FertiCult IVF/FIV Среда для культивирования эмбрионов человека
advertisement
FertiCult IVF/FIV Среда для культивирования эмбрионов человека «in vitro» в течение первых 48 часов. Документ FP09I07R01B.1. Дата издания 21/03/2011 Общая информация FertiCult IVF/FIV – готовая к использованию среда для культивирования «in vitro» ранних эмбрионов человека. Специально разработана для кратковременного культивирования (до 48 часов) эмбрионов человека. Среда полностью готова к употреблению и не требует каких-либо дополнительных компонентов. По предпочтению, возможно добавление сыворотки пациентки до 10%. По желанию заказчика производитель может добавить в среду краситель Red Fenol (фенол красный) и сульфат гентамицина (10мг на 1 литр). FertiCult IVF/FIV подходит для приготовления микрокапли под маслом или для культивирования в чашках Фалькон 3037 (также 4-луночные Нунки). Как и все прочие культуральные среды, FertiCult IVF /FIV должна быть пре-инкубирована (с открытой пробкой) в инкубаторе в течение 24 часов перед использованием. Материалы, включённые в набор: Код продукта FECU020 9фл х20мл FertiCult IVF/FIV Код продукта FECU050 5фл х50мл FertiCult IVF/FIV Код продукта FECU100 3фл х100мл FertiCult IVF/FIV Код продукта FECU020PHR 9фл х20мл FertiCult IVF/FIV (c фенолом красным) Код продукта FECU050 PHR 5фл х50мл FertiCult IVF/FIV (c фенолом красным) Код продукта FECU020PHR_G 9фл х20мл FertiCult IVF/FIV (c фенолом красным и гентамицином) Код продукта FECU050 PHR_G 5фл х50мл FertiCult IVF/FIV (c фенолом красным и гентамицином) Материалы, не включенные в набор • Инкубатор (5% СО2) • Чашки Петри (или Фалькон 3037) • Минеральное масло (FertiCult Mineral Oil) • Ламинарный шкаф (класс чистоты ISO5) • Микроскоп • Пробирки Спецификация продукта и контроль качества Контроль качества: Контроль рН 7.20 – 7.50 (37 ºС – 5%СО2) Контроль осмолярности 270-290 mOsm/кг Тест на уровень эндотоксинов (LAL) < 0.25 EU/ml Тест на стерильность стерилен (SAL 10¯³) Тест на эндотоксины < 0.25 EU/ml Эмбрионы мыши (развитие до бластоцисты через 96 часов в среде) ≥ 80% (от стадии зиготы) Сертификат анализов по запросу Предварительная подготовка Не используйте среду при обесцвечивании (если среда содержит фенол красный), а также при помутнении, что указывает на микробиологическую контаминацию. Не используйте продукцию при повреждении целостности упаковки флаконов, во время транспортировки. Содержание и хранение. • Храните от 2° до 25°С, после вскрытия при 2-8°С • Не замораживайте перед использованием • Берегите от солнечного света, в темном месте. • Не используйте продукт дольше 7 дней после вскрытия. • Не используйте после окончания срока хранения Меры предосторожности FertiCult IVF/FIV содержит человеческий сывороточный альбумин. Источники материалов, из которых эти компоненты получены, показали отрицательный результат при тестировании на антитела HIV HBc HCV HTLV 1/2 и отрицательную реакцию на HbsAg, HCV RNA и HIV-1 RNA и сифилис. Известные на сегодняшний день методы подтверждают, что продукты, полученные из крови человека, не переносят какие-либо инфекции. Тем не менее, работайте со всеми компонентами так, как если бы они были опасны на ВИЧ или гепатит. Всегда надевайте защитную одежду. Всегда работайте с соблюдением строгих гигиенических условий во избежание возможной контаминации, даже если FertiCult IVF/FIV содержит гентамицин (ламинарный шкаф, ИСО 5 – окружающая среда). МЕТОД (предлагаемая процедура) Подготовка для использования микрокапель. Нанесите на стенки культуральной 60-мл чашки до 8 капель FertiCult IVF/FIV объемом 100-250 мкл, затем добавьте 5 мл очищенного и пре-инкубированного минерального масла (нетоксичного и предпочтительно эмбрио-тестированного – FertiCult Mineral Oil). Одна яйцеклетка обычно помещается примерно вместе с 10000 сперматозоидов на 1 микро-каплю, поэтому если ожидается получение 16 яйцеклеток, то следует подготовить две чашки на пациента. Затем чашки помещаются в инкубатор на ночь при температуре 37°С и содержанием СО2 не более 5%. (Ночная балансировка настоятельно рекомендована!!). Подготовка для использования в открытых системах. В открытых системах, таких как Фалькон или чашки Петри, около 1 мл среды помещается в каждую лунку. Следующие 3 мл помещаются в окружение лунок для создания необходимой влажности, а также обеспечения среды для промывания яйцеклеток и эмбрионов. До пяти яйцеклеток на чашку (или лунку, при использовании Нунки) могут культивироваться вместе, обычно до 100000 сперматозоидов на лунку. Поэтому, если ожидается получение 15 яйцеклеток при заборе, то, по крайней мере, 6 лунок должно быть приготовлено на пациента (3 - для промывки и 3 для ночного инкубирования). При использовании Нунки, 2-х будет достаточно (т.к. в каждой – 4 лунки) и т.д. Затем ёмкости помещаются в инкубатор на ночь при температуре 37°С и содержанием СО2 не более 5%. (Ночная балансировка настоятельно рекомендована!!). В открытых системах парафиновое масло не требуется, но иногда 1 мл минерального масла может добавляться на среду. При использовании таких открытых систем, инкубатор должен быть увлажнен. Культивирование По окончании ночного инкубирования, подготовленные чашки готовы к использованию. Во время аспирации фолликулов и отбора яйцеклеток, они промываются и помещаются в лунки или же в капли. Когда процедура окончена, яйцеклетки повторно проверяются и промываются для последующего помещения их в капли/лунки и проведения ночного культивирования. Обычно, в течение 6-ти часов с момента отбора, яйцеклетки должны быть инсеминированы подготовленной спермой, и затем помещены на ночь в инкубатор. Процедуры, описанные выше, - для культивирования в течение первых 24-х часов. Затем эмбрионы идентифицируются на наличие 2-х пронуклеусов. После этого они помещаются в свежие чашки, содержащие свежую среду. Ранее, при использовании сыворотки пациента, первоначальная среда содержала 10% сыворотки и при смене (оплодотворении) - 15%. При использовании FertiCult IVF/FIV дополнительный протеин не требуется. Чашки готовятся описанным выше методом, после чего они готовы для помещения в них эмбрионов. При культивировании в пробирке (редко встречается), с использованием данного метода, поместите в неё 1 мл FertiCult IVF/FIV и затем продолжите процедуру в соответствии с методикой, предлагаемой для открытых систем.
