ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ ТЕСТ-СИСТЕМА «АБ-АН» ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОБЛИГАТНО-

ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
ТЕСТ-СИСТЕМА «АБ-АН» ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОБЛИГАТНОАНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ К АНТИБИОТИКАМ
Тест-система «АБ-АН» для определения чувствительности облигатно-анаэробных микроорганизмов к
антибиотикам однократного использования служит для определения чувствительности облигатноанаэробных микроорганизмов к антибиотикам в полужидкой среде после 18-48 ч инкубации. Учѐт
чувствительности возможен визуально или инструментально с помощью анализатора иммуноферментного
Ф300ТП и компьютера с программным обеспечением «Sensitiv».
В культуральную среду добавляется бактериальная взвесь, которые затем вносятся в лунки планшета,
содержащего лиофильно высушенные антибиотики. После инкубации производится визуальный или
инструментальный учѐт. Резистентные штаммы растут в лунке, делая среду непрозрачной, а если штамм
чувствителен к антибиотику – среда остаѐтся прозрачной.
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест-система «АБ-АН» для определения чувствительности облигатно-анаэробных микроорганизмов к
антибиотикам предназначена для определения чувствительности облигатно-анаэробных микроорганизмов к
антибиотикам.
Область применения тест-системы – клиническая медицина.
СОСТАВ НАБОРА
Компоненты тест-системы «АБ-АН» для определения чувствительности облигатно-анаэробных
микроорганизмов к антибиотикам:
96-луночный плоскодонный планшет – 1 шт;
Среда АБ для культивирования облигатно-анаэробных бактерий (4+0,1)мл – 4 флакона;
Стерильный раствор хлорида натрия с массовой долей 0,9%, (5+0,1) мл, в ампуле – 4 ампулы;
Наконечники полипропиленовые стерильные для автоматических дозаторов вместимостью 200 мкл – 4 шт;
Планшет содержит 96 лунок (12 колонок и 8 рядов, по 2 ряда - 24 лунки для определения
чувствительности одного штамма микроорганизма). Всего планшет позволяет определять чувствительность к
12 антибиотикам четырех штаммов микроорганизмов. Последняя лунка каждого четного ряда не содержит
антибиотика и служит для определения положительного контрольного роста. Остальные 23 лунки содержат
антибиотик в 2-х пороговых концентрациях, исключая тикарциллин.
2.3 Концентрации антибиотиков в лунках планшета (в мкг/мл или г/л после внесения питательной среды)
представлены в таблице 1.
Таблица 1. Концентрации антибиотиков в лунках планшета (в мкг/мл или г/л после внесения
питательной среды)
Обозначения
антибиотиков
для рядов:
- A, С, E, G
- B, D, F, H
Номер лунки
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
Пен
0,5
Пен
2
А+К
4
А+К
8
Т+К
32
Т+К
64
Цеф
16
Цеф
32
Ими
4
Ими
8
Мер
4
Мер
8
Клин
2
Клин
4
Хлор
8
Хлор
16
Мет
8
Мет
16
Мок
2
Мок
8
Амо
2
Амо
4
Тик
32
К
Сокращѐнные названия антибиотиков с концентрациями
устойчивости представлены в таблице 2.
и примечаниями
по определению
Таблица 2. Сокращѐнные наименования антибиотиков с концентрациями и примечаниями по
определению устойчивости
Антибиотик
Сокращѐнное название
Концентрация 1, мкг/мл
Концентрация 2,
мкг/мл
Пенициллин
Амоксициллин/ клавуланат
Тикарциллин/ клавуланат
Цефокситин
Имипенем
Пен
А+К
Т+К
Цеф
Ими
0,5
4/2
32/2
16
4
2
8/4
64/2
32
8
Меропенем
Мер
4
8
Клиндамицин
Хлорамфеникол
Метронидазол
Моксифлоксацин
Амоксициллин
Тикарциллин
Контрольная лунка
Клин
Хлр
Мет
Мок
А
Тик
К
2
8
8
2
2
32
0
4
16
16
8
4
-
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
Флаконы со средой и планшеты должны быть выдержаны при температуре от 18 до 30 °С 20 минут.
Работа с планшетом
должна
проводиться в стерильном боксе после 30 минут обработки
ультрафиолетовым облучением.
Необходимое лабораторное оборудование:
- холодильник;
- термостат электрический для выращивания бактерий с автоматическим терморегулятором до
температуры
37,6 °С с ценой деления 0,1 °С;
- спиртовая или газовая горелка;
- дозаторы автоматические с погрешностью 1 % объѐмом от 5 до 20 мкл и от 20 до 200 мкл;
- денситометр, спектрофотометр или стандартный образец оптической плотности 4 оптические единицы
McFarland ;
- анализатор иммуноферментный АИФ М/340 или Ф 300ТП;
- программное обеспечение «Sensitiv»;
- IBM совместимый компьютер.
МЕТОДИКА ПОСТАНОВКИ
В стерильный флакон внести 2 мл стерильного раствора хлорида натрия с массовой долей 0,9 %.
Приготовить взвесь бактерий.
Для этого бактериологической петлей внести одну или более колоний бактерий, выращенных в течение
18-48 ч при 37°С на среде для анаэробов, в стерильный флакон с 2 мл стерильного раствора хлорида натрия с
массовой долей 0,9 %.
Оптическая плотность взвеси в пробирке после внесения микроорганизма должна соответствовать 4
оптическим единицам McFarland. Этого можно достичь путем:
измерения на денситометре или на спектрофотометре при длине волны 550 нм – 1 OD (составляет
9
1,2х 10 КОЕ/мл);
сравнения со стандартом оптической плотности 4 McFarland;
Перенести в ампулу с питательной АБ средой для культивирования облигатно-анаэробных бактерий 200
мкл приготовленной взвеси бактерий и тщательно перемешать.
Внести в каждую лунку планшета по 135 мкл питательной среды АБ для культивирования облигатноанаэробных бактерий с микроорганизмами (2,9 х 108 КОЕ/мл).
Планшет накрыть крышкой. Инкубировать 18-48 ч при 37 °С в термостате в строго анаэробных
условиях.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Резистентные штаммы растут в лунке, делая среду непрозрачной, а если штамм чувствителен к
антибиотику – среда остаѐтся прозрачной.
При отсутствии роста в контрольной лунке – тест считается недействительным, и его необходимо
повторить.
Визуальный учет
Для антибиотиков, представленных в двух концентрациях
Визуальный учет
Результат
Исследуемые штаммы
-ая
-ая
1 конц.
2 конц.
с
С
○ прозрачная ○ прозрачная
Ч (S)
Чувствительный
● мутная
○ прозрачная
+
П (I)
Промежуточный
● мутная
● мутная
+
+
Р (R)
Резистентный
Для антибиотиков, представленных в одной концентрации
Визуальный учет
Результат
○ прозрачная
Ч (S)
● мутная
+
Р (R)
Исследуемые штаммы
Чувствительный
Резистентный
Ч (S)
При отсутствии роста в лунках с 1-ой и 2-ой концентрацией антибиотика штамм
чувствителен
П (I)
При наличии роста в лунке с 1-ой концентрацией, но отсутствии в лунке со 2-ой
концентрацией штамм обладает промежуточной чувствительностью
При наличии роста с 1-ой и 2-ой концентрацией, штамм считать устойчивым
Р (R)
Инструментальный учет
Измерение оптической плотности проводят на иммуноферментном анализаторе Ф300ТП с помощью
программного обеспечения «Sensitiv».
При отсутствии роста в контрольной лунке – тест считается недействительным, и его необходимо
повторить.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
Тест-система должна храниться при температуре плюс (4+2) °С на протяжении всего срока годности,
указанного на упаковке.
Флаконы со средой и планшеты перед постановкой опыта должны быть выдержаны при температуре
20-30 ºС 20 минут.
Для исследования необходимо использовать только 18-48 ч культуру микроорганизма.
Количество вносимого инокулята должно быть стандартным. Поэтому обязательно необходимо
пользоваться денситометром или стандартом оптической плотности.
Для отбора и добавления реагентов необходимо использовать полуавтоматические пипетки со
сменными наконечниками, аттестованные на точность по значению средней дозы и воспроизводимость
результатов пипетирования.
Инкубация планшета должна производиться в строго анаэробных условиях и только в температурном
режиме 35 -37 0С. При повышении или понижении температуры возможен некорректный результат.
Большое количество пузырьков в культуральной среде может изменить результаты автоматического
учѐта чувствительности.
Собранный материал и бактериальные культуры следует считать потенциально опасными, что требует
опытного и квалифицированного обращения. После использования все планшеты, флаконы и наконечники
должны быть простерилизованы в паровом стерилизаторе при температуре (120+2) °С давлении
(0,11+0,02) мПа (1,1+0,2) кгс/см2 в течении (45+3) мин, сожжены или дезинфицированы погружением в
раствор хлорамина Б с массовой долей 0,5 % с экспозицией 30 мин.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению
набора.
ФОРМА ВЫПУСКА
Планшет позволяет определять чувствительность к 12 антибиотикам четырех штаммов
микроорганизмов.
Компоненты тест-системы в виде комплекта, включающего 1 планшет с антибиотиками, 1 пакетик с
силикагелем , 4 флакона питательной среды АБ (4+0,1) мл, 4 флакона стерильного раствора хлорида натрия
с массовой долей 0,9 % (5+0,1) мл, 4 наконечника стерильных для автоматических дозаторов вместимостью
200 мкл, лист с комплектностью (таблица 2) и инструкция по применению помещаются в коробку из картона
коробочного.
В тару с тест-системами, направлением в каждый адрес по требованию заказчика вкладывается 1флакон
стандартного образца оптической плотности 4 оптические единицы McFarland, объемом (4+0,1) мл.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ
Хранение тест-системы должно производиться при температуре плюс (4+2) °С на протяжении всего
срока годности.
Транспортирование тест-системы осуществлять при температуре плюс (4+2) °С в сухих, чистых,
крытых транспортных средствах (ГОСТ 17768).
Срок годности тест-системы - 12 месяцев с даты изготовления.
При нарушении условий хранения, транспортирования и схемы постановки опыта рекламации не
принимаются.
В остальных случаях рекламации на качество тест-системы направляются по адресу изготовителя:
211309, Республика Беларусь, Витебская обл., Витебский р-н, д. Должа, ул. Советская, 26А.
Тел/факс +375212-20-94-10.
Открытое акционерное общество «БелВитунифарм».