
УРОВЕНЬ СИНТЕЗА БЕЛКОВ В ЗОНЕ ОГНЕСТРЕЛЬНОЙ РАНЫ И
ОСЛАБЛЯЕТ РАЗВИТИЕ ОБЩЕГО АДАПТАЦИОННОГО
СИНДРОМА
И.Н.Тодоров, Г.Н.Богданов, Ю.И.Митрохин, В.Н.Варфоломеев,
Л.И.Сидоренко, Д.В.Мищенко
Институт проблем химической физики РАН
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Работа проведена на крысах линии Вистар весом 200-250 г.
Огнестрельную рану наносили в бедро крыс с помощью
малокалиберной винтовки Марголина, калибр 5.56 мм, с
расстояния 10 м.
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
26
РАЦИОНАЛЬНОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ РЕЗУЛЬТАТОВ
БИОМЕДИЦИНСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
9 стандартные животные
9 стандартные условия их содержания
9 стандартные методические подходы
(Good Laboratory Practice)
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
27
Внешняя среда
Первичное ограждение
(клетка)
Вторичное ограждение
(комната)
Микросреда
Макросреда
Микросреда
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
28
Контроль параметров микроклимата
Изоляторы
ТЭМП
Вентилируемые
шкафы
Изолированные
комнаты
GLP: Основы доклинических исследований
29
Контроль параметров микроклимата
Микроизоляторы
Клетка с крышкойфильтром
Вентилируемые клетки
1 – приточный фильтр
2 – вытяжной клапан
3 – герметичный замок
4 – герметичный держатель бутылочки
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
30
Контроль параметров микроклимата
Вентилируемая микроизоляторная система
•
•
•
•
Регуляция в клетке
влажности, уровня
аммиака и углекислого
газа
Защита животного
Защита персонала
Эффективное
использование площади
комнаты
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
31
Корма для грызунов
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Гранулированный или прессованный
Порошок
Для молодых растущих животных
Обычный для содержания
Для размножающихся
Для морских свинок
Стерильный (автоклавированный,
облученный)
Автоклавируемый (увеличено содержание
витаминов)
Разные специализированные корма
Сертифицированные корма для GLPисследований
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
32
Виды подстила
Рекомендуемые:
‹ Стружка мягких пород
деревьев
‹ Чипы мягких пород
деревьев
‹ Бумага
Не рекомендуемые:
‹ Необработанные стружка и
чипы твердых пород
деревьев
‹ Опилки
‹ Стружка и опилки хвойных
пород деревьев без
нейтрализации смол
Тополиная стружка
Чипы из тополя
Шарики из кукурузы
Целлюлозный подстил (Harlan)
ТЭМП
GLP: Основы доклинических исследований
33