ПЦР - Молекулярная диагностика

Молекулярные методы
диагностики и алгоритмы
лабораторного обследования
на урогенитальные инфекции
Гущин А.Е.
Лаборатория молекулярной диагностики
и эпидемиологии инфекций органов
репродукции
ФГУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
г. Москва
Возбудители инфекции органов
репродукции
T.pallidum
N.gonorrhoeae
C.trachomatis
T.vaginalis
M.genitalium
Вирусы
(HSV1&2; HPV)
Условно-патогенные
микоплазмы
U.urealyticum, U.
parvum, M.hominis
Candida spp.
G. vaginalis, A.vaginae и
BV-ассоциированные
микроорганизмы
Другая условнопатогенная флора
Возбудители
ИППП
Нозологическая
форма (МКБ-X)
Наиболее частая
клиническая форма
(клинический синдром)
Treponema pallidum
Сифилис
Эрозивно-язвенные
поражения половых органов
Neisseria gonorrhoeae
Гонорея
Уретрит, цервицит, ВЗОМТ
Trichomonas vaginalis
Урогенитальный
трихомоноз
Уретрит (мужчины)
Вагинит
Chlamydia trachomatis
(серотипы …)
Урогенитальный
хламидиоз
Уретрит, цервицит, ВЗОМТ
Mycoplasma genitalium
-
Уретрит (мужчины),
цервицит, ВЗОМТ
Ureaplasma urealyticum
(биовар Т-960)
-
Уретрит (мужчины)
Проблемы диагностики ИППП
на современном этапе
Разнообразие лабораторных тестов для
диагностики ИППП с различными
аналитическими и диагностическими
характеристиками;
Методы диагностики гонореи
Метод диагностики
Диагн. чувствит. метода
Микроскопия (по
Граму)
80-95% (М)
30-50% (Ж)
Бак. посев.
95-98 (М)
80-87% (Ж)
ПЦР
95-98% (М и Ж)
Методы диагностики
хламидиоза
Метод
диагностики
Диагн. чувств.
метода
Микроскопия
(по Романовскому)
10-12%
ПИФ
10-40%
Бак. посев.
60-80%
ПЦР
95-98%
Методы диагностики
трихомониаза
Метод
диагностики
Диагн. чувствит.
метода
Микроскопия
(окраш. преп.)
10-20% (М)
50-60 (Ж)
Бак. посев.
70-95%
ПЦР
90-96%
Рутинные методы диагностики
инфекции вызванной
M.genitalium
Метод
диагностики
Диагн. чувств.
метода
Микроскопия
-
ПИФ
-
Бак. посев.
-
МАНК
96-99%
Клинический синдром
Нозологическая форма
Лабораторные
методы
обследования
Этиология заболевания
Этиотропная терапия
Лабораторные
методы
обследования
Контроль эффективности
лечения
Дифференциальная диагностика
уретрита использованием
классических методов
«не-ПЦР»
ПЦР
Ширшова Е.В., Кисина В.И., Гущин А.Е., 2007
Универсальный протокол выявление
возбудителей с помощью ПЦР
ПЦР на N.gonorrhoeae
ПЦР на C.trachomatis
ПЦР на T.vaginalis
ПЦР на M.genitalium
Дифференциальная диагностика
уретрита использованием
ПЦР
ПЦР
Ширшова Е.В., Кисина В.И., Гущин А.Е., 2007
Выявление возбудителей ИППП с помощью
«АмплиСенс-NG/CT/MG/TV-мультипрайм»
ПЦР на:
N.gonorrhoeae
T.vaginalis
C.trachomatis
M.genitalium
АмплиСенс
N.gonorrhoeae/C.trachomatis/
M.genitalium/T.vaginalisМУЛЬТИПРАЙМ-FL
(кат.№ R-B55) для 5-6 канального RG6000
Проблемы диагностики ИППП
на современном этапе
Разнообразие лабораторных тестов для
диагностики ИППП с различными
аналитическими и диагностическими
характеристиками;
Отсутствие обоснованных рекомендаций по
использованию подтверждающих тестов;
Какой метод использовать в
дополнении к ПЦР?
Screening Tests
To Detect Chlamydia trachomatis
and Neisseria gonorrhoeae
Infections --- 2002
… Because of the greater sensitivity of NAATs, a NAAT
is the only recommended additional test to verify a
result from another NAAT…
… В связи с более высокой чувствительностью
МАНК, верификацию их результатов, следует
проводить на основе альтернативных МАНКтестов…
Тесты с аналитической
чувствительностью меньшей,
чем у метода ПЦР (ПИФ, Бак.
посев) не корректно
использовать для
подтверждения его
результатов!
Гонококковая инфекция:
МАНК 1 + МАНК 2 ≈ Бак. Посев *
… Two positive NAATs, each targeting a different nucleic acid
sequence, may be substituted for culture of the cervix or the
urethra as legal evidence of infection...
Harrison`s Principles of Internal Medicine 16th Edition, 2006
* Кроме случаев обследования детей и
образцов экстрагенитальной локализации
Диагностическая чувствительность и
специфичность методов выявления
C.trachomatis
Метод
Культ. клеток
ПЦР
(Амплисенс)
NASBA
(Амплисенс)
ДЧ
(%)
78,4
ДС
(%)
100
100
100
100
100
Шипицына Е.В. С соавт.
«Журнал акушерства и женских болезней»
2005, том LIV, выпуск 4, стр. 17-21
NASBA
+
ПЦР
=
Достоверность
лабораторного диагноза
Проблемы диагностики ИППП
на современном этапе
Разнообразие лабораторных тестов для
диагностики ИППП с различными
аналитическими и диагностическими
характеристиками;
Отсутствие обоснованных рекомендаций по
использованию подтверждающих тестов;
Отсутствие стандартизованных алгоритмов
диагностики ИППП.
Категории пациентов
обследуемых на ИППП:
Лица с симптомами и
клиническими
проявлениями
инфекции
Дифференциальная
диагностика клинических
синдромов
Лица без клинических
проявлений инфекции и
лица с высоким риском
инфекции
Скрининг и установление
бессимптомных
инфицированных
Клинически здоровые
лица с низким риском
инфекции
Скрининг и исключение
ИППП
Лица с клинико-лабораторными
признаками урогенитальной инфекции
ДНК «…»
НЕ обнаружена
Синдромальная
терапия
ПЦР
N.gonorrhoeae
C.trachomatis
T.vaginalis
M.genitalium
ДНК «…»
обнаружена
Этиотропная
терапия
НАСБА-исследование не требуется
Основные клинические
синдромы и урогенитальные инфекции
Уретрит
N.gonorrhoeae
C.trachomatis
M.genitalium
T.vaginalis
Цервицит
N.gonorrhoeae
C.trachomatis
M.genitalium
T.vaginalis
Выделения
из влагалища
G.vaginalis, A.vaginae, BVассоц. микроорганизмы
M.hominis, Ureaplasma
spp.
Candida spp.
Выявление возбудителей ИППП с помощью
«АмплиСенс-NG/CT/MG/TV-мультипрайм»
ПЦР на:
N.gonorrhoeae
T.vaginalis
C.trachomatis
M.genitalium
Лица с клинико-лабораторными
признаками урогенитальной инфекции
ДНК «…»
НЕ обнаружена
Синдромальная
терапия
ПЦР
N.gonorrhoeae
C.trachomatis
T.vaginalis
M.genitalium
ДНК «…»
обнаружена
Этиотропная
терапия
НАСБА-исследование не требуется
Половые партнеры (без клинических
проявлений) лиц с установленной
урогенитальной инфекцией
ДНК «…»
НЕ обнаружена
ПЦР:
N.gonorrhoeae
C.trachomatis
T.vaginalis
M.genitalium
НАСБАисследование
РНК «…»
обнаружена
РНК «…»
НЕ обнаружена
Инфекция
Не установлена
ДНК «…»
обнаружена
Этиотропная
терапия
Лица без клинических проявлений
урогенитальной инфекции после
сомнительных половых контактов
ДНК «…»
НЕ обнаружена
НАСБАисследование
(N.gonorrhoeae,
C.trachomatis)
РНК «…»
НЕ обнаружена
Инфекция
Не установлена
ПЦР:
N.gonorrhoeae
C.trachomatis
T.vaginalis
M.genitalium
РНК «…»
обнаружена
Этиотропная
терапия
ДНК «…»
обнаружена
НАСБАисследование
РНК «…»
НЕ обнаружена
Инфекция
Не установлена
Лица без клинических проявлений –
постоянные половые партнеры,
семейные пары, прегравидарная подготовка
ДНК «…»
НЕ обнаружена
Инфекция
Не установлена
ПЦР:
N.gonorrhoeae
C.trachomatis
T.vaginalis
M.genitalium
РНК «…»
НЕ обнаружена
Этиотропная
терапия
ДНК «…»
обнаружена
НАСБАисследование
РНК «…»
обнаружена
Особенности эрадикации C.trachomatis
при терапии разными препаратами
Окончание
приема
Джозамицин
Окончание
приема
Доксициклин
A.Savicheva et al., 2006г.
Лица после проведенной
этиотропной терапии
(контроль лечения)
ДНК «…»
НЕ обнаружена
Эрадикация
ПЦР :
N.gonorrhoeae
C.trachomatis
T.vaginalis
M.genitalium
РНК «…»
НЕ обнаружена
≤ 1 недели – не полная элиминация
≥ 1-2 недель – рецидив инфекции
≥ 1-3 мес. – рецидив инфекции-?,
реинфекция-?
ДНК «…»
обнаружена
НАСБАисследование
РНК «…»
обнаружена
ФЛОФОЦЕНОЗ- комплексный подход к
диагностик е условно-патогенной флоры
ПЦР-мультипрайм
M.hominis
U.urealyticum
U.parvum
(Количественный формат)
диагностика
генитальных
микоплазм
ПЦР-мультипрайм
C.albicans
C.galbrata
C.crusei
(количественный формат )
диагностика
кандидоза
ПЦР-мультипрайм
G.vaginalis
A.vaginae
Lactobacteria
Bacteria
(количественный формат )
диагностика
бактериального
вагиноза