БИОСИНТЕЗ КОФЕРМЕНТА А – УНИВЕРСАЛЬНЫЙ МЕХАНИЗМ
advertisement
ÄÎÏβIJ Þ²ËÅÉÍί ÊÎÍÔÅÐÅÍÖ²¯ ÓÄÊ 577.164.14:612.015.6:615.356 ÁÈÎÑÈÍÒÅÇ ÊÎÔÅÐÌÅÍÒÀ À ÓÍÈÂÅÐÑÀËÜÍÛÉ ÌÅÕÀÍÈÇÌ ÑÎÏÐßÆÅÍÈß ÝÊÇÎÃÅÍÍÎÑÒÈ È ÌÍÎÆÅÑÒÂÅÍÍÎÑÒÈ ÔÓÍÊÖÈÉ ÏÀÍÒÎÒÅÍÎÂÎÉ ÊÈÑËÎÒÛ À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊΠÈíñòèòóò áèîõèìèè ÍÀÍ Áåëàðóñè, Ãðîäíî; e-mail: val@biochem.unibel.by Ðîçâèòîê ³äå¿ àêàäåì³êà Ð. Â. ×àãîâöÿ ùîäî ðåãóëÿòîðíî¿ ðîë³ â³òàì³í³â òà ¿õí³õ ïîõ³äíèõ â îáì³í³ ñ³ðêîâì³ñíèõ ñïîëóê, ôîðìóâàíí³ àíòèîêñèäàíòíî¿ ñèñòåìè îðãàí³çìó, â äîñë³äæåíí³ íåêîôåðìåíòíèõ ôóíêö³é â³òàì³í³â ãðóïè Â, â³òàì³íçâÿçóâàëüíèõ á³ëê³â ìàëî çíà÷íèé âïëèâ íà á³ëüø í³æ 40-ð³÷íº âèâ÷åííÿ ìåòàáîë³çìó òà á³îõ³ì³÷íèõ ôóíêö³é ïàíòîòåíîâî¿ êèñëîòè ñï³âðîá³òíèêàìè ãðîäíåíñüêî¿ â³òàì³íîëîã³÷íî¿ øêîëè. Îáãðóíòîâàíî êîíöåïö³þ ñòîñîâíî âíóòð³øíüîêë³òèííî¿ ñòðóêòóðè ôîíäà êîôåðìåíòíîãî ïàíòîòåíàòó-ÑîÀ (âì³ñò òà ñï³ââ³äíîøåííÿ ÑîÀ-SH, àöåòèë-ÑîÀ, êîðîòêîëàíöþãîâèõ òà äîâãîëàíöþãîâèõ àöèë-ÑîÀ, äèñóëüô³äíèõ ôîðì êîôåðìåíòó òà ÑîÀ-S-S-á³ëê³â), ùî º íàéâàæëèâ³øèì ôàêòîðîì ðåãóëÿö³¿ ìåòàáîë³çìó (çà âêëþ÷åííÿ ðåäîêñ-ïîòåíö³àëó ñèñòåìè ãëóòàò³îíó), çì³íà ÿêîãî º ïðîâ³äíèì ìåõàí³çìîì ðåàë³çàö³¿ â³òàì³ííî¿ òà ôàðìàêîòåðàïåâòè÷íî¿ àêòèâíîñò³ ïîõ³äíèõ ïàíòîòåíîâî¿ êèñëîòè. ijÿ îñòàíí³õ îïîñåðåäêîâóºòüñÿ ñèñòåìîþ á³îñèíòåçó ÑîÀ, ôîñôîïàíòåòå¿íïðîòå¿í³â, çì³íîþ ð³âíÿ ÑîÀ-S-S-á³ëê³â, ùî ó ñâîþ ÷åðãó ï³äòðèìóþòü âíóòð³øíüîêë³òèííèé ð³âåíü ÑîÀ-SH òà öèòîçîëüíîì³òîõîíäð³àëüíîãî òðàíñïîðòóâàííÿ éîãî â³òàì³íîâì³ñíèõ ïîïåðåäíèê³â. Âèÿâëåíî óí³âåðñàëüíó ôóíêö³þ á³îñèíòåçó ÑîÀ â ïîïåðåäæåíí³ ³í³ö³þâàííÿ ïðîöåñ³â ïåðîêñèäíîãî îêèñëåííÿ ë³ï³ä³â òà ðîçâèòêó îêèñëþâàëüíîãî ñòðåñó. Ê ë þ ÷ î â ³ ñ ë î â à: êîôåðìåíò À (ÑîÀ), á³îñèíòåç ÑîÀ, ïàíòîòåíàòê³íàçà, ÑîÀ-S-S-áåëîê, ïàíòîòåíîâà êèñëîòà, àöèë-ÑîÀ, äåôîñôî-ÑîÀ, 4 ′-ôîñôîïàíòåòå¿í, 4 ′-ôîñôîïàíòîòåíîâà êèñëîòà. Ì èíóâøèé 2003 ãîä áûë îòìå÷åí âàæíûìè èñòîðè÷åñêèìè âåõàìè â èçó÷åíèè ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû âèòàìèííîãî ïðåäøåñòâåííèêà êîôåðìåíòà À (ÑîÀ), à èìåííî 70-ëåòèåì îòêðûòèÿ ýòîãî íåçàìåíèìîãî ôàêòîðà ïèòàíèÿ (R.Williams, 1933) è, ñïóñòÿ 10 ëåò, åãî êîôåðìåíòíîé ôîðìû â ôåðìåíòàòèâíîé ðåàêöèè àöåòèëèðîâàíèÿ õîëèíà (D. Nachmansohn, 1943). ×åðåç 5 ëåò, â 1948 ã., ÑîÀ áûë èäåíòèôèöèðîâàí êàê ïàíòîòåíàòñîäåðæàùèé êîôàêòîð (F. Lipmann, 1948) â ïðîöåññàõ N-àöåòèëèðîâàíèÿ, ÷òî ñòàëî îñíîâàíèåì ïðèñóæäåíèÿ àâòîðó Íîáåëåâñêîé ïðåìèè (÷åðåç 20 ëåò ïîñëå ðàáîòû D. Nachmansohn). ÑîÀ-çàâèñèìàÿ ðåàêöèÿ àöåòèëèðîâàíèÿ õîëèíà ñòàëà ïðåäìåòîì è íà÷àëîì èññëåäîâàíèé ïðîöåññîâ àöåòèëèðîâàíèÿ è áèîñèíòåçà ÑîÀ Ãðîäíåíñêîé áèîõèìè÷åñêîé øêîëîé, îñíîâàòåëåì è ìíîãîëåòíèì ðóêîâîäèòåëåì êîòîðîé áûë ïðîôåññîð, â ïîñëåäóþùåì àêàäåìèê ÀÍ ÁÑÑÐ Þ. Ì. Îñòðîâñêèé. 40-ëåòíèé ïåðèîä èññëåäîâàíèé ãðîäíåíñêèõ áèîõèìèêîâ â îáëàñòè ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû (ÏÀÊ), ÑîÀ, 100-ëåòíèé þáèëåé êîðèôåÿ ñîâåòñêîé è óêðàèíñêîé âèòàìèíîëîãèè àêàäåìèêà Ð. Â. ×àãîâöà, åãî òâîð÷åñêàÿ äðóæáà ñ îñíîâàòåëåì Ãðîäíåíñêîé áèîõèìè÷åñêîé øêîëû è áåçóñëîâíîå âëèÿíèå íà ôîðìèðîâàíèå íàó÷íûõ íà- ïðàâëåíèé â Îòäåëå ðåãóëÿöèè îáìåíà âåùåñòâ Èíñòèòóòà ÀÍ ÁÑÑÐ, à âïîñëåäñòâèè òàêæå ðÿäà äðóãèõ ïîäðàçäåëåíèé Èíñòèòóòà áèîõèìèè ÍÀÍ Áåëàðóñè, ïîñëóæèëè ïîâîäîì äëÿ îöåíêè ïðîéäåííîãî ïóòè êàê óêðàèíñêèìè, òàê è áåëîðóññêèìè ó÷åíûìè è ïëîäîòâîðíîé ðåàëèçàöèè èäåé àêàäåìèêà Ð. Â. ×àãîâöà. Ðå÷ü èäåò î êîíöåïòóàëüíûõ ïîëîæåíèÿõ, îáîñíîâàííûõ èì îòíîñèòåëüíî ðåãóëÿòîðíîé ðîëè âèòàìèíîâ è èõ ìåòàáîëèòîâ â îáðàçîâàíèè è îáìåíå ñåðîñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé (ÑîÀ-SH, ãëóòàòèîí-SH, öèñòåèí-SH è äð.), ôîðìèðîâàíèè àíòèîêñèäàíòíîé ñèñòåìû (ÀÑ) îðãàíèçìà, èçó÷åíèè íåêîôåðìåíòíûõ ôóíêöèé âèòàìèíîâ ãðóïïû Â, âèòàìèíñâÿçûâàþùèõ áåëêîâ [13]. Ïðåäìåò ðàññìîòðåíèÿ è èññëåäîâàíèé ÏÀÊ (âèòàìèí Â5) øèðîêî ðàñïðîñòðàíåííûé â áèîîáúåêòàõ âèòàìèí è ïðåèìóùåñòâåííî â ôîðìå ÑîÀ èñïîëüçóåìûé â ìíîãî÷èñëåííûõ ðåàêöèÿõ ïåðåíîñà àöèëîâ, îñóùåñòâëåíèè êëþ÷åâûõ ýíåðãåòè÷åñêèõ öèêëîâ â ìèòîõîíäðèÿõ. Ïî îöåíêå Ð. Â. ×àãîâöà, ýññåíöèàëüíîñòü ÏÀÊ ñîîòâåòñòâóåò ôåíîìåíó âòîðè÷íîé ãåòåðîòðîôíîñòè ó ìëåêîïèòàþùèõ [2], ÷òî ïîäòâåðæäåíî íàìè â ñïåöèàëüíîì èññëåäîâàíèè [4].  îòëè÷èå îò ðÿäà äðóãèõ êîôåðìåíòîâ (íàïðèìåð íèêîòèíàìèäíûõ è ðèáîôëàâèíîâûõ) êàòàëèòè÷åñêèå ôóíê- 68 ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4 À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊΠöèè ÑîÀ-SH ðåàëèçóþòñÿ ñâîáîäíîé (íåïðîòåèíèçèðîâàííîé) ôîðìîé êîôåðìåíòà, êîòîðàÿ ïðèñóòñòâóåò âî âñåõ áèîëîãè÷åñêèõ îáúåêòàõ, íàïðèìåð â òêàíÿõ ìëåêîïèòàþùèõ â êîíöåíòðàöèè 20140 íìîëü/ã ñûðîé òêàíè. Ñóììàðíîå ñîäåðæàíèå ôðàêöèé ÑîÀ, âêëþ÷àÿ ÑîÀ-SH, àöåòèë-ÑîÀ, äðóãèå àöèë-ÑîÀ, äèñóëüôèäíûå ïðîèçâîäíûå ñîñòàâëÿþò âåëè÷èíó, ïðåâûøàþùóþ óêàçàííóþ â 2,53,0 ðàçà. Íàïðèìåð, â ïå÷åíè áåëûõ êðûñ, ïîëó÷àþùèõ ñáàëàíñèðîâàííûé ðàöèîí, ñóììàðíîå êîëè÷åñòâî ÑîÀ (îáùåãî êîôåðìåíòà) ïðèáëèæàåòñÿ ê 450 íìîëü/ã ñûðîé òêàíè. Ê êîíöó 70-õ ãîäîâ âûÿñíèëîñü, ÷òî ñóùåñòâóåò êëàññ ôîñôîïàíòåòåèíïðîòåèíîâ, ó÷àñòâóþùèõ â íåêîòîðûõ ñëîæíûõ öèêëè÷åñêèõ ïðîöåññàõ áèîñèíòåçà æèðíûõ êèñëîò, àíòèáèîòèêîâ, êàòàëèçèðóåìûõ ìóëüòèôåðìåíòíûìè êîìïëåêñàìè, â ÷àñòíîñòè ñèíòåòàçîé æèðíûõ êèñëîò [5]. Íàèáîëåå òðóäíóþ ïðîáëåìó â áèîõèìèè ÑîÀ ïðåäñòàâëÿëî íå ñòîëüêî êîëè÷åñòâåííîå îïðåäåëåíèå ôðàêöèé ÑîÀ (ÑîÀ-SH, êèñëîòîðàñòâîðèìûõ è êèñëîòîíåðàñòâîðèìûõ àöèë-ÑîÀ), ñêîëüêî äèôôåðåíöèðîâàííûé ó÷åò ïðåäøåñòâåííèêîâ ÑîÀ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ. Óæå ê êîíöó 60-õ ãîäîâ ñòàëî î÷åâèäíûì, ÷òî îïðåäåëåííûå êîëè÷åñòâà ïîñëåäíèõ (4′-ôîñôîïàíòîòåíîâàÿ êèñëîòà, 4′-ôîñôîïàíòîòåíîèëöèñòåèí, 4′-ôîñôîïàíòåòåèí, äåôîñôî-ÑîÀ, ïàíòåòèí) èäåíòèôèöèðóþòñÿ â òêàíÿõ ìëåêîïèòàþùèõ. Òåì ñàìûì áûë îïðîâåðãíóò âàæíûé ïîñòóëàò, âûòåêàþùèé èç èòîãîâ èññëåäîâàíèé Å. Lipmann î òîì, ÷òî åäèíñòâåííîé ìåòàáîëè÷åñêè àêòèâíîé ôîðìîé ÏÀÊ ÿâëÿåòñÿ ÑîÀ [5]. Îòêðûëèñü ïåðñïåêòèâû èçó÷åíèÿ øèðîêîãî ñïåêòðà ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ, êàê ïîòåíöèàëüíûõ âèòàìèííûõ è ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ, êîòîðûå ïðîâîäèëèñü ïðàêòè÷åñêè îäíîâðåìåííî â Îòäåëå ðåãóëÿöèè îáìåíà âåùåñòâ ÀÍ ÁÑÑÐ è íà êàôåäðå áèîõèìèè Îäåññêîãî óíèâåðñèòåòà èì. È. È. Ìå÷íèêîâà. Íà I Âñåñîþçíîì ñèìïîçèóìå ïî áèîõèìèè ñèíòåçà è îáìåíà êîôåðìåíòîâ è êîôåðìåíòíûõ âèòàìèíîâ (Êèåâ, ÿíâàðü 1972 ã.), îðãàíèçîâàííûì àêàäåìèêîì Ð. Â. ×àãîâöåì, âïåðâûå áûëè äîëîæåíû äàííûå ïî áèîäîñòóïíîñòè ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ ÏÀÊ-Ñà, 4′-ôîñôî-ÏÀÊ-Ñà, ïàíòåíîëà, S-áåíçîèëïàíòåòåèíà, ïàíòåòèíà (ÏÒ), 4′-ôîñôî-áåíçîèëïàíòåòåèíà. Ðåçóëüòàòû ïîêàçàëè, ÷òî ôîñôîðèëèðîâàííûå ïðîèçâîäíûå âèòàìèíà, à òàêæå ïàíòåòèí, ÿâëÿþòñÿ ýôôåêòèâíî óòèëèçèðóåìûìè ïðåïàðàòàìè, ñïîñîáíûìè ñòèìóëèðîâàòü áèîñèíòåç ÑîÀ, è îáëàäàþò âûñîêîé ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâíîñòüþ [6]. Ðåçóëüòàòèâíûé è êâàëèôèöèðîâàííûé ñèíòåç ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ îáåñïå÷èâàëñÿ ñîòðóäíè÷åñòâîì ñ êîëëåêòèâîì ëàáîðàòîðèè ãåòåðîöèêëè÷åñêèõ ñîåäèíåíèé ÂÍÈÂÈ (Â. È. Ãóíàð, Â. Ì. Êîïåëåâè÷, Ã. Ñ. Êîçëîâà, Ò. Ä. Ìàðèåâà, ÍÏÎ Âèòàìèíû), â òîì ÷èñëå íàïðàâëÿåìûìè íà ó÷åáó è ñòàæèðîâêó ñîòðóäíèêàìè èç Ãðîäíî (À. Â. Ëûñåíêîâà, Ò. Â. Äåäîâè÷ è äð.). Ñèíòåç 4′-ôîñôîïàíòîòåíîâîé êèñëîòû, ïàíòåòåèíà, ôîñôàòíûõ ïðîèçâîäíûõ ïàíòåòèíà è S-ñóëüôîïàíòåòåèíà áûë ðåàëèçîâàí íà ïðèîðèòåòíîì óðîâíå [710].  1977 ã. íàìè áûë îðãàíèçîâàí ìåæðåñïóáëèêàíñêèé ñèìïîçèóì Õèìèÿ, áèîõèìè÷åñêèå ôóíêöèè è ïðèìåíåíèå ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû, êîòîðûé ïîçâîëèë îáúåäèíèòü è ñêîîðäèíèðîâàòü óñèëèÿ ïðàêòè÷åñêè âñåõ ó÷åíûõ ÑÑÑÐ, ðàáîòàâøèõ â äàííîé îáëàñòè âèòàìèíîëîãèè. Ãëàâíûì íàó÷íûì èòîãîì ðàáîòû ñèìïîçèóìà ÿâèëîñü îáîñíîâàíèå àêòóàëüíîñòè èññëåäîâàíèé ïî áèîñèíòåçó ÑîÀ, äåòàëüíîìó èçó÷åíèþ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ, íåîáõîäèìîñòè ñîâåðøåíñòâîâàíèÿ ìåòîäîëîãèè èññëåäîâàíèé áèîòðàíñôîðìàöèè ïàíòîòåíàòîâ [11]. Ñ 1980 ã. ñîãëàñîâàííàÿ ïðîãðàììà, â ÷àñòíîñòè ïî èçó÷åíèþ 4′-ôîñôîïàíòîòåíîâîé êèñëîòû, ïîñëåäîâàòåëüíî ðåàëèçóåòñÿ â íàó÷íûõ ó÷ðåæäåíèÿõ Ãðîäíî, Ìîñêâû, Îäåññû, Êèåâà, Ðèãè, Âèëüíþñà, Èðêóòñêà è ×èòû.  ñîîòâåòñòâèè ñ ïîñòàíîâëåíèåì Áþðî Ïðåçèäèóìà ÀÍ ÁÑÑÐ îò 2 èþëÿ 1981 ã. íà îñíîâå íàó÷íîé ãðóïïû áèîõèìèè ñåðîñîäåðæàùèõ âèòàìèíîâ (ðóê. ê.ì.í. À. Ã. Ìîéñååíîê) áûëà ñôîðìèðîâàíà ëàáîðàòîðèÿ êîôåðìåíòîâ â ñòðóêòóðå Îòäåëà ðåãóëÿöèè îáìåíà âåùåñòâ ÀÍ ÁÑÑÐ ( ñ 1985 ã. Èíñòèòóò áèîõèìèè). Óòâåðæäåíî íàó÷íîå íàïðàâëåíèå : Èçó÷åíèå îáìåíà ïðèðîäíûõ ñîåäèíåíèé ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû â îðãàíèçìå æèâîòíûõ è ÷åëîâåêà, âêëþ÷àÿ èññëåäîâàíèÿ ìåõàíèçìîâ ðåãóëÿöèè ïàíòîòåíàòñîäåðæàùèõ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì, ìåõàíèçìîâ ðåãóëÿöèè ñèñòåì áèîñèíòåçà è ðàñïàäà êîôåðìåíòà àöåòèëèðîâàíèÿ. Ìåòîäè÷åñêîé îñíîâîé âûïîëíÿåìûõ èññëåäîâàíèé ñòàëè îðèãèíàëüíûå èëè ìîäèôèöèðîâàííûå ìåòîäû îïðåäåëåíèÿ ÏÀÊ ìåòîäîì ÃÆÕ [12], èññëåäîâàíèå áèîòðàíñôîðìàöèè âèòàìèíñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé íà îñíîâå ðàäèîíóêëèäíîé äåòåêöèè [13], îïðåäåëåíèå ôîñôîïàíòîòåíîâîé êèñëîòû [14], îïðåäåëåíèå àêòèâíîñòè ÏÀÊ-êèíàçû ðàäèîìåòðè÷åñêèì ìåòîäîì [15], äèôôåðåíöèðîâàííîå îïðåäåëåíèå êîðîòêîöåïî÷å÷íûõ èëè äëèííîöåïî÷å÷íûõ àöèëÑîÀ íà îñíîâå 2-îêñîãëóòàðàòäåãèäðîãåíàçíîé ðåàêöèè [16], îïðåäåëåíèå ñâîáîäíîãî ÑîÀ, êîðîòêîöåïî÷å÷íûõ àöèë-ÑîÀ, â òîì ÷èñëå àöåòèëÑîÀ íà îñíîâå ôîñôîòðàíñàöåòèëàçíîé ðåàêöèè [17], îïðåäåëåíèå ÏÀÊ-áåëêîâûõ êîìïëåêñîâ öèòîçîëÿ ãåïàòîöèòîâ íà îñíîâå ãåëü-ôèëüòðàöèè è èîíîîáìåííîé õðîìàòîãðàôèè [18], èçó÷åíèå ìåõàíèçìîâ òðàíñïîðòà ÏÀÊ â òîíêîì êèøå÷íèêå [19], êîìïëåêñíûå ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ [20], èñ- ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4 69 ÄÎÏβIJ Þ²ËÅÉÍί ÊÎÍÔÅÐÅÍÖ²¯ ñëåäîâàíèå áèîòðàíñôîðìàöèè ìå÷åíûõ ïðåäøåñòâåííèêîâ áèîñèíòåçà ÑîÀ íà îñíîâå ÂÝÆÕ [21].  ñóùíîñòè, ê ñåðåäèíå 80-õ ãîäîâ áûëà ðàçðàáîòàíà ñîâðåìåííàÿ ìåòîäîëîãèÿ èññëåäîâàíèé, ïîçâîëÿþùàÿ âñåñòîðîííå ðåøàòü íàó÷íûå çàäà÷è â ðàìêàõ íàó÷íîãî íàïðàâëåíèÿ ëàáîðàòîðèè êîôåðìåíòîâ, à òàêæå âûïîëíÿòü íàó÷íî-òåõíè÷åñêèå è ïðèêëàäíûå ðàçðàáîòêè, ôèíàíñèðóåìûå ÍÏÎ Âèòàìèíû [22]. Êàê èçâåñòíî, èçìåíåíèå ñòðóêòóðû âíóòðèêëåòî÷íîãî ôîíäà ÑîÀ èëè, èíà÷å ãîâîðÿ, ñîîòíîøåíèå äåòåêòèðóåìûõ ôðàêöèé ÑîÀ (ÑîÀSH/àöåòèë-ÑîÀ, àöèë-ÑîÀ/îáùèé ÑîÀ è äð.) ÿâëÿåòñÿ âàæíûì ðåãóëÿòîðíûì ôàêòîðîì ìåòàáîëèçìà óãëåâîäîâ è ëèïèäîâ. Íàïðèìåð ïèðóâàòäåãèäðîãåíàçà èíãèáèðóåòñÿ âûñîêèì îòíîøåíèåì àöåòèë-ÑîÀ/ÑîÀ, òîãäà êàê ïèðóâàòêàðáîêñèëàçà àêòèâèðóåòñÿ èçáûòêîì àöåòèë-ÑîÀ [23]. Áîëåå ïîäðîáíî ìåòàáîëè÷åñêàÿ ðîëü èçìåíåíèé ñòðóêòóðû âíóòðèêëåòî÷íîãî ôîíäà ÑîÀ èçëîæåíà â öèêëå ðàáîò Ð. Garland, P. Randle, J. Williamson, îáîáùåíà â èçâåñòíîé ìîíîãðàôèè Å. Íîñõîëìà è Ê. Ñòàðà [24] è, ÷àñòè÷íî, â íàøåé ìîíîãðàôèè [25]. Ñîáñòâåííûå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî àëèìåíòàðíàÿ íåäîñòàòî÷íîñòü âèòàìèíà Â5 â îðãàíèçìå æèâîòíûõ ïðèâîäèò ê âûðàæåííîìó ñíèæåíèþ îáùåãî êîëè÷åñòâà ÑîÀ â ïå÷åíè è ðÿäå äðóãèõ òêàíåé. Êîëè÷åñòâî ïðåäøåñòâåííèêîâ áèîñèíòåçà ÑîÀ (4′-ôîñôî- è äåôîñôî-ÑîÀ-ïàíòåòåèíà) ïîäâåðãàåòñÿ áûñòðîìó ñíèæåíèþ è íà ãëóáîêèõ ñòàäèÿõ âèòàìèííîé íåäîñòàòî÷íîñòè ñîñòàâëÿåò 5060% îò óðîâíÿ, íàáëþäàåìîãî ó æèâîòíûõ, ïîëó÷àþùèõ ñáàëàíñèðîâàííûé ðàöèîí.  òî æå âðåìÿ ââåäåíèå ïîñëåäíèì ðàçëè÷íûõ ïðåïàðàòîâ ÏÀÊ âûçûâàåò çíà÷èòåëüíûå è íåðàâíîöåííûå èçìåíåíèÿ ñîäåðæàíèÿ ÑîÀ-SH è åãî àöèëèðîâàííûõ ïðîèçâîäíûõ, à òàêæå ñîäåðæàíèÿ ïðåäøåñòâåííèêîâ êîôåðìåíòà â ïå÷åíè. Òåì ñàìûì âïåðâûå áûëè ïîëó÷åíû äàííûå, ïîçâîëÿþùèå ñäåëàòü âûâîä î ñóùåñòâîâàíèè îïðåäåëåííûõ îñîáåííîñòåé âî âçàèìîîòíîøåíèÿõ ÏÀÊ ïðåäøåñòâåííèêîâ ÑîÀ è ñèñòåìû áèîñèíòåçà ÑîÀ [11,18,25]. Íàèáîëåå âåðîÿòíûì ìåõàíèçìîì, îáóñëîâëèâàþùèì ñòîëü î÷åâèäíûå ðàçëè÷èÿ èíèöèèðîâàíèÿ áèîñèíòåçà ÑîÀ ïðè ââåäåíèè ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ, ìîæåò áûòü èõ ðàçëè÷íàÿ áèîäîñòóïíîñòü è õàðàêòåð âçàèìîäåéñòâèÿ ñ êëþ÷åâûì ôåðìåíòîì áèîñèíòåçà êîôåðìåíòà ïàíòîòåíàòêèíàçîé (2.7.1.33). Èíãèáèòîðàìè àêòèâíîñòè ôåðìåíòà ÿâëÿåòñÿ ÑîÀ-SH, äåôîñôî-ÑîÀ, ôîñôîïàíòåòåèí è ðàçëè÷íûå àöèë-ÑîÀ. Ïðè Êi ïàíòîòåíàòêèíàçû, ðàâíîé 0,25 ìÌ, ôèçèîëîãè÷åñêàÿ êîíöåíòðàöèÿ ôîñôîïàíòåòåèíà è ÑîÀ ðàâíÿåòñÿ 0,20,36 ìÌ. Ïîñêîëüêó òêàíåâîå ñîäåðæàíèå ñâîáîäíîé ôîðìû ÑîÀ-SH ñîñòàâëÿåò òîëüêî ÷àñòü óêàçàííîé âåëè÷èíû, ñóììàðíûé ñäåðæèâàþùèé ýôôåêò áèîñèíòåçà ÑîÀ äîïîëíèòåëüíî îáåñïå÷èâàþò àöèë-ÑîÀ, ïðåæäå âñåãî àöåòèë-ÑîÀ, ïðîïèîíèë-ÑîÀ, ïàëüìèòîèë-ÑîÀ è äðóãèå àêòèâèðîâàííûå àöèëû [5,25,26]. Àíàëèç ñîîòíîøåíèÿ óðîâíÿ ÑîÀ-SH, äëèííîöåïî÷å÷íûõ àöèë-ÑîÀ è îáùåãî ÑîÀ îáíàðóæèâàåò çíà÷èòåëüíûå èçìåíåíèÿ â ñòðóêòóðå òêàíåâîãî ôîíäà êîôåðìåíòà, ïðîèñõîäÿùèå ïðè ââåäåíèè ðàçëè÷íûõ ïðåïàðàòîâ ÏÀÊ (ðèñ. 1), ÷òî ñîïðîâîæäàåòñÿ êà÷åñòâåííûìè è êîëè÷åñòâåííûìè èçìåíåíèÿìè óðîâíÿ ïðåäøåñòâåííèêîâ áèîñèíòåçà ÑîÀ, à òàêæå àêòèâíîñòè ôåðìåíòîâ ñèíòåçà è ãèäðîëèçà àöèë-ÑîÀ ãåïàòîöèòîâ [25]. Ðàñøèðåííûå èññëåäîâàíèÿ, ïðîâîäèìûå ñ îñíîâíîé âèòàìèííîé è ëåêàðñòâåííîé ôîðìîé âèòàìèíà Â5 ÏÀÊ-Ñà, ïîêàçàëè, ÷òî â ïå÷åíè ïîëîâîçðåëûõ áåëûõ êðûñ ñóùåñòâåííîå óâåëè÷åíèå îáùåãî ÑîÀ äîñòèãàåòñÿ îäíîêðàòíîé èíúåêöèåé ïðåïàðàòà â äîçå, ðàâíîé èëè âûøå 30 ìã/êã ìàññû òåëà. Ïîâûøåíèå îáùåãî ÑîÀ èìååò õàðàêòåðíûé ìàêñèìóì ñïóñòÿ 6 ÷ îò ìîìåíòà èíúåêöèè è íå ñîïðîâîæäàåòñÿ èçìåíåíèåì ñòðóêòóðû ôîíäà êîôåðìåíòà â ïå÷åíè, â ÷àñòíîñòè ñîîòíîøåíèÿ ÑîÀ-SH/îáùèé ÑîÀ. Îäíàêî êóðñîâîå ââåäåíèå ïàíòîòåíàòà (ñóììàðíàÿ äîçà 300 ìã/êã ìàññû òåëà) óâåëè÷èâàåò óðîâåíü îáùåãî ÑîÀ â ïå÷åíè íà 52% ïðè îäíîâðåìåííîì ñíèæåíèè êîýôôèöèåíòà ÑîÀ-SH/îáùèé ÑîÀ [25,27]. Êàê âïåðâûå ïîêàçàíî â ëàáîðàòîðèè À. ß. Ðîçàíîâà, ïðè èíúåêöèîííîì ââåäåíèè ïðåïàðàòîâ ÏÀÊ æèâîòíûì íàáëþäàþòñÿ îñöèëëÿöèè óðîâíÿ ìåòàáîëèòîâ âèòàìèíà, â ò.÷. ÑîÀ, â ðàçëè÷íûõ òêàíÿõ è ïðîÿâëÿþòñÿ â áûñòðîì ïåðâè÷íîì (1560 ìèí) è ìåäëåííîì âòîðè÷íîì (4 70 ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4 0,5 0,4 Ñîîòíîøåíèå CoASH/îáùèéCoA ÑîA-SH/ îáùèé ÑîÀ Ñîîòíîøåíèå àöèë-CoA/îáùèé CoA 0,4 0,37 0,29 0,3 0,27 0,26 0,25 0,2 0,2 0,22 0,19 0,17 0,1 0 1 2 3 4 5 Ðèñ. 1. Èçìåíåíèå ñîîòíîøåíèÿ ÑîÀ-SH/îáùèé ÑîÀ è äëèííîöåïî÷å÷íûå àöèë-ÑîÀ/îáùèé ÑîÀ â ïå÷åíè áåëûõ êðûñ ïîñëå êóðñîâîãî ââåäåíèÿ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ â äîçå 30 ìã/êã ìàññû òåëà, ýêâèìîëÿðíîé ÏÀÊ-Ñà. 1 êîíòðîëü; 2 ÏÀÊ-Ñà; 3 ïàíòåíîë; 4 ôîñôî-ÏÀÊ-Ñà; 5 ïàíòåòèí [25]. À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊΠ6 ÷) èõ íàêîïëåíèè, îáóñëîâëåííîì ðåòðîèíãèáèðîâàíèåì ïàíòîòåíàòêèíàçíîé ðåàêöèè (ñì. âûøå), à òàêæå ïå÷åíî÷íî-êèøå÷íîé ðåöèðêóëÿöèåé ìåòàáîëèòîâ ÏÀÊ [11,28]. Äåòàëèçàöèÿ âûøåóêàçàííîãî ýêñïåðèìåíòàëüíîãî ïîäõîäà è èñïîëüçîâàíèå ñîâðåìåííîãî ìåòîäà ðàçäåëåíèÿ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ ñ ïîìîùüþ õðîìàòîãðàôèè íà ñåðâàöåëå ÄÝÀÝ 23SH [29] ïðèâåëè ê íåîæèäàííûì ðåçóëüòàòàì. Ïîñëå îäíîêðàòíîãî ïîäêîæíîãî ââåäåíèÿ [14Ñ]-ðàäèîíóêëèäîâ ÏÀÊ-Ñà, ôîñôî-ÏÀÊ è ÏÒ â äîçå 36 ìêìîëü/êã (0,12 ìêÊè/ìêìîëü) ÷åðåç 10, 30, 60, 180 è 360 ìèí â ïå÷åíè êðûñ ñ íåäîñòàòî÷íîñòüþ ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû âûÿâëåíû ñóùåñòâåííûå ðàçëè÷èÿ â íàêîïëåíèè â íåé ðàäèîàêòèâíûõ ïðåïàðàòîâ è èõ ìåòàáîëèòîâ âî âðåìåíè. Íàèáîëåå âàæíûì â îöåíêå áèîòðàíñôîðìàöèè ïðåïàðàòîâ [14C]-ïàíòîòåíàòà è åãî ïðîèçâîäíûõ ÿâëÿåòñÿ îïðåäåëåíèå èõ âêëþ÷åíèÿ âî ôðàêöèþ êîôåðìåíòà. Íàðàñòàþùàÿ âî âðåìåíè èíêîðïîðàöèÿ ðàäèîíóêëèäà âî ôðàêöèþ ÑîÀ ïå÷åíè îáåñïå÷èâàåòñÿ èíúåêöèåé ÏÀÊ-Ñà. Ñðàâíèòåëüíûé àíàëèç áèîòðàíñôîðìàöèè ÏÀÊ-Ñà è ÏÒ äî ñòàäèè îáðàçîâàíèÿ êîôåðìåíòà ñâèäåòåëüñòâóåò î ïðåäïî÷òèòåëüíîì èñïîëüçîâàíèè ñèñòåìîé áèîñèíòåçà ÑîÀ ñâîáîäíîãî âèòàìèíà ïî ñðàâíåíèþ ñ ÏÒ. Ýòî îòìå÷åíî ïî ñêîðîñòè áèîòðàíñôîðìàöèè ÏÀÊ-Ñà â ôîñôîðèëèðîâàííûå ìåòàáîëèòû ÑîÀ, ÑîÀ è ïî ïðîäîëæèòåëüíîñòè íàêîïëåíèÿ ìåòàáîëèòîâ, à òàêæå ïî àáñîëþòíîé âåëè÷èíå âíåäðåíèÿ ðàäèîíóêëèäà â áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûå ôîðìû âèòàìèíà [25]. Äëÿ îöåíêè âîçìîæíîñòè ïðîòåèíèçàöèè ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ è âåðîÿòíîé âçàèìîñâÿçè îáðàçîâàíèÿ ÏÀÊ-áåëêîâûõ êîìïëåêñîâ (ÏÁÊ) ñ áèîòðàíñôîðìàöèåé ÏÀÊ-ïðîèçâîäíûõ, èññëåäîâàíèÿ áûëè ïðîâåäåíû íà æèâîòíûõ, ïîëó÷àþùèõ ÏÀÊ-äåôèöèòíûé ðàöèîí â òå÷åíèå 12 íåäåëü. Æèâîòíûì ââîäèëè ïîäêîæíî D,L-[14C]ÏÀÊ-Ñà èëè D,L-[ 14C]ÏÒ, èëè D,L-[ 14C]ôîñôî-ÏÀÊ (óäåëüíàÿ àêòèâíîñòü 3,5⋅10-3 ÌÁê/ìêìîëü) îäíîêðàòíî â äîçå 68 ìêìîëü/êã íà ïåðèîä 6 ÷. Ñóäÿ ïî ðåçóëüòàòàì ðàäèîõðîìàòîãðàôè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé, íàèáîëåå âûñîêàÿ ñòåïåíü áèîòðàíñôîðìàöèè äî ìåòàáîëèòîâ, îòíîñÿùèõñÿ ê ôðàêöèè III (äåôîñôî-ÑîÀ + ÑîÀ), íàáëþäàåòñÿ â ñëó÷àÿõ ââåäåíèÿ ÏÀÊ-Ñà è ôîñôî-ÏÀÊ (20 25% âñåãî òêàíåâîãî ðàäèîíóêëèäà ó êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ è 3841% ó æèâîòíûõ ñ íåäîñòàòî÷íîñòüþ ÏÀÊ). Áèîòðàíñôîðìàöèÿ ÏÒ ïðîèñõîäèò ïðåèìóùåñòâåííî äî íåíóêëåîòèäíûõ ìåòàáîëèòîâ ÏÀÊ (ôðàêöèÿ II), êîòîðàÿ ñîäåðæàëà 5764% âñåé òêàíåâîé ðàäèîàêòèâíîñòè. Îòíîñèòåëüíûé óðîâåíü ðàäèîíóêëèäà âî ôðàêöèè ÑîÀ (ôðàêöèÿ III) ïå÷åíè æèâîòíûõ ñ âèòàìèííîé íåäîñòàòî÷íîñòüþ áûë âûøå, ÷åì â êîíòðîëå [18]. Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ ðàäèîíóêëèäîâ â ñîñòàâå ÏÁÊ öèòîçîëÿ êëåòîê ïå÷åíè ïîêàçàëè, ÷òî ïðåïàðàò ôîñôî-ÏÀÊ èëè åãî ìåòàáîëèò íàèáîëåå ýôôåêòèâíî ñâÿçûâàåòñÿ â ÏÁÊ ê øåñòè ÷àñàì ïîñëå èíúåêöèè è ïðè ýòîì óðîâåíü ïðîòåèíèçàöèè ðàäèîíóêëèäà ñóùåñòâåííî âîçðàñòàåò â óñëîâèÿõ ÏÀÊ-âèòàìèííîé íåäîñòàòî÷íîñòè. Ñîïîñòàâëåíèå äàííûõ ïðîòåèíèçàöèè ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ è ñòåïåíè èõ áèîòðàíñôîðìàöèè â ïðîìåæóòî÷íûå ìåòàáîëèòû áèîñèíòåçà ÑîÀ è ñàì êîôåðìåíò ïîçâîëèëî ïðåäïîëîæèòü íàëè÷èå îïðåäåëåííûõ âçàèìîîòíîøåíèé õàðàêòåðà ïðîòåèíèçàöèè ÏÀÊ-ñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé â öèòîçîëå è ïðîöåññîâ èõ âíóòðèêëåòî÷íîãî ðàñïðåäåëåíèÿ èëè äåïîíèðîâàíèÿ, ïðîòåêàþùèõ ñèíõðîííî ñ âíóòðèêëåòî÷íûì áèîñèíòåçîì ÑîÀ [13,18,25]. Íà ñëåäóþùåì ýòàïå ðàáîòû íàìè ïðîâîäèëîñü èçó÷åíèå áèîòðàíñôîðìàöèè ïðåïàðàòà [14C]ÏÀÊ-Na ñ âûñîêîé óäåëüíîé àêòèâíîñòüþ 55,2 ìÊè/ììîëü ïðè åãî âíóòðèáðþøèííîì ââåäåíèè íîðìàëüíûì è Â5-àâèòàìèíîçíûì æèâîòíûì â äîçå 0,33 ìêìîëü/êã. Íà ïðîòÿæåíèè èçáðàííîãî ñðîêà èññëåäîâàíèÿ (1060 ìèí) îòìå÷åíû âîëíîîáðàçíûå èçìåíåíèÿ îáùåé ðàäèîàêòèâíîñòè, ïðè÷åì åå óðîâåíü â ïå÷åíè ïàíòîòåíàòäåôèöèòíûõ æèâîòíûõ ïðàêòè÷åñêè âî âñå ñðîêè èññëåäîâàíèÿ îêàçàëñÿ ñóùåñòâåííî âûøå îòíîñèòåëüíî êîíòðîëÿ. Ðåçóëüòàòû ðàäèîõðîìàòîãðàôè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ãîìîãåíàòîâ ïå÷åíè íîðìàëüíûõ è ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ áåëûõ êðûñ (ðèñ. 2) ïîäòâåðæäàþò äàííûå ïðåäûäóùèõ èññëåäîâàíèé [25] î ñóùåñòâîâàíèè òðåõ îñíîâíûõ ôðàêöèé ðàäèîàêòèâíûõ ïðîèçâîäíûõ âèòàìèíà, ïðåäñòàâëåííûõ ÏÀÊ (ôðàêöèÿ I), ôîñôîÏÀÊ è ôîñôîïàíòåòåèí (ôðàêöèÿ II) è ÑîÀ (ôðàêöèÿ III). Ìèíîðíûìè êîìïîíåíòàìè ýòèõ ôðàêöèé ìîãëè ñîîòâåòñòâåííî ÿâëÿòüñÿ: ÏÒ, ôîñôîïàíòîòåíîèëöèñòåèí, äåôîñôî-ÑîÀ. Ðåçóëüòàòû ïîêàçûâàþò, ÷òî ïîëíûé ïðîöåññ áèîòðàíñôîðìàöèè ðàäèîíóêëèäà ÏÀÊ â ïå÷åíè êàê íîðìàëüíûõ, òàê è ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ æèâîòíûõ îñóùåñòâëÿåòñÿ äîñòàòî÷íî áûñòðî (âíåäðåíèå âî ôðàêöèþ ÑîÀ íàáëþäàåòñÿ ÷åðåç 10 ìèí îò íà÷àëà ýêñïåðèìåíòà). Îäíàêî ê 60 ìèí îïûòà, âñëåäñòâèå áîëåå áûñòðîãî è èíòåíñèâíîãî îáðàçîâàíèÿ ôîñôîðèëèðîâàííûõ ïðåäøåñòâåííèêîâ êîôåðìåíòà, óðîâåíü ðàäèîàêòèâíîñòè ôðàêöèè ÑîÀ ïðè Â5-íåäîñòàòî÷íîñòè îêàçàëñÿ â 1,8 ðàçà âûøå (ðèñ. 2).  öèòîçîëå ïå÷åíè ýòèõ æå ïîäîïûòíûõ æèâîòíûõ íàáëþäàåòñÿ óâåëè÷åíèå óðîâíÿ ðàäèîíóêëèäà ÑîÀ (ôðàêöèÿ III) ñ 14 (1030 ìèí) äî 6 (45 ìèí) è 28% (60 ìèí) ó íîðìàëüíûõ æèâîòíûõ (ðèñ. 3). Ñîîòâåòñòâåííî ðàäèîàêòèâíîñòü ôðàêöèè ñâîáîäíîé ÏÀÊ ñíèæàëàñü ñ 7687% îò îáùåé ðàäèîàêòèâíîñòè öèòîçîëÿ äî 55 (45 ìèí) ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4 71 ÄÎÏβIJ Þ²ËÅÉÍί ÊÎÍÔÅÐÅÍÖ²¯ 3 õ 10 à 3 * 120 * I II 60 40 20 0 10 20 30 45 60 à 100 Èìï⋅ìèí-1⋅ã -1 80 · Èìï⋅ìèí-1⋅ã -1 õ 10 I II 80 60 * 40 20 0 ìèí 10 Âðåìÿ, ìèí 3 * I II * 3 30 40 * 20 30 45 ìèí õ 10 * * á * * I II 20 10 0 0 10 20 30 45 ì 60 10 20 30 45 Âðåìÿ, ìèí 60 ìèí Âðåìÿ,ìèí 3 õ 10 12 80 * 60 I II * * 40 20 ã · â -1 Èìï⋅ìèí1 -1⋅ã 1 3 õ 10 100 Èìï⋅ìèí-1⋅ã -1 60 Âðåìÿ, ìèí Èìï⋅ìèí-1⋅ã -1 á 60 · Èìï⋅ìèí-1⋅ã -1 õ 10 20 â 8 * I II * * * * 4 0 0 10 20 30 45 60 ì Âðåìÿ, ìèí 10 20 30 45 60 ìèí Âðåìÿ, ìèí Ðèñ. 2. Äèíàìèêà ñîäåðæàíèÿ ðàäèîàêòèâíûõ ìåòàáîëèòîâ ÏÀÊ âî ôðàêöèÿõ ÏÀÊ (à), ôîñôîðèëèðîâàííûõ íåíóêëåîòèäíûõ (á) è íóêëåîòèäíûõ (â) ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ â ãîìîãåíàòå ïå÷åíè íîðìàëüíûõ (I) è ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ (II) êðûñ; * p < 0,05 ïî îòíîøåíèþ ê I ãðóïïå. Ðèñ. 3. Äèíàìèêà ñîäåðæàíèÿ ðàäèîàêòèâíûõ ìåòàáîëèòîâ ÏÀÊ âî ôðàêöèÿõ ÏÀÊ (à), ôîñôîðèëèðîâàííûõ íåíóêëåîòèäíûõ (á) è íóêëåîòèäíûõ (â) ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ â öèòîçîëå ïå÷åíè íîðìàëüíûõ (I) è ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ (II) êðûñ; * p < 0,05 ïî îòíîøåíèþ ê I ãðóïïå. è 28% (60 ìèí). Ó ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ êðûñ ïðîöåññ áèîòðàíñôîðìàöèè âèòàìèíà áûë äîñòàòî÷íî çàìåòåí óæå íà 20-é ìèíóòå îïûòà, êîãäà ôðàêöèÿ II ñîäåðæàëà 37% ðàäèîíóêëèäà, à ÑîÀ 14%. Íà îñíîâàíèè ýòèõ èññëåäîâàíèé ìîæíî êîíñòàòèðîâàòü, ÷òî öèòîçîëü ïå÷åíè ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé íå òîëüêî êëåòî÷íûé êîìïàðòìåíò èíòåíñèâíîé áèîòðàíñôîðìàöèè ÏÀÊ, ãäå îñóùåñòâëÿþòñÿ âñå ýòàïû áèîñèíòåçà ÑîÀ [30], íî è ìåñòî àêêóìóëèðîâàíèÿ íåèçìåíåííîãî âèòàìèíà (ðèñ. 3, à), ïî êðàéíåé ìåðå â íà÷àëüíûå ñðîêè èíèöèàöèè áèîñèíòåçà êîôåðìåíòà.  òî æå âðåìÿ ìåòàáîëèòû ìå÷åíîé ÏÀÊ äîñòàòî÷íî áûñòðî ýêñïîðòèðóþòñÿ, â îòëè÷èå îò ñâîáîäíîãî âèòàìèíà, â äðóãèå êëåòî÷íûå êîìïàðòìåíòû, ÷òî îñîáåííî çàìåòíî ïî ðåçóëüòàòàì èññëåäîâàíèÿ ðàäèîàêòèâíîñòè ôðàêöèè ÑîÀ â öèòîçîëå è ãîìîãåíàòàõ ïå÷åíè. Äëÿ îöåíêè òðàíñïîðòà ïðåäøåñòâåííèêîâ áèîñèíòåçà ÑîÀ è åãî íàêîïëåíèÿ âî âíåöèòîçîëüíûõ êîìïàðòìåíòàõ (äî 75% êëåòî÷íîãî ôîíäà â ìèòîõîíäðèÿõ [31,32]) íàìè ïðîèçâåäåí ðàñ÷åò ïåðåðàñïðåäåëåíèÿ ðàäèîàêòèâíîé ÏÀÊ, åå ìå- 72 ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4 À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊΠ2 2 à õ10 1000 II I 500 Èìï⋅ìèí-1⋅ã -1 Èìï⋅ìèí-1⋅ã -1 õ10 600 400 300 200 100 0 á II I 800 600 400 200 0 0 10 20 30 45 60 0 10 20 30 45 Âðåìÿ, ìèí ìèí 60 Âðåìÿ, ìèí Ðèñ. 4. Âíóòðèêëåòî÷íîå ðàñïðåäåëåíèå [14C]-ÑîÀ è [14C]-äåôîñôî-ÑîÀ â ïå÷åíè êðûñ ÷åðåç 1060 ìèí ïîñëå ââåäåíèÿ [14C]-ÏÀÊ-Na íîðìàëüíûì (à) è ÏÀÊ-äåôèöèòíûì êðûñàì (á); I ÑîÀ, äåôîñôî-ÑîÀ â öèòîçîëüíîé ôðàêöèè, II ÑîÀ, äåôîñôî-ÑîÀ âíå öèòîçîëÿ. òàáîëèòîâ è ÑîÀ ïî ðàçíîñòè ðàäèîàêòèâíîñòè ýòèõ òðåõ îñíîâíûõ ôðàêöèé â öèòîçîëå è îáùåì ãîìîãåíàòå ïå÷åíè. Ïîëó÷åííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò îá èíòåíñèâíîì ýêñòðàöèòîçîëüíîì òðàíñïîðòå äåôîñôî-ÑîÀ è ÑîÀ íà ïðîòÿæåíèè 60 ìèí ýêñïåðèìåíòà (ðèñ. 4), ïðè÷åì âûðàæåííîñòü ïðåäïîëàãàåìîãî âíóòðèìèòîõîíäðèàëüíîãî íàêîïëåíèÿ íóêëåîòèäíûõ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ îêàçàëàñü ñóùåñòâåííî áîëüøåé ïðè Â5-íåäîñòàòî÷íîñòè (ðèñ. 4, á). Çíà÷èòåëüíàÿ ÷àñòü îáíàðóæåííîãî â öèòîçîëå ðàäèîíóêëèäà ÏÀÊ âûÿâëåíà â ïðîòåèíèçèðîâàííîé ôîðìå (òàáë. 1). Ñòåïåíü ïðîòåèíèçàöèè ìå÷åíîãî ìåòàáîëèòà ïàíòîòåíàòà â öèòîçîëå ïå÷åíè âîçðàñòàëà êàê ó êîíòðîëüíûõ, òàê è ó îïûòíûõ æèâîòíûõ, äîñòèãàÿ ó ïîñëåäíèõ ê 30 ìèí ýêñïåðèìåíòà äîâîëüíî ñòàáèëüíîãî óðîâ- íÿ (43%) îò îáùåé ðàäèîàêòèâíîñòè öèòîçîëÿ. Íàêîïëåíèå ñâîáîäíîé ìåòêè â öèòîçîëå õàðàêòåðèçîâàëîñü íàëè÷èåì ìàêñèìóìà ê 30 ìèí îïûòà. Î÷åâèäíî, ÷òî 30-ìèíóòíûé ìàêñèìóì îáðàçîâàíèÿ ÏÁÊ â öèòîçîëå ñîâïàäàåò ñ âðåìåííûì ïàäåíèåì áèîòðàíñôîðìàöèè ñâîáîäíîãî âèòàìèíà (ðèñ. 3, à) â ÑîÀ (ðèñ. 3, â) è, òåì ñàìûì, ñâèäåòåëüñòâóåò î âîçìîæíîì ó÷àñòèè ÏÁÊ â ðåãóëÿöèè áèîñèíòåçà ÑîÀ íà ñòàäèè, êàòàëèçèðóåìîé ÏÀÊ-êèíàçîé [33]. Ñ öåëüþ èäåíòèôèêàöèè ïðåäøåñòâåííèêîâ áèîñèíòåçà ÑîÀ â ìèòîõîíäðèÿõ ïå÷åíè êðûñ ïðè ðàçëè÷íîé îáåñïå÷åííîñòè îðãàíèçìà ïàíòîòåíîâîé êèñëîòîé èçó÷åíî ðàñïðåäåëåíèå [14Ñ]-ÏÀÊ â ïå÷åíè ïîñëå ââåäåíèÿ âèòàìèíà â äîçå, îáåñïå÷èâàþùåé ñóòî÷íóþ ïîòðåáíîñòü â âèòàìèíå. Èññëåäîâàëè ñîîòíîøåíèå ÏÀÊ-ñîäåðæàùèõ Ò à á ë è ö à 1. Ðåçóëüòàòû ãåëü-õðîìàòîãðàôèè öèòîçîëÿ ïå÷åíè êîíòðîëüíûõ (1) è ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ (2) êðûñ, ïîëó÷èâøèõ âíóòðèáðþøèííî [14Ñ]-ÏÀÊ-Nà ñ óäåëüíîé àêòèâíîñòüþ 55,2 ìÊè/ììîëü â äîçå 0,33 ìêìîëü/êã Âðåìÿ, ìè í Ãðóï ï à 10 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 20 30 45 60 Î áùàÿ ðàäè îàêòè â í îñòü ö è òîçîëÿ, è ìï ⋅ìè í -1⋅ìã-1 áåëêà 3 3 3 ,0 ± 2 2 ,7 4 5 6 , 9 ± 3 6 ,4 7 0 6 ,9 ± 2 5 ,5 1116,8 ± 20,7* 1157,9 ± 57,2 1 7 8 0 ,3 ± 9 9 ,4 * 1 0 1 9 ,4 ± 2 0 ,8 1 2 2 1 ,7 ± 7 2 ,6 1 0 3 8 ,6 ± 6 5 ,4 9 3 0 ,9 ± 5 0 ,4 ÏÁÊ, è ìï ⋅ìè í -1⋅ìã-1 áåëêà 4 7 ,7 ± 8 ,4 6 9 ,3 ± 1 2 ,9 6 4 ,9 ± 3 ,6 3 7 5 ,8 ± 4 ,8 * 3 1 4 ,1 ± 1 9 ,8 7 6 3 ,6 ± 2 2 ,0 * 3 3 6 ,0 ± 9 ,1 5 3 0 ,9 ± 8 1 ,1 4 5 1 ,3 ± 4 1 ,2 4 2 7 ,8 ± 2 0 ,6 % ÏÁÊ îò îáùåé ðàäè îàêòè â í îñòè ö è òîçîëÿ 14 15 9 34 27 43 33 43 43 46 * Ðàçëè÷èÿ ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëþ äîñòîâåðíû, ð < 0,05; ÏÁÊ ÏÀÊ-áåëêîâûé êîìïëåêñ. ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4 73 ÄÎÏβIJ Þ²ËÅÉÍί ÊÎÍÔÅÐÅÍÖ²¯ êîìïîíåíòîâ â ãîìîãåíàòàõ è ìèòîõîíäðèàëüíûõ ýêñòðàêòàõ ïå÷åíè ïðè äëèòåëüíîì (510 ñóò) åæåäíåâíîì ââåäåíèè æèâîòíûì 14Ñ-ÏÀÊ-Na â äîçå 1,25 ìã/êã (5 ìêìîëü/êã, 6,25 ìêÊu/êã ìàññû) äëÿ äîñòèæåíèÿ ìàêñèìàëüíîé çàìåíû òêàíåâûõ ìåòàáîëèòîâ ÏÀÊ íà èõ ðàäèîíóêëèäíûå ïðîèçâîäíûå. Ðàçäåëåíèå ìåòàáîëèòîâ îñóùåñòâëÿëè ÂÝÆÕ, îáåñïå÷èâàþùåé ðàçäåëåíèå ôîñôîïðîòåèííóêëåîòèäà, äåôîñôî-ÑîÀ è ÑîÀ [34]. Âíåñåíèå 25 ìÌ òàðòðàòà íàòðèÿ â ñðåäó äëÿ ãîìîãåíèçàöèè òêàíè ïðåäóïðåæäàëî ãèäðîëèç ÑîÀ ôîñôàòàçàìè [32]. Ïîêàçàíî, ÷òî â ãîìîãåíàòàõ òêàíè ïå÷åíè ìåíåå 5% îáùåé ðàäèîàêòèâíîñòè ïðèõîäèòñÿ íà äðóãèå ìåòàáîëèòû ÏÀÊ, à íå íà ÑîÀ (äàííàÿ ôðàêöèÿ ïðèíÿòà çà 100%), ïðè èññëåäîâàíèè ÷åðåç 5 ñóò ââåäåíèÿ ìå÷åíîãî âèòàìèíà. Ôðàêöèÿ íåèçìåíåííîé ÏÀÊ è åå ôîñôîðèëèðîâàííîé ôîðìû äîñòèãàëà 2,83,6%, à ôðàêöèè ÔÏÍ, äåôîñôî-ÑîÀ ïðàêòè÷åñêè íå âûÿâëÿëèñü. ×åðåç 10 ñóò ýêñïåðèìåíòà ôðàêöèè ìåòàáîëèòîâ ÏÀÊ, âêëþ÷àÿ ÔÏÍ è äåôîñôî-ÑîÀ, ñîñòàâèëè áîëåå çíà÷èìóþ âåëè÷èíó (711%).  òàáë. 2 ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ ìèòîõîíäðèàëüíûõ ýêñòðàêòîâ ïå÷åíè. ×åðåç 5 ñóò ýêñïåðèìåíòà ìåòàáîëèòû ÏÀÊ, èíûå ÷åì ÑîÀ, ñîñòàâëÿëè áîëåå 1/2 ðàäèîàêòèâíîãî ìàòåðèàëà, ïðåèìóùåñòâåííî çà ñ÷åò ôðàêöèè äåôîñôî-ÑîÀ. ×åðåç 10 ñóò ýêñïåðèìåíòà óðîâåíü ðàäèîàêòèâíîñòè óêàçàííîé ôðàêöèè çíà÷èòåëüíî ïðåâûñèë òàêîâîé ôðàêöèè ÑîÀ ó êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ è äîñòèãàë âûñîêîãî óðîâíÿ â ìèòîõîíäðèÿõ ïå÷åíè ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ êðûñ [35]. Íå èñêëþ÷åíî ïðèñóòñòâèå âî ôðàêöèè äåôîñôî-ÑîÀ ïàíòåòåèíà, ñïîñîáíîãî çà ñ÷åò ïàíòåòåèíêèíàçíîé èëè ÏÀÊ-êèíàçíîé ðåàêöèè òðàíñôîðìèðîâàòüñÿ â ôîñôîïàíòåòåèí. Îäíàêî òàêèå ôåðìåíòàòèâíûå ñèñòåìû îòñóòñòâóþò â ìèòîõîíäðèàëüíîì êîìïîíåíòå êëåòêè, à ñàì ïàíòåòåèí, íå ÿâëÿåòñÿ ïðåäøåñòâåííèêîì ÑîÀ â ìèòîõîíäðèÿõ [5]. Íàèáîëåå âåðîÿòíî ïðîöåññ áèîñèíòåçà ÑîÀ ëèìèòèðóåò, ïðåæäå âñåãî, äîñòóïíîñòü äåôîñôî-ÑîÀ, ïîñêîëüêó â ìèòîõîí- äðèÿõ ÏÀÊ-äåôèöèòíûõ êðûñ, ó êîòîðûõ àêòèâèðóåòñÿ áèîñèíòåç ÑîÀ, âûÿâëåí áîëåå íèçêèé óðîâåíü äåôîñôî-ÑîÀ [35]. Èçëîæåííîå âûøå ïîçâîëÿåò ñäåëàòü çàêëþ÷åíèå, ÷òî äåôîñôî-ÑîÀ ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì ïðåäøåñòâåííèêîì íà êîíå÷íûõ ñòàäèÿõ áèîñèíòåçà âíóòðèìèòîõîíäðèàëüíîãî ÑîÀ (âîçìîæíî òàêæå îïòèìàëüíîé òðàíñïîðòíîé ôîðìîé). Íåñîìíåííî, ÷òî ýòîò ìåòàáîëèò, ïðåâðàùåíèå êîòîðîãî êàòàëèçèðóåòñÿ äåôîñôî-ÑîÀ-êèíàçîé (ÑîÀ-ñèíòåòàçîé) [36], ÿâëÿåòñÿ äîìèíèðóþùèì áèîñèíòåòè÷åñêèì ôàêòîðîì ïîääåðæàíèÿ ñòàáèëüíîñòè CoA-SH â ãëàâíîì ÑîÀ-ñîäåðæàùåì êîìïàðòìåíòå êëåòêè ìèòîõîíäðèÿõ. Îñòàâàëñÿ îòêðûòûì âîïðîñ î ðîëè ïàíòîòåíàòêèíàçíîé ðåàêöèè â âûøåðàññìîòðåííûõ ïðîöåññàõ áèîòðàíñôîðìàöèè ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ ñ ó÷åòîì åå êëþ÷åâîé ðîëè â áèîñèíòåçå ÑîÀ è âîçìîæíîñòè èíãèáèðîâàíèÿ ôèçèîëîãè÷åñêèìè êîíöåíòðàöèÿìè êîôåðìåíòà è 4′-ôîñôîïàíòåòåèíà.  ýòîé ñâÿçè â íàøåé ëàáîðàòîðèè èç ïå÷åíè êðûñû áûë âûäåëåí ýëåêòðîôîðåòè÷åñêè ãîìîãåííûé ïðåïàðàò ïàíòîòåíàòêèíàçû ñî ñòåïåíüþ î÷èñòêè 199 ðàç è óäåëüíîé àêòèâíîñòüþ 8,55 íìîëü çà 1 ìèí íà 1 ìã áåëêà. Ïîêàçàíî, ÷òî ôåðìåíòíûé áåëîê îáëàäàåò ÷åòâåðòè÷íîé ñòðóêòóðîé è ñîñòîèò èç äâóõ èäåíòè÷íûõ ñóáúåäèíèö ñ ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé 49 êÄà. Ïàíòîòåíàòêèíàçà èìååò øèðîêóþ ñóáñòðàòíóþ ñïåöèôè÷íîñòü ñ âåëè÷èíàìè Êm äëÿ ïàíòîòåíàòà 1,2 ⋅ 10-5 Ì, à äëÿ ïàíòåòåèíà 2,7 ⋅ 10-5Ì. 4′-Ôîñôîïàíòåòåèí, äåôîñôî-ÑîÀ, ÑîÀ-SH è àöèë-ÑîÀ èíãèáèðóþò ôåðìåíò, ÷òî ïðåäïîëàãàåò íàëè÷èå ðåãóëÿòîðíîãî öåíòðà â ìîëåêóëå ïàíòîòåíàòêèíàçû.  ÷àñòíîñòè, òîðìîæåíèå ðåàêöèè ÑîÀ-SH, 4′-ôîñôîïàíòåòåèíîì, äåôîñôî-ÑîÀ, àöåòèë-ÑîÀ, ïàëüìèòîèë-ÑîÀ îñóùåñòâëÿëîñü ïî áåñêîíêóðåíòíîìó òèïó ñ Ê1 0,45; 1,4; 6,4; 12,0; 5,6 ìêÌ ñîîòâåòñòâåííî. Áëîêèðîâàíèå ñêîðîñòè ðåàêöèè ôèçèîëîãè÷åñêèìè êîíöåíòðàöèÿìè ýòèõ ìåòàáîëèòîâ, â îñîáåííîñòè ÑîÀ-SH, ñâèäåòåëüñòâóåò, ÷òî àêòèâíîñòü êèíàçû in vivo ïîñòîÿííî ïîäâåðæåíà âîçäåéñòâèþ îòðèöàòåëüíûõ ýôôåêòîðîâ [37]. Ò à á ë è ö à 2. Ðàñïðåäåëåíèå ðàäèîíóêëèäà [14Ñ]-ÏÀÊ âî ôðàêöèÿõ ìåòàáîëèòîâ âèòàìèíà â ìèòîõîíäðèÿõ êëåòîê ïå÷åíè Ãðóï ï û æè â îòí ûõ Êîí òðîëü, 5 ñóò ÏÀÊ- í åäîñòàòî÷í îñòü, 5 ñóò Êîí òðîëü, 10 ñóò ÏÀÊ- í åäîñòàòî÷í îñòü, 10 ñóò Ðàäè îàêòè â í îñòü îòí îñè òåëüí î ÏÀÊ + ÔÏÊ ÔÏÍ 2 ,4 ± 0 , 4 0 , 9 ± 0 ,3 2 ,5 ± 0 ,6 0 , 8 ± 0 ,5 5±3 10 ± 2 3 ,2 ± 0 ,5 1 ,3 ± 0 ,1 * ô ðàêö è è ÑîÀ (100%), % Ñ îÀ äåô îñô î- ÑîÀ 100 51 ± 18 100 17 ± 2* 100 166 ± 30 100 26 ± 8* * Ðàçëè÷èÿ äîñòîâåðíû ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëþ, ð < 0,05; ÏÀÊ ïàíòîòåíîâàÿ êèñëîòà, ÔÏÍ ôîñôîïàíòåòåèí, ÔÏÊ ôîñôîïàíòîòåíîâàÿ êèñëîòà. 74 ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4 À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊΠÂîçíèêàåò âîïðîñ, çà ñ÷åò êàêèõ ìåõàíèçìîâ îñóùåñòâëÿåòñÿ ñòèìóëÿöèÿ àêòèâíîñòè ïàíòîòåíàòêèíàçû, ïîçâîëÿþùàÿ ïîääåðæèâàòü ñòàáèëüíûé âíóòðèêëåòî÷íûé ôîíä ÑîÀ èëè îáåñïå÷èâàòü ýôôåêòèâíóþ áèîòðàíñôîðìàöèþ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ, íàïðèìåð â ñëó÷àå èõ èíúåöèðîâàíèÿ â ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ äîçàõ. Î÷åâèäíî îòâåò ñëåäîâàëî èñêàòü â ïîèñêå ñïîñîáîâ ôèçèîëîãè÷åñêîãî äåèíãèáèðîâàíèÿ ôåðìåíòà, êîòîðûé áûë óæå èçâåñòåí ïðè èñïîëüçîâàíèè L-êàðíèòèíà, íî íå åãî àöèëèðîâàííîé ôîðìû [38]. Ñ ó÷åòîì íàëè÷èÿ ôóíêöèîíàëüíî àêòèâíîé ñóëüôãèäðèëüíîé ãðóïïû ó ÑîÀ, äåôîñôî-ÑîÀ è ôîñôîïàíòåòåèíà è âîçìîæíîñòüþ èõ íåôåðìåíòàòèâíîãî âçàèìîäåéñòâèÿ ñ ðÿäîì ïðèðîäíûõ äèñóëüôèäîâ, à òàêæå íåïîñðåäñòâåííûì ó÷àñòèåì L-öèñòåèíà â áèîñèíòåçå ÑîÀ [5], ïðåäñòàâëÿëîñü î÷åâèäíûì ïðîâåäåíèå èññëåäîâàíèé ñ ðÿäîì ñåðîñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé, ïðåæäå âñåãî ñ îêèñëåííûì ãëóòàòèîíîì è öèñòåèíîì. Ïàðàëëåëüíûå èññëåäîâàíèÿ, ïðîâåäåííûå in vivo, ïîêàçàëè, ÷òî ñî÷åòàííàÿ íåäîñòàòî÷íîñòü ÏÀÊ è ìåòèîíèíà ïðèâîäèò ê íàèáîëåå çàìåòíîìó óìåíüøåíèþ óðîâíÿ ÑîÀ è ïðåäøåñòâåííèêîâ åãî áèîñèíòåçà â ïå÷åíè. Ââåäåíèå â ýòèõ óñëîâèÿõ èíäèêàòîðíîé äîçû ðàäèîàêòèâíîãî ìåòèîíèíà âûÿâèëî, ÷òî äî 16% íàõîäÿùåéñÿ â òêàíè ïå÷åíè ìå÷åíîé àìèíîêèñëîòû âêëþ÷àåòñÿ âî ôðàêöèè (ÄÅÀÅ-õðîìàòîãðàôèÿ) 4′-ôîñôîïàíòåòåèíà è ÑîÀ [27]. Ýòè ðåçóëüòàòû ñëóæàò äîïîëíèòåëüíîé èëëþñòðàöèåé ê âûñêàçàííîé åùå â 1967 ã. Ð. Â.×àãîâöåì èäåè îá ó÷àñòèè âèòàìèíîâ è èõ ïðîèçâîäíûõ â îáìåíå ñåðîñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé [39]. Ñðåäè áîëüøîãî ÷èñëà èññëåäóåìûõ ñîåäèíåíèé öèñòèí è îêèñëåííûé ãëóòàòèîí (2,10 ìÌ), âíîñèìûå â èíêóáàöèîííóþ ñðåäó îäíîâðåìåííî ñ ÑîÀ-SH (1,5 èëè 3,0 ìêÌ), ïðåäóïðåæäàëè èíãèáèðóþùåå äåéñòâèå êîôåðìåíòà íà àêòèâíîñòü êèíàçû, òîãäà êàê âîññòàíîâëåííûå ôîðìû ýòèõ ïðåïàðàòîâ ïîäîáíûì ýôôåêòîì íå îáëàäàëè.  ÷èñòûõ ñèñòåìàõ (áåç ÑîÀ-SH) öèñòèí, îêèñëåííûé ãëóòàòèîí è èõ òèîëû íå ÿâëÿëèñü ýôôåêòîðàìè ôåðìåíòà. Äëÿ îáúÿñíåíèÿ âûÿâëåííîãî ïðîöåññà äåèíãèáèðîâàíèÿ, èññëåäîâàëè ñèììåòðè÷íûé äèñóëüôèä ÑîÀ, à òàêæå ñèíòåçèðîâàííûå íàìè ñìåøàííûå äèñóëüôèäû: ÑîÀ-S-Sãëóòàòèîí è ÑîÀ-S-S-ïàíòåòåèí. Âíåñåíèå â ðåàêöèîííóþ ñðåäó ýòèõ äèñóëüôèäîâ (1,59,0 ìÌ) íå ïðèâîäèëî ê èíãèáèðîâàíèþ ôåðìåíòà, â òî âðåìÿ êàê äîáàâëåíèå äèòèîòðåèòîëà (20 ìÌ) â àíàëîãè÷íóþ ôåðìåíòàòèâíóþ ñðåäó çíà÷èòåëüíî ñíèæàëî àêòèâíîñòü ÏÀÊ-êèíàçû. Äåéñòâèå äèòèîòðåèòîëà â äàííîé ñèòóàöèè ñâÿçàíî ñ âîññòàíîâëåíèåì äèñóëüôèäîâ äî ñîîòâåòñòâóþùèõ òèîëüíûõ ôîðì, èç êîòîðûõ îòðèöàòåëüíûì ýô- ôåêòîðîì ÿâëÿåòñÿ òîëüêî ÑîÀ-SH [40]. Ñëåäîâàòåëüíî, ïðåäóïðåæäåíèå îêèñëåííûì ãëóòàòèîíîì è öèñòèíîì èíãèáèðóþùåãî äåéñòâèÿ ÑîÀ-SH íà ðåàêöèþ ôîñôîðèëèðîâàíèÿ ÏÀÊ îáóñëîâëåíî îáðàçîâàíèåì ñìåøàííûõ äèñóëüôèäîâ ñ ÑîÀ. Ñòàíîâèòñÿ ïîíÿòíîé âûñîêàÿ áèîëîãè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü ïàíòåòåèíà, à ðîëü äèñóëüôèäîâ ÑîÀ â êëåòêå ìîæíî ðàññìàòðèâàòü íå òîëüêî êàê ðåçåðâíóþ, íî è êàê ðåãóëÿòîðíóþ. Òàêèì îáðàçîì, âïåðâûå âûÿâëåí ìåõàíèçì ðåãóëÿöèè àêòèâíîñòè ïàíòîòåíàòêèíàçû ïóòåì åå äåèíãèáèðîâàíèÿ â ñèñòåìå, ñîäåðæàùåé ÑîÀSH, êîòîðûé îáóñëîâëåí îáðàçîâàíèåì ñìåøàííûõ äèñóëüôèäîâ ïðè âçàèìîäåéñòâèè ÏÒ, öèñòèíà èëè îêèñëåííîãî ãëóòàòèîíà ñ ñóëüôãèäðèëüíîé ôîðìîé êîôåðìåíòà [40]. Ñ ó÷åòîì âûñîêîãî óðîâíÿ ãëóòàòèîíà â æèâîòíûõ òêàíÿõ (îò 0,4 äî 12 ìÌ) è ïðåèìóùåñòâåííî â öèòîçîëå, åñòü âñå îñíîâàíèÿ ïîëàãàòü, ÷òî âçàèìîäåéñòâèå ñèñòåìû ðåäîêñ-ñîñòîÿíèÿ ãëóòàòèîíà è áèîñèíòåçà ÑîÀ ÿâëÿåòñÿ âàæíåéøèì ôàêòîðîì ðåãóëÿöèè âíóòðèêëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ ìåòàáîëèçìà è îáåñïå÷åíèÿ ôóíêöèîíèðîâàíèÿ ÑîÀ-çàâèñèìûõ ïðîöåññîâ, ïðèâîäÿùèõ ê ñòàáèëüíîìó ýíåðãåòè÷åñêîìó ñîñòîÿíèþ è ñòðóêòóðíîé öåëîñòíîñòè ïëàçìàòè÷åñêèõ è âíóòðèêëåòî÷íûõ ìåìáðàí. Âåðîÿòíî çà ñ÷åò óêàçàííîãî ìåõàíèçìà, à òàêæå âûñîêîãî ñðîäñòâà ïðîèçâîäíûõ âèòàìèíà ê áèîìåìáðàíàì [3] îáåñïå÷èâàåòñÿ âûñîêàÿ áèîäîñòóïíîñòü ïðåïàðàòîâ ÏÀÊ ïðåäøåñòâåííèêîâ áèîñèíòåçà ÑîÀ, ââîäèìûõ êàê per os, òàê è ïàðåíòåðàëüíî [20]. Ðàñøèðåííûå ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ, ïðîâîäèìûå íà áåëûõ ìûøàõ è êðûñàõ ñ èñïîëüçîâàíèåì ìå÷åííûõ ïî óãëåðîäó èëè òðèòèþ ïðåïàðàòîâ, ââîäèìûõ â äîçàõ 30 ìã/êã ìàññû òåëà ýêâèìîëÿðíî ÏÀÊ-Ñà, ïîçâîëèëè îïèñàòü ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèå ïðîöåññû èññëåäóåìûõ ñîåäèíåíèé ñ ïîìîùüþ îäíî-, äâóõ- è òðåõ÷àñîâûõ ìîäåëåé íà îñíîâå ïðîãðàììû ÀÑÏÈÄ [41]. Ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ïðåïàðàòû ÏÀÊ áûñòðî âñàñûâàþòñÿ â æåëóäî÷íî-êèøå÷íîì òðàêòå, â îñîáåííîñòè ïàíòåíîë, ÿâëÿþùèéñÿ êñåíîáèîòè÷åñêèì ïðåäøåñòâåííèêîì ÑîÀ è òðàíñôîðìèðóåìûé â ÏÀÊ â àëêîãîëüäåãèäðîãåíàçíîé ðåàêöèè [5,42]. Áèîäîñòóïíîñòü èññëåäóåìûõ ïðåïàðàòîâ ïðè ïàðåíòåðàëüíîì ââåäåíèè òàêæå âûñîêà (6085%) è íåñêîëüêî íèæå ó êàëüöèåâûõ ñîëåé ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ. Âñå ñîåäèíåíèÿ õàðàêòåðèçóþòñÿ âûñîêîé ñòåïåíüþ óòèëèçàöèè è ïðîòåèíèçàöèè, îäíàêî ñîõðàíÿþò çíà÷èòåëüíûå äèíàìè÷åñêèå ðàçëè÷èÿ â áèîòðàíñôîðìàöèè â êîôåðìåíòíóþ ôîðìó. Ýêñêðåòèðóþòñÿ èññëåäîâàííûå ñîåäèíåíèÿ è èõ ìåòàáîëèòû ïðåèìóùåñòâåííî ñ ìî÷îé, ïðè÷åì âðåìÿ ýëèìèíàöèè äëÿ íåêîòîðûõ ñîåäèíåíèé ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4 75 ÄÎÏβIJ Þ²ËÅÉÍί ÊÎÍÔÅÐÅÍÖ²¯ (íàïðèìåð äëÿ ÏÒ) äîñòèãàåò ïðàêòè÷åñêè ñóòî÷íîãî ïåðèîäà [41], ÷òî õîðîøî ñîîòâåòñòâóåò äàííûì, ïîëó÷åííûì ïðè èññëåäîâàíèè áèîòðàíñôîðìàöèè ÏÒ [25]. Ìåõàíèçì âñàñûâàíèÿ ÏÀÊ â êèøå÷íèêå, êàê âïåðâûå ïîêàçàíî â íàøåé ëàáîðàòîðèè [19] ñ èñïîëüçîâàíèåì ìåìáðàííûõ âåçèêóë ùåòî÷íîé êàéìû ýïèòåëèàëüíûõ êëåòîê òîíêîé êèøêè êðûñ, îñóùåñòâëÿåòñÿ ïî íàòðèé-ïàíòîòåíàò êîòðàíñïîðòíîìó ìåõàíèçìó. Åñòü îñíîâàíèÿ ïîëàãàòü, ÷òî èíòåíñèâíîñòü ïðîöåññîâ òðàíñïîðòà íå çàâèñèò îò îáåñïå÷åííîñòè îðãàíèçìà ÏÀÊ, îäíàêî îí íàõîäèòñÿ â òåñíîé ôóíêöèîíàëüíîé ñâÿçè ñ óñâîåíèåì íåêîòîðûõ äðóãèõ âèòàìèíîâ (áèîòèí, ëèïîàò).  ïîñëåäíèå ãîäû â ðÿäå ëàáîðàòîðèé äåòàëüíî îõàðàêòåðèçîâàí óíèâåðñàëüíûé ïåðåíîñ÷èê ÏÀÊ, áèîòèíà è ëèïîàòà â ïëàöåíòå, ýíòåðîöèòàõ è êîëîíîöèòàõ. Ïðîöåññ óñâîåíèÿ ÏÀÊ ïîñòóëèðîâàí êàê îïîñðåäîâàííûé ïåðåíîñ÷èêîì Na+-çàâèñèìûé ïðîöåññ, èìåþùèé ðàçëè÷íóþ ýëåêòðîãåííóþ ïðèðîäó ïðè ïåðåíîñå âèòàìèíà ÷åðåç ìåìáðàíó ùåòî÷íîé êàéìû èëè áàçîëàòåðàëüíóþ ìåìáðàíó ýïèòåëèîöèòîâ [43]. Ïðèâåäåííûå ðåçóëüòàòû ïîçâîëÿþò ñäåëàòü çàêëþ÷åíèå î òîì, ÷òî îáåñïå÷åíèå ôóíêöèîíèðîâàíèÿ ñèñòåìû áèîñèíòåçà ÑîÀ âî ìíîãîì îïðåäåëÿåòñÿ ìåõàíèçìàìè áèîäîñòóïíîñòè ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ (âñàñûâàíèå, òðàíñïîðò, ïðîäîëæèòåëüíîñòü íàõîæäåíèÿ â êðîâåíîñíîì ðóñëå) [25] è âîçìîæíîñòüþ îáðàçîâàíèÿ ÏÀÊ-áåëêîâûõ êîìïëåêñîâ, âåðîÿòíî âðåìåííî äåïîíèðóþùèõ ìåòàáîëèòû âèòàìèíà äëÿ åãî ïîñëåäóþùåãî èñïîëüçîâàíèÿ â öèòîçîëüíûõ ñèñòåìàõ îáðàçîâàíèÿ ÑîÀ èëè ôîñôîïàíòåòåèíïðîòåèíîâ. Äëÿ âûÿñíåíèÿ ïðèðîäû ÏÁÊ öèòîçîëÿ ïå÷åíè, ïðåäâàðèòåëüíî ïîìå÷åíûé in vivo êîìïëåêñ ïîäâåðãàëè ãåëü-ôèëüòðàöèè èëè õðîìàòîãðàôèè íà TSK-ãåëå Toyopearl HW-60F. Ïîñòðîåíèå ãðàäóèðîâî÷íîãî ãðàôèêà ñ èñïîëüçîâàíèåì áåëêîâ-ìàðêåðîâ ïîêàçàëî, ÷òî ìîëåêóëÿðíàÿ ìàññà êîìïëåêñà ñîñòàâëÿåò 6070 êÄà. Ïîñëåäóþùàÿ ÂÝÆÕ ðàäèîàêòèâíîé ôðàêöèè, âêëþ÷åííîé â ÏÁÊ, îáðàáîòàííûé õëîðíîé êèñëîòîé, îáíàðóæèëà ñîâïàäåíèå ïèêà ñòàíäàðòà íåìå÷åíîãî ÑîÀ, äåòåêòèðóåìîãî ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêè ïðè 254 íì, ñ âðåìåíåì óäåðæàíèÿ ðàäèîàêòèâíîãî ìåòàáîëèòà ÏÀÊ. Äàëüíåéøåå èçó÷åíèå ñâîéñòâ ÏÁÊ ñ ïîìîùüþ ìåòîäà èììóíîáëîòòèíãà ñ ïðèìåíåíèåì àíòèòåë, ñïåöèôè÷íûõ ê ÑîÀ, âûÿâèëî äèñóëüôèäíóþ ñâÿçü ÑîÀ ñ áåëêîì öèòîçîëÿ. Èíêóáàöèÿ ôðàêöèè áåëêîâ öèòîçîëÿ ñ ïåðâè÷íûìè àíòèòåëàìè, ñïåöèôè÷íûìè äëÿ ÑîÀ, âûÿâèëà ôðàêöèþ, ðåàãèðóþùóþ ñ àíòèòåëàìè àíòè-ÑîÀ IgG, êîòîðóþ ïîâòîðíî èññëåäîâàëè ìåòîäàìè ýëåêòðîôîðåçà â ïîëèàêðèëàìèäíîì ãåëå, âåñòåðí-áëîòòèíãà è óñèëåííîé õå- ìèëþìèíåñöåíöèè (ECL). Ñî÷åòàíèå ýòèõ ìåòîäîâ äëÿ èññëåäîâàíèÿ áåëêîâ öèòîçîëÿ ïå÷åíè êðûñ ïîçâîëèëî äîñòè÷ü âûñîêîé ñòåïåíè ñïåöèôè÷íîñòè ïðè èõ ðàçäåëåíèè è äîñòîâåðíî îïðåäåëèòü ìîëåêóëÿðíóþ ìàññó ÑîÀ-ñâÿçûâàþùåãî áåëêà, ðàâíóþ 56 êÄà [44]. Åñëè ïðèíÿòü òî÷êó çðåíèÿ, âûíåñåííóþ íàìè â çàãëàâèå íàñòîÿùåé ñòàòüè î òîì, ÷òî áèîñèíòåç ÑîÀ ÿâëÿåòñÿ óíèâåðñàëüíûì ìåõàíèçìîì ñîïðÿæåíèÿ ýêçîãåííîñòè è ìíîæåñòâåííîñòè ôóíêöèé ÏÀÊ, íåîáõîäèìî îáúÿñíèòü, êàêèì îáðàçîì îñóùåñòâëÿåòñÿ âçàèìîäåéñòâèå öèòîçîëüíîé ñèñòåìû áèîñèíòåçà ÑîÀ è ÑîÀ-ñèíòåòè÷åñêèõ ðåàêöèé ìèòîõîíäðèé (ïàíòåèíôîñôàòàäåíèëòðàíñôåðàçà, 2.7.7.3 è äåôîñôî-ÑîÀ-êèíàçû, 2.7.1.24), âîçìîæåí ëè îáìåí èëè ýêñòðàöèòîçîëüíûé òðàíñïîðò ñàìîé êîôåðìåíòíîé ôîðìû ïðè îïðåäåëåííûõ ìåòàáîëè÷åñêèõ óñëîâèÿõ. Óìåñòíî íàïîìíèòü, ÷òî äî 7090% âíóòðèêëåòî÷íîãî ôîíäà ÑîÀ ëîêàëèçîâàíî â ìèòîõîíäðèàëüíîì êîìïàðòìåíòå êëåòîê ìëåêîïèòàþùèõ [25]. Ïîëó÷åííûå íàìè ýêñïåðèìåíòàëüíûå äîêàçàòåëüñòâà ñóùåñòâîâàíèÿ çíà÷èòåëüíûõ êîëè÷åñòâ äåôîñôî-ÑîÀ â ìèòîõîíäðèàëüíîé ôðàêöèè ïå÷åíè æèâîòíûõ, äëèòåëüíî ïîëó÷àâøèõ èíäèêàòîðíóþ äîçó [14Ñ]-ÏÀÊ (òàáë. 2), à òàêæå ïðèñóòñòâèå ýòîãî êîìïîíåíòà (íàðÿäó ñ ÑîÀ) â ïðîöåññå ýêñòðàöèòîçîëüíîãî ïåðåíîñà ïðîäóêòîâ áèîòðàíñôîðìàöèè ÏÀÊ-ñîäåðæàùèõ ïðåäøåñòâåííèêîâ ÑîÀ ïîçâîëÿþò ïðåäïîëîæèòü, ÷òî îñíîâíîé òðàíñïîðòíîé ôîðìîé ïðåäøåñòâåííèêîâ áèîñèíòåçà ÑîÀ â ìèòîõîíäðèÿõ ÿâëÿåòñÿ äåôîñôî-ÑîÀ.  ýòîé ñâÿçè ñòàíîâÿòñÿ ïîíÿòíûìè ðåçóëüòàòû èçó÷åíèÿ ëîêàëèçàöèè ôåðìåíòîâ áèîñèíòåçà ÑîÀ íà âíóòðåííåé ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíå, êîòîðûå ïîêàçàëè áîëåå ïîâåðõíîñòíîå ðàñïîëîæåíèå áåëêà äåôîñôî-ÑîÀêèíàçû îòíîñèòåëüíî äåôîñôî-ÑîÀ-ïèðîôîñôîðèëàçû [46]. Îáà ôåðìåíòà ñòðóêòóðíî îáúåäèíåíû â áèîôóíêöèîíàëüíîì ôåðìåíòíîì êîìïëåêñå (òàê íàçûâàåìàÿ ÑîÀ-ñèíòåòàçà ìèòîõîíäðèé) è ïîïûòêè èõ ðàçäåëåíèÿ áûëè áåçóñïåøíûìè. Êîíöåïöèÿ îá èçîëèðîâàííîñòè ìèòîõîíäðèàëüíîãî è öèòîçîëüíîãî ïóëà ÑîÀ, îñíîâàííàÿ íà íåïðîíèöàåìîñòè âíóòðåííåé ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû äëÿ ÑîÀ [26,30], òàêæå äîëæíà áûòü ïåðåñìîòðåíà. Ðåøàþùèì àðãóìåíòîì, îïðîâåðãàþùèì òðàäèöèîííûå ïðåäñòàâëåíèÿ, ÿâèëîñü îòêðûòèå ìèòîõîíäðèàëüíîé ÑîÀ-òðàíñïîðòèðóþùåé ñèñòåìû â ìèîêàðäèîöèòàõ [46]. Ïîêàçàíî, ÷òî ìèòîõîíäðèè àêêóìóëèðóþò ðàäèîàêòèâíûé ÑîÀ, ïðè÷åì ïðîöåññ èìååò äâóõôàçíûé õàðàêòåð. Ïåðâàÿ ôàçà íå çàâèñèò îò èñòî÷íèêà ýíåðãèè è òåìïåðàòóðû è ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé íåíàñûùàþùèéñÿ ïðîöåññ íåñïåöèôè÷åñ- 76 ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4 À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊΠêîãî ñâÿçûâàíèÿ ÑîÀ íà ÑîÀ-àäåíèí÷óâñòâèòåëüíîì ìåñòå ìèòîõîíäðèàëüíûõ ìåìáðàí. Âòîðàÿ ôàçà ÿâëÿåòñÿ ýíåðãî- è òåìïåðàòóðîçàâèñèìîé è õàðàêòåðèçóåòñÿ íàñûùàþùåéñÿ êðèâîé ñïåöèôè÷åñêîãî ïåðåíîñà ÑîÀ â ìèòîõîíäðèàëüíûé ìàòðèêñ [46,47]. Ìèòîõîíäðèàëüíûé òðàíñïîðò ÑîÀ â ìèîêàðäèîöèòàõ, êàê îêàçàëîñü, ìîäóëèðóåòñÿ ðÍ ìàòðèêñà è ðåãóëèðóåòñÿ ôèçèîëîãè÷åñêèìè êîíöåíòðàöèÿìè ÑîÀ, ïðèñóòñòâóþùåãî â öèòîçîëå (âåëè÷èíà Êm òðàíñïîðòà 17 ìÌ áëèçêà ê óðîâíþ ÑîÀ-SH â öèòîçîëå 14 ìÌ). Ìû íàáëþäàëè òðàíñïîðò ÑîÀ â ìèòîõîíäðèÿõ, èçîëèðîâàííûõ èç ïå÷åíè êðûñ (ðèñ. 5) â ñèñòåìå, ñîäåðæàùåé àöèëäîíîðíûé ñóáñòðàò ïèðóâàò, ïóòåì ïàðàëëåëüíîãî êîíòðîëÿ ïîãëîùåíèÿ ÑîÀ ôåðìåíòàòèâíûì ìåòîäîì è ïðÿìîé ðàäèîìåòðèåé âíóòðèìèòîõîíäðèàëüíî îáðàçóþùåãîñÿ àöèë-ÑîÀ [48]. Ñîäåðæàíèå îáùåãî ÑîÀ â ìèòîõîíäðèÿõ óâåëè÷èâàëîñü â çàâèñèìîñòè îò åãî êîíöåíòðàöèè â ñðåäå èíêóáàöèè. Ñèñòåìà òðàíñïîðòà ñâîáîäíîãî ÑîÀ â ìèòîõîíäðèè ìîæåò áûòü è èçâíå äåéñòâóþùèì ìåõàíèçìîì â îïðåäåëåííûõ ìåòàáîëè÷åñêèõ ñèòóàöèÿõ (ñåêâåñòðàöèÿ ÑîÀ-SH, èçáûòîê àöèëèðóåìûõ ñóáñòðàòîâ è äð.), à òàêæå îáåñïå÷èâàòü ñóáñòðàòîì ÑîÀ-ñèíòåòàçó, ÷òî ïðèâîäèò ê ïîñëåäóþùåìó äåôîñôîðèëèðîâàíèþ ÑîÀ ñ îáðàçîâàíèåì äåôîñôî-ÑîÀ è ôîñôîïàíòåòåèíà. Ýòî ïîäòâåðæäåíî ïðÿìûì èññëåäîâàíèåì ñ èñïîëüçîâàíèåì ÂÝÆÕ, êîãäà â ìèòîõîíäðèàëüíûõ ýêñòðàêòàõ âûÿâëÿëèñü ÑîÀ, äåôîñôî-ÑîÀ, ÏÀÊ, ôîñôîïàíòåòåèí è ôîñôî-ÏÀÊ [48]. Ïîÿâëåíèå äîíóêëåîòèäíûõ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ â ìèòîõîíäðèàëüíûõ ýêñòðàêòàõ, êàê è èõ âîçäåéñòâèå íà òðàíñïîðò ÑîÀ â ìèòîõîíäðèè [49] òðåáóåò ýêñïåðèìåíòàëüíîé ïðîâåðêè. Ïåðâîíà÷àëüíàÿ âåðñèÿ î âîçìîæíîé ðîëè ïàíòåòåèíêèíàçíîé ðåàêöèè (2.7.1.34) â îáåñïå÷åíèÿ ìèòîõîíäðèàëüíîãî ïóëà ÑîÀ, êàê ìû óêàçûâàëè âûøå, íå ïîëó÷èëà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ äîêàçàòåëüñòâ [35,38]. Âìåñòå ñ òåì, ñóùåñòâóåò òî÷êà çðåíèÿ, ÷òî òðàíñïîðò ÑîÀ â ìèòîõîíäðèè ìîæåò ïðåäñòàâëÿòü ñîáîé ôèçèîëîãè÷åñêèé ìåõàíèçì àêòèâàöèè áèîñèíòåçà êîôåðìåíòà â öèòîçîëå [49]. Ïîäîáíûì îáðàçîì ìîæíî ïðåäñòàâèòü è ôóíêöèþ ÑîÀ-S-S-áåëêà öèòîçîëÿ, îñóùåñòâëÿþùåãî âðåìåííîå ñåêâåñòèðîâàíèå êîôåðìåíòíîé ôîðìû âèòàìèíà äëÿ ñîçäàíèÿ îïòèìàëüíûõ óñëîâèé ïðîòåêàíèÿ ÏÀÊ-êèíàçíîé ðåàêöèè (äëÿ ïðåäóïðåæäåíèÿ èíãèáèðîâàíèÿ êëþ÷åâîãî ôåðìåíòà áèîñèíòåçà ÑîÀ). Ïîäîáíîãî ðîäà ñåêâåñòèðîâàíèå CoA-SH ìîæåò òàêæå èãðàòü ðîëü â ïîääåðæàíèè îïòèìàëüíîãî ñîîòíîøåíèÿ CoASH/àöèë-ÑîÀ, ÷òî õàðàêòåðíî äëÿ ðÿäà áåëêîâ, ñâÿçûâàþùèõ àöèë-ÑîÀ â öèòîçîëå [5,25]. Íåëüçÿ òàêæå èñêëþ÷àòü âîçìîæíîñòü ïðÿìîãî äåïîíèðîâàíèÿ ÑîÀ â öåëÿõ ñòàáèëèçàöèè åãî ëîêàëüíîãî ôîíäà äëÿ ïðåäóïðåæäåíèÿ ðåçêîãî èçìåíåíèÿ áàëàíñà ìåòàáîëè÷åñêèõ ïðîöåññîâ â öèòîçîëå, â òîì ÷èñëå îáóñëîâëåííûõ èçìåíåíèåì ðåäîêñ-ïîòåíöèàëà. Àíàëîãè÷íûé ìåõàíèçì ïîñòóëèðîâàí â ìèòîõîíäðèÿõ, ãäå òàêæå äîêàçàíà ðîëü Âðåìÿ, Ðèñ. 5. Íàêîïëåíèå îáùåãî ÑîÀ (à) è èçìåíåíèå îáùåé ðàäèîàêòèâíîñòè êîôåðìåíòà (á) â èçîëèðîâàííûõ ìèòîõîíäðèÿõ ïå÷åíè êðûñ â çàâèñèìîñòè îò âðåìåíè èíêóáàöèè ïðè ðÍ 7,4 â ñðåäå [48], ñîäåðæàùåé ðàäèîàêòèâíûé ïðåïàðàò [3Í]-ÑîÀ â êîëè÷åñòâå 3,6 íìîëü (7ìêÊu/ìêÌ)/ìë.  äâîéíûõ ëîãàðèôìè÷åñêèõ êîîðäèíàòàõ ïðåäñòàâëåíà çàâèñèìîñòü íàêîïëåíèÿ ÑîÀ â ìèòîõîíäðèÿõ (Ñ1 ) îò åãî êîíöåíòðàöèè (Ñ2 ) âî âíåøíåé ñðåäå. ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4 77 ÄÎÏβIJ Þ²ËÅÉÍί ÊÎÍÔÅÐÅÍÖ²¯ ÑîÀ-ïðîòåèíèçàöèè äëÿ îáíîâëåíèÿ ôåðìåíòàòèâíûõ áåëêîâ [50]. Ñ ó÷åòîì âíîâü âûÿâëåííûõ äàííûõ ïî èäåíòèôèêàöèè ÑîÀ-S-S-áåëêà öèòîçîëÿ è äåôîñôî-ÑîÀ, êàê äîìèíèðóþùåãî ïðåäøåñòâåííèêà áèîñèíòåçà ÑîÀ â ìèòîõîíäðèÿõ, âçàèìîäåéñòâèå öèòîçîëüíîãî è ìèòîõîíäðèàëüíîãî êîìïàðòìåíòà â áèîñèíòåçå ÑîÀ ìîæíî ïðåäñòàâèòü ñëåäóþùèì îáðàçîì (ñì. ñõåìó).  öåëîì, ñèñòåìà áèîñèíòåçà ÑîÀ ïðåäñòàâ- Ñóùåñòâóþò äîñòàòî÷íî óáåäèòåëüíûå äîêàçàòåëüñòâà, ïîëó÷åííûå ãðóïïîé óêðàèíñêèõ áèîõèìèêîâ [52], î ïðèñóòñòâèè ÑîÀ-ñèíòåòàçû â ìèòîõîíäðèÿõ, ëîêàëèçîâàííîé íà íàðóæíîé ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíå áëàãîäàðÿ ãèäðîôîáíîìó ó÷àñòêó íà N-êîíöå ïîëèïåïòèäíîé öåïè ôåðìåíòà è áåëîê-áåëêîâûì âçàèìîäåéñòâèÿì. Ïðåäïîëàãàåòñÿ, â ÷àñòíîñòè, ÷òî ÑîÀ-ñèíòåòàçà ôèêñèðóåòñÿ íà ìåìáðàíå, ñïåöèôè÷åñêè âçàèìîäåéñòâóÿ ñ ïðåäñòàâèòåëåì ñåìåéñòâà áåëêîâ, îáðà- Öèòîçîëü: ÏÀÊ (ÏÍ) ~→ ÔÏÍ→äåôîñôî-ÑîÀ→ÑîÀ↔ÑîÀ-S-S-áåëîê Ìåìáðàíû ìèòîõîíäðèé: Ìàòðèêñ ìèòîõîíäðèé: ÔÏÍ↔äåôîñôî-ÑîÀ→ÑîÀ↔ÑîÀ-S-S-áåëêè àöèë-ÑîÀ ↔ àöåòèë-ÑîÀ Ñõåìà. Ïóòè ñòàáèëèçàöèè ôîíäà ÑîÀ â ìèòîõîíäðèÿõ. ëÿåòñÿ êàê ìíîãîýòàïíûé ïðîöåññ, âêëþ÷àþùèé ñòàäèè áèîòðàíñôîðìàöèè ÏÀÊ â ÑîÀ â öèòîçîëüíîì êîìïàðòìåíòå, äåôîñôî-ÑîÀ (è, âîçìîæíî, ÔÏÍ) â ÑîÀ â ìèòîõîíäðèàëüíîì êîìïàðòìåíòå, ïåðåíîñ (àêòèâíûé òðàíñïîðò) ïðåäøåñòâåííèêîâ ÑîÀ ÷åðåç ïëàçìàòè÷åñêóþ è âíóòðåííþþ ìèòîõîíäðèàëüíóþ ìåìáðàíû, ïðîòåèíèçàöèþ (îáðàçîâàíèå ÏÀÊ-áåëêîâûõ êîìïëåêñîâ) âíîâü ñèíòåçèðîâàííîãî ÑîÀ ÑîÀ-ñâÿçûâàþùèì áåëêîì öèòîçîëÿ, à òàêæå âûñîêîñïåöèôè÷íûé òðàíñïîðò êîôåðìåíòà â ìèòîõîíäðèè. Åñòü âñå îñíîâàíèÿ ïîëàãàòü, ÷òî êëþ÷åâóþ ðîëü â ðåãóëÿöèè ïðîöåññà áèîòðàíñôîðìàöèè ïðåäøåñòâåííèêîâ ÑîÀ âûïîëíÿþò ôåðìåíòû êàê öèòîçîëÿ (ÏÀÊ-êèíàçà), òàê è ìèòîõîíäðèé (äåôîñôî-ÑîÀ-êèíàçà). Ïðîöåññ áèîñèíòåçà ÑîÀ íà êîíå÷íûõ ñòàäèÿõ òåñíî ñîïðÿæåí ñ ïðîòåèíèçàöèåé (ñåêâåñòðàöèåé) âíîâü ñèíòåçèðîâàííîãî ÑîÀ çà ñ÷åò ðåàêöèé òèîë-äèñóëüôèäíîãî îáìåíà, ÷òî îáåñïå÷èâàåò îïòèìèçàöèþ óñëîâèé ñàìîãî áèîñèíòåçà è äåïîíèðîâàíèÿ ÷àñòè ÑîÀ (â âèäå äèñóëüôèäà) äëÿ ñòàáèëüíîãî îáåñïå÷åíèÿ ÑîÀ-çàâèñèìûõ ôåðìåíòàòèâíûõ ðåàêöèé.  ïîñëåäíèå ãîäû äîñòèãíóò ñóùåñòâåííûé ïðîãðåññ â èññëåäîâàíèÿõ ÏÀÊ-êèíàçû è ÑîÀñèíòåòàçû ìëåêîïèòàþùèõ, îñóùåñòâëåíî êëîíèðîâàíèå è ýêñïðåññèÿ ôåðìåíòíûõ áåëêîâ, èññëåäîâàíèå èõ áèîõèìè÷åñêèõ ñâîéñòâ [43]. Ïðîâåäåíà èäåíòèôèêàöèÿ ìîíîôóíêöèîíàëüíîé äåôîñôî-ÑîÀ-êèíàçû, êîòîðàÿ, â îòëè÷èå îò ÑîÀñèíòàçû ìèòîõîíäðèàëüíîãî ìàòðèêñà, ëîêàëèçîâàíà â ìåæìåìáðàííîì ïðîñòðàíñòâå è âî ôðàêöèè íàðóæíîé ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû [51]. çóþùèõ ïîòåíöèàëçàâèñèìûå àíèîííûå êàíàëû Voltage dependent anion channels (VDAC) èëè VDAC-àññîöèèðîâàííûìè áåëêàìè (àöèë-ÑîÀñèíòåòàçà äëèííîöåïî÷å÷íûõ àöèë-ÑîÀ). Ïîêàçàíî, ÷òî îáà âèäà àêòèâíîñòè ÑîÀ-ñèíòåòàçû (äåôîñôî-ÑîÀ-êèíàçíàÿ è äåôîñôî-ÑîÀ-ïèðîôîñôîðèëàçíàÿ) àêòèâèðóþòñÿ in vitro ôîñôàòèäèëõîëèíîì è ôîñôàòèäèëýòàíîëàìèíîì [52] âåðîÿòíî âñëåäñòâèå èçìåíåíèÿ êîíôîðìàöèîííîãî ñîñòîÿíèÿ îáîèõ ôåðìåíòîâ.  ýòîì ïëàíå ðîëü äåôîñôî-ÑîÀ âî âíóòðèìèòîõîíäðèàëüíîì îáåñïå÷åíèè áèîñèíòåçà ÑîÀ ïðèîáðåòàåò êëþ÷åâîå çíà÷åíèå. Åñëè êîíôîðìàöèîííûå èçìåíåíèÿ äëÿ ðåãóëÿöèè àêòèâíîñòè ÑîÀ-ñèíòåòàçû ñòîëü çíà÷èìû, ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî îáðàòèìîñòü äåôîñôî-ÑîÀ-ïèðîôîñôîðèëàçíîé ðåàêöèè äåëàåò âîçìîæíûì âíóòðèìèòîõîíäðèàëüíûé ñèíòåç ÑîÀ èç 4′-ôîñôîïàíòåòåèíà [48] èëè, íàïðîòèâ, óñòðàíåíèå èçáûòêà äåôîñôî-ÑîÀ èç ìèòîõîíäðèàëüíîãî êîìïàðòìåíòà (ñõåìà). Âûøåîïèñàííûå ìåõàíèçìû ôîðìèðîâàíèÿ è ðàñïðåäåëåíèÿ âíóòðèêëåòî÷íîãî ôîíäà ÑîÀ èìåþò èñêëþ÷èòåëüíîå çíà÷åíèå äëÿ ïîääåðæàíèÿ ìåòàáîëè÷åñêîãî ãîìåîñòàçà, ýíåðãîîáåñïå÷åíèÿ è ïîääåðæàíèÿ öåëîñòíîñòè êëåòî÷íûõ ìåìáðàí. Ñèñòåìà áèîñèíòåçà ÑîÀ â öèòîçîëå è ìèòîõîíäðèÿõ, ôóíêöèîíàëüíîå äåïîíèðîâàíèå èëè ñåêâåñòèðîâàíèå ÷àñòè ÑîÀ â ïðîöåññå áèîòðàíñôîðìàöèè ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ íåñîìíåííî ÿâëÿþòñÿ ìåõàíèçìîì îáåñïå÷åíèÿ ìíîæåñòâåííîñòè ôóíêöèé ÑîÀ ïîñðåäñòâîì ðàçíîîáðàçíûõ ÑîÀ- è àöèë-ÑîÀ-çàâèñèìûõ è ìåòàáîëèçèðóþùèõ ðåàêöèé. 78 ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4 À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊΠ ïîñëåäíåå âðåìÿ ïðèâëåêàåò îñîáîå âíèìàíèå öèòîçîëüíûé ïóë ÑîÀ, â êîòîðîì ñîñðåäîòî÷åíî äî 10% êëåòî÷íîãî ñîäåðæàíèÿ ÑîÀ â ôîðìå ÑîÀ-S-S-ãëóòàòèîíà. Äîêàçàíî ó÷àñòèå íåñèììåòðè÷íîãî äèñóëüôèäà â íåôåðìåíòàòèâíîì è ôåðìåíòàòèâíîì ñóëüôãèäðèëüíî-äèñóëüôèäíîì îáìåíå, â òîì ÷èñëå êàòàëèçèðóåìîì ÑîÀãëóòàòèîí-ãîìîöèñòèíòðàíñãèäðîãåíàçîé (1.8.4.1) èëè NADP-çàâèñèìîé ÑîÀ-S-S-ãëóòàòèîí-ðåäóêòàçîé (1.6.4.6) [5]. Âåðîÿòíî, ñ ó÷àñòèåì ÑîÀ-SS-áåëêà öèòîçîëÿ ìîæåò îñóùåñòâëÿòüñÿ ñòàáèëèçàöèÿ ðåäîêñ-ïîòåíöèàëà ñèñòåìû ãëóòàòèîíà, à òàêæå ðåàëèçàöèÿ ðåäîêñ-ñèãíàëèçèðîâàíèÿ [56]. Åñëè óêàçàííàÿ ãèïîòåçà ñïðàâåäëèâà, òî ñ åå ïîìîùüþ ìîæíî îáúÿñíèòü ðîëü èíèöèèðîâàíèÿ áèîñèíòåçà ÑîÀ â ïðåäóïðåæäåíèè ïðîöåññîâ àêòèâàöèè ÏÎË, íàðóøåíèÿ öåëîñòíîñòè ìåìáðàí, âûçûâàåìûõ ðàçíîîáðàçíûìè ôèçè÷åñêèìè è õèìè÷åñêèìè ôàêòîðàìè. Íåïðåìåííûì óñëîâèåì ïðîòåêòèâíîãî ýôôåêòà ÿâëÿåòñÿ áèîòðàíñôîðìàöèÿ ïðîèçâîäíûõ ÏÀÊ â ÑîÀ è ñóùåñòâåííûé ðîñò âíóòðèêëåòî÷íîãî âîññòàíîâëåííîãî ãëóòàòèîíà-SH. Ïðîöåññ âûñîêîñïåöèôè÷åí, òàê êàê áëèçêàÿ ïî ñòðóêòóðå è ôèçèêî-õèìè÷åñêèì ôóíêöèÿì ê ÏÀÊ ãîìîïàíòîòåíîâàÿ êèñëîòà íå òðàíñôîðìèðóåòñÿ â ÑîÀ, íå îáåñïå÷èâàåò ïðèðîñò âíóòðèêëåòî÷íîãî âîññòàíîâëåííîãî ãëóòàòèîíà è ñòàáèëüíîñòü ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû àñöèòíîé êàðöèíîìû Ýðëèõà [53]. Áèîñèíòåç ÑîÀ, òåñíî ñâÿçàííûé ñ ðåäîêññîñòîÿíèåì êëåòîê òèîëäèñóëüôèäíûì îáìåíîì ãëóòàòèîíà, ïðîöåññàìè ïðåäóïðåæäåíèÿ àêòèâàöèè ÏÎË è àïîïòîçà [4,5], ìîæåò áûòü íîâîé îáøèðíîé ñôåðîé ôèçèîëîãè÷åñêèõ è áèîõèìè÷åñêèõ ôóíêöèé ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû, îïîñðåäîâàííîé ìåòàáîëèçìîì ñåðîñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé [56]. Òåì ñàìûì ìû íàáëþäàåì ÷àñòíûé ñëó÷àé ïîñòóëèðîâàííîé åùå Ð. Â. ×àãîâöåì [2,39] ýññåíöèàëüíîñòè âèòàìèíîâ â ìåòàáîëèçìå ñåðîñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé. derivatives in thiol-containing compound metabolism and antioxidant system formation as well as in studying non-coenzymatic functions of B-vitamins and vitamin-binding proteins had a considerable effect on the almost 40-year studies on pantothenic acid metabolism and biochemical functions by scholars at the vitaminologic school in Grodno. The concept concerning the intracellular structure of the pantothenate coenzyme form, CoA, pool (content and ratio of CoA-SH, acetyl-CoA, short-chain and long-chain acyls-CoA, coenzyme disulfide forms and CoA-S-S-proteins) was substantiated as an important metabolic regulatory factor (including glutathione system redox potential), with changes being a principal mechanism of pantothenate derivative vitamin and pharmacotherapeutic activity implementation. The effect of the latter is mediated through the systems of CoA biosynthesis and phosphopantetheine proteins, changed CoA-S-S-protein levels, which in turn maintain the intracellular level of CoA-SH as well as cytosolic and mitochondrial transport of its vitamin-containing precursors. A universal CoA biosynthetic function was revealed in prevention of lipid peroxidation initiation and oxidative stress development. K e y w o r d s: coenzyme A (CoA), CoA biosynthesis, pantothenate kinase, CoA-S-S-protein, pantothenic acid, acyl-CoA, dephospho-CoA, 4′-phosphopantetheine, 4′-phosphopantothenic acid. Development of Academician R. V. Chagovets ideas of the regulatory role of vitamins and their 1. ×àãîâåö Ð. Â., Ëàõíî Å. Â. // Âîïð. ïèòàíèÿ. 1968. 27, ¹ 1. Ñ. 310. 2. ×àãîâåö Ð. Â., Ëàõíî Å. Â. // Âèòàìèíû-V. Ýâîëþöèîííàÿ, ñðàâíèòåëüíàÿ è âîçðàñòíàÿ âèòàìèíîëîãèÿ / Ðåä. Ð. Â. ×àãîâåö. Íàóê. äóìêà, Êèåâ. 1970. Ñ. 7587. 3. Õàëìóðàäîâ À. Ã., Òîöêèé Â. Í., ×àãîâåö Ð. Â. Ìåìáðàííûé òðàíñïîðò êîôåðìåíòíûõ âèòàìèíîâ è êîôåðìåíòîâ. Êèåâ: Íàóê. äóìêà. 1982. 280 ñ. 4. Ìîéñååíîê À. Ã., Ãóðèíîâè÷ Â. À. / Ôèçèêîõèìè÷åñêèå è áèîëîãè÷åñêèå îñíîâû ôóíêöèîíèðîâàíèÿ æèâûõ ñèñòåì. Íàóêà. Ìîñêâà. 1985. Ñ. 106109. 5. Ìîéñååíîê À. Ã. Ïàíòîòåíîâàÿ êèñëîòà (áèîõèìèÿ è ïðèìåíåíèå âèòàìèíà). Ìèíñê.: Íàóêà è òåõíèêà. 1980. 262 ñ. 6. Ìîéñååíîê À. Ã., Þðãèëåâè÷ Â. Ï., Êî÷óðêî Ñ. Í. è äð. Áèîõèìèÿ ñèíòåçà è îáìåíà êîôåðìåíòîâ è êîôåðìåíòíûõ âèòàìèíîâ. Ìàòåð. I Âñåñîþç. ñèìï. / Ðåä. Ð. Â. ×àãîâåö. Íàóê. äóìêà, Êèåâ. 1972. Ñ. 2223. 7. À.ñ. 629213 ÑÑÑÐ, ÌÊÈ Ñ07Ñ 161/05. Ñïîñîá ïîëó÷åíèÿ ùåëî÷íûõ èëè ùåëî÷íîçåìåëüíûõ ñîëåé S-ñóëüôîïàíòåòåèíà (Â. Ì. Êîïåëåâè÷, À. Â. Ëûñåíêîâà, À. Ã. Ìîéñååíîê, Â. È. Ãóíàð). ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4 79 COENZYME A BIOSYNTHESIS AS UNIVERSAL MECHANISM OF CONJUGATION OF EXOGENOUS AND MULTIPLE PANTOTHENIC ACID FUNCTIONS A. G. Moiseyenok, V. A. Gurinovich, S. N. Omelyanchik, V. S. Slyshenkov Institute of Biochemistry, National Academy of Sciences of Belarus, Grodno; e-mail: val@biochem.unibel.by Summary ÄÎÏβIJ Þ²ËÅÉÍί ÊÎÍÔÅÐÅÍÖ²¯ 8. À.ñ. 686360 ÑÑÑÐ, ÌÊÈ Ñ07F 9/09. Ñïîñîá ïîëó÷åíèÿ 4′-ôîñôàòà D-ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû èëè åãî ñîëè (Â. Ì. Êîïåëåâè÷, À. Â. Ëûñåíêîâà, Ò. Ä. Ìàðèåâà, Â. È. Ãóíàð, À. Ã. Ìîéñååíîê). 9. À.ñ. 776042 ÑÑÑÐ, ÌÊÈ Ñ07F 9/09. Ñïîñîá ïîëó÷åíèÿ ôîñôàòíûõ ïðîèçâîäíûõ ïàíòåòèíà èëè S-ñóëüôîïàíòåòåèíà (Â. Ì. Êîïåëåâè÷, À. Â. Ëûñåíêîâà, Â. È. Ãóíàð, À. Ã. Ìîéñååíîê). 10. Ëûñåíêîâà À. Â. Ñèíòåç ñåðî- è ôîñôîðñîäåðæàùèõ ïðîèçâîäíûõ ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû. Àâòîðåô.äèñ. ... êàíä. õèì. íàóê. Ìîñêâà. 1979. 25 ñ. 11. Õèìèÿ, áèîõèìè÷åñêèå ôóíêöèè è ïðèìåíåíèå ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû (ìàòåðèàëû 4-ãî Ãðîäíåíñêîãî ñèìïîçèóìà). Ïîä ðåä. À. Ã. Ìîéñååíêà è äð. Ìèíñê.: Íàóêà è òåõíèêà. 1977. 212 ñ. 12. Ìîéñååíîê À. Ã., Ñëûøåíêîâ Â. Ñ., Ñóíîçîâà Å. Â., Ãóðèíîâè÷ Â. À. // Âîïð. ìåä. õèìèè. 1984. 30, ¹ 1. Ñ. 126128. 13. Ãóðèíîâè÷ Â. À., Ìîéñååíîê À. Ã. // Âîïð. ïèòàíèÿ. 1986. ¹ 6. Ñ. 5054. 14. Ñëûøåíêîâ Â. Ñ., Äåäîâè÷ Ò. Â., Ìîéñååíîê À. Ã. // Õèìèÿ ïðèðîäí. ñîåä. 1987. ¹ 2. Ñ. 262265. 15. Õîìè÷ Ò. È., Âîñêîáîåâ À. È. ×åðíèêåâè÷ È. Ï., Ìîéñååíîê À. Ã. // Âîïð. ìåä. õèìèè. 1984. 30, ¹ 1. Ñ. 131132. 16. Øåéáàê Â. Ì., Ìîéñååíîê À. Ã. // Õèì.-ôàðì. æóðíàë. 1983. 17, ¹ 7. Ñ. 778781. 17. Ìîéñååíîê À. Ã., Îìåëüÿí÷èê Ñ. Í., Óòíî Ë. ß. è äð. // Êðèîáèîëîãèÿ. 1988. ¹ 3. Ñ. 3639. 18. Ãóðèíîâè÷ Â. À., Ìîéñååíîê À. Ã. // Óêð. áèîõèì. æóðíàë. 1987. 59, ¹ 5. Ñ. 6066. 19. Âîðîáüåâ Â. Â., Õîìè÷ Ò. È., Ìîéñååíîê À. Ã. // Ôèçèîë. æóðí. ÑÑÑÐ. 1988. 74, ¹ 1. Ñ. 113117. 20. Äîðîôååâ Á. Ô., Õîëîäîâ Ë. Å., ßêîâëåâà Ã. Ì., Ìîéñååíîê À. Ã. // Õèì.-ôàðì. æóðí. 1988. ¹ 4. Ñ. 401406. 21. Ðåçÿïêèí Â. È., Ãóðèíîâè÷ Â. À. Äåäîâè÷ Ò. È., Ìîéñååíîê À. Ã. // Õèìèÿ ïðèðîäí. ñîåä. 1988. ¹ 6. Ñ. 855858. 22. Ìîéñååíîê À. Ã. / Ìåòîäû îöåíêè è êîíòðîëÿ âèòàìèí. îáåñïå÷. íàñåëåíèÿ. Ðåä. Â. Á. Ñïèðè÷åâ. Ìîñêâà. Íàóêà. 1984. Ñ. 111120. 23. Âåëèêèé Í. Í., Îáðîñîâà È. Ã., Åôèìîâ À. Ñ. è äð. // Âîïð. ìåä. õèìèè. 1992. 38, ¹ 4. Ñ. 4552. 24. Íüþñõîëì Ý., Ñòàðò Ê. Ðåãóëÿöèÿ ìåòàáîëèçìà. Ì.: Ìèð. 1977. 408 ñ. 25. Ìîéñååíîê À. Ã., Êîïåëåâè÷ Â. Ì., Øåéáàê Â. Ì., Ãóðèíîâè÷ Â. À. Ïðîèçâîäíûå ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû. Ðàçðàáîòêà íîâûõ âèòàìèííûõ è ôàðìàêîòåðàïåâòè÷åñêèõ ñðåäñòâ. Ìèíñê: Íàóêà è òåõíèêà. 1989. 216 ñ. 26. Abiko Y. / Metabolism Sulfur Compounds. 7. Ed. D. M. Greenberg. N.Y.: Acad. Press. 1975. P. 120. 27. Øåéáàê Â. Ì. Âëèÿíèå ñïåöèôè÷åñêèõ è íåñïåöèôè÷åñêèõ ôàêòîðîâ íà ñîîòíîøåíèå óðîâíÿ êîôåðìåíòà À, àöèë-ÑîÀ è ïðåäøåñòâåííèêà êîôåðìåíòà â ïå÷åíè æèâîòíûõ íà ñáàëàíñèðîâàííîì è ïàíòîòåíàòäåôèöèòíîì ðàöèîíàõ. Àâòîðåô. äèñ. ... êàíä.ìåä.íàóê. Ìèíñê. 1986. 17 ñ. 28. Ðîçàíîâ À. ß. / Âèòàìèíû. Âûï. IX. Ðåä. Ð. Â. ×àãîâåö. Ê.: Íàóê. äóìêà. 1976. Ñ. 34 42. 29. Ìîéñååíîê À. Ã., Ãóðèíîâè÷ Â. À., Ëûñåíêîâà À. Â. è äð. // Õèì.-ôàðì. æóðí. 1986. ¹ 12. Ñ. 14331437. 30. Robishaw J. D., Neely J. R. // Am. J. Physiol. 1985. 248, N 1. P. E1E9. 31. Williamson J. R., Corkey B. // Methods Enzymol. 1979. 55. P. 200222. 32. Tahiliani A. G., Beinlich C. J. // Vitam. Horm. 1991. 46. P. 165228. 33. Robishaw J. D., Neely J. R. // Am. J. Physiol. 1984. 246, N 4. P. H532H541. 34. Halvorsen O., Skrede S. // Anal. Biochem. 1980. 107, N 1. P. 103108. 35. Ðåçÿïêèí Â. È. / Ïàíòåòèí: ìåòàáîëèçì, ôàðìàêîëîãèÿ è ðåãóëÿöèÿ îáìåíà ëèïèäîâ. Ðèãà: Çèíàòíå. 1991. Ñ. 5357. 36. Aghajanian S., Worrall D. M. // Biochem. J. 2002. 365. P. 1318. 37. Õîìè÷ Ò. È., Ìîéñååíîê À. Ã., Âîñêîáîåâ À. È. // Áèîõèìèÿ. 1990. 55, ¹ 8. Ñ. 14681473. 38. Õîìè÷ Ò. È. Ìîëåêóëÿðíûå ìåõàíèçìû ðåãóëÿöèè è êèíåòè÷åñêèå ñâîéñòâà ïàíòîòåíàòêèíàçû ïå÷åíè êðûñ. Àâòîðåô. äèñ. .... êàíä.áèîë.íàóê. Ìèíñê. 1993. 16 ñ. 39. ×àãîâåö Ð. Â., Øòóòìàí Ö. Ì., Äóøåéêî À. À. è äð. / Ìàòåð. VI íàó÷íîé ñåññèè Âñåñîþçíîãî íàó÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîãî èíñòèòóòà âèòàìèíîëîãèè Ìèíçäðàâà ÑÑÑÐ. Ðåä. Ì. È. Ñìèðíîâ. Ìîñêâà. 1967. Ñ. 6465. 40. Ìîéñååíîê À. Ã., Õîìè÷ Ò. È., Ðåçÿïêèí Â. È. // Äîêë. ÀÍ ÑÑÑÐ. 1988. 300, ¹ 2. Ñ. 485487. 41. Äîðîôååâ Á. Ô. Èññëåäîâàíèå òîêñèêîëîãè÷åñêèõ è ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèõ ñâîéñòâ ïðîèçâîäíûõ ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû. Àâòîðåô. äèñ. ..... äîêò. ìåä.íàóê. Ìîñêâà. 1994. 28 ñ. 42. Ïàíòåíîë è äðóãèå ïðîèçâîäíûå ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû: áèîõèìèÿ, ôàðìàêîëîãèÿ è ìåäèöèíñêîå ïðèìåíåíèå. Ìàòåð. ìåæäóíàð. ñèìï. / Ðåä. À. Ã. Ìîéñååíîê. Ãðîäíî. 1998. 232 ñ. 43. Ìîéñååíîê À. Ã., Ãóðèíîâè÷ Â. À. / Ïèòàíèå è 80 ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4 À. Ã. ÌÎÉÑÅÅÍÎÊ, Â. À. ÃÓÐÈÍÎÂÈ×, Ñ. Í. ÎÌÅËÜßÍ×ÈÊ, Â. Ñ. ÑËÛØÅÍÊΠîáìåí âåùåñòâ. Ðåä. À. Ã. Ìîéñååíîê. Ãðîäíî. 2002. Ñ. 5370. 44. Ãóðèíîâè÷ Â. À. Áèîòðàíñôîðìàöèÿ è ïðîòåèäèçàöèÿ ïðîèçâîäíûõ ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû â ïå÷åíè æèâîòíûõ. Àâòîðåô. äèñ. ... êàíä. áèîë. íàóê. Ãðîäíî. 2003. 24 ñ. 45. Skrede S., Halvorsen O. // Eur. J. Biochem. 1983. 131, N 1. P. 5763. 46. Tahiliani A., Neely J. // J. Biol. Chem. 1987. 262, N 24. P. 1160711610. 47. Ìîéñååíîê À. Ã. / Êîôåðìåíò À è åãî ïðåäøåñòâåííèêè: ñèíòåç, àíàëèç è ýêñïåðèìåíòàëüíîå èçó÷åíèå. Ðåä. Â. Ñ. Òèøêèí. Ìîñêâà. 1997. Ñ. 1522. 48. Ìîéñååíîê À. Ã. Áèîñèíòåç êîôåðìåíòà À â ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïðîèçâîäíûõ ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû. Àâòîðåô. äèñ. .... äîêò. áèîë. íàóê. Ìîñêâà. 1996. 47 ñ. 49. Tahiliani A. G. // Biochim. Biophys. Acta. 1991. 1067, N 1. P. 2937. 50. Balzer I., Huth W. // Ibid. 1986. 870, N 2. P. 350356. 51. Daugherty M., Polanuyer B., Farrell M. et al. // J. Biol. Chem. 2002. 277, N 24. P. 21431 21439. 52. Zhyvoloup A., Nemazanyy I., Panasyuk G. et al. // Ibid. 2003. 278, N 50. P. 5031650321. 53. Slyshenkov V. S., Rakowska M., Moiseenok A. G., Wojtczak L. // Free Radic. Biol. Med. 1995. 19, N 66. P. 767772. 54. Slyshenkov V. S., Moiseenok A. G., Wojtczak L. // Ibid. 1996. 20, N 6. P. 793800. 55. Slyshenkov V. S., Piwocka K., Sikora E., Wojtczak L. // Ibid. 2001. 30, N 11. P. 1303 1310. 56. Ìîéñååíîê À. Ã. / Áèîõèìèÿ, ôàðìàêîëîãèÿ è êëèíè÷åñêîå ïðèìåíåíèå ïðîèçâîäíûõ ïàíòîòåíîâîé êèñëîòû. Ðåä. À. Ã. Ìîéñååíîê. Ãðîäíî. 2003. Ñ. 107114. ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 4 81
