Полифазная питательная среда Entero Plus Шуляк Б.Ф., ООО
advertisement
Полифазная питательная среда Entero Plus Шуляк Б.Ф., ООО «ГЕМ» (г. Москва) Энтеробактерии — большая группа грамотрицательных бактерий, многие из которых (сальмонеллы, шигеллы, иерсинии, кишечная палочка) вызывают энтерит и пищевые токсикоинфекции. Особенности этих болезней (скоротечность, высокая контагиозность и др.), а также неодинаковая чувствительность их возбудителей к антимикробным препаратам диктует необходимость в быстрой и точной идентификации возбудителя. Традиционно энтеробактерии идентифицируют в несколько этапов, требующих значительного расхода времени, питательных сред и труда: для первичной изоляции энтеробактерий пользуются жидкими обогатительными (при необходимости) и селективно-идентификационными плотными средами (например,агаром Мак Конки); определяют принадлежность изолятов к сем. Enterobacteriaceae на средах Клиглера, трехсахарном агаре с железом и др.; дифференцируют роды энтеробактерий, проявляющих сходство по ряду признаков, с помощью цитратных и др. сред; устанавливает видовую принадлежность изолятов. Применение универсальных сред, позволяющих одновременно определять несколько параметров (например, отечественной двухслойной среды ДУКС, на которой определяют способность энтеробактерий ферментировать углеводы, образовывать сероводород и расщеплять мочевину) позволяет сокращать сроки исследований. Среда Entero Plus (Novamed, Израиль) — готовая питательная среда, поставляемая в пробирках. Ее нижняя фаза полужидкая, а верхняя — скошенная плотная. Предназначена для дифференциации изолятов энтеробактерий, выделенных на традиционно применяемых с этой целью средах, по 7 признакам (таблица): 1). Подвижности; 2). Наличию ß-галактозидазы — фермента, расщепляющего орто-нитрофенил галактозидазу на глюкозу и орто-нитрофенил. Последний окрашивает среду в желтый цвет. Традиционно тест проводят с помощью дисков или добавлением субстрата в суточную культуру; 3). Ферментации глюкозы; 4). Образованию сероводорода; 5). Образованию индола; 6). Выделению газа при ферментации глюкозы; 7). Способности разлагать мочевину. Определение этих признаков обеспечивает дифференциацию большей части изолятов энтеробактерий, но иногда требуется проведение дополнительных тестов. Например, для дифференциации бактерий родов Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter и Serratia определяют наличие у изолятов лизиндекарбоксилазы и/или дезоксирибонуклеазы (см. ниже Схему). Если выделенная бактерия не ферментирует глюкозу, то проводят оксидазный тест и окрашивают ее по Граму для подтверждения ее принадлежности к родам Pseudomonades или Acinetobacter. Бактерии Citrobacter freundii Citrobacter diversus Edwardsiella tarda Enterobacter aerogenes Enterobacter agglomerans Enterobacter cloacae Escherichia coli Hafnia alvei Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca Morganella morganii Proteus mirabilis Proteus vulgaris Providencia alkalifaciens Providencia rettgeri Providencia stuartii Salmonella (большая часть сероваров) Salmonella cholerasuis Salmonella typhi Salmonella paratyphi A Serratia marcescens Serratia liquefaciens Serratia rubidaea Shigella A,B,C Shigella sonnei Yersinia enterocolitica Yersinia pseudotuberculosis Идентификационные признаки Плотная фаза* Жидкая фаза Наличие ßH2S Ферментация Подвижность Уреаза галактозидазы глюкозы + + КГ + — + — КГ + — — + КГ + — + — КГ + — в — К/КГ ± — (+) + — КГ + — (+) + — КГ ± — + — КГ + — + — КГ — — (+) + — КГ — — (+) — — К Г/ К ± + — + К Г/ К + + — + КГ + + — КГ + — — К/КГ + + — К + ±М — + КГ + — — — — ±М В + — + ± ± ± (±) — — — — — — — — КГ К КГ К Г/ К К Г/ К К/КГ К К К К + + + + + ± — ±Б — (+22°C) — — — — — — — — — + + Пробка Индол ±М + + — ±М — + — — + + — + + + + — — — — — — — ±М — ±М — Обозначения. К — образование кислоты; Г — образование газа; + положительная реакция; (±) слабоположительная реакция; (+) положительная реакция на уреазу, маскируемая ферментацией глюкозы; — отрицательная реакция; в — вариабельное проявление признака; ±М признак, проявляющийся у меньшей части штаммов; ±Б признак, проявляющийся у большей части штаммов. Примечания. * По покраснению цвета скошенной части плотной фазы среды судят о наличии у изолята ß-галактозидазы, по изменению столбиковой части — о ферментации глюкозы (желтый цвет), образовании H2S (черный цвет), газообразовании — по появлению пузырей, трещин и разрывов. Подвижные бактерии вызывают помутнение, образующие уреазу — ее покраснение. При образовании индола нижняя часть пробки становится розово-фиолетовой. Схема применения дополнительных тестов для идентификации ряда энтеробактерий Обозначения: ONPG - наличие ß-галактозидазы; ЛД - наличие лизиндекарбоксилазы; ДНК-аза наличие дезоксирибонуклеазы; + наличие; — отсутствие
