(812) 412-8380 www.olvex-d.ru α-АМИЛАЗА Кат. №: 011.003 – 50 мл Кат. №: 011.013 – 100 мл Количество определений зависит от характеристик используемого анализатора и минимального рабочего объема кюветы. НАЗНАЧЕНИЕ Набор «Альфа-АМИЛАЗА-3-ОЛЬВЕКС» предназначен для количественного определения активности альфа-амилазы в сыворотке крови и моче человека кинетическим методом в клинической лабораторной диагностике. Согласно стандартной процедуре анализа набор рассчитан на проведение 50 или 100 определений при расходе 1,0 мл рабочего реагента на один анализ. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА Исследование проводить непосредственно в термостатируемой при +37 °С фотометрической кювете спектрофотометра с длиной оптического пути 1,0 см при длине волны 405 нм против воздуха или воды. Для анализа сыворотки крови смешать 1,0 мл предварительно прогретого рабочего реагента и 0,02 мл анализируемого материала (соотношение реагент/образец 50 : 1.). Для анализа мочи смешать 1,0 мл предварительно прогретого рабочего реагента и 0,01 мл анализируемого материала (соотношение реагент/образец 100 : 1). Через 10 секунд начать считывание величины экстинкции с интервалом в 1 минуту в течение 3 минут. Вычислить среднее изменение экстинкции за 1 минуту (&Е/мин). Если &Е/мин превышает 0,500 Abs, развести исследуемый образец физиологическим раствором в 10 раз и повторить анализ; результат умножить на фактор разведения 10. ПРИНЦИП МЕТОДА Под действием фермента C-амилазы синтетический субстрат 2-хлор-4-нитрофенил-галактопиранозилмальтозид (Gal-G2CNP) гидролизируется до окрашенного продукта реакции 2-хлор-4-нитрофенола (CNP). Скорость нарастания концентрации 2-хлор-4-нитрофенола в ходе реакции определяется по увеличению оптической плотности реакционной среды при длине волны 405 нм и пропорциональна активности Cамилазы. СХЕМА РЕАКЦИИ α-амилаза GalG2-CNP + Н2О ___________> CNP + GalG2 СОСТАВ НАБОРА Реагент 1 (буферный раствор). Реагент 2 (субстрат (лиофилизат). АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Набор обеспечивает линейную область определения активности альфа-амилазы в диапазоне от 10 до 2000 Ед/л. Отклонение от линейности не более 5%. Чувствительность определения не более 7 Ед/л. Коэффициент вариации не более 5%. Качество набора может проверяться на отечественных или зарубежных контрольных сыворотках с аттестованным по данному методу показателем. Нормальные величины активности альфа-амилазы: в сыворотке крови 27-96 Ед/л; в моче до 460 Ед/24 часа. Рекомендуется в каждой лаборатории уточнять диапазон нормальных величин для обследуемого контингента. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ Свежая сыворотка крови без гемолиза, моча. Для сбора суточной мочи необходимо довести рН мочи до щелочных значений. Активность фермента в исследуемом материале сохраняется до 5 дней при +2-8 °С. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РЕАГЕНТА Перед проведением анализа содержимое флакона с Реагентом 2 растворить при аккуратном перемешивании в Реагенте 1. Рабочий реагент готов к использованию через 5 минут после растворения лиофилизата. Рабочий реагент стабилен при +2-8 °С в защищённом от Тщательно закрывайте флаконы с реагентами после каждого использования! Избегать случайного загрязнения реагентов и исследуемого материала слюной и потом. РАСЧЕТ Активность α-амилазы (Ед/л) в исследуемом образце рассчитать по формуле: Для сыворотки крови: Для суточной мочи: А = 3806 х&Е405нм/мин А = 7612 х&Е405нм/мин х V где: А – активность α-амилазы, Ед/л; &Е405нм/мин – среднее значение изменений экстинции за минуту; V – суточный диурез, л; 3806 и 7612 – фактор пересчёта, соответственно для сыворотки крови и мочи. Фактор пересчёта для каждого анализатора рекомендуется рассчитывать по сывороточному мультикалибратору. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА Набор должен храниться в упаковке предприятияизготовителя при +2-8 °С в защищённом от света месте в течение всего срока годности. Срок годности набора 18 месяцев. Рабочий реагент стабилен при +2-8 °С в защищённом от света месте не менее 21 дня. !