значение проведения биохимического скрининга для

Смирнова В.Н., преподаватель
Жамалова З.А., студентка группы 6Л
ФГОУ СПО «Нижегородский медицинский колледж»
Минздравсоцразвития РФ
ЗНАЧЕНИЕ ПРОВЕДЕНИЯ БИОХИМИЧЕСКОГО СКРИНИНГА
ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ПАТОЛОГИИ ПЛОДА
1.Введение
В соответствии с данными Всемирной организации здравоохранения
(ВОЗ) 2,5-3% всех новорожденных уже при появлении на свет обнаруживают
различные врождённые пороки развития (ВПР), обусловленные действием
неблагоприятных экзогенных и эндогенных факторов. Согласно официальной
статистике в Российской Федерации частота врождённых и наследственных
заболеваний (ВНЗ) среди всех новорожденных детей составляет 4-5%, а их доля
в структуре младенческой смертности достигает 35-40%. Ежегодно в России на
каждую тысячу новорожденных рождается от 40 до 50 детей с врожденными и
наследственными заболеваниями. На их лечение государство вынужденно
расходовать огромные средства. В этой связи становится совершенно
очевидным, что профилактика наследственной и врожденной патологии в
России имеет важное социальное значение.
Решающая роль в комплексе мероприятий по профилактике и
предупреждению ВПЗ принадлежит пренатальной медико-генетической
диагностике, позволяющей предотвратить рождение детей с тяжелыми
некорригируемыми пороками развития, генными и хромосомными болезнями
и, тем самым, уменьшить генетический груз популяции.
Одним из методов пренатальной диагностики является биохимический
скрининг, позволяющий на ранних стадиях беременности выявить пороки
генетически обусловленных нарушений развития плода: трисомию 21-ой и 18ой хромосом и дефект невральной трубки. Маркёрами этих нарушений
являются альфа-фетопротеин и бета-субъединица ХГЧ, определяемые в
сыворотке крови беременных женщин во втором триместре беременности.
Данный комплекс тестов проводится в Нижегородском областном клиническом
диагностическом центре (НОКДЦ) и доступен для каждой женщины в первом и
во втором триместре её беременности.
Целью настоящей работы явилась оценка концентрации маркерных
белков (альфа-фетопротеина и бета-субъединицы ХГЧ) в сыворотке крови
беременных женщин в популяции Нижегородской области.
В ходе работы ставились следующие задачи:

Отработать метод твердофазного двусайтового флуоресцентного
иммунометрического анализа для оценки содержания маркерных белков в
сыворотке крови беременных женщин второго триместра.

Исследовать уровень альфа-фетопротеина и бета-субъединицы ХГЧ в
сыворотке крови женщин с возможной патологией плода и женщин с
нормальным течением беременности в популяции Нижегородской области.

Оценить эффективность данного теста для выявления возможных
патологий плода в Нижегородской области.
2. Материалы исследования
В данной работе мной были использованы образцы сыворотки крови
беременных женщин (во втором триместре беременности), поступившие в
лабораторию медицинской генетики НОКДЦ из женских консультаций
Нижнего Новгорода и Нижегородской области. Целью исследований образцов
сывороток крови являлось выявление врождённых пороков развития плода с
помощью специальной программы Life Cycle, введённой в память ИФА
анализатора Wallac Victor2 D фирмы «Perkin Elmer».
Для проведения исследования в лаборатории использовались:
1) специальные наборы реагентов, имеющие в своём составе моноклональные
антитела: DELFIA AFP kit, DELFIA Free hCGb kit, DELFIA PAPP-A kit.
2) оборудование:
- флюориметр - DЕЛЬФИА, оснащенный компьютером;
- автоматический вошер – ДЕЛЬФИЯ (плейвошер);
- автоматический шейкер – ДЕЛЬФИЯ (плейшер).
Исследования проводились методом иммунофлуоресценции. Метод
основан на твердофазном двусайтовом флуоресцентном иммунометрическом
анализе, при котором один из компонентов системы «антиген – антитело»
сорбируется на твердую фазу–лунку планшета. В каждой лунке планшета
проводится отдельная реакция, которая затем анализируется. При анализе
антигенов на стенке лунок планшета сорбируются антитела против данного
антигена, затем добавляется раствор тестируемого антигена (то есть сыворотка с
маркерными сывороточными белками) и меченные антитела против того же
антигена. Проводится инкубация, в ходе которой происходит взаимодействие
«антиген – антитело», в результате чего образуется связанный с твердой фазой
комплекс, состоящий из антител, антигена и меченых ионами антител. Реакция
«антиген – антитело» проявляется добавлением усиливающего раствора,
который диссоциирует ионы из меченного антитела в раствор, где они
формируют высокофлуоресцентные хелатные комплексы с компонентами
усиливающего раствора. Флуоресцентный сигнал пропорционален количеству
антител. Из флюориметра данные поступают в компьютер, где с помощью
специальной программы строится кривая стандартов. Данные пациентов
сравниваются с полученной кривой, определяется концентрация маркеров в
сыворотке пациентов (АФП в нг/мл, а бета – ХГЧ в ед/мл).
Тест заканчивается компьютерным расчетом риска рождения ребенка с
патологиями. При расчете индивидуального риска учитываются факторы,
изменяющие уровни маркерных белков: возраст и вес беременной женщины,
количество плодов, курение, раса и наличие сахарного инсулинозависимого
диабета, хромосомная патология
беременности и семейном анамнезе.
ребенка или плода в предыдущей
3. Результаты и их обсуждение
При внедрении в Нижегородской области пренатального биохимического
скрининга с марта 2008 по декабрь 2010 года было обследовано 76658 женщин
с 16 по 20 неделю беременности.
На диаграмме приведены данные по группе риска, выявленной при
проведении пренатального скрининга беременных женщин; исследования
выполнены мной в период 2008-2010г.
242
с-м Эдвардса 5%
568
32
8
3
4128
ДНТ 12%
с-м Дауна + с-м Эдвардса 0,64%
с-м Эдвардса + ДНТ 0,16%
с-м Дауна + ДНТ 0,006%
с-м Дауна 83%
Из диаграммы видно, что из общего количества обследованных - 76658
женщин в группу риска «ВСЕГО» вошли 4968 женщин, что составило 6,5%.
Из этого числа выделены подгруппы:
- по болезни Дауна составила 4128 пациенток или 83%;
- по синдрому Эдварса составила 242 пациенток или 5%,
- по дефекту невральной трубки составила 568 пациенток или 11%.
В плане раннего выявления болезни Дауна наиболее эффективным был
признан комбинированный ультразвуковой и биохимический скрининг,
включающий измерение толщины воротникового пространства, а также
определение уровня РАРР-А и свободной бета-субъединицы ХГ в крови
беременной. На основании этих комплексных показателей и возраста женщины
с помощью автоматизированной программы рассчитывали комплексный риск
рождения ребенка с болезнью Дауна. Ожидаемая эффективность выявления
риска генетических нарушений развития плода достигла 85-90% при 3-5%
ложноположительных результатах, что совпало с данными других авторов,
известных в этой области. Полученные результаты свидетельствуют о
необходимости более широкого использования биохимического скрининга в
пренатальной медико-генетической диагностике для снижения таких
показателей генетического груза популяции, как величина перинатальной
смертности, частота хромосомных и генных болезней, а также для
профилактики этих тяжелых заболеваний.
4. Выводы:
В ходе исследований, проведённых мной в период 2008г-2010гг, был
освоен
метод
твердофазного
двусайтового
флуоресцентного
иммунометрического анализа для оценки количественного содержания
маркерных сывороточных белков в сыворотке крови беременных женщин
второго триместра, а также:
1.Установлена
динамика
изменений
концентрации
маркерных
сывороточных белков при патологии плода.
2. Подтверждена эффективность скрининговых тестов для профилактики
рождения детей с врожденными патологиями.