подтверждение и дифференциация. Авдонина А - congress

ИММУННЫЙ БЛОТТИНГ
В ДИАГНОСТИКЕ
ВИЧ-ИНФЕКЦИИ:
ПОДТВЕРЖДЕНИЕ
И
ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ
г. Санкт-Петербург, 2015 г.
Динамика роста числа лиц с впервые
выявленным диагнозом ВИЧинфекции в Российской Федерации*
79728
70744
63863
62385
80000
70000
58527 58633
54563
60000
50000
49903
44761
39857
36213
35649
33619
40000
30000
20000
*по данным
Федерального научно-методического
профилактике и борьбе со СПИДом
Центра
2014
2013
2012
2011
2010
2009
2008
2007
2006
2005
2004
2003
0
2002
10000
по
(за 2014 год данные представлены по состоянию на 01.11.2014)
2
Классификация ВИЧ
ВИЧ
ВИЧ-1
ВИЧ-2
Субтипы
от А до Е
Группа
М
Группа
О
Группа
N
Субтипы от А до K
3
Отличие ВИЧ-2 от ВИЧ-1
Группа белков
Белки оболочки
вируса
Белки сердцевины
Ферменты вируса
ВИЧ -1
ВИЧ -2
gр160, 120, gp140, 105,
41 кД
36 кД
p55, 24, 18
кД
p56, 26, 16
кД
p68, 51, 31
кД
p68 кД
4
Алгоритм диагностики ВИЧинфекции
ИФА 1(АГ-АТ)
Отрицательный
результат (-)
Положит
ИФА 2
ИФА 3 (АГ-АТ )
Отрицат.
(АГ-АТ )
Положит.
Отрицат.
Положит.
Блот подтверждающий
АГ тест
Отрицат.
Серологическ
ие маркеры
ВИЧ –
отсутствуют
Положит.
Первичная ВИЧ –
инфекция.
Отрицат.
Положит.
Неопред.
Диагноз
ВИЧ-1
Иммуноблот на ВИЧ-2
Отрицат.
Неопред.
Диспансерное наблюдение
Положит.
Диагноз
ВИЧ-2
5
Иммунный блоттинг
 Аналитический метод, используемый
для определения специфичных
белков в образце.
 В его основе лежит явление
высокоспецифичного
взаимодействия антиген–антитело.
6
Иммуноблот: принцип метода
1. Нанесение антигенов ВИЧ (с
использованием нативного вирусного
лизата ВИЧ – формат Western Blot, или
рекомбинантных антигенов – формат Line
Blot)
2.Инкубация с добавлением исследуемой
сыворотки – специфическое соединение
белков ВИЧ с соответствующими
отдельными антителами к ВИЧ из
добавленной сыворотки
3. Инкубация с добавлением конъюгата
(меченные ферментом антитела к
человеческим Ig)
4. Детекция окрашенных полос
7
Белковый профиль ВИЧ
на контрольном положительном
образце
gp140
gp105
gp160
gp120/110
p68/66
p55
p52
gp41
p40
p34
ENV
GAG
POL
Env 160
Env 41
Gag1
Pol1
Env 2
p68
p55
gp36
p34
POL
ENV
p26
GAG
p24\25
p18
Kp
ВИЧ-1 (WB)
Каг
Кр
ВИЧ-1,2 (LB)
p16
ВИЧ-2 (WB)
8
Интерпретация результатов
иммуноблота
**CRSS: Консорциум по стандартизации исследования ретровирусов
9
Иммуноферментные тест-системы
ЗАО «ЭКОлаб» для диагностики
ВИЧ-инфекции
10
«ИФА-БЛОТ-ВИЧ-1»
Тест-система иммуноферментная для выявления
антител к индивидуальным белкам вируса
иммунодефицита человека 1 типа методом
иммунного блоттинга, формат WESTERN BLOT.
Количество
определений: 24
возможна дробная
постановка по
6 определений,
включая контроли
Срок годности: 1год.
11
«ИФА-Лайн-Блот-ВИЧ-1,2»
Тест-система иммуноферментная для выявления
антител к антигенам вируса иммунодефицита
человека типов 1 и 2 методом иммунного
блоттинга с использованием рекомбинантных
антигенов, формат Line Blot.
Количество определений:
24
возможна дробная
постановка по 8
определений, включая
контроли
Срок годности: 1,5 года.
12
«ИФА-БЛОТ-ВИЧ-2»
Тест-система иммуноферментная для выявления
антител к индивидуальным белкам вируса
иммунодефицита человека 2 типа методом
иммунного блоттинга, формат WESTERN BLOT.
Количество
определений: 24
возможна дробная
постановка по
6 определений
Срок годности: 1год.
13
Актуальные аспекты
подтверждения ВИЧ-инфекции
 Для подтверждения ВИЧ-1 инфекции
может быть использован и лизатный,
и рекомбинантный иммуноблот
 Рекомбинантный блот может быть
использован в качестве
дифференцирующего теста на ВИЧ-2
 Наиболее достоверный метод
подтверждения ВИЧ-2 инфекции –
лизатный иммуноблот
14