Лабораторная работа 18

Лабораторная работа 18
Изучение ферментов дыхания растений
Принцип метода: дегидрогеназы — это ферменты, активирующие и отщепляющие
водород от окисляемого субстрата. Обнаружение дегидрогеназ основано на их
способности передавать водород какому-нибудь акцептору, который, восстанавливаясь,
меняет свою окраску. В качестве акцептора водорода берут метиленовую синь,
переходящую в восстановленном состоянии в бецветную лейкоформу.
Цель работы: провести экспериментальное определение активности дегидрогеназ
— дыхательных ферментов.
Ход работы: с семян набухшего гороха снять кожуру. Семена поместить в две
пробирки. В одну из них налить воду и довести до кипения, чтобы убить ткани семян.
После охлаждения воду слить и обе партии горошин (кипяченые и непрокипяченные)
залить 1% раствором метиленовой сини для окрашивания. Через 5…10 мин. синь из
пробирок слить, семена промыть водопроводной водой. После промывания все семена
должны иметь темно-синюю окраску.
Окрашенные семена залить отстоянной водопроводной водой, пробирки закрыть
резиновыми пробками, то есть создать анаэробные условия, и поместить их в термостат
или водяную баню с оптимальной для работы дегидрогеназ температурой (около 30…35
°С).
Через 1,5…2 ч можно заметить, что непрокипяченные семена теряют синюю
окраску. Это происходит потому, что дегидрогеназы, участвующие в дыхании клеток,
активировали и сняли водород с дыхательного материала, а затем передали его на
метиленовую синь, которая восстановилась и обесцветилась. Если с обесцвеченных семян
слить воду, то на воздухе они снова синеют, так как лейкоформа метиленовой сини
окисляется.
Семена в контрольной пробирке остаются синими, поскольку при кипячении
дегидрогеназы разрушились. Аналогичные опыты можно провести с любым
неокрашенным растительным материалом.
После проведения опыта зарисовать живые и мертвые семена, описать и объяснить
полученный результат.
Оборудование и материалы: 1) набухшие семена гороха посевного (Pisum sativum L.); 2)пробирки с пробками;
3) метиленовая синь; 4) водяная баня.