cостояние провоспалительных цитокинов и с реактивного белка

№ 3, ВЕРЕСЕНЬ 2005
ДЕРМАТОЛОГІЯ
УДК 616.5092:612.017
CОСТОЯНИЕ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ
И С"РЕАКТИВНОГО БЕЛКА
У БОЛЬНЫХ РОЗАЦЕА С РАЗЛИЧНЫМИ
ПРОЯВЛЕНИЯМИ АУТОИММУННЫХ РЕАКЦИЙ
Л.Д. Калюжная, Т.И. Гавриленко, О.В. Стоянова, Е.М. Корнилина
Киевская медицинская академия последипломного образования имени П.Л. Шупика
Институт кардиологии имени Н.Д. Стражеско АМН Украины
Ключевые слова: розацеа, аутоиммунная и иммуновоспалительная реакции, цитокины.
З
а последние годы накоплено множество дан
ных, свидетельствующих об участии иммунных
механизмов в патогенезе дерматологических забо
леваний, в частности розацеа [1, 6, 12]. На совре
менном этапе кожа рассматривается не только как
орган неспецифической защиты, но и как участник
иммуногенеза во всех его проявлениях [3, 4, 11, 8].
Клинические и экспериментальные исследования
показали, что эпидермис, как и кожа в целом, обла
дает всем необходимым для инициирования и раз
вития местного иммунного ответа. Оказалось, что
кератиноциты являются не только наружным ме
ханическим барьером для биологических, физи
ческих и химических факторов внешней среды.
Они способны синтезировать и секретировать во
внутреннюю среду организма, в частности в кровь,
различные вещества, участвующие в реализации
иммунного ответа. После повреждения кожи кера
тиноциты начинают синтезировать и секретиро
вать цитокины, являющиеся медиаторами межкле
точных коммуникаций при системном иммунном
ответе, иммунном воспалении, а также межсистем
ных взаимодействиях [2, 7]. Это белки, вырабаты
ваемые преимущественно активированными клет
ками (лимфоцитами — Лф, моноцитами — Мц,
нейтрофилами — Нф и местно — кератиноцитами,
эндотелиальными клетками и другими) иммунной
системы, лишенные специфичности в отношении
антигенов. Нарушения регуляторных процессов, в
которых цитокины играют решающую роль, может
способствовать возникновению ряда дерматологи
ческих заболеваний, в том числе розацеа [1, 5].
Хотя цитокины различаются по строению, био
логической активности, продолжительности жиз
ни, происхождению и по многим другим свойст
вам, их посредством регулируется характер, глуби
на и продолжительность воспаления и иммунного
ответа организма. Цитокины связывают кератино
циты с лимфоцитами, фагоцитами и гранулоцита
ми и являются критическими элементами в ответе
кожи на повреждение, инфекционновирусное по
ражение и аутоиммунизацию [3, 4, 5, 10, 11].
Цель работы — определение способности моно
нуклеарных клеток (МНК) лимфоцитов и моноци
тов вырабатывать провоспалительные цитокины
Український журнал дерматології, венерології, косметології
(ИЛ1, ИЛ6) и уровня Среактивного белка (СРБ)
крови, установление их взаимосвязи с факторами
аутоиммунизации (аутоантителами к ткани кожи и
ЦИК) у больных розацеа.
Материалы и методы исследования
Обследовано 38 больных розацеа в возрасте от 30
до 65 лет. С эритематозной формой — 11 пациен
тов, с эритематознопапулезной — 10, с папуло
пустулезной — 10, с инфильтративнопродуктив
ной — 7, контрольную группу составили 15 практи
чески здоровых лиц.
В сыворотке крови определяли уровень СРБ с
использованием высокочувствительных иммуно
ферментных тестсистем (Diagnostic Automation,
Kaнaдa).
Уровень циркулирующих иммунных комплексов
(ЦИК) — методом Digion (1977). Уровень цитоки
нов и их растворимых рецепторов (ИЛ1R1, ИЛ6R)
в среде мононуклеаров периферической крови оп
ределяли методом твердофазного иммунофермент
ного анализа, используя иммуноферментные тест
системы фирмы Diaklone (Франция).
При статистической обработке результатов ис
пользовали программу «Statgraf». Достоверность
различий рассчитывали по tкритерию Стьюдента.
Собственные данные
Данные, характеризующие секреторную способ
ность МНК вырабатывать ИЛ1, ИЛ6 у больных
розацеа и практически здоровых лиц, представле
ны в табл. 1.
По данным литературы ИЛ1 обладает полифунк
циональными свойствами, стимулирует:
синтез ИЛ2 и его рецептора Тлимфоцитами;
ранние этапы дозревания тимоцитов;
продукцию антител Влимфоцитами;
хемотаксис нейтрофилов и моноцитов;
выделение факторов активации тромбоцитов,
простагландинов и NO;
функцию дендритных клеток;
пролиферацию фибробластов и синовиоцитов
синовиальной оболочки суставов и выделение ими
коллагеназы и простагландинов;
синтез белков острой фазы в печени, в част
ности СРБ;
15
ДЕРМАТОЛОГІЯ
№ 3, ВЕРЕСЕНЬ 2005
Таблица 1. Секреторная способность МНК вырабатывать ИЛ"1 и ИЛ"6, уровень аутоантител
к ткани кожи и ЦИК у больных розацеа в зависимости от концентрации С"РБ
Группа
обследованных
ИЛ"1,
пг/мл
sИЛ"1R1,
нг/мл
ИЛ"6,
пг/мл
sИЛ"6R,
нг/мл
С"РБ, мг/л
АТ к коже,
усл. ед.
ЦИК,
ед. оп. пл.
Практически
здоровые доноры
33,7 ± 3,8
2,5 ± 0,3
210 ± 7,8
11,7 ± 3,4
3,1 ± 0,5
10,1 ± 0,9
64,8 ± 7,1
Больные розацеа 156,8 ± 30* 4,51 ± 0,63* 861,2 ± 115,7* 4,21 ± 0,47 6,35 ± 0,96 17,14 ± 1,53* 87,32 ± 4,22*
I группа
143,7 ± 56,0* 3,47 ± 0,7
II группа
136,5 ± 27,0* 5,35 ± 1,44
816 ± 78,1
III группа
206,4 ± 33,0*
843 ± 46,1
5 ± 1,01
913,3 ± 82,9* 4,78 ± 0,95 1,78 ± 0,3
10,3 ± 1,9
78,6 ± 7,7
3,62 ± 0,33 6,35 ± 0,8*
15 ± 3,07
96,5 ± 6,5*
4,08 ± 1,08 13,5 ± 0,9*
20 ± 3,09*
87,9 ± 6,1*
Примечание. * достоверные отличия от показателей в группе доноров.
резорбцию и перестройку кости;
катаболизм в миоцитах;
повышение температуры тела.
Как видно из табл. 1, количество секретируемого
ИЛ1 в общей группе больных розацеа значительно
превышали значения в группе доноров.
Высокий уровень ИЛ1 можно считать главным
провоспалительным фактором, который участвует
в развитии местной воспалительной реакции и ре
гулятором острофазового ответа на уровне орга
низма больных розацеа.
По данным литературы, цитокины могут прояв
лять свое действие только благодаря специфичес
ким рецепторам на клетках. Исследования струк
туры этих рецепторов и путей передачи ими сигна
лов внутрь клетки позволили найти ответ на мно
гие вопросы, которые касаются роли цитокинов в
функционировании иммунной и других систем, на
которые они влияют. Для ИЛ1 найдено два рецеп
тора: ИЛ1R1 и ИЛ1R2. Они имеют строение имму
ноглобулиноподобных молекул. Рецептор ИЛ1R2
находится, в основном, на нейтрофилах, моноци
тах и Влимфоцитах. В отличие от ИЛ1R1, ИЛ1R2
не пересылает сигнал внутрь клетки, а похож лишь
на «западню» для ИЛ1, тем более, что он также су
ществует в растворимой форме.
Мы изучали наличие растворимого ИЛ1R2ре
цептора. В общей группе больных розацеа он дос
товерно превышал показатели в группе практичес
ки здоровых лиц, что указывает на значительную
возможность связывания секретируемого иммуно
компетентными клетками ИЛ1, а это ведет к даль
нейшей активации воспалительного процесса
(местного и системного).
ИЛ6, который по биологическим свойствам схо
ден с ИЛ1; активирует Влимфоциты, значительно
усиливает цитотоксическую активность натураль
ных киллеров, относится к основным медиаторам
воспаления, локализован во всех слоях эпидермиса
16
с наиболее высокой экспрессией в базальном и
надбазальном слоях. Активация ИЛ6 происходит
только после стимуляции эпидермальных клеток, а
в нестимулированном эпидермисе никаких следов
мРНК ИЛ6 не обнаружено. Синтезируется в лим
фоцитах и кератиноцитах.
ИЛ6 подавляет выработку ИЛ1. Эта особен
ность ИЛ6 определяет его двойственную роль в
развитии воспаления. Являясь по своим эффектам
типичным провоспалительным цитокином, он ока
зывает также противовоспалительное действие, ог
раничивая выработку других провоспалительных
медиаторов. Биологический смысл этого кажуще
гося парадоксальным явления сводится к тому, что
ИЛ6 как бы завершает формирование воспали
тельного процесса. Также ИЛ6 влияет на синтез
белков острой фазы воспаления гепатоцитами, в
том числе СРБ, тем самым связывая факторы мест
ного и системного воспаления.
Наши исследования показали (см. табл. 1), что у
больных розацеа была значительно повышена сек
реция МНК ИЛ6, в то время как количество кле
ток с рецепторами к этому цитокину невелико. По
мнению М. Якобисяка (2004), растворимый рецеп
тор для ИЛ6 (sИЛ6R) усиливает действие ИЛ6
при связывании с ним, а далее с присутствующей в
клеточной мембране цепью β (130 kDa), которая пе
редает сигнал в клетку, активирует ее функцио
нальные возможности. Растворимый рецептор для
ИЛ6 возникает как путем протеолитического от
секания его от поверхности клетки, так и на матри
це мРНК при альтернативной обработке, которая
убирает отрезок, соответствующий трансмембран
ному участку. Уменьшение растворимого рецепто
ра к ИЛ6 может, на наш взгляд, привести к сниже
нию противовоспалительного эффекта, на кото
рый способен ИЛ6, ослаблению взаимосвязи с
клеткамимишенями, вследствие чего усугубится
местное воспаление.
Український журнал дерматології, венерології, косметології
№ 3, ВЕРЕСЕНЬ 2005
ДЕРМАТОЛОГІЯ
Классическим белком острой фазы, маркером сис
темного воспаления и клеточной деструкции являет
ся СРБ. Сегодня непонятно, является ли СРБ участ
ником повреждения стенки сосуда и тканей или яв
ляется лишь маркером тяжести системного воспале
ния и повышенного риска развития розацеа. В пос
леднее время появились данные, что СРБ может за
пускать классический путь активации системы комп
лемента, повышать активность моноцитов, макрофа
гов, лимфоцитов и нейтрофилов, тем самым спо
собствуя усилению продукции цитокинов ИКК.
Из данных табл. 1 видно, что больные розацеа от
личаются от группы практически здоровых лиц
достоверно высоким уровнем СРБ. Однако, учи
тывая разнородность показателей, характеризую
щих уровень СРБ в общей группе больных роза
цеа, они были распределены по трем группам: I —
уровень СРБ до 3 мг/л, II — от 3 до 10 мг/л, III —
свыше 10 мг/л. У пациентов всех трех групп парал
лельно были рассмотрены показатели, характери
зующие концентрацию провоспалительных цито
кинов (ИЛ1, ИЛ6), их растворимые рецепторы, а
также степень аутоиммунизации по наличию ауто
антител и уровню циркулирующих иммунных
комплексов.
В I группе, где у больных не было системного вос
паления (СРБ в пределах нормы) и по клиничес
кой характеристике пациентов, у которых установ
лены лишь местные воспалительные реакции,
уровни провоспалительных ИЛ1 и ИЛ6, а также
растворимых рецепторов к ИЛ1R были достовер
но увеличены, тогда как количество растворимых
рецепторов к ИЛ6 не превышало нормальные ве
личины. При проведении корреляционного анали
за (табл. 2) установлена слабая достоверная взаи
мосвязь между ЦИК и аутоантителами к ткани ко
жи (r = 0,3), уровнем аутоантител и СРБ (r = 0,3),
то есть между показателями, которые достоверно
не превышали нормальные величины (см. табл. 1)
Во II группе больных розацеа, у которых отмеча
ется начальная стадия системного воспаления
(уровень СРБ от 3 до 10 мг/л), были установлены
взаимосвязи между высоким уровнем ЦИК и боль
шой концентрацией растворимых рецепторов ИЛ1
(r = 0,5, Р < 0,05) и обратная связь с растворимыми
рецепторами к ИЛ6 (r = –0,4, Р < 0,05). Незначи
тельное повышенное количество аутоантител к
ткани кожи коррелировало с низким уровнем рас
творимых рецепторов к ИЛ6 (r = 0,4, Р < 0,05) и
СРБ (r = 0,3, Р < 0,05).
В III группе отмечено (см. табл. 2) большое коли
чество взаимосвязей между показателями, харак
теризующих активную иммуновоспалительную
реакцию и значительную аутоиммунизацию: об
ратная взаимосвязь большого количества аутоан
тител к коже и ЦИК, с числом рецепторов к ИЛ1, а
также с растворимыми рецепторами к ИЛ6 (r =
–0,5 и r = –0,4 соответственно, Р < 0,05); между
большим количеством ЦИК и высоким уровнем
СРБ, а также со значительно повышенным провос
палительным ИЛ6 (r = 0,8 и r = 0,4 соответствен
но, Р < 0,05), что, на наш взгляд, и определяет разви
тие системного воспаления у больных розацеа.
Таким образом, у больных розацеа с высокой ак
тивностью системного воспаления (СРБ больше
10мг/л) отмечена активация мононуклеарных кле
ток с высокой секреторной способностью выраба
тывать провоспалительные интерлейкины (ИЛ1,
ИЛ6), при этом сбрасывается большое количество
растворимых рецепторов к ИЛ1 на фоне незначи
тельно повышенных — к ИЛ6. Это свидетельству
ет о развитии иммуновоспалительной реакции с
активацией клеток, которые способны сбрасывать
в сыворотку рецепторы к ИЛ1, бесконтрольно вы
рабатывать и не связывать ИЛ6.
Несмотря на то, что секреторная способность мо
нонуклеарных клеток относительно ИЛ1 и ИЛ6 у
больных розацеа значительно превышает показа
тели в группе практически здоровых лиц, раство
римых рецепторов к ИЛ6 в сыворотке крови было
выявлено немного. Это, повидимому, связано
прежде всего с формированием ранней стадии
системного воспаления во II и III группах пациен
тов, у которых недостаточно стимулированы эпи
дермальные клетки, а в нестимулированном эпи
дермисе никаких следов ИЛ6 не выявляется.
Кроме того, нам удалось установить, что с повыше
нием аутоиммунных проявлений (по наличию ауто
Таблица 2. Взаимосвязи между факторами системного воспаления, аутоантителами и ЦИК
у больных розацеа
ЦИК
Ауто
антитела
к ткани
кожи
Аутоантитела
к ткани кожи
С"РБ
sИЛ"6R
ИЛ"1R1
ИЛ"6
ЦИК
I группа
0,3
—
—
—
—
—
II группа
—
—
0,6
0,5
—
—
III группа
—
0,8
—
—
0,4
—
I группа
—
0,3
—
—
—
—
II группа
—
0,3
0,4
—
—
—
III группа
—
—
–0,4
–0,5
—
–0,5
Український журнал дерматології, венерології, косметології
17
ДЕРМАТОЛОГІЯ
антител и уровня ЦИК) значительно активизируется
иммуновоспалительная реакция как системная, так и
местная (по концентрации СРБ и секреции МНК
ИЛ1 и ИЛ6). Выявленные нарушения и установлен
CПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Абрагамович Л. Акне розацеа як системне аутоімун
не захворювання // Дерматологія і венерологія.— 2000.—
№ 2 (10).— С. 107—111.
2. Бурякова А. Морфологические основы реализации
иммунного ответа в коже // Дерматологія и венерологія.—
1999.— № 2 (8).— С. 46—49
3. Лолор Г., Фишер Т., Адельман Д. Клиническая имму
нология и аллергология.— М., 2000.— С. 686—687.
4. Лолор Г., Фишер Т., Адельман Д. Аутоантитела, выяв
ляемые при разных заболеваниях // Клиническая иммуно
логия и аллергология.— М., 2000.— С. 734—736.
5. Казмірчук В., Мальцев Д. Роль цитокінів у виявленні
функціональних порушень імунітету // Ліки України.—
2004.— № 2.— С. 15—18.
№ 3, ВЕРЕСЕНЬ 2005
ные корреляционные связи между аутоиммунной и
иммуновоспалительной реакциями могут служить
основанием для назначения противовоспалительных
и иммунокорригирующих препаратов.
6. Кресюн В.Й., Рожковський Я.В. Біологічні ефекти ін
терлейкіну1 та його вплив на захисні реакції організму //
Одеський медичний журнал.— 2003.— № 2 (76).— С. 92—96.
7. Ройт А., Бростофф Дж. Мейл. Иммунологические
методы. Иммунология.— М.: Мир, 2000.— С. 527—545.
8. Сергеев А.Ю., Караулов А.В., Сергеев Ю.В. Иммунодер
матология: иммунологические основы патогенеза главных
воспалительных дерматозов человека // Иммунология, ал
лергология, инфектология.— 2003.— № 3.— С. 10—23.
9. Синицин Б. Кожа как орган иммунного надзора и
неспецифической защиты.— 1997.— Обзоры.— С. 36—39.
10. Темников В. Особенности иммунного статуса при ро
зовых угрях. Иммунология в дерматовенерологии.— Ниж
ний Новгород, 1991.— С. 86—88.
11. Якобисяк М. Імунологія.— Нова книга, 2004.—
С. 258—282.
12. Ярилин А. Кожа и иммунная система // Косметика и
медицина.— 2001.— № 2.— С. 5—13.
РІВЕНЬ ПРОЗАПАЛЬНИХ ЦИТОКІНІВ ТА С"РЕАКТИВНОГО ПРОТЕЇНУ
У ХВОРИХ НА РОЗАЦЕА З РІЗНИМИ ВИЯВАМИ АВТОІМУННИХ РЕАКЦІЙ
Л.Д. Калюжна, Т.І. Гавриленко, О.В. Стоянова, О.М. Корніліна
На сучасному етапі шкіра розглядається не тільки як орган неспецифічного захисту, але і як учасник
імуногенезу в усіх його виявах. У хворих на розацеа з високою активністю системного запалення (СРБ
понад 10 мг/л) спостерігається активація мононуклеарних клітин (висока секреторна здатність виробляти
прозапальні інтерлейкіни ІЛ1, ІЛ6). При цьому скидається велика кількість розчинних рецепторів до ІЛ1
на тлі незначної кількості розчинних рецепторів до ІЛ6.
У разі збільшення автоімунних виявів (за наявності автоантитіл і рівня циркулюючих імунних комплексів)
значно активізується імунозапальна реакція — як системна, так і місцева. Виявлені порушення і встановлені
кореляційні зв'язки між автоімунною та імунозапальною реакціями можуть слугувати підставою для
призначення протизапальних й імунокоригувальних препаратів.
THE LEVEL OF INFLAMMATORY CYTOKINES AND С"RЕАCТІVE PROTEIN IN THE RОSАCEA
PATIENTS WITH DIFFERENT DISPLAYS OF AUTOIMMUNE REACTIONS
L.D. Кalyuzhnaya, T.I. Gavrilenko, О.V. Stoyanova, E.M. Kornilina
On a modern stage a skin is examined not only as organ of unspecific defence, but also as participant of immuno
genesis in all its displays. In the rosacea patients and with high activity of system inflammation (СRP level more
10 mg/l) was noted activation mononuclear cells (high secretory ability to produce inflammatory interleukins ІL1,
ІL6), plenty of soluble receptors to ІL1 on a background a little promoted brushes off here — to ІL6.
At the increase of autoimmune displays (on the presence of autoantibodies and level circulating immune complex
es) activates considerably system and local immunoinflammatory reactions.
Exposed violations and set correlation communications between autoimmune and immunoinflammatory reactions
may be foundation for setting of antiinflammatory and immunomodulating preparations.
18
Український журнал дерматології, венерології, косметології