ПРОТИВОСУДОРОЖНОЕ ДЕЙСТВИЕ ФИТОСРЕДСТВА «НЕЙРОФИТ»
advertisement
ÁÞËËÅÒÅÍÜ ÂÑÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ, 2005, ¹ 7 (45) УДК 615.32:616.8009.24 Æ.Á. Äàøèíàìæèëîâ, Ê.Ñ. Ëîíøàêîâà, Ä.Á. Æàìáàëîâà, À.À. Ãóëåâè÷, Ñ.Ì. Íèêîëàåâ ПРОТИВОСУДОРОЖНОЕ ДЕЙСТВИЕ ФИТОСРЕДСТВА «НЕЙРОФИТ» Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН (УланУдэ) Республиканский наркологический диспансер МЗ РБ (УланУдэ) На модели тиосемикарбазидных судорог у крыс линии Вистар, в экспериментальной работе уста новлено, что при введении «нейрофита» время наступления судорог удлиняется по сравнению с контролем, длительность судорожного периода уменьшается, существенно сохраняется выжи ваемость животных. По данным исследования, «нейрофит» не уступает препарату сравнения – настойке пиона. Патоморфологические изменения структур головного мозга у животных получавших «нейрофит», характеризовались менее выраженными изменениями. Отмечался незначительный отек вещества головного мозга, некоторые сосудистые нарушения, интенсивность изменений нервных клеток коры, Ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ â ìåäèöèíå è áèîëîãèè 157 ÁÞËËÅÒÅÍÜ ÂÑÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ, 2005, ¹ 7 (45) подкорковых образований и мозжечка значительно сокращалась (на 36 %), преобладали клетки с яв лениями «первичного раздражения». Ключевые слова: нейрофит, тиосемикарбазидные судороги, нервные клетки ANTICONVULSIVE EFFECT OF PHYTOREMEDY «NEUROPHYTE» Zh.B. Dashinamzhilov, K.S. Lonshakova, D.B. Zhambalova, A.A. Gulevich, S.M. Nikolayev The Institute of General and Experimental Biology SB RAS (UlanUde) Republican Narcological Dispensary of Ministry of Health, Republic Burytia (UlanUde) In Albino Wistar rat model of thiosemicarbazide convulsions, it has been established that «Neurophyte» administration elongates the starting time of convulsions compared with controls, whereas convulsion peri od is decreased. The animal survival is also higher. «Neurophyte» was shown to be as good as the remedy of comparison – tincture Paeoniae. Pathomorphological changes of brain structures in animals received «Neurophyte» were less pronounced. Nonsignificant brain swelling and some vascular disturbances were noted. The intensity of changes in neu rons, subcortical structures and cerebellum significantly decreased (by 36 %), cells with «primary irritation» were predominant. Key words: Neurophyte, thiosemicarbazide convulsions, neurons Судорожные синдромы сопровождают многие заболевания. По данным ВОЗ адекватное противо судорожное лечение получают всего лишь 8–30 % больны х от общего количества нуждающихся. Это объясняется наличием у современных противосу дорожных препаратов побочных эффектов, изза которых больные самостоятельно прекращают ле чение, либо применяют их от случая к случаю. Перспективными для фармакологической кор рекции судорожных синдромов и связанных с ними осложнений со стороны жизненноважных функциональных систем организма являются средства растительного происхождения, отличаю щиеся широтой терапевтического действия, малой токсичностью при длительном применении без риска возникновения побочных реакций [4, 6, 9]. Целью настоящего исследования явилось оп ределение противосудорожной активности фито средства «нейрофит», состоящего из пиона укло няющегося (Paeonia anomala L.), валерианы лекар ственной (Valeriana officinalis L.), шлемника бай кальского (Scutellaria baicalensis Georgi), плодов боярышника (Crataegus), душицы обыкновенной (Origanum vulgare L.) и других видов сырья, при эк спериментальном повреждении головного мозга у крыс линии Вистар. МЕТОДИКА Эксперименты проведены на крысах линии Вистар обоего пола с исходной массой 170–230 г. Церебропротекторный эффект «нейрофита» изу чали при экспериментальном повреждении голов ного мозга крыс введением тиосемикарбазида. Тиосемикарбазид вводили однократно внутри брюшинно в дозе 20 мг/кг массы животных [1, 6]. Животным 1й опытной группы внутрижелудоч но вводили фитосредство «нейрофит» в дозе 200 мг/кг (в пересчете на суховоздушное сырье) в виде отвара. Отвар готовили по ГФ XI [3], исходя из соотношения сырье: вода 1:10, и вводили в же лудок крысам 1 раз в сутки в течение 4 дней и пя тый раз за 1 час до тестирования. Животным 2й опытной группы по аналогичной схеме вводили 158 препарат сравнения – деалкоголизированную настойку пиона уклоняющегося в дозе 200 мг/кг (доза, проявляющая оптимальный фармакологи ческий эффект). В контроле по аналогичной схе ме вводили дистиллированную воду в эквивалент ном объеме. О фармакотерапевтической эффек тивности лекарственных средств судили по дли тельности судорог, латентного периода, выживае мости животных [1, 8] и по патоморфологической картине головного мозга [5, 7]. Патоморфологические исследования головно го мозга крыс проводили с использованием обще принятых гистологических методик, описанных в специальных изданиях [5, 7]. Подопытных живот ных умерщвляли методом мгновенной декапитации под легким эфирным наркозом. Кусочки головно го мозга фиксировали в 10% растворе нейтрально го формалина и этиловом спирте восходящих кон центраций. После фиксации головной мозг крысы разрезали в нескольких направлениях: сагитталь ном – по средней линии через гиппокампову бо розду; дорсальном – на уровне боковых желудоч ков и вертикальном – на уровне гипоталамуса. После обезвоживания проводили заливку срезов в парафин, гистологические срезы готовили на мик ротоме, осуществляли окраску гематоксилин – эозином, крезил – виолетом по Нисслю, исполь зовали метод Ван Гизона. Комплексное использо вание гистологических методик при изучении го ловного мозга экспериментальных животных по зволило детально выявить толщину серого веще ства, число его слоев, состояние клеток, характер изменения сосудов и нейроглии. С целью опреде ления тяжести поражения головного мозга крыс при использовании нейротоксических агентов, производили подсчет общей площади (Sобщ.), пло щади занимаемой некротизированными клетками (Sнекр.) и площади занимаемой измененными ней ронами (Sизм.) – сморщенными, лишенными длин ных отростков, с тотальным или центральным хро матолизом, изменением содержания вещества Нис сля, вакуолизацией цитоплазмы, просветлением перинуклеарного пространства, базафильной зер Ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ â ìåäèöèíå è áèîëîãèè ÁÞËËÅÒÅÍÜ ÂÑÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ, 2005, ¹ 7 (45) нистостью краевых отделов цитоплазмы, смещени ем ядер на периферию клеток. Полученные экспериментальные данные обра ботаны методами вариационной статистики с ис пользованием непараметрического критерия Вил коксонаМаннаУитни [2]. ства головного мозга, некоторые сосудистые нару шения, интенсивность изменений нервных клеток коры, подкорковых образований и мозжечка зна чительно сокращалась (на 36 %), преобладали клет ки с явлениями «первичного раздражения». Таким образом, исследуемое фитосредство в указанном объеме обладает противосудорожным действием, оказывая ингибирующее влияние на подкорковые центры продолговатого мозга, бла гоприятно влияет на морфофункциональное со стояние головного мозга, и тем самым укорачива ет клоническую и тоническую фазы судорог. По лученные в работе данные свидетельствуют о том, что реализация фармакотерапевтической эффек тивности «нейрофита» способствует широкий спектр фармакологической активности изучаемо го фитосредства. Высокая фармакологическая ак тивность «нейрофита» обусловлена содержанием комплекса биологически активных веществ: фла воноидов, алкалоидов, эфирных масел, поливита минного комплекса, органических кислот, макро элементов и микроэлементов, дубильных веществ. Одним из важнейших аспектов молекулярно клеточных механизмов церебропротекторного действия «нейрофита» является наличие антиок сидантной и мембраностабилизирующей активно стей, реализация которых связана с присутстви ем в них, главным образом, комплекса фенольных соединений [10]. Полученные данные аргументируют целесооб разность применения «нейрофита» в неврологи ческой практике в качестве средства, улучшающе го функциональное состояние нервной системы. РЕЗУЛЬТАТЫ В результате проведенных исследований уста новлено, что на модели тиосемикарбазидных су дорог при введении «нейрофита» в указанной дозе время наступления судорог удлиняется на 10 % по сравнению с контролем (табл. 1), длительность су дорожного периода уменьшается, существенно сохраняется выживаемость животных. По данным исследования, «нейрофит» не уступает препарату сравнения – настойке пиона. При патоморфологическом исследовании структур головного мозга при введении тиосеми каразида наиболее часто наблюдали изменения со судов в виде небольших аневризматических расши рений капилляров, участков сужения или запусте вания капилляров, отмечались единичные кровоиз лияния. В эндотелиальных клетках ядра выглядели пикнотичными или были подвержены лизису, ци топлазма была набухшей, принимала гомогенный вид. Отмечался значительный отек вещества голов ного мозга. Дистрофическим изменениям подвер гались нервные клетки I слоя коры головного моз га, клетки пирамидного слоя аммонова рога, клет ки глубоких слоев мозга, клетки Пуркинье коры мозжечка. Нервные клетки были несколько умень шены в размерах, интенсивнее окрашены, длинные отростки клеток не просматривались. В группе белых крыс, получавших препарат сравнения, настойку пиона, микроскопически обна руживали полнокровие и отечность вещества голов ного мозга, дистонию мозговых сосудов, одиночные диапедезные кровоизлияния. Полнокровие было в большей мере выражено в подкорковых образова ниях. При дальнейшем изучении гистологических препаратов в нервных клетках выявлялись клетки со значительными изменениями (центральный и то тальный хроматолиз, смещение ядер на периферию клетки, исчезновение ядрышка, мутное набухание). Патоморфологические изменения структур го ловного мозга у животных получавших «нейро фит», характеризовались менее выраженными из менениями. Отмечался незначительный отек веще ВЫВОДЫ На модели тиосемикарбазидных судорог при введении «нейрофита» время наступления судо рог удлиняется, длительность судорожного пери ода уменьшается и существенно сохраняется вы живаемость животных. Патоморфологические изменения структур головного мозга у животных получавших «нейро фит», характеризовались менее выраженными изменениями. Отмечался незначительный отек вещества головного мозга, некоторые сосудистые нарушения, интенсивность изменений нервных клеток коры, подкорковых образований и мозжеч ка значительно сокращалась, преобладали клетки с явлениями «первичного раздражения». Та б л и ц а 1 Влияние «нейрофита» на течение судорог, вызванных тиосемикарбазидом Группы животных Контрольная группа, (дистилл. вода) Латентный период, сек. Длительность судорог, сек. Выживаемость, % 107,0 ± 6,08 24,5 ± 2,41 10 ∗ Опытная группа, («нейрофит», 200 мг/кг) 131,1 ± 3,58 22,8 ± 2,06 50 Группа сравнения(настойка пиона, 200 мг/кг) 136,07 ± 3,91∗ 21,35 ± 1,29 30 Примечание: *– разница достоверна при сравнении с контролем при Р ≤ 0,05; n – количество животных в группе. Ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ â ìåäèöèíå è áèîëîãèè 159 ÁÞËËÅÒÅÍÜ ÂÑÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ, 2005, ¹ 7 (45) Широкий спектр фармакологической актив ности «нейрофита» определяется антиоксидантным действием и мемраностабилизирующим эффектом. Полученные данные аргументируют целе сообразность использования «нейрофита» в не врологической практике в качестве средства, улучшающего функциональное состояние не рвной системы. ЛИТЕРАТУРА 1. Фармакологические свойства диагама – но вого потенциального ноотропного средства / Н.И. Андреева, В.В. Аснина и др. // Химикофар мацевтический журн. – 1998. – № 9. – С. 43–48. 2. Биометрия: Пособие для биохимических специальностей вузов / Под ред. Г.Ф. Лакина. – М., 1980. – 293 с. 3. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2: Общие методы анализа. Лекарственное раститель ное сырье / МЗ СССР. – 11е, изд., доп. – М.: Медицина, 1990. – 400 с. 4. Крылов А.А. Руководство по фитотерапии / А.А. Крылов, В.А. Марченко. – СПб.: Издво «Пи тер», 2000. – 416 с. 160 5. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники / Г.А. Меркулов. – М., 1956. – С. 143–145. 6. Начатой В.Г. Клиническая фармакология / В.Г. Начатой. – СПб.: Издво СпбМУ им. Акад. И.П. Павлова, 2000. – 288 с. 7. Пирс Э. Гистохимия теоретическая и при кладная / Э. Пирс. – М., 1962. – 962 с. 8. Руководство по экспериментальному (док линическому) изучению новых фармакологичес ких веществ / Минво здравоохранения Рос. Фе дерации. Департамент контроля качества, эф фективности и безопасности лекарств. средств, Науч. центр экспертизы и гос. контроля ле карств. средств. Фармакол. гос. ком. – М., 2000. – 398 с.: ил. 9. Соколов С.Я. Справочник по лекарственным растениям (фитотерапия) / С.Я. Соколов, И.П. За мотаев. – 3е изд. стереотип. – М., 2000. – 512 с. 10. Хазанов В.А. Митохондриальные эффек ты в механизме антигипоксического действия экстракта шлемника байкальского / В.А. Хаза нов, Р.Р. Сайфутдинов // Бюл. эксперим. биоло гии и медицины. – 1999. – Т. 128, № 9. – С. 327–329. Ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ â ìåäèöèíå è áèîëîãèè
