СВЕРХМАЛЫЕ ДОЗЫ АНТИИДИОТИПИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К

Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2002, Приложение № 4
76
ÑÂÅÐÕÌÀËÛÅ ÄÎÇÛ ÀÍÒÈÈÄÈÎÒÈÏÈ×ÅÑÊÈÕ ÀÍÒÈÒÅË
Ê ÈÍÒÅÐÔÅÐÎÍÓ-γγ ×ÅËÎÂÅÊÀ: ÈÇÓ×ÅÍÈÅ
ÈÌÌÓÍÎÒÐÎÏÍÛÕ ÑÂÎÉÑÒÂ
Å.Þ.Øåðñòîáîåâ, Í.Â.Ìàñíàÿ, À.À.×óðèí,
Î.Ñ.Áîðñóê, À.Â.Ìàðòþøåâ*, Î.È.Ýïøòåéí*
ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè ÒÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ; *Íàó÷íî-ïðîèçâîäñòâåííàÿ ôèðìà “Ìàòåðèà Ìåäèêà Õîëäèíã”, Ìîñêâà
Èçó÷àëè âëèÿíèå ñâåðõìàëûõ äîç àíòèèäèîòèïè÷åñêèõ àíòèòåë ê èíòåðôåðîíó-γ ÷åëîâåêà íà ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò ýêñïåðèìåíòàëüíûõ æèâîòíûõ ïðè èììóíèçàöèè òèìóñçàâèñèìûì àíòèãåíîì, èíòåíñèâíîñòü ðåàêöèè ãèïåð÷óâñòâèòåëüíîñòè çàìåäëåííîãî òèïà è ôàãîöèòàðíóþ àêòèâíîñòü íåéòðîôèëîâ ïåðèòîíåàëüíîãî ýêññóäàòà. Ïîêàçàíî, ÷òî äàííûé ïðåïàðàò ñòèìóëèðóåò ãóìîðàëüíûé îòâåò è íå âëèÿåò íà
ôóíêöèîíèðîâàíèå Ò-êëåòîê-ýôôåêòîðîâ, òåì íå ìåíåå îí ñïîñîáåí ñóùåñòâåííî àêòèâèçèðîâàòü ôàãîöèòîç.
Êëþ÷åâûå ñëîâà: ñâåðõìàëûå äîçû, àíòèèäèîòèïè÷åñêèå àíòèòåëà, èíòåðôåðîí-γ ÷åëîâåêà,
ãóìîðàëüíûé è êëåòî÷íûé èììóííûé îòâåò
Ñîâðåìåííàÿ íàóêà íå íàõîäèò àäåêâàòíîãî îáúÿñíåíèÿ íàëè÷èþ áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ó
âåùåñòâ â ñâåðõìàëûõ êîíöåíòðàöèÿõ, ïîëó÷àåìûõ ñ ïîìîùüþ ãîìåîïàòè÷åñêîé òåõíîëîãèè ïîòåíöèðîâàíèÿ, îäíàêî ãîìåîïàòè÷åñêèå ñðåäñòâà îáëàäàþò äîñòàòî÷íîé òåðàïåâòè÷åñêîé ýôôåêòèâíîñòüþ ïðè ðàçëè÷íûõ çàáîëåâàíèÿõ. Âûÿâëåííàÿ ó ñâåðõìàëûõ äîç àíòèòåë ê ýíäîãåííûì ðåãóëÿòîðàì, â òîì ÷èñëå ê èíòåðôåðîíó-γ
(ÈÔÍ-γ) [4,6], ñïîñîáíîñòü ìîäèôèöèðîâàòü
ôóíêöèîíàëüíóþ àêòèâíîñòü ýòîãî ðåãóëÿòîðà,
ïîäòâåðæäåíà â öåëîì ðÿäå ðàáîò [1,4-7].
Öåëüþ íàñòîÿùåãî èññëåäîâàíèÿ ÿâèëîñü ýêñïåðèìåíòàëüíîå èçó÷åíèå èììóíîòðîïíûõ ñâîéñòâ
ñâåðõìàëûõ äîç àíòèèäèîòèïè÷åñêèõ àíòèòåë ê
ÈÔÍ-γ ÷åëîâåêà.
ÌÅÒÎÄÈÊÀ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß
Ýêñïåðèìåíòû ïðîâåäåíû íà 92 ìûøàõ (63 ñàìöà
è 29 ñàìîê) ëèíèè ÑÂÀ/ÑàLac ìàññîé 16-18 ã,
ïîëó÷åííûõ èç êîëëåêöèîííîãî ôîíäà Íàó÷íîèññëåäîâàòåëüñêîé ëàáîðàòîðèè ýêñïåðèìåíòàëüíî-áèîìåäèöèíñêîãî ìîäåëèðîâàíèÿ ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè ÒÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ (ñåðòèôèêàò èìååòñÿ). Ñàìîê èñïîëüçîâàëè ïðè èçó÷åíèè ôàãîöèòîçà, îñòàëüíûå îïûòû ïîñòàâëåíû íà ñàìöàõ.
Èñïîëüçîâàëè ñìåñü ãîìåîïàòè÷åñêèõ ðàçâåäåíèé (Ñ12+Ñ30+Ñ200) àíòèèäèîòèïè÷åñêèõ àíòèòåë ê ÈÔÍ-γ ÷åëîâåêà (ÏÀÒ-ÈÔÍ), êîòîðóþ
ââîäèëè per os â îáúåìå 0.2 ìë êóðñîì â òå÷åíèå
10 äíåé (ýêâèâàëåíòíàÿ êîíöåíòðàöèÿ — 10—24
ìàññîâûõ äîëåé). Ìûøè ãðóïï ñðàâíåíèÿ ïîëó÷àëè ðàñòâîðèòåëü — ïîòåíöèðîâàííóþ äèñòèëëèðîâàííóþ âîäó (ÏÄÂ, Ñ12+Ñ30+Ñ200) ïî òàêîé æå ñõåìå. Ôîíîâûå çíà÷åíèÿ ðåãèñòðèðîâàëè
ó èíòàêòíûõ æèâîòíûõ ñîîòâåòñòâóþùåãî ïîëà.
Ïðè èçó÷åíèè ãóìîðàëüíîãî èììóííîãî îòâåòà ìûøåé èììóíèçèðîâàëè ìèíèìàëüíûìè
äîçàìè ýðèòðîöèòîâ áàðàíà (ÝÁ) [3] â äîçå 5½
106/ìûøü îäíîêðàòíî âíóòðèáðþøèííî â îáúåìå 0.2 ìë â êîíöå 10-äíåâíîãî êóðñà ââåäåíèÿ
ÏÀÒ-ÈÔÍ èëè ÏÄÂ. Íà 4-å ñóòêè ïîñëå èììóíèçàöèè îáùåïðèíÿòûìè ìåòîäàìè [2] îïðåäåëÿëè îáùåå êîëè÷åñòâî ëåéêîöèòîâ â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè, ìàññîâûå èíäåêñû è îáùóþ êëåòî÷íîñòü òèìóñà è ñåëåçåíêè, à òàêæå îòíîñèòåëüíîå è àáñîëþòíîå êîëè÷åñòâî àíòèòåëîîáðàçóþùèõ êëåòîê (ÀÎÊ) â ñåëåçåíêå ïî ìåòîäó [8]
è òèòð àíòèòåë â ñûâîðîòêå êðîâè ñ ïîìîùüþ
ðåàêöèè ãåìàããëþòèíàöèè.
Ïðè ïîñòàíîâêå ðåàêöèè ãèïåð÷óâñòâèòåëüíîñòè çàìåäëåííîãî òèïà (ÃÇÒ) [3] ñåíñèáèëèçàöèþ ÝÁ ïðîâîäèëè â êîíöå 10-äíåâíîãî êóð-
ФАРМАКОЛОГИЯ СВЕРХМАЛЫХ ДОЗ
77
Ñóùåñòâåííîå âëèÿíèå íà ìàññó è êëåòî÷íîñòü òèìóñà îêàçûâàëà ëèøü ÏÄ (òàáë. 1),
ïðèìåíåíèå ÏÀÒ-ÈÔÍ íå ïðèâîäèëî ê ñêîëüêî-íèáóäü çíà÷èòåëüíûì èçìåíåíèÿì â òèìóñå.
Èììóíèçàöèÿ ïîñëå êóðñîâîãî ââåäåíèÿ ÏÄÂ
ñïîñîáñòâîâàëà òàêæå ïîâûøåíèþ îáùåé êëåòî÷íîñòè ñåëåçåíêè îòíîñèòåëüíî êîíòðîëÿ;
ÏÀÒ-ÈÔÍ íà ñîñòîÿíèå ñåëåçåíêè ñóùåñòâåííîãî âëèÿíèÿ íå îêàçûâàë (òàáë. 1).
 îòëè÷èå îò ýêñïåðèìåíòîâ ïî èçó÷åíèþ
èììóíîòðîïíîãî äåéñòâèÿ ÏÀÒ-ÈÔÍ [4], â äàííîé ñåðèè îïûòîâ ïîïóëÿöèÿ ìûøåé ëèíèè ÑÂÀ
îêàçàëàñü ñïîñîáíîé äîñòàòî÷íî àêòèâíî ôîðìèðîâàòü ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò íà ââåäåíèå ìèíèìàëüíûõ äîç ÝÁ: â êîíòðîëå îòìå÷åíî ñóùåñòâåííîå íàðàñòàíèå îòíîñèòåëüíîãî
è àáñîëþòíîãî êîëè÷åñòâà ÀÎÊ â ñåëåçåíêå ïî
ñðàâíåíèþ ñ ôîíîì (òàáë. 1), à òèòð ñïåöèôè÷åñêèõ ãåìàããëþòèíèíîâ â ñûâîðîòêå êðîâè ýòèõ
ìûøåé êîëåáàëñÿ â ïðåäåëàõ ðàçâåäåíèé 1:2561:512.
Èììóíèçàöèÿ ÝÁ ïî îêîí÷àíèè êóðñà ââåäåíèÿ ÏÀÒ-ÈÔÍ òàêæå ïðèâîäèëà ê ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìîìó ïîâûøåíèþ ïðîöåíòíîãî ñîäåðæàíèÿ ÀÎÊ îòíîñèòåëüíî ôîíîâûõ âåëè÷èí.
ÏÀÒ-ÈÔÍ íå ñïîñîáñòâîâàëè àêòèâèçàöèè èììóííîãî îòâåòà: îòíîñèòåëüíîå è àáñîëþòíîå
êîëè÷åñòâî ÀÎÊ è òèòð àíòèòåë ó ìûøåé ýòîé
ãðóïïû áûëè ñóùåñòâåííî íèæå àíàëîãè÷íûõ
ïîêàçàòåëåé â êîíòðîëå (òàáë. 1). Ïðè èììóíèçàöèè â êîíöå êóðñîâîãî ââåäåíèÿ ÏÄ ïîëó÷åíû àíàëîãè÷íûå ðåçóëüòàòû (òàáë. 1).
Íè ÏÀÒ-ÈÔÍ, íè ÏÄÂ ñóùåñòâåííî íå
âëèÿëè íà âûðàæåííîñòü ðåàêöèè ÃÇÒ: èíäåêñ
ðåàêöèè ñîñòàâèë 28.86±2.44 è 23.83±1.84% ñîîòâåòñòâåííî ïðîòèâ 26.10±2.14% â êîíòðîëå.
ñà ââåäåíèÿ ÏÀÒ-ÈÔÍ èëè ÏÄÂ, äîçà ÝÁ â
ýòîì ñëó÷àå ñîñòàâëÿëà 107 êëåòîê/ìûøü ïîäêîæíî â îáúåìå 0.1 ìë, ðàçðåøàþùóþ äîçó ÝÁ
(108 êëåòîê â îáúåìå 20 ìêë) ââîäèëè â ïîäóøå÷êó çàäíåé ëàïû íà 5-é äåíü ïîñëå ñåíñèáèëèçàöèè. Îäíîâðåìåííî â êîíòðàëàòåðàëüíóþ
ëàïó ââîäèëè 0.9% NaCl â òîì æå îáúåìå. Èíòåíñèâíîñòü ðåàêöèè îöåíèâàëè ÷åðåç 24 ÷ ïî
èíäåêñó ðåàêöèè, êîòîðûé âû÷èñëÿëè èíäèâèäóàëüíî äëÿ êàæäîãî æèâîòíîãî, âûðàæàÿ ðàçíîñòü ìåæäó ìàññîé ëàïû â îïûòå è â êîíòðîëå
â ïðîöåíòàõ îò ïîñëåäíåé.
Ôàãîöèòàðíóþ àêòèâíîñòü íåéòðîôèëîâ ïåðèòîíåàëüíîãî ýêññóäàòà îöåíèâàëè ÷åðåç 24 ÷
ïîñëå îêîí÷àíèÿ 10-äíåâíîãî êóðñà ââåäåíèÿ
ÏÀÒ-ÈÔÍ èëè ÏÄ ïî ñïîñîáíîñòè ýòèõ êëåòîê ïîãëîùàòü ñóòî÷íóþ êóëüòóðó S. aureus, øòàìì
209 (ïîëó÷åí ñ êàôåäðû ìèêðîáèîëîãèè Ñèáèðñêîãî ãîñóäàðñòâåííîãî ìåäèöèíñêîãî óíèâåðñèòåòà), êîíöåíòðàöèÿ âçâåñè ìèêðîáîâ — 108 êëåòîê/ìë; ó÷èòûâàëè ïðîöåíò íåéòðîôèëîâ, ïîãëîòèâøèõ ìèêðîáû (ôàãîöèòàðíûé èíäåêñ — ÔÈ),
è ñðåäíåå ÷èñëî ñòàôèëîêîêêîâ, ïîãëîùåííîå
îäíîé êëåòêîé (ôàãîöèòàðíîå ÷èñëî — Ô×) [3].
Ïðè ñòàòèñòè÷åñêîé îáðàáîòêå ïðèìåíÿëè
ïàêåò ïðîãðàìì “Statgraphics 3.0” ñ ïðåäâàðèòåëüíîé îöåíêîé íîðìàëüíîñòè ðàñïðåäåëåíèÿ,
èñïîëüçîâàëè t êðèòåðèé Ñòüþäåíòà.
ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß
Êàê “÷èñòàÿ” èììóíèçàöèÿ ÝÁ, òàê è èíúåêöèÿ
àíòèãåíà â êîíöå 10-äíåâíîãî êóðñîâîãî ââåäåíèÿ ÏÀÒ-ÈÔÍ èëè ÏÄ ïðèâîäèëè ê ñíèæåíèþ óðîâíÿ ëåéêîöèòîâ â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè
ìûøåé ïî ñðàâíåíèþ ñ ôîíîì (òàáë. 1).
Òàáëèöà 1. Âëèÿíèå ÏÀÒ-ÈÔÍ íà ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò ìûøåé ëèíèè ÑÂÀ/CaLac (M±m)
Èììóíèçàöèÿ ÝÁ
Ïîêàçàòåëü
Èíòàêòíûå
9
Общее количество лейкоцитов, 10 /л
12.95±0.70
êîíòðîëü
+ÏÄÂ
10.00±0.57*
+ÏÀÒ-ÈÔÍ
7.45±0.48*
10.10±0.74* о
6
Общая клеточность, 10 клеток
тимуса
107.75±9.10
67.20±16.20
95.00±6.39
88.20±11.22
селезенки
155.50±2.53
110.20±10.94*
139.60±3.00*
123.60±13.53
Массовый индекс
тимуса
1.75±0.13
1.46±0.09
2.30±0.24
1.80±0.18
селезенки
3.70±0.09
3.03±0.19*
3.09±0.25
3.33±0.20
4.18±0.31
6.42±0.63*
4.99±0.39*
4.19±0.57+++
2.70±0.24
5.84±0.13*
3.56±0.21*
3.36±0.16*+
0
9.00±0.37
6.20±1.24
4.25±0.63++
АОК, 10
6
%
Титр антител, log2
Примечание. Здесь и в табл. 2: *различия с интактными достоверны; +p=0.000002,
контролем, оp=0.02 по сравнению с группой ПДВ.
++
p≤0.0001,
+++
p=0.03 по сравнению с
Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2002, Приложение № 4
78
Òàáëèöà 2. Âëèÿíèå ÏÀÒ-ÈÔÍ íà ôàãîöèòàðíóþ àêòèâíîñòü íåéòðîôèëîâ ïåðèòîíåàëüíîãî ýêññóäàòà
ìûøåé ÑÂÀ/CaLac (M±m)
Ïîêàçàòåëü
Èíòàêòíûå
ÏÄÂ
ÏÀÒ-ÈÔÍ
Фагоцитарный индекс, %
23.60±3.84
11.40±2.14*
51.20±3.98*++
Фагоцитарное число
4.06±0.31
6.18±0.80
7.42±0.45*
Êóðñ ÏÀÒ-ÈÔÍ ñóùåñòâåííî ñòèìóëèðîâàë
ôàãîöèòîç (òàáë. 2). ÏÄÂ íå îêàçûâàëà ñòèìóëèðóþùåãî âëèÿíèÿ íà ôàãîöèòàðíóþ àêòèâíîñòü íåéòðîôèëîâ, áîëåå òîãî, ïðîöåíò êëåòîê,
ñïîñîáíûõ ïîãëîùàòü ñòàôèëîêîêêè, áûë ñóùåñòâåííî íèæå, ÷åì ó èíòàêòíûõ æèâîòíûõ; ôàãîöèòàðíîå ÷èñëî â ãðóïïàõ ÏÄ è ÏÀÒ-ÈÔÍ
çíà÷èìî íå ðàçëè÷àëîñü (òàáë. 2). Íàëè÷èå íàïðàâëåííîé ôàðìàêîëîãè÷åñêîé (èììóíîòðîïíîé) àêòèâíîñòè ó ÏÄÂ, áåçóñëîâíî, çàñëóæèâàåò
îòäåëüíîãî èçó÷åíèÿ.
Òàêèì îáðàçîì, èññëåäîâàíèå âîçìîæíîãî
èììóíîòðîïíîãî äåéñòâèÿ ñâåðõìàëûõ äîç àíòèèäèîòèïè÷åñêèõ àíòèòåë ê ÈÔÍ-γ ÷åëîâåêà ïîêàçàëî, ÷òî ïðè ââåäåíèè per os ìûøàì ëèíèè
ÑÂÀ/CaLac â èçó÷åííûõ äîçèðîâêàõ è â âûáðàííûõ óñëîâèÿõ ýêñïåðèìåíòà ïðåïàðàò íå îáëàäàåò ñïîñîáíîñòüþ ñòèìóëèðîâàòü ãóìîðàëüíûé
îòâåò ïðè èììóíèçàöèè òèìóñçàâèñèìûì àíòèãåíîì è ïðàêòè÷åñêè íå âëèÿåò íà ôóíêöèîíèðîâàíèå Ò-êëåòîê-ýôôåêòîðîâ ïðè ðàçâèòèè ðåàêöèè ÃÇÒ â îòâåò íà ñåíñèáèëèçàöèþ ÝÁ. Òåì
íå ìåíåå ÏÀÒ-ÈÔÍ ñïîñîáíû ñóùåñòâåííî ïîâûøàòü ôàãîöèòàðíóþ àêòèâíîñòü íåéòðîôèëîâ
ïåðèòîíåàëüíîãî ýêññóäàòà â îñíîâíîì çà ñ÷åò
óâåëè÷åíèÿ ïðîöåíòà àêòèâíûõ ôàãîöèòîâ.
Ïðèíèìàÿ âî âíèìàíèå òîò ôàêò, ÷òî èììóíîòðîïíûå ýôôåêòû ÏÀÒ-ÈÔÍ ðåàëèçóþòñÿ
âî ìíîãîì çà ñ÷åò èíäóêöèè ýíäîãåííîãî ÈÔÍ-γ
[7], ìîæíî ñäåëàòü âûâîä, ÷òî ïîòåíöèðîâàííûå
àíòèèäèîòèïè÷åñêèå àíòèòåëà ê ÈÔÍ-γ íå îáëàäàþò ñïîñîáíîñòüþ èíäóöèðîâàòü âûðàáîòêó ýíäîãåííîãî ÈÔÍ-γ.
ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ
1. Àãàôîíîâ Â.È., Áåëüñêàÿ Í.Â., Äàíèëåö Ì.Ã. è äð. //
Áþë. ýêñïåð. áèîë. 2001. Ïðèë. 3. Ñ. 46-48.
2. Ãîëüäáåðã Å.Ä., Äûãàé À.Ì., Øàõîâ Â.Ï. Ìåòîäû
êóëüòóðû òêàíè â ãåìàòîëîãèè. Òîìñê, 1992.
3. Ìåòîäè÷åñêèå óêàçàíèÿ ïî èçó÷åíèþ èììóíîòðîïíîé àêòèâíîñòè ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ âåùåñòâ //
Ðóêîâîäñòâî ïî ýêñïåðèìåíòàëüíîìó (äîêëèíè÷åñêîìó) èçó÷åíèþ íîâûõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ âåùåñòâ.
Ì., 2000. Ñ. 257-263.
4. Øåðñòîáîåâ Å.Þ., Ìàñíàÿ Í.Â., ×óðèí À.À. è äð. //
Áþë. ýêñïåð. áèîë. 2001. Ïðèë. 3. Ñ. 37-39.
5. Ýïøòåéí Î.È. Íåéðîôèçèîëîãè÷åñêèå ìåõàíèçìû
ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ ïîòåíöèðîâàííûõ
(“ãîìåîïàòèçèðîâàííûõ”) àíòèòåë ê ìîçãîñïåöèôè÷åñêîìó áåëêó S-100. Àâòîðåô. äèñ. ... êàíä. ìåä.
íàóê. Òîìñê, 1999.
6. Ýïøòåéí Î.È., Áåëüñêèé Þ.Ï., Øåðñòîáîåâ Å.Þ.
è äð. // Áþë. ýêñïåð. áèîë. 2001. Ïðèë. 3. Ñ. 34-36.
7. Ýïøòåéí Î.È., Æäàíîâ Â.Â., Ñòàâðîâà Ë.À. è äð.
Ãåìîñòèìóëèðóþùèå ñâîéñòâà ñâåðõìàëûõ äîç àíòèòåë ê ýðèòðîïîýòèíó // Òàì æå. Ñ. 40-42.
8. Cunningham A.I. // Nature. 1965. Vol. 207. P. 4313.