Оценка метода Compact Dry SL, применяемого для выявления
advertisement
Оценка метода Compact Dry SL, применяемого для выявления Сальмонеллы в обогащенных образцах пищи. Эллис П., Кирххоф Дж. И Мэлдрум Р. *NPHS Уэльса, Больница Лэндоу, Penarth, CF64 2XX # Scil Diagnostics GmbH, Fraunhoferstrasse 15, D-82152 Martinsried, Germany Введение. Сальмонелла остается одной из основных причин заражения через пищу, и только за последние десятилетие в Великобритании известно от 16,000 до 27,000 случаев. Первичные резервуары для Сальмонеллы - желудочно-кишечные тракты как диких так и домашних животных, птиц, домашних птиц в особенности. Передача происходит преимущественно через продукты, например, мясо, сырые яйца, молоко и молочные продукты, которые были недостаточно приготовлены или заражены после приготовления. Традиционно для обнаружения Сальмонеллы в пище требуется 4 последовательных этапа, а именно: преобогащение в неселективном носителе, обогащение в селективном бульоне, субкультура в селективный агар и исходная идентификация, и, наконец, подтверждение исходных колоний, используя биохимическую и серологическую идентификацию. Использование метода dryfilm для специфических патогенов - сравнительно недавнее новшество в методологии, нацеленное на обеспечение лабораторий альтернативными методами, использующими дегидрированного селективного или дифференциального носителя в новом формате. Цель этого анализа в том, чтобы оценить один такой метод, Compact Dry SL, для обнаружения Сальмонеллы. Были протестированы сорок образцов обогащенной готовой пищи, используя Compact Dry SL и стандартные методы PHLS. Метод. В питательном бульоне была приготовлена суточная культура Сальмонеллы, последовательные разбавления из которого были приготовлены и инокулированы на пластинки кровяного агара для определения уровней обогащения. Затем для каждого образца готовой пищи был приготовлен раствор 1:10 – взвесили 25 г пищи, поместили в стерильный гомогенизированный контейнер, добавили 225 мл буферной пептоновой воды, и гомогенизировали при помощи stomacher в течение 30 секунд. Каждый гомогенизорованный продукт был затем обогащен, примерно около 2 и 26 cfu/25 г пищи и инкубирован при температуре 37oC в течение 16-18 часов. Следом за инкубацией инокулировали 1 мл гомогенизированного продукта в бульон Selenite Cystine, который затем был инкубирован при 37oC в течение 18-24 часов, и 0.1 мл гомогенизатора был инокулирован в бульон Rappaport Vassiliadis, который затем был инкубирован при 420C в течение 18-24 часов. Следом за инкубацией бульон Selenite Cystine и бульон Rappaport Vassiliadis были инокулированы на агар Brilliant Green и агар Desoxycholate. Затем все пластины инкубировали при 370C в течение 18-24 часов. Compact Dry SL также была инокулирована из инкубированной буферной пептоновой воды. 0.1 мл гомогенизатора был помещен на поверхность пластины приблизительно на расстоянии 1 см от нижней границы. Затем 1 мл стерильной воды был инокулирован на поверхность пластины с противоположной стороны от гомогенизатора (Рисунок 1). Пластины Compact Dry были инкубированы при 420C в течение 24 часов. Следом за инкубацией были изучены все пластины на наличие подозрительных колоний Сальмонеллы. Все подозрительные колонии были субкультурированы в агар MacConkey и в результате серологического и биохимического (API) тестирования установлены как Сальмонелла. Результаты. Образец Приблизительное Обогащение Cfu/25 g Результаты по Сальмонелле Compact Dry SL Стандартный метод PHLS Цыпленок 6 Положительный Положительный Колбаса 6 Положительный Положительный Говядина 6 Положительный Положительный Говядина 6 Положительный Положительный Говядина 6 Положительный Положительный Ветчина 6 Положительный Положительный Ветчина 6 Положительный Положительный Ветчина 6 Положительный Положительный Молоко 26 Положительный Положительный Молоко 26 Положительный Положительный Молоко 26 Положительный Положительный Молоко 26 Положительный Положительный Молоко 2 Положительный Положительный Молоко 2 Положительный Положительный Молоко 2 Положительный Положительный Молоко 2 Положительный Положительный Мясной пирог 2 Положительный Отрицательный Мясной пирог 2 Положительный Положительный Мясной пирог 2 Положительный Положительный Мясной пирог 2 Положительный Положительный Мясной пирог 2 Положительный Положительный Мясной пирог 2 Положительный Положительный Мясной пирог 2 Положительный Отрицательный Мясной пирог 2 Положительный Положительный Мороженое 3 Положительный Положительный Мороженое 3 Положительный Положительный Мороженое 3 Положительный Положительный Мороженое 3 Положительный Положительный Мороженое 3 Положительный Положительный Мороженое 3 Положительный Положительный Мороженое 3 Положительный Положительный Мороженое 3 Положительный Отрицательный Мороженое 3 Положительный Положительный Бутерброд 3 Положительный Положительный Рулет бекона из 3 Положительный Положительный Сэндвич цыпленка из 3 Отрицательный Положительный Сэндвич ветчиной салатом Бутерброд с 3 и Положительный Положительный 3 Положительный Положительный Сэндвич ветчиной с 3 Положительный Положительный Сэндвич говядиной с 3 Положительный Положительный Рулет цыпленка из 3 Отрицательный Положительный Обсуждение. Показатели восстановления для Compact Dry SL были 95%, а для стандартного метода PHLS – 93%. Образцы, в которых Сальмонелла не была восстановлена, были обогащены малым количеством (2-3 cfu/25 g). Пластины Compact Dry SL были легки в использовании, была отмечена высокая степень селективности. Отрицательные пластинки имели светло-голубой цвет (Рисунок 2), в то время как исходный рост Сальмонеллы выявлялся черными или желтыми областями или в виде изолированных колоний (Рисунок 3), или же когда случался высокий прирост, не было видимых колоний, зато целая пластина окрашивалась желтым (Рисунком 4). Колиформные организмы выявляются в среде сине-красном/фиолетовом цвете, но они были мало представлены, в отличие от прироста, полученного при использовании стандартного метода, где в каждом тестируемом образце можно было наблюдать брожение лактозных организмов. Согласно подтверждающему тесту, субкультурирование роста подозрительных колоний прошло без затруднений в обоих методов. При использовании стандартного метода PHLS на поверхности пластинок селективного агара возникали типичные колонии, которые легко было выбрать. Метод Compact Dry SL редко производил дискретные колонии, так как прирост главным образом происходил в гелевом матриксе пластинки dryfilm, а не на поверхности. Следовательно, те области пластины, где произошло изменение цвета, были отобраны петлей и перемещены в агар MacConkey для изоляции единичных колоний. Последующее подтверждение было идентично для обоих методов. Из субкультур на агаре MacConkey были выполнены серологические и биохимические тесты. Метод Compact Dry SL действовал быстрее, чем стандартный метод, отрицательный результат был доступен уже после 48 часов по сравнению с 72 часами для стандартного метода, подтверждение положительных результатов было получено спустя четыре дня. Другим преимуществом Compact Dry SL является меньшее количество отходов, так как этот тест представляет собой всего одну пластину, по сравнению со стандартным методом, в котором используется два селективных бульона и четыре селективных пластинки агара. Следовательно, Compact Dry SL предполагает также меньше трудовых затрат. Заключение. Было решено, что для исследований Compact Dry SL может сравниться со стандартным методом, имея при этом такие дополнительные преимущества как, например, сокращение объема работы и отходов, более легкая идентифицикация колоний и более быстрое подтверждение отрицательных и положительных результатов.
