ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗА–L Liquid 100 (LDH

Расчеты
Рассчитайте активность ЛДГ в пробе, используя
1. Калибратор
ЛДГ (E/л; мккат/л) = Скал. x
ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗА–L Liquid 100
(LDH-L L 100)
Кат. № 10010031
Хранить при (+2 – +8) °С
Метод
Жидкий реагент для определения активности лактатдегидрогеназы в сыворотке или плазме,
метод рекомендованный Международной федерацией клинической химии (IFCC).
Принцип реакции
Лактатдегидрогеназа катализирует превращение L-лактата в пируват с одновременным восстановлением НАД+ в НАДН.
Изменение поглощения за время превращения НАД в НАДH прямо пропорционально активности ЛДГ.
Лактат + НАД+
ЛДГ
4х20 мл
406 ммоль/л
62,5 ммоль/л
1 х20 мл
50 ммоль/л
Состав смеси R1+R2
N-Метил D-глюкамин (рН 9,4)
L-лактат
НАД+
325 ммоль/л
50 ммоль/л
10 ммоль/л
Приготовление и стабильность рабочих реагентов
Двухреагентный метод – старт субстратом
Реагенты R1 и R2 жидкие готовые к использованию.
Реагенты стабильны до достижения указанного срока годности, если хранятся при (+2
– +8) °С.
После вскрытия, реагенты стабильны до указанного срока годности, если хранятся при (+2
– +8) °C, в тщательно закрытых флаконах, избегая испарения или контаминации реагентов, в
защищенном от света месте, особенно реагент 2.
Монореагентный метод – старт образцом
Смешать 4 части раствора реагента 1 (R1) с 1 частью раствора реагента 2 (R2), тщательно
перемешать.
Готовый рабочий раствор стабилен:
4 часа при 20–25 °С при хранении в защищенном от света месте.
24 часа при 2–8 °С при хранении в защищенном от света месте.
Образцы
Сыворотка, гепаринизированная плазма (Li,Na, NH4+).
Избегать гемолиза!
Стабильность ЛДГ в cывороткe и плазмe 3 дня при 4–8 °С
Калибровка
Для калибровки рекомендуется использовать Лионорм Калибратор, Кат. № 10003200
Контроль качества
Для проведения контроля качества рекомендуется контрольная сыворотка:
Лионорм ГУМ Н, Кат. № 10003204
Лионорм ГУМ П, Кат. № 10003206
Анализ
Длина волны:
Hg 365 нм, 340 нм или Hg 334 нм
Оптический путь:
1 см
Температура:
37 °С
Объемное соотношение
Сыворотка, плазма / реакционная смесь
1/ 63,5 при работе двухреагентным методом
Сыворотка, плазма / реакционная смесь
1/ 51 при работе монореагентным методом
Объемы образца и реагентов могут быть изменены при сохранении соотношения реагент/образец
Двухреагентный метод – старт субстратом
Бланк по
реагенту
Калибратор
Образец
Реагент 1
1,000 мл
1,000 мл
1,000 мл
Образец
–
–
0,020 мл
–
0,020 мл
–
0,020 мл
–
–
0,250 мл
0,250 мл
Дистил. вода
Смешать, инкубировать 1–5 мин. (при 37 °C). Добавить:
Реагент 2
0,250 мл
Смешать, через 1 мин. измерить поглощение и одновременно включить секундомер. Измерить поглощение точно через 1, 2 и 3 минуты. Рассчитать среднее изменение поглощения
в минуту (∆А).
Монореагентный метод – старт образцом
Рабочий реагент
Бланк по
реагенту
Калибратор
Образец
1,000 мл
1,000 мл
1,000 мл
Образец
–
–
0,020 мл
Калибратор
–
0,020 мл
–
0,020 мл
–
–
Дистил. вода
Скал. – активность ЛДГ в калибраторе
2. Факторы:
ЛДГ = Ф x ∆A/мин
Ф – фактор пересчета, см. нижеследующую таблицу
Факторы
Старт пробой
Старт субстратом
37 °C
Длина волны
37 °C
E/л
мккат/л
E/л
мккат/л
334 nm
8250
137,5
10275
171,25
340 nm
8095
134,9
10080
168,00
365 nm
15000
250,0
18675
311,25
Коэффициент пересчета
1 кат/л = 1 моль/л. сек
1 мккат/л = 60 Е/л
Нормальные величины
ЛДГ сыворотка, плазма
Пируват + НАДH + H+
Реагенты
R1 Реагент 1, буфер
N-Метил D-глюкамин (рН 9,4)
L-лактат
R2 Реагент 2, субстрат
НАД+
Калибратор
∆Aобр. – ∆Aбланк
∆Aкал. – ∆Aбланк
Смешать, через 1 мин. измерить поглощение и одновременно включить секундомер. Измерить поглощение точно через 1, 2 и 3 минуты. Рассчитать среднее изменение поглощения
в минуту (∆А).
Протоколы для использования на автоматических анализаторах могут быть получены по
запросу.
E/л
мккат/л
мужчины
37 °С
< 248
< 4,13
женщины
< 247
< 4,12
Приведенные диапазоны величин следует рассматривать как ориентировочные. Каждой
лаборатории необходимо определять свои диапазоны.
Рабочие характеристики
Линейность: до 1500 E/ л (25 мккат/л)
Чувствительность: 4,2 E/л (0,07 мккат/л)
Нижний предел определения: 13,2 E/л (0,22 мккат/л)
Диапазон измерений: 13,2 – 1500 E/л (0,22 – 25 мккат/л)
Воспроизводимость (при 37 °C)
Внутрисерийная
(число измерений n =20)
Среднеарифметическое
значение
CV
(%)
SD
E/л
мккат/л
E/л
мккат/л
Образец 1
147
2,45
2,4
0,04
1,51
Образец 2
250
4,16
2,4
0,04
0,90
Образец 3
450
7,49
2,4
0,04
0,52
Межсерийная
(число измерений n =10)
Среднеарифметическое
значение
CV
(%)
SD
E/л
мккат/л
E/л
мккат/л
Образец 1
146
2,43
3,6
0,06
2,37
Образец 2
251
4,18
4,2
0,07
1,57
Образец 3
451
7,51
7,8
0,13
1,74
Точность
Аналитическое смещение В (bias):
+ 2,7 % (256,8 E/л), (4,28 мккат/л)
Сравнение методов
Сравнение было проведено на 49 образцах с использованием реагентов Pliva-Lachema
Диагностика ЛДГ-L Liquid (у) и имеющихся в продаже реагентов с коммерчески доступной
методикой (х).
Результаты: y = 0,008x - 0,064 мккат/л r = 1,000
Специфичность/Влияющие вещества:
Не влияют на результаты анализа:
Аскорбиновая кислота до 1,7 ммоль/л, билирубин до 684 мкмоль/л, триглицериды до 22
ммоль/л.
Гемоглобин до 0,5 г /л.
Примечание
1. Если изменение поглощения в минуту (∆А/мин) превышает 0,150 при 334 (340) нм или
0,080 при 365 нм, разбавить 0,1 мл образца 1,0 мл физраствора (0,9 % NaCl) и повторить
анализ, используя данное разведение. Полученный результат умножить на 11.
2. Реагенты содержат в качестве консерванта азид натрия (0,95 г/л). Не глотать! Избегать
контакта с кожей и слизистыми.
Меры предосторожности
Набор реагентов предназначен для in vitro диагностики профессионально обученным лаборантом. Набор реагентов не относится к категории опасных.
Первая помощь
При приеме внутрь следует прополоскать рот водой, выпить 0,5 л воды и вызвать рвоту. При
попадании в глаза быстро промыть их проточной водой. При попадании на кожу необходимо
промыть теплой водой с мылом. Во всех серьезных случаях обратиться к врачу.
Утилизация использованных материалов
Все образцы теста должны рассматриваться как потенциально инфицированные и вместе с
остальными реагентами должны быть уничтожены в соответствии с существующими в каждой
стране правилами для данного вида материалов.
Бумажная упаковка и другое (бумага, стекло, пластик) должны быть рассортированы для выброса с мусором или отправления на переработку.
Литература
1. Thomas L. Clinical laboratory diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft;
1998. 89-94.
2. Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry,
3rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders Company, 1999. 617-721.
3. Schumann G, Bonora R, Ceriotti F, Férard G et al. IFCC primary reference procedure for the
measurement of catalytic concentrations of enzymes at 37 °C. Part 3: Reference procedure for
the measurement of catalytic concentration of lactate dehydrogenase. Clin. Chem. Lab Med
2002, 40:643-48.
Дата проведения последнего контроля: 16. 12. 2005
B/PI/187/05/B