Инструкция для применения

Документ:
K384АIR
Версия инструкции: 009
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНА
СОИ В ПРОДУКТАХ
Только для ин витро исследований
Номер по каталогу: K384А
Версия набора: 009
Производитель: ФООО «Хема», Санкт-Петербург, Дегтярный пер. 8-10
тел./факс (812) 271-24-41, 271-78-70; электронная почта spb@xema.ru, интернет www.xema.ru
Введение
Определение содержания сои в колбасах и мясных консервах имеет большое значение для
разделения этих продуктов на “содержащие сою” и “не содержащие”. Сегодня, не содержащий
сои продукт – это продукт, в котором сои менее 1%.
В данной тест-системе используются моноклональные антитела мыши к термо-чувствительному
эпитопу соевого глобулина.
Исследуемый материал
Набор предназначен для качественного определения антигена сои в продуктах питания, смывах
с производственного оборудования и других видах материала. В мясных консервах и колбасах
набор позволяет определять содержание сои до порогового значения в 1%. В состав набора
входят контрольные образцы, содержащие 1% сои для двух наиболее часто встречающихся
вариантов термической обработки мясопродуктов – 250С (мясные кончервы, тушенка) и 72С
(колбасы, сосиски). Набор рассчитан на 96 определений и обеспечивает анализ 46 образцов в
дублях.
Принцип определения
В данной тест-системе используется принцип “сэндвич” иммуноферментного анализа. В лунки
полистирольного микропланшета вносят водно-солевой экстракт продукта, содержащего
антиген сои. Антиген сои вместе с другими антигенами адсорбируется на поверхности
активированного полистирола. Несвязавшийся материал удаляется отмывкой. Далее в лунки
вносят моноклональные антитела против соевого глобулина, меченые пероксидазой. После
повторной отмывки активность фермента, связанного с поверхностью лунки микропланшета,
проявляется и измеряется добавлением хромоген-субстратной смеси, стоп-раствора и
фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции прямо пропорциональна количеству
антигена в образце.
Состав набора: ПРОБНАЯ КОМПЛЕКТАЦИЯ
Код
Наименование
Кол Ед-во цы
1 шт
1 P384А
Планшет полистироловый, разделяемый по лункам,
максимальной сорбционной емкости
2 N003
Пленка для заклеивания планшетов
2
шт
3 S005Z
Таблетка для приготовления экстрагирующего буфера
1
шт
4 C384АZ
Набор положительных и отрицательных контролей, содержащих
0 и 1% антигена сои по 1 мл
1
шт
6 S008Z
Концентрат отмывочного раствора, 22 мл
1
шт
7 T301Z
Конъюгат моноклональных антител мыши против соевого
глобулина с пероксидазой , 11 мл
1
шт
8 R051Z
9 R050Z
Раствор субстрата - 3,3',5,5'-тетраметилбензидина (ТМБ), 11 мл
Стоп-реагент, 11 мл
1
1
шт
шт
10 K384АIR Инструкция Антиген сои ИФА, русская
1
шт
11 K384АQ Паспорт контроля качества Антиген сои ИФА
1
шт
Цвет
синий
синий
Дополнительно необходимые реактивы, не включенные в набор
1.
Дистиллированная вода
Важные замечания по хранению реагентов и выполнению теста
2
3
4
5
Реагенты сохраняют стабильность в течение 1 месяца после вскрытия флаконов.
Не смешивайте и не используйте в одной постановке реагенты разных серий.
После использования реагента немедленно закрывайте крышку флакона или
пробирки. Внимание: закрывайте каждый флакон своей крышкой.
Все компоненты набора должны храниться в холодильнике (+2+8оС). Не
замораживайте набор.
1
После вскрытия пакета тщательно заклейте оставшиеся неиспользованными
лунки входящей в состав набора пленкой для заклеивания планшетов, чтобы
предотвратить воздействие влаги. Это необходимо для сохранения
работоспособности набора.
7 Не используйте для отмывки микропланшет растворы, содержащие азид натрия.
Азид натрия даже в следовых количествах ингибирует маркёрный фермент пероксидазу, что может привести к заниженному сигналу.
8 Внимание: во время всех инкубаций заклеивайте планшет клейкой лентой. Не
допускайте пересыхания лунок микропланшет между стадиями постановки.
9 Все пробы, калибраторы и контрольные образцы желательно ставить в двух
параллелях.
10 Отмывка микропланшет может проводиться как вручную, так и с использованием
автоматических устройств. Вносите не менее 250 мкл Отмывочного буфера в лунку
при каждой отмывке. Задержка при отмывке («замачивание») не требуется. После
окончания ручной отмывки резко опрокиньте микропланшет на фильтровальную
бумагу для удаления остатков буфера.
11 После остановки реакции с субстратом измеряйте оптическую плотность в течение
не более 15 минут.
6
Оборудование
Спектрофотометр для микропланшет, способный проводить измерения при длине волны 450 нм
в диапазоне от 0 до 3.0 единиц оптической плотности.
Инкубатор с температурой 37С
Весы лабораторные, точность взвешивания 0,05г
ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Подготовка реагентов
Все реагенты (включая необходимое число распечатанных стрипов) перед использованием
должны быть доведены до комнатной температуры (20-25С).
Подготовка образцов:
*1
Измельчите небольшую порцию исследуемого продукта с помощью ступки или
блендера, измельчение проводите до получения однородной массы. Взвесте 1 ± 0.1 г
гомогента. Внимание! Тщательно промывайте устройство для измельчения при
анализе нескольких образцов для предотвращения перекрестной контаминации!
2*
Приготовьте буфер для экстракции. Для этого растворите таблетку в 100 мл
дистиллированной воды.
*3
Проведите экстракцию антигенов из исследуемых образцов. Для этого добавьте 20 мл
буфера к 1 г гомогената.
*4
Инкубируйте 5 минут при температуре 20-25С при постоянном интенсивном
встряхивании.
*5
Центрифугируйте экстракты при 300-500 g в течение 5 минут для удаления
нерастворимых частиц. ОТБЕРИТЕ СУПЕРНАТАНТ для постановки реакции
(см.ниже).
2
Постановка реакции:
Поместите в рамку нужное количество стрипов или лунок из расчета: 8 лунок для
контрольных образцов и необходимое количество для исследуемых образцов в 2
повторах. Отметьте лунки, предназначенные для калибровочных проб, контрольных
и исследуемых образцов.
Внесите в соответствующие лунки по 100 мкл контрольных образцов. В лунки,
предназначенные для исследуемых образцов, внесите по 100 мкл супернатанта.
ВНИМАНИЕ! Строго соблюдайте последовательность внесения реагентов в
лунки!
Инкубируйте 60 минут при температуре 37 С
*6
*7
*8
Приготовьте отмывочный раствор 21-кратным разбавлением Концентрата S008Z.
Готовый отмывочный раствор можно хранить до 2 недель при +2-8С. Отмойте
стрипы 3 раза отмывочным раствором.
Внесите в лунки по 100 мкл раствора Конъюгата
Инкубируйте 30 минут при температуре 37 C.
Отмойте стрипы 5 раз Отмывочным раствором.
Внесите в лунки 100 мкл раствора Субстрата R051Z
Инкубируйте 15 минут при температуре 20-25 C
Внесите в лунки 100 мкл Стоп-реагента.
Определите оптическую плотность в лунках на фотометре при длине волны 450 нм.
Бланк фотометра выставляйте по нулевому калибратору
*9
*10
*11
*12
*13
*14
*15
*16
*17
Примеры полученных значений оптической плотности контрольных образцов для данного
набора приведены в Паспорте контроля качества.
Обработка результатов анализа:
1.
2.
3.
Рассчитайте средние значения ОП контрольных образцов, содержащих 0 %, 1 % сои, и
неизвестного образца.
Вычтите среднюю ОП контрольного образца, содержащего 0% сои из ОП образца с 1%
сои и неизвестного образца.
Разделите среднюю ОП неизвестного образца на ОП образца с содержанием сои 1%.
Если полученное значение К > 1.1, то в образце сои более 1%, если К <0.9, то в образце
сои менее 1%. Если 0.9 < К < 1.1, то около 1%.
ВНИМАНИЕ! Для расчета содержания сои в колбасах и мясных консервах необходимо
использовать разные контрольные образцы.
Контроль качества
Значения контрольных образцов должны попасть в требуемый диапазон (см. Паспорт контроля
качества).
3