Методичка Описторхоз. - Московская государственная академия
advertisement
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РФ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ “МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ И БИОТЕХНОЛОГИИ ИМЕНИ К. И. СКРЯБИНА” О.Е. ДАВЫДОВА, М.Ш. АКБАЕВ, Н.В. ЕСАУЛОВА, Д.Н. ШЕМЯКОВ ОПИСТОРХОЗ ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛОВЕКА В СОВРЕМЕННЫХ УСЛОВИЯХ Учебно-методическое пособие Допущено Учебно-методическим объединением высших учебных заведений Российской Федерации в области зоотехнии и ветеринарии в качестве учебнометодического пособия для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальности 111801 - Ветеринария Москва - 2011 2 УДК: 619:616.995.121:636.7 О.Е. ДАВЫДОВА, М.Ш. АКБАЕВ, Н.В. ЕСАУЛОВА, Д.Н. ШЕМЯКОВ. Описторхоз животных и человека в современных условиях: Учебнометодическое пособие. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2011, 55 с. Описаны морфология и биология развития возбудителя описторхоза, а также возбудителей других описторхидозов, клинические признаки и патогенез болезни. Подробно представлены современные методы диагностики и схемы лечения описторхоза. Предназначена для студентов факультета ветеринарной медицины, ветеринарно-биологического факультета, аспирантов, слушателей ФПК и специалистов ветеринарного профиля. Рецензенты: Даугалиева Э.Х., докт. вет наук, профессор, ООО НВЦ «Агроветзащита»; Архипов И.А., докт. вет наук, профессор, зам. директора по науке ГНУ ВИГИС; Масимов Н.А., докт. вет наук, профессор каф. эпизоотологии и инфекционных болезней. Утверждена на заседании учебно-методической комиссии ФВМ ФГОУ ВПО «МГАВМиБ им. К.И. Скрябина» от 7 октября 2010 г., протокол № 1. 3 ОГЛАВЛЕНИЕ страницы 1. Введение 4 2. Морфология возбудителя 6 3. Биология развития 11 4. Эпизоотологические данные 15 5. Клинические признаки и патогенез 19 6. Патологоанатомические изменения 24 7. Иммунитет 26 8. Лабораторная диагностика 27 8.1.Исследование дефинитивных хозяев 27 8.1.1. Гельминтоовоскопические методы 27 8.1.2. Иммунологические методы 33 8.2. Исследование дополнительных хозяев 34 9. Лечение 36 10. Профилактика 39 11. Список литературы 40 12. Контрольные вопросы 45 13. Приложения 48 4 1.ВВЕДЕНИЕ. В настоящее время описторхоз относится к гельминтозам, имеющим большое эпизоотологическое и эпидемиологическое значение. Это антропозоонозное природноочаговое паразитарное заболевание, возбудителем которого является трематода Opisthorchis felineus (тип Plathelminthes, класс Trematoda, подкласс Digenea, отряд Opisthorchida, подотряд Heterophyata, семейство Opisthorchidae, Opisthorchis). Дефинитивные хозяева гельминта – плотоядные и всеядные млекопитающие, а также человек, промежуточные – пресноводные моллюскибитинииды, дополнительные – рыбы сем. карповых. Этот трематодоз на сегодняшний день имеет весьма широкое распространение на территории РФ и сопредельных стран, далеко вышедшее за рамки первоначального ареала, и представляет собой серьезную ветеринарно-медицинскую проблему. По данным на 1997г. (Беэр,2000), расчетная экспертная оценка по заболеванию описторхозом в РФ – около 2 млн.чел. Впервые пристальное внимание ученых, врачей и ветеринарных специалистов к описторхозу было привлечено в 1929 году, после 70-й гельминтологической экспедиции в Западную Сибирь, организованной К.И.Скрябиным. Однако с тех пор, как в 1932 г. К.И. Скрябин определил описторхоз как одну из приоритетных санитарных и социально-экономических проблем Сибирского региона (на тот момент описторхоз имел почти поголовное распространение среди северных народов, например, в Тобольском крае), существенно пополнились знания по биологии и экологии возбудителя, накоплен большой объем данных по природной очаговости инвазии, открыты новые очаги и закономерности циркуляции возбудителя. Начиная с 50-х годов прошлого века и по настоящее время проведены многочисленные исследования, описторхоза, биологии профилактики этого развития опасного касающиеся экологических возбудителя, диагностики, гельминтоза. В частности, аспектов терапии и разработаны принципиально новые методы диагностики, основанные на современных знаниях 5 и технологиях, испытана эффективность некоторых перспективных антгельминтиков, и т.п. Нельзя обойти вниманием и тот факт, что в настоящее время понятие описторхоза существенно расширено: кроме непосредственного возбудителя O. felineus, существует еще целая группа трематод-описторхид (сем. Opisthorchidae и некоторые другие, близкие в систематическом отношении, принадлежащие к подотряду Heterophyata), сравнительно многочисленная в видовом отношении и вызывающая различные патологии. Часто локализация, биология развития, распространение в природе этих видов сходны с каноническим, общеизвестным видом – описторхисом, но в диагностическом плане их необходимо различать. Зачастую бытует общее название этой группы заболеваний - «описторхидозы». Многие ученые (Романов и др., 2005, и др.), подчеркивают, что проблему описторхоза необходимо рассматривать комплексно, изучая в равной мере все патогенные виды описторхид. Однако при этом необходимо помнить и о существенных различиях между этими видами, учитывая их при постановке окончательного диагноза. К патогенным для человека и плотоядных животных относятся следующие виды описторхид: Clonorchis sinensis, Metagonimus yokogawai, Pseudoamphistomum truncatum, Metorchis bilis, Echinochasmus perfoliatus, Nanofietus salmincola, Paragonimus westermani. В последнее время в список патогенных для человека и плотоядных животных включают близкородственные виды Rossicotrema donicum и Apophallus muehlingi (Сапожников, 2000), локализующиеся в стадии мариты в кишечнике рыбоядных птиц, кошек, собак, лисиц, песцов, человека, а также Paracoenogonimus ovatus, считающийся на сегодняшний день условнопатогенным. Параценогонимус паразитирует у рыбоядных птиц, также найден в кишечнике диких и домашних плотоядных, способен паразитировать и у человека (Сапожников, 2000; Вьюшкова, Проскурина, 2000). Расчетная экспертная оценка на 1997 в отношении заболеваемости описторхидозами (исключая собственно описторхоз) – 5-50 тыс.чел. (Беэр, 2000). 6 2. МОРФОЛОГИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ Opisthorchis felineus – кошачья, или сибирская двуустка (рис. 1а). Имеет типичные для трематод черты строения - продолговатое, заметно суживающееся к концу тело. Длина – 8-13мм, ширина – 1,5-3,5мм, ротовая и брюшная присоски почти одинаковые по величине. В задней части тела – 2 лопастных семенника, между которыми извивается S- образный экскреторный канал. Кишечные стволы оканчиваются слепо в задней половине тела. Яичник и крупный семяприемник расположены впереди семенников, гроздья желточников – между кишечными стволами. Петли матки располагаются в средней части тела. Половые отверстия находятся впереди брюшной присоски, мужская половая бурса отсутствует. Яйца имеют характерное строение – размеры 0.02-0.03 х 0.01-0.02мм, с крышечкой и утолщением скорлупы на противоположном полюсе, бледножелтой окраски, слегка асимметричные, при выходе из матки наружу содержат мирацидий (рис. 1б) . Локализация марит (половозрелых гермафродитных особей) – желчные протоки печени, желчный пузырь, реже – протоки поджелудочной железы, где гельминты встречаются обычно в гораздо меньшем количестве (Зиганшин Р.В., Кульчиев А.А., 1982). Локализация метацеркариев (инвазионных личинок) – мышцы (в основном дорзальные), иногда мышцы пищевода, жабры рыб семейства карповых – облигатных дополнительных хозяев. Метацеркарий также имеет характерное строение (табл. 1). Особенности морфологии и локализации таблицах 1 и 2., на риc. 2-12. описторхид представлены в 7 Диагностические признаки метацеркариев описторхид, опасных для плотоядных животных и человека (по В.С. Осетрову, 1989 и Г.А. Котельникову, Табл.1. 1984) № п/п Виды описторхид Локализа ция У рыб Размер, мм.,форма цист Оболочки цисты Форма экскреторн ого пузыря Присо ски Подвижн ость личинки в цисте Морфологи я эксцистиро ванной личинки Веретенооб разная, на передней части тела шипики 1 Opisthorchis felineus Мышцы, Подкож. клетчатка Овальная. Реже круглая, 0,230,38х0,20,3 мм 2 (наружняя и внутренняя) Почковидн. , 1/3размера личинки 2 кругл., ротовая 0,09, брюшная 0,08мм Подвижн ая 2 Clonorchis sinensis Там же Почковид ная, шаровидная 0,150,18х0,080,03 мм 2, плотно прилегают друг к другу То же 2кругл., брюшная больше ротовой Подвижн ая, в т.ч. и освобожд енная 3 Pseudoamphisto mum truncatum мышцы 2, плотно прилегают друг к другу Овальная, 1/3размера личинки, цвет темный 2 кругл.,од инаковые по раз меру Движени я замедлен ные 4 Metorchis bilis Мышцы, Жабры, Глаза, Плавники 2 Почковидн. , 1/3размера личинки 2кругл.,о динаковы е по раз меру Движени я замедлен ные задний конец тела расширен 5 Metagonimus yokogawai Чешуя, плавники, жабры, подкож. клетчатка Круглая, 0,320,46х0,260,4 мм, личинка располагает ся в ней свободно Круглая, овальная, 0,210,38х0,140,24 мм Круглая, удлиненноовальная, 0,3-0,4х 0,09-0,1мм 2 2кругл.,б рюшная больше ротовой в 2 раза слабопод вижная листовидна я или языковидна я 6 Nanophietus salmincola Жабры, Чешуя, Плавники , почки Овальная, круглая,0,20,35х0,170,33мм 2, наружняя – прозрачная, нежная, личинка заключена в толстую Треуголь ная, с закруглен ными концами, или мешковидн ый, цвет черный Овальная, цвет темный 2 кругл.,од инаковые по раз меру Подвижн ая, в т.ч. и освобожд енная Удлиненноовальная, шипики на теле мелкие удлиненноовальная, передний конец округлый, задний – заостренны й, мелкие шипики отсутствую т в задней части тела, по бокам тела – 10 папилл тело покрыто шипиками, задний конец «обрублен» 8 7 Echinochasmus perfoliatus жабры 8 Paragonimus westermani Rossicotrema donicum, Apophallus muehlingi Мышцы ракообразных Плавники Поверхно сть кожи Эллипсоид ная,0,240,26х0,20,23мм Paracoenogoni mus ovatus мышцы Сферичная, темнопрозрачная, с наружней капсулой – до 0,7мм, без не -0,40,5мм 9 10 Овальная, круглая, 0,080,1х0,080,09мм волокнисту ю капсулу 2, наружняяпрозрачная, эластичная 2, вокруг наружней – черный пигмент кольцами 2, наружняя в 2 раза толще внутренней, прилегает неплотно 2 экскрет.пол ости овальные Ротов.при соска с крючьями , брюшная – в задней части тела слабопод вижная ротовая присоска с адоральным диском и 24 крьчьями Не просматри ваается Не просматр и ваается слабопод вижная продолгова тая В виде тройника в кольце, со щелевидны ми пространст вами, занимает всю полость личинки 2 и орган Брандеса слабопод вижная яйцевидная Морфологические особенности описторхид (по И.А.Кассирскому и др., 1974, и другим авторам). № п/п возбудитель Размер, мм 1 Clonorchis sinensis 10-20х 2-4мм 2 Pseudoamphistomum truncatum 1,52,5х0,61,0мм 3 Metorchis bilis 2,5-3мм Табл.2. Морфологические особенности марит Морфологически сходен с Opisthorchis felineus, но имеет в задней части тела 2 сильно разветвленных семенника, покрывающие кишечные ветви. Желточники (как и у большинства др.видов описторхид – в боковых полях тела и между кишечными стволами. Задний конец тупо срезан, втянут внутрь в виде присоски. « округлых семенника в заднем конце тела как бы охватывают 2 ствола кишечника. Матка в средней части тела. На покровах – шипики, Морфология яйца Локализация марит 0,026-0,035х0,0120,019мм, форма грушевидная, часто асимметричная. Оболочка шершавая, толстая, хорошо выражены выступы оболочки перед крышечкой, сама крышечка высокая, ее граница заметна хорошо. Бугорок на противоположном полюсе яйца заметен плохо. 0,027-0,035х0,0120,016мм, по форме и строению сходны с яйцами Opisthorchis felineus Желчные протоки печени, протоки поджелудочной железы 0,027-0,032х0,013- Желчные протоки Желчные протоки печени 9 4 Metagonimus yokogawai 1-2,5х 0,40,7мм 5 Nanophietus salmincola 5,86,2х4,54,7мм 6 Echinochasmus perfoliatus 3-4 мм 7 Paragonimus westermani 7,513х48мм семенники – продолговатые, слабо лопастные, в задней части тела, наискось друг к другу Форма продолговатая, бока слегка втянуты внутрь, образуя «талию». Поверхность покрыта шипами, брюшная присоска отсутствует. В середине тела, с правой стороны – крупная половая бурса (половая присоска). 2 круглых семенника – в задней части тела наискось, овальный яичник – впереди них. Матка занимает почти всю заднюю часть тела. Форма почти округлая, семенники крупные, в задней части тела, желточники, в отличие от др.описторхид – разбросаны по всему телу в виде фолликул. Тело вытянуто в длину, покрыто хорошо заметными шипами. Ротовая присоска заметно мельче брюшной. Между ротовой присоской и глоткой, по бокам тела, имеется адоральный диск, вооруженный 24 шипами в 1 ряд. Семенники крупные, округлые, расположены один позади другого, в задней части тела. Между округлым яичником и овальным семяприемником, впереди семенников и брюшной присоски, разбросаны яйца овальной формы, 0,1х0,05мм. Цвет красно-коричневый, форма тела яйцевидная. Поверхность тела с шипиками. Брюшная присоска – на середине тела. Семенники и яичник дольчатые. Матка сбоку от брюшной присоски, у заднего края которой – половые отверстия. 0,015мм, по форме строению сходны яйцами Opisthorchis felineus. и с печени 0,02-0,028х0,0150,017мм, форма лимоновидная, симметричная. Оболочка совершенно гладкая, тонкая, выступы оболочки перед крышечкой не выражены, граница крышечки – в виде тонкой ровной линии, крышечка плоская, слабо различимая. Бугорок на противоположном полюсе яйца заметен хорошо. 0,062-0,072х0,0430,048мм, достаточно крупные, крышечка выражена. По морфологии напоминают яйца лентеца широкого (Cestoda). Овальные, крупные (0,1х0,05мм) Тонкий кишечник 0,08-0,1х0,05-0.06мм, овальные, с хорошо выраженной крышечкой, цвет – золотистокоричневый Преимущественно – мелкие бронхи, иногда – плевра, диафрагма, поджелудочная железа, кишечник, мезентериальные лимфоузлы, предстательная железа, печень, кожа, головной мозг, сердце и др. Тонкий кишечник Тонкий кишечник 10 8 Rossicotrema donicum, Apophallus muehlingi Не более 2,5мм 9 Paracoenogonimus ovatus 0,80,9х0,60,7мм Кутикула покрыта шипиками, Передняя часть тела сужена, гонады – в задней части. Около середины тела – генитальный синус и особая половая присоска. Бурса цирруса и циррус отсутствуют. 2 округлых семенника – в задней четверти тела. Желточники – в латеральных полях в задней части тела. (по Р.С.Шульцу, Е.В.Гвоздеву, 1970). Форма тела яйцевидная или грушевидная, тело покрыто мелкими шипиками. Ротовая присоска крупная, брюшная – слаборазвита, находится в середине тела, вблизи переднего края хорошо развитого органа Брандеса (0,20,4мм), возвышающегося в виде присоски над поверхностью тела. Семенники овальные, лежат косо в задней половине тела, яичник маленький, шаровидный или овальный – между семенниками или сбоку. Желточники в виде фолликул окружают область гонад. Размеры мелкие, форма яйцевидная, крышечка заметна хорошо, цвет – золотисто-коричневый 0,09-0,13х0,06-0,09мм, крупные, оболочка тонкая, поэтому яйца часто деформированы, с измененным размером и формой. органы и ткани. Гельминты находятся здесь в фиброзных капсулах 10-35мм, обычно по 2 в капсуле. Тонкий кишечник Тонкий кишечник Таким образом, возбудители различаются по местам локализации марит и метацеркариев, морфологии и ареалам, видам промежуточных, дополнительных и дефинитивных хозяев, а также по своей патогенности для последних. Однако диагностические методы, применяемые для выявления возбудителей гельминтозов из группы описторхид, в основном аналогичны методам диагностики собственно описторхоза. 11 3. БИОЛОГИЯ РАЗВИТИЯ. Описторхоз – болезнь собак, кошек, лисиц, песцов, соболей и др. куньих, енотовидных собак, свиней, человека. По последним данным, дефинитивными хозяевами O. felineus являются 35 видов млекопитающих, принадлежащих к 6 отрядам, 13 семействам. Так, например, интересен факт наличия в качестве дефинитивного хозяина описторхиса бобра, установленный еще в 1957 г. В.А. Ромашовым в условиях Воронежского заповедника (Ромашов и др., 2005): известно, что бобр в зимний период способен в некоторых случаях к поеданию небольших количеств снулой и погибшей рыбы, что и обуславливает заражение (обнаруженная ИИ гельминта в печени – 203 экз.). К описторхозу восприимчивы также некоторые насекомоядные (выхухоль, кутора) (Горчакова, 2003). Дополнительные хозяева O. felineus – исключительно рыбы сем.карповых, преимущественно язь, елец, линь, плотва, усач, лещ, густера, жерех, пескарь, красноперка, уклея, верховка, сырть, подуст, гольян, вобла, тарань. Всего зарегистрировано в этом качестве 30 видов рыб этого семейства, причем карп и сазан заражению не подвержены (по некоторым данным, заражение сазана и его одомашненной формы – карпа возможно в редких случаях и только у молоди раннего возраста). Наибольший процент зараженности обнаруживается у язя, ельца, линя и плотвы, что некоторые авторы (Горчакова, 2003) связывают с эволюционно установившейся экологической связью этих рыб с моллюсками – промежуточными хозяевами, а также наличием мягкой мелкой чешуи у некоторых видов (линь), что существенно облегчает проникновение церкариев в их мышцы. Дополнительные хозяева клонорхиса – черный и белый амуры, белый и пестрый толстолобики, карась, верхогляд, язь, елец, уклея, пескарь, гольян, а также рыбы из других отрядов – окунь и бычки; псевдоамфистомума, меторхиса – многие виды карповых, причем большое значение в распространении псевдоамфистомума имеет вобла; эхинохазмуса – линь, красноперка, сазан, лещ, язь, густера, белоглазка, а также окунеобразные (окунь, судак), щука, сом; 12 парагонимуса – пресноводные раки, крабы, креветки; метагонимуса – язь, карась, лещ, толстолобик, сазан, горчак, пескарь, а также сиговые и лососевые – сиг, ленок, таймень; нанофиетуса - дальневосточные лососи, таймень, ленок, хариус, елец, а также пескарь; россикотремы и апофаллуса – в основном окунь, ерш, судак, бычки, по некоторым данным – редко кижуч, радужная форель, жерех, густера, лещ, язь, белоглазка, вобла, красноперка; параценогонимуса - лещ, красноперка, сазан, щука, окунь и судак. Промежуточными хозяевами для O.felineus являются пресноводные моллюски из рода Codiella (или Bithinia): C.leachi, C.inflata, C.tentaculata, а также некоторые другие - C.sibirica, C.troscheli (в Сибири) (рис. …..). Моллюски-битинииды обитают на подводных и погруженных в воду растениях, в пазухах листьев и т.п. Это небольшие моллюски (5-12 х 4-8 мм), раковина овально-коническая, с острым завитком, зеленоватого, бурого или рогового цвета. Имеется 5-6 выпуклых оборотов в виде уступов, отделенных друг от друга швом, и округлоовальная крышечка. Пупок (узкая щель между стенкой устья и последним оборотом раковины) чаще всего хорошо выражен (отсутствует у C.tentaculata). Обитают битинииды только в определенных биотопах, характеризующихся следующими условиями: прибрежная зона с песчаным дном и растительностью, медленно текущая или стоячая чистая прохладная вода. Эти условия соответствуют береговой зоне рек и озер, плесам, пойменным и заливным лугам, водоемам в пределах речных русел, старицам, ерикам, мелководьям рек. В загрязненных и сильно эвтрофицированных водоемах с обилием нитчатых водорослей и высокой температурой воды эти моллюски не обитают. Активны битинииды при температуре воды не ниже 8-12о С, пик активности в типичных ареалах – лето (То - 12-22о С). Для других описторхид промежуточными хозяевами являются другие пресноводные моллюски, часто эндемичные: для C.sinensis на Дальнем Востоке – моллюски из рода Parafossalurus, для P.westermani – из родов Semisulcospira, Yuga, для M.yakogawai и N.salmincola из Азии и Дальнего Востока – из рода Yuga, для P.ovatus из низовьев Волги – широко распространенные лужанки (р. 13 Viviparus), для E.perfoliatus – не менее широко распространенные катушки (р.Planorbis), для R.donicum из Европейского региона – переднежаберные брюхоногие моллюски из рода Lithoglyphus, для Metorchis bilis и P.truncatum битинииды (C.tentaculata и некоторые другие). Биология развития паразита будет изложена на примере основного вида O.felineus. Для других описторхид она сходна с ним, различия имеются в основном по срокам развития различных стадий и гостальной специфичности. Марита O.felineus в сутки выделяет до 900 яиц, выводящихся с фекалиями дефинитивного хозяина наружу. Жизнеспособность яиц в фекалиях – 18 сут, в почве летом в Европейской части – 2-14 сут, в Сибири – 28-34 сут, в фекальных массах уличных туалетов – 6-7,5 мес, зимой под снегом – 34-39 сут (Ромашов, 2005). Необходимое условие дальнейшего развития – попадание яйца в воду (в воде при Т0 +5-70С - жизнеспособны свыше 15 мес), где они заглатываются моллюсками – промежуточными хозяевами. В моллюсках происходит развитие партеногенетических личиночных стадий (поколений партенит): в гемоцеле моллюска выходит из яйца, питается и растет мирацидий, который, в свою очередь, превращается в следующую стадию – материнскую спороцисту, локализующуюся в стенке кишечника моллюска. В материнской спороцисте формируются зародыши очередного (дочернего) партенитного поколения – редий. Редии, развивающиеся в материнской спороцисте, имеют мешкообразную форму тела, кишечник и зачатки половой системы, дозревают, растут и питаются в гепатопанкреасе моллюска. В теле редий формируются многочисленные партениты следующего поколения – церкарии. Церкарии выходят из моллюска в воду, где сохраняют жизнеспособность до 60 ч (Близнюк,1969). Они активно плавают, имеют хвост и т.н. железы проникновения для проникания через покровы дополнительного хозяина. Массовый выход церкарий из мантийной полости моллюска приурочен в природе к дневным часам, при Т 0 воды 18-240С, т.е. в период наибольшей активности рыб. Из каждого зараженного моллюска выходит в среднем до 1000 церкарий за один раз, а всего за общий период их выделения (летом – 2-4,5 мес) – 60-70 тыс. (Ромашов, 2005, Близнюк, 1969). 14 Период развития в моллюске патренит описторхиса составляет в условиях водоемов Европы – 2,5-3 мес, Сибири – 10-12 мес (Горячева, …), причем личинки впадают в анабиоз вместе с моллюском, с наступлением весны – продолжают свое развитие. Вышедшие из моллюска церкарии внедряются в тело дополнительного хозяина активно, через кожу (у молоди рыб – и через чешую), достигая мышц. По данным Л.С.Лисицкой (1958), проникновение может происходить и контактным путем через слизистые оболочки жабр, и даже через кишечную стенку при заглатывании рыбой церкариев. В поверхностных слоях мышц рыб, преимущественно – в передних и средних дорзальных (иногда – в абдоменальных и каудальных мышцах, в пищеводе, жаберном аппарате) уже через 24-48 ч формируются последние – инвазионные - личиночные стадии – метацеркарии. Инцистированный метацеркарий достигает инвазионности для дефинитивного хозяина уже через 2 мес, сохраняет жизнеспособность в рыбе до 24-26 мес (в среднем – 12-16 мес), после чего резорбируется. ИИ и ЭИ рыб нарастает с возрастом (до 80 тыс. метацеркарий в мышцах взрослого язя, по данным Мартынова, 1958). При поедании дефинитивным хозяином сырой или недостаточно обработанной зараженной рыбы, метацеркарии эксцистируются в 12-перстной кишке, освобождая ювенильные особи описторхиса. Они, в свою очередь, проникают в общий желчный проток (реже – в проток поджелудочной железы), где обнаруживаются уже через 10 ч. Другой путь проникновения – гематогенный (Коваленко и др., 2005): юные описторхисы активно проникают через слизистую оболочку 12-перстной кишки, внедряясь в сосуды ее венозной сети, и с током крови пассивно заносятся через систему воротной вены в междольковые вены печени, а затем, перфорируя стенки этих вен, внедряются в прилежащие желчные канальцы, с током желчи мигрируя в более крупные желчные протоки. Половой зрелости основная масса гельминтов в местах локализации достигает через 20-25 дней (Ромашов, 2005), однако их развитие в организме не происходит синхронно, и даже к 38 сут 16,6% описторхисов еще не являются половозрелыми. 15 Средняя продолжительность жизни O.felineus у плотоядных животных – более 3 лет, у человека – около 20 лет. Интенсивность инвазии (ИИ) в организме дефинитивных хозяев бывает очень высока: у человека установленное максимальное значение – 25321 экз., у волка – 6930 экз., у кошки – 1354 экз. (Горчакова, 2003). 4. Э П И З О О Т О Л О Г И Ч Е С К И Е Д А Н Н Ы Е Возбудитель описторхоза O.felineus в настоящее время распространен широко. По данным Зимина … и Мачнева … (2000), основанным на анализе эпидемиологических данных по регионам, отмечено увеличение показателей общей зараженности населения в последние годы на 8%. Основные очаги гельминтоза расположены в бассейнах крупных рек Азиатского и Европейского регионов – Оби, Иртыша, Печоры, Тобола, Северной Двины, Камы, Днепра, Дона, Южного Буга, Немана, Днестра, Дуная и др., где зараженность рыб – дополнительных хозяев может быть очень высока (особенно язя, ельца, линя – до 75-90%). Однако распространение возбудителя обладает ярко выраженной природной очаговостью, причем частота встречаемости его нарастает с западных к восточным границам ареала. На востоке естественная граница ареала – бассейн реки Обь. Наиболее значимые очаги описторхоза находятся по всему Обь-Иртышскому бассейну, в Западной Сибири и Северном и Центральном Казахстане (Иргиз-Тургинский, Кургальджин-Нуринский, Кустанайский, Убаганский очаги). В некоторых районах Томской и Сургутской областей по последним данным инвазированность кошек в населенных пунктах близка к 100%, собак – 20%, ондатры – 33%, людей – до 60-90% (в т.ч. детей – 34%); при этом зараженность рыб метацеркариями – 35-90% (в основном язь, елец). Случаи описторхоза людей в Томской области составляют 25,7% всех случаев, зарегистрированных в РФ. Наибольшая инвазированность животных и людей отмечается в центральной части ОбьИртышского бассейна (Завойкин, 1990). В некоторых населенных пунктах Ханты-Мансийского АО зараженность кошек – 67-100%, собак – 27-68%, рыб – 65-81% (ельца – до 100%). В Тюменской 16 области на долю описторхоза по данным санитарно-эпидемиологических служб приходится 73% от всех гельминтозов человека в регионе, зараженность кошек – 78%, собак – 33%, песцов – 7%. Зараженность людей описторхозом в этой местности составляет 20% от общероссийского показателя. В Хакасии количество случаев описторхоза человека возросло в период с 1991 по 1998г. в 11 раз (Ромашов, 2005). Описторхоз также зарегистрирован и в бассейнах большинства крупных рек Европы. На Днепре центральная часть очага расположена в Сумской области Украины, 2-й по величине очаг – в Днепропетровской области, где зараженность людей – 8-25%. В Волго-Камском бассейне наиболее высокие показатели зараженности описторхозом людей, домашних плотоядных, а также рыб зарегистрированы в Кировской и Волгоградской областях, Коми-Пермяцком АО и Пермской области (здесь зараженность кошек может достигать 70%, собак – 25%, детей – 54%, рыб – 17-30%, в основном язя, густеры, плотвы и леща), Татарстане, Удмуртии (зараженность кошек – 10-75%, карповых рыб – 5-50%). В низовьях Волги крупные очаги описторхоза зарегистрированы в Астраханской области (зараженность кошек в некоторых регионах – 75%, собак – 13-70%, кабанов -5%, домашних свиней – до 40%, енотовидных собак и лисиц – 4-14%, соответственно, зараженность людей – 20% от общероссийского показателя) (Плющева и др., 1994). В зарегистрированных очагах описторхоза в Самарской области зараженность кошек достигает 62%, в Нижегородской области – 20%. В бассейне реки Дон основные очаги описторхоза приурочены к рекам Воронеж и Усмань, где имеется много неблагополучных населенных пунктов, в т.ч. и собственно г.Воронеж и область (зараженность карповых рыб язя и плотвы – 44-100%) (Ромашов, 2005; Котельников, Малков, 1991). На Северо-Западе РФ и странах Балтии очаги инвазии зарегистрированы в бассейнах Северной и Западной Двины, Немана, во внутренних водоемах Карелии. Неблагополучны по описторхозу некоторые районы Канады, Польши, Румынии (в бассейне Дуная), Западной Украины (в бассейне р. Южный Буг в 17 некоторых населенных пунктах зараженность кошек – 10-53%, рыб – 8-28%), Болгарии, Италии. По мнению многих ученых, формирование новых очагов происходит в настоящее время постоянно, чему способствует, в частности, миграция населения и нарушение правил ветеринарно-санитарной экспертизы рыбы, а также ослабление санитарно-просветительской работы среди населения неблагополучных регионов. В формировании и эволюционировании очагов инвазии не последнее место отводится также домашним и диким животным. Так, например, в формировании и поддержании таких очагов в Омской, Томской и Тюменской областях ведущая роль принадлежит ондатре, лисице, соболю (Ромашов, 2005), а в Ахтубинском районе (бассейн Волги) – домашним свиньям, являющимся здесь, по мнению Горчаковой … (2003), основным источником распространения описторхоза. Общепринятым является мнение, что основной после человека источник инвазии – кошка, а также собака. Таким образом, в настоящее время выделено 2 географических изолята O.felineus, циркулирующих в пределах ареала возбудителя и отличающихся специфичностью по отношению, в основном, к промежуточным хозяевам (моллюскам) – Европейский изолят (его центр – Украина, бассейн Днепра и Волго-Каспийский бассейн на территории РФ) и Сибирский изолят (ОбьИртышский бассейн) (Завойкин, 1990, Соусь, Малышев, 1976, и др.). По данным многих авторов (Ромашов …, и др.), популяции моллюсков – промежуточных хозяев из каждого изолята относительно слабо восприимчивы к возбудителям из «чужого» изолята; высокая же степень совместимости между паразитом и промежуточным хозяином наблюдается лишь в местных популяциях. Вероятно, это и является основным сдерживающим фактором в распространении описторхоза. Также, по мнению О.Н.Жигилевой и Р.М.Цоя (2002), в очагах описторхоза выявлено значительное конвергентное сходство белковых систем (неспецифических эстераз) у карповых рыб и описторхисов в стадии метацеркария, рассматриваемое как результат длительной коэволюции паразита и 18 хозяина, помогающее образованию устойчивых пар «паразит-хозяин». Возникновение генетического подобия в этих парах происходит в результате естественного отбора, когда наихудшую приживаемость показывают паразиты с белками, резко отличающимися от белков хозяина (иммунитет – фактор отбора). В условиях Тюменской области наиболее устойчивой паразитохозяинной системой является система «язь - метацеркарий описторхиса», в которой очень высок индекс генетического подобия, и в этой местности зараженность язя максимальна. Распростанение других описторхид носит более локальный характер. Так, C.sinensis, M.yakogawai, P.westermani, N.salmincola - эндемики Дальневосточного региона (C.sinensis и M.yakogawai – в бассейнах Уссури и Амура, на северном Сахалине, где инвазированность рыб метацеркариями может достигать 15-17%, P.westermani и N.salmincola – в Амурской области, Хабаровском и Приморском краях, но основной регион распространения P.westermani – Япония, Китай, Корея, Филиппины). P.ovatus, P.truncatum встречаются преимущественно в Волго- Каспийском регионе (бассейны Волги (низовье), Дона (Воронежская обл.), локально - Нижегородская, Саратовская, Екатеринбургская, а также Ивановская и Московская области, некоторые регионы Азово-Черноморского и даже ОбьИртышского бассейнов. Зараженность рыб (воблы, красноперки) некоторых районов в бассейнах Волги и Дона метацеркариями P.truncatum может составлять 22-40%, при ИИ более 17 экз. личинок на рыбу, P.ovatus (у леща, щуки, воблы) – 82-96%, при ИИ – до нескольких сотен экземпляров личинок на рыбу. В последнее время среди партий рыб из естественных водоемов из региона дельты Волги, поступающих в охлажденном виде для реализации в крупные города, в том числе Москву, часто встречаются зараженные метацеркариями пагаценогонимуса (Смирнова и др., 2002). широко, но очагово в водоемах E.perfoliatum Нижнего Поволжья, распространен Волгоградской, Астраханской (зараженность собак – до 57%, свиней – 22-100%) областей, Казахстана, в бассейнах Днепра, Березины, Западной Двины, Припяти. Очень 19 широко распространены и бассейнах рек (зараженность виды R.donicum, A.muehlegi, встречающиеся в Балтийского, окуня Черного, метацеркариями Азовского, в районах Каспийского морей преимущественного распространения – в дельте Волги – до 100%), на Дальнем Востоке, в Европе (реки Карпат и Прикарпатья), в Северной Америке. Меторхис чаще всего встречается в дельте Волги (зараженность рыб – 7-18% (Сапожников и др., 2000). 5. К Л И Н И Ч Е С К И Е П Р И З Н А К И И П А Т О Г Е Н Е З В клиническом отношении выделяют острое и хроническое течение описторхоза. Острое течение в основном характерно для человека, проявляется у лиц, приехавших в очаг из неэндемичных по описторхозу районов. Проявления острого течения обуславливаются характеризуются отечностью, токсико-аллергическим холангитом с синдромом и пролиферативными, десквамационными и метапластическими процессами в эпителии желчных протоков печени, повышенной продукцией слизи, попадающей в желчь. Наблюдается холецеститоподобный или гепатохолангетический синдром, Т0 тела – выше 39 0С, сохраняется 2-3 недели. Выявляется эозинофилия, лейкоцитоз, повышение СОЭ (Ткаченко, Офицеров, 2001; Озерецковская, 1986; Бронштейн, 1986 (цит.по Ткаченко,Офицеров,2001)). Чаще описторхоз как у животных, так и у человека, протекает хронически. У больных животных отмечают угнетение, расстройства пищеварения, периодическую рвоту, иктеричность слизистых оболочек и даже кожи, прогрессирующую кахексию, анорексию, болезненность в области печени и ее резкое увеличение (область печеночного притупления выходит за границы 13 межреберья), иногда – кожный зуд. По мнению В.В.Кривенко, В.Г.Филатова (1982), у собак острое течение описторхоза переходит в хроническое в течение 6 месяцев, при этом начиная со срока после заражения, равного 73 сут, наблюдается обильная яйцепродукция гельминтов, сохраняющаяся в течение последующих 4 мес. 20 Хронически протекающий описторхоз оказывает системное влияние на состояние здоровья, в результате поражения печени и нарушения ее барьерных и антитоксических функций сопутствующие болезни протекают тяжело. У человека хронический описторхоз часто является причиной возникновения вторичного рака печени (холангиокарциномы), частота встречаемости которой в очагах описторхоза в 6-7 раз выше, чем в неэндемичных районах (Шайн А.А. и др, 1973). По свидетельству Hoogland H.J.M. (1929, цит. по Н.Н. Плотникову, 1981), случаи рака печени наблюдались иногда и у больных кошек. Авторы рассматривают выявляемую у животных железистую гиперплазию эпителия желчных протоков, развитие незрелой соединительной ткани в паренхиме печени как атипические разрастания, близкие к опухолевому росту, при этом, возможно, меняется химизм желчи и образуются бластомогенные вещества (Шабад А.М., 1973, (цит. по Н.Н. Плотникову, 1981)). Встречаются случаи пролиферативного холангита, холангиогепатита. При описторхозном поражении поджелудочной железы возникает каналикулит с резким расширением протоков (Озерецковская …, 1986), ведущий к каналикулоэктазии (закупорка главного панкреатического протока и его ветвей гельминтами) и образованию ретенционных кист под капсулой железы (Зиганшин Р.В., Кульчиев А.А., 1982). Описано порядка 35 случаев рака (аденокарциномы) поджелудочной железы, ассоциированного с описторхозом, у человека (Михайлов В.Я, 1965; Бычков В.Г., 1982). Интересно, что описторхисы в панкреатических протоках обнаруживаются в значительно меньших количествах, чем в желчных: в поджелудочной железе паразитирует обычно не более 5-10 экземпляров. Тем не менее, длительное паразитирование даже такого малого количества трематод ведет к грубым изменениям железы, склеротизации паренхимы, рубцовым деформациям протоков с их окклюзией и обтурацией (Зиганшин Р.В., Кульчиев А.А., 1982). В целом же клинические проявления описторхоза имеют полиморфную картину с отсутствием патогномоничных симптомов. 21 В последнее время некоторые авторы (Кузнецова В.Г..2000; Наумов В.А. и др., 2002) указывают на возможность развития рецидивирующиго течения описторхоза у человека. Рецидивы развиваются через 8-11 мес после клинического выздоровления (при этом в анамнезе достоверно отмечена невозможность нового вторичного заражения), характеризуются признаками, присущими острой фазе описторхоза, при этом наблюдается выделение яиц описторхисов. Согласно гипотезе, предложенной авторами, появление новых марит спустя длительное время после окончания лечения может быть вызвано активацией эксцистированных метацеркариев, в некотором количестве сохраняющихся в организме длительное время после заражения. На них ингибирующее действуют секреторно-экскреторные антигены марит описторхисов, тормозя их развитие и обуславливая латентное течение инвазии. После уничтожения марит антгельминтиком, со временем прекращается ингибирующее действие их экскретов на оставшиеся метацеркарии, и они продолжают свое развитие, обуславливая рецидив болезни с появлением новых марит. Таким образом, в патогенезе описторхоза главную роль играют: при остром течении – аллерготоксические реакции, механическое воздействие трематод (особенно молодых особей, имеющих на поверхности тегумента шипы), нейрорефлекторные реакции и вторичная инфекция в результате инокуляции патогенной микрофлоры (Акбаев, Есаулова, 2004; Ромашов, 2005); при хроническом течении – прогрессирующее поражение гепатобилиарной системы и поджелудочной железы. Картина такого поражения характеризуется развитием следующих патологий: - геморрагический синдром; - механическая и паренхиматозная желтуха (вследствие гепатоцеллюлярной недостаточности); - портальная гипертензия, стеноз воротной вены, как следствие – асцит, расширение сосудов брюшной полости; 22 - холестаз, фиброз и расширение стенки желчных протоков с формированием холангиоэктазов; - гепаторенальный синдром с некрозом эпителия почечных канальцев на фоне прогрессирующего билиарного цирроза печени, развитие почечной недостаточности. Билиарный цирроз как одно из самых ярких и тяжелых проявлений хронического описторхоза развивается вследствие хронических воспалительных процессов в желчных протоках печени при паразитировании O.felineus. Он характеризуется дегенеративными изменениями клеток на фоне сильного разрастания соединительной ткани с ее уплотнением и рубцеванием. Возникает переполнение протоков желчью, холестаз, варикозное расширение внутридольковых капилляров, что в конечном счете ведет к возникновению очаговых некрозов паренхимы с последующей заменой ее тяжами соединительной ткани (Журавлев и др., 1985). Развиваются кистозные образования (ретенционные кисты) желчных протоков как следствие препятствия адекватному оттоку желчи и холангиоэктазы с аденоматозно-полипозной пролиферацией эпителия слизистой оболочки желчных протоков или же разрастанием соединительной ткани (Зубков В.Г., 1982). билиарного цирроза – асцит, развивающийся при Последствия венозном застое крови и нарушении лимфооттока. Затруднение и прекращение оттока желчи ведет также к развивитию механической желтухи с характерными симптомами (иктеричность кожи и слизистых оболочек, билирубинемия, реакции со стороны ЦНС (вследствие накопления в крови токсичных желчных кислот). В дальнейшем желтуха приобретает не только механический, но и паренхиматозный характер, развиваются, наряду с функциональными, также и морфологические изменения гепатоцитов: механическая закупорка желчных протоков паразитами ведет к переполнению их желчью, увеличивая давление в полости протоков. При растяжении и разрыве желчных капилляров гепатоциты наполняются желчью и происходит их гибель, зернистое и жировое перерождение (Третьяк и др., 2003). 23 Желчь через лимфатические щели также поступает в кровь. Это ведет и к нарушению болевой чувствительности, деятельности периферической нервной системы, кожному зуду: в крови продолжают накапливаться соли желчных кислот, раздражающие нервные окончания. В крови резко возрастает активность экскреторных ферментов (щелочной фосфатазы (ЩФ), лейцинаминопептидазы (ЛАП), гамма-глютамилтрансферазы (ГГТ). Эти ферменты структурированы в стенке тонкого кишечника, желчных капилляров, в щеточной каемке желчных протоков, и в норме экскретируются в желчь, а при явлениях обтурации, развитии холангиогепатита, нарушении целостности гепатоцитов – резко возрастает их активность в крови. Уже с первых недель течения болезни выявляется стабильное повышение уровня ЩФ и ЛАП в сыворотке крови в 2-3 раза, а ГГТ – в 14,5 раза по сравнению с нормой, особенно в начальный период болезни (Казьмина Н.П., 1982). Известно, что повышение активности ГГТ в крови обусловлено увеличением ее продукции при застое желчи. Эта пептидаза, локализованная на мембране клеток, выводится из кровотока посредством работы рецепторов галактозы, присутствующих в печени, и изменения показателя ГГТ в сыворотке крови всегда сопровождает холестатические заболевания и липидозы печени. Таким образом, основную роль в патогенезе описторхоза играют: - механическое воздействие гельминтов (повреждение стенок желчных и панкреатических протоков, дискинезия, временное или полное прекращение оттока желчи и секретов поджелудочной железы, разрастание соединительной ткани, желтуха; - перерождение и гибель гепатоцитов, кистозное перерождение, железистая пролиферация эпителия желчных и панкреатических протоков (у человека оценивается как предраковое состояние (Ткаченко, Офицеров, 2001); - нервно-рефлекторные реакции (вследствие раздражения гельминтами нервных элементов протоков с возникновением патологических импульсов с интерорецепторов, прежде всего передающихся на желудок и 12-перстную кишку 24 (Ткаченко, Офицеров, 2001), а также в связи с накоплением в крови токсичных солей желчных кислот); - присоединение вторичной микрофлоры, инфицирование; - аллергические реакции: проявлением аллергической сенсибилизации может являться эозинофилия (до 60% эозинофилов в крови, по данным А.В.Шлычкова, 1982) и лейкоцитоз. Другие описторхиды, имеющие подобную O.felineus локализацию, вызывают сходные проявления болезни. Виды, населяющие тонкий кишечник – имеют меньшее эпизоотолого-эпидемиологическое значение. Однако отмечено (…,), что симптомами нанофиетоза у собак являются геморрагический энтерит, генерализованная лимфоаденопатия, рвота, диарея, летаргическое состояние, сопровождаемое анорексией и лихорадкой. Однако такое состояние может быть обусловлено и инфицированием микроорганизмом Neorickettsia helmintheca, заражение которым происходит при поедании мяса лососевых рыб, пораженных метацеркариями нанофиетуса. Очень патогенен вид P.westermani, вызывающий тяжелые патологии различных органов и тканей человека и животных. По данным …., парагонимус у собак и кошек локализуется чаще в легких, вызывая хронические респираторные заболевания. 6. П А Т О Л О Г А Н А Т О М И Ч Е С К И Е И З М Е Н Е Н И Я Заболевание сопровождается выраженными патологоанатомическими изменениями, заключающимися, в основном, в некротических и деструктивных изменениях желчных протоков и паренхимы печени. Так, печень кошек при описторхозе с высокой ИИ увеличена в 4-5 раз, поверхность бугристая, с мускатным рисунком или мелкозернистая, заметны участки гиперемии. Консистенция органа – плотная, цвет – желто-коричневый. По краям печеночных долей – сеть серо-белых шнуров, представляющих собой утолщенные желчные протоки с варикозными и кистоподобными расширениями (разросты эпителия, дилатации, холицеле) – образованиями желто-белого цвета, 25 очень плотной консистенции, достигающими величины лесного ореха. На поверхности печени заметны рубцы разроста фиброзной ткани. Беловатые извитые тяжи пораженных желчных протоков обнаруживаются и под капсулой печени, в паренхиме. Стенки протоков сильно утолщены, склеротизированы (рис. …). На разрезе органа видны также множественные бело-серые очаговые образования величиной до булавочной головки, соответствующие утолщенным междольковым желчным протокам. На разрезе желчных протоков и на внутренней поверхности кистозных расширений – крошковидный белый налет и студенистая серовато-белая, темно-коричневая или желто-зеленая жидкость вязкой консистенции, содержащая паразитов (Вскрытие …, 1982; Патологическая…, 2006; Третьяк и др., 2003) (рис…., ….). При гистологическом исследовании в печени кошек, погибших в результате инвазии, отмечаются изменения, характерные для токсической дистрофии с фокусами атрофического и билиарного цирроза. Так, в срезах печени, приготовленных с мест локализации рубцов, выявляются фокусные разросты волокнистой соединительной ткани, уходящей вглубь органа с формированием ложных долек (рис. 14). Со стороны эпителия слизистой оболочки желчных протоков – аденоидные разросты с формированием билиарного цирроза, гибелью клеток эпителия и его десквамацией (рис. 15). На этом фоне наблюдается пролиферация эпителия желчных путей, фиброз и инфильтрация стенки лимфоидными и плазматическими клетками. Хорошо заметны изменения, характерные для развития паренхиматозной желтухи. Паренхима в состоянии жировой декомпозиции (рис. 16-17). Границы сохранившихся гепатоцитов, особенно в центре долек, слабо заметны, ядра многих из них – пикнотичны, цитоплазма в состоянии зернистой дистрофии. В результате кариопикноза и кариолизиса многие гепатоциты превращены в мелкозернистую массу распада. Рисунок балочного строения долек заметно нарушен, межбалочные капилляры расширены, переполнены кровью (исследования проведены В.А. Салимовым, О.М.Козыревой, Ю.Ю.Пожидаевым, А.И.Цыганковой, Самара, 2008). В этих же исследованиях обнаружены 26 патоморфологические изменения поджелудочной железы кошек, соответствующие прогрессирующей гиперплазии эндокринных клеток островков Лангерганса описторхозного происхождения: дольки железы и островки неоднородны по размеру, в некоторых дольках отмечено отсутствие островков, другие – почти полностью состояли из эндокринных клеток; периваскулярные пространства расширены, стенки сосудов склеротизированы. Осложнениями описторхоза, носящими зачастую летальный характер и дополняющими патологоанатомическую картину, являются гнойный холангит, абсцессы печени, перфоративный желчный перитонит вследствие перфорации субкапсулярных протоков и холангоэктазов, перфоративный флегмонозный холецистит, спаечные процессы и др. 7. И М М У Н И Т Е Т Формирование иммунного ответа организма при описторхозе развивается по общему принципу первичного иммунного воспаления пораженной гепатобилиарной системы с гиперчувствительностью немедленного типа с последующим формированием вторичного иммунного воспаления в эндотелии всего капиллярного русла, развивающегося по принципу гиперчувствительности замедленного типа. По данным Т.И.Ткаченко и В.И.Офицерова (2001), Т.Ф.Постниковой (1982), на ранней стадии описторхоза восприимчивость организма к паразитам контролируется механизмами клеточного иммунитета. Повышается активность моноцитов, наблюдается индукция Т-клеточного звена, в основном за счет повышения активности Т-супрессоров. В то же время, по данным этих же авторов, при описторхозе ограничен гуморальный ответ иммунной системы. При первичном контакте с антигенами гельминта начинается выработка IgM, максимальные значения которых регистрируются через 1,5-2 нед., а уже через 6-8 нед – количество IgM резко снижается. Происходит «переключение» на синтез IgG, максимум количества которых наблюдается ко 2-му-3-му мес после заражения . В то же время, при длительном течении болезни происходит 27 снижение уровня выработанных организмом специфических антител ниже порогового уровня. Причина этого – расход антител на образование циркулирующих иммунных комплексов с экскреторно-секреторными антигенами гельминта - ЦИК (комплексы «антиген-антитело»), главная функция которых – связывание и удаление из организма хозяина чужеродных антигенов. ЦИК также стимулируют у инвазированного хозяина наработку специфических агентов, угнетающих Т-звено иммунитета, оказывая тем самым тормозящее влияние на функциональное состояние всей иммунной системы (Старостина.., Клебановская…, 1991). Таким образом, иммунная система не способна сформировать полноценный и эффективный защитный ответ на первичную инвазию, что обуславливает развитие хронического течения и повторные реинвазии. 8. Л А Б О Р А Т О Р Н А Я Д И А Г Н О С Т И К А 8.1. Исследования дефинитивных хозяев. Окончательный диагноз у дефинитивного хозяина, как и при любом гельминтозе, устанавливают специальными методами, позволяющими обнаружить яйца или непосредственно гельминта – овоскопии фекалий и гельминтоскопии (в данном случае – неполное гельминтологическое вскрытие по методу К.И.Скрябина). 8.1. 1. Гельминтоовоскопические методы. В ветеринарной и медицинской практике наиболее употребительными при диагностике описторхоза (и других описторхидозов) являются следующие методы: - флотации - седиментации - комбинированные. А. Методы флотации. Использование методов флотации, основанных на феномене разницы удельного веса (плотности) яиц гельминтов и насыщенных растворов солей, когда яйца 28 всплывают в течение определенного времени в поверхностный слой раствора, откуда извлекаются гельминтоскопической петлей в капле раствора и микроскопируются, имеет ряд ограничений при диагностике описторхоза. Яйца описторхисов (и других описторхид), как и все яйца трематод, обладают большим удельным весом (1,38-1,46), и их всплытие возможно только в растворах солей, имеющих еще больший удельный вес. В связи с этим, применение многих растворов, например, насыщенного раствора соли поваренной (плотность 1,18-1,2) по методу Фюллеборна, тиосульфата натрия (плотность в среднем 1,3) и др. нецелесообразно. Некоторыми исследователями (Акбаев, Есаулова, 2004), предложено проводить диагностические исследования с растворами натриевой селитры (нитрата натрия, плотность 1,4) по Калантарян, азотнокислого свинца (плотность 1,5) по Котельникову-Хренову, или хлорида цинка (плотность 1,82). Проводится обычная флотация по общепринятой схеме. Пробу фекалий массой около 3 г кладут в стаканчик или фарфоровую ступку, заливают небольшим количеством флотационного раствора, размешивают стеклянной палочкой или растирают пестиком, доливая раствор порциями до 50 мл. Затем смесь фильтруют через ситечко в другой стаканчик, оставляют для отстаивания на 15-20 мин. Затем металлической петлей, прикасаясь к поверхностной пленке раствора, снимают на чистое предметное стекло 3-4 капли из разных мест фильтрата. Микроскопируют при малом увеличении, можно накрыть покровным стеклом и добавить 1 каплю 50% раствора глицерина с водой для замедления процесса высыхания и кристаллизации (Котельников, 1984; Акбаев и др., 2006). Недостатками метода флотации в растворах солей с высокой плотностью является то, что при проведении исследования поверхностный слой взвеси оказывается сильно загрязнен частицами всплывших фекалий и посторонних примесей, и обнаружение мелких и слабопигментированных яиц описторхиса затруднено, особенно – при слабой интенсивности инвазии. Кроме того, яйца могут деформироваться в растворах солей повышенной плотности, но при этом 29 восстанавливают свою форму при добавлении к препарату на предметное стекло капли дистиллированной воды. Б. Методы седиментации. Метод седиментации, или последовательных смывов, и различные его модификации широко применяются в гельминтологии для выявления, по преимуществу, яиц трематод (Котельников, 1984). Он основан на принципе осаждения взвешенных в жидкости яиц гельминтов, промывании осадка и его микроскопии. По стандартизированной методике пробу фекалий (3г) кладут в стаканчик, заливают небольшим количеством воды, размешивают и при постоянном помешивании доливают воду до 50 мл. Смесь фильтруют через сито в другой стакан, отстаивают до образования осадка. Затем верхний надосадочный слой сливают, снова добавляют 50 мл воды и отстаивают. Таким образом осадок промывают неоднократно, пока надосадочный слой не станет прозрачным. Затем осадок с помощью пипетки каплями помещают на предметное стекло и микроскопируют с целью обнаружения яиц трематод. Диагностическая эффективность стандартизированной методики последовательных смывов в отношении описторхоза слабоокрашенных яиц недостаточно высока, обнаружение мелких и O.felineus в осадке затруднено. Также в фекалиях плотоядных и человека имеется неусвоенный жир, и этот фактор липофильности препятствует седиментации яиц. Для повышения диагностической эффективности пробы фекалий перед исследованием методом седиментации на описторхоз необходимо обрабатывать жирорастворяющими веществами. Пробы фекалий плотоядных растирают с добавлением эфира, спирта, бензина и т.п. (5-7 мл на 3 г фекалий) (Котельников, 1984). Тем не менее, проф. М.Ш.Акбаев, исходя из личного опыта, считает рациональным проводить прижизненную гельминтоовоскопическую диагностику описторхоза кошек по показаниям в первую очередь именно методом седиментации (последовательных смывов), проявляя в исследованиях особую тщательность. 30 Большее распространение в диагностике описторхоза имеют модифицированные методы седиментации. 1. Метод Ю.А. Березанцева и Ф. Межазакиса (1979). Методика предложена для диагностики трематодозов человека (в т.ч. описторхоза, клонорхоза и др.), может применяться в ветеринарии (Котельников, 1984). Метод основан на осаждении яиц в солевом растворе, для чего используют насыщенный раствор нитрата натрия (плотность 1,3, 1кг/л воды), который разливают по 40 мл в воронки, снабженные трубками с зажимом и закрепленные на штативе. Пробу фекалий (1-3г) растирают в отдельном стаканчике с 5-7 мл 2% раствора уксусной кислоты и осторожно фильтруют через однослойную марлю в воронку с солевым раствором, наслаивая взвесь сверху. Смесь отстаивают 6-7 часов, затем осадок выпускают из воронки на предметное стекло и микроскопируют. При этом методе в процессе седиментации происходит химическая реакция между уксусной кислотой и нитратом натрия с выделением кислорода и окиси азота (NO2) в виде пузырьков газа, задерживающихся в частицах фекалий и препятствующих их оседанию. В итоге осадок получается чистым, содержащим яйца описторхисов без посторонних примесей. Методика показывает высокую эффективность, недостатком является длительность седиментации. 2.Формалин-эфирный метод. Этот метод седиментации применяют в ветеринарии (Новикова, 2005), а также в медицине, где т.н. эфир-формалиновый метод Като и его модификации являются приоритетными в гельминтоовоскопических диагностических исследованиях на описторхоз (Ткаченко, Офицеров, 2001). При проведении исследования в градуированные центрифужные пробирки наливают по 7 мл 10% раствора формалина, добавляют 1г фекалий (общий объем раствора в пробирке – 8 мл). Фекалии осторожно размешивают в растворе формалина до получения однородной взвеси, которую фильтруют через металлическое ситечко или 2 слоя марли в другую центрифужную пробирку 31 (общий объем раствора должен снова составлять 8 мл, при необходимости его доводят до этой отметки, добавляя 10% формалин). В эту же пробирку добавляют 2 мл эфира (до отметки «10 мл»), закрывают пробкой и энергично встряхивают 30 секунд в горизонтальном положении. Далее смесь центрифугируют (3000 об./мин 1 мин или 1500 об/мин 2 мин). После центрифугирования в пробирке образуется 4 слоя: эфир, «фекальная пробка», формалин, осадок, содержащий яйца гельминтов. Осадок микроскопируют, нанося на предметное стекло по 2 капли. 3. Уксусно-эфирный метод. Методика сходна с вышеописанным формалин-эфирным методом. В центрифужную пробирку вносится 5 мл 5% раствора уксусной кислоты и 1г фекалий. Пробирку закрывают пробкой, раствор тщательно перемешивают, встряхивают пробирку в горизонтальном положении, отстаивают взвесь 1 мин. Затем взвесь процеживают в другую пробирку, доводя полученный объем до 6 мл (при необходимости добавляют 5% раствор уксусной кислоты). В эту пробирку добавляют 4 мл эфира, встряхивают 30с при закрытой пробке в горизонтальном положении, центрифугируют (см. выше). После центрифугирования в пробирке образуется 4 слоя: эфирный экстракт, «фекальная пробка», раствор уксусной кислоты, осадок, содержащий яйца описторхисов. Исследования осадка проводят способом, описанным выше. Уксусная кислота эмульгирует фекалии, ее удельный вес вместе с эфиром – меньше удельного веса воды, поэтому частицы фекалий поднимаются вверх, образуя пробку. Яйца гельминтов, обладающие большим удельным весом, выпадают в осадок. В. Комбинированные методы. 1. Метод Г.А. Котельникова и А.А.Вареничева. Данный метод был предложен авторами специально для диагностики описторхоза плотоядных животных, обладает 100%-ной эффективностью, 32 преимуществами по отношению к методам флотации и седиментации. Время исследования одной пробы – 15 мин (Котельников, 1984). Методика представляет собой комбинацию двойного обычного отстаивания (седиментации) с цетрифугированием осадка для лучшего осаждения яиц и последующей флотации яиц в растворах солей высокой плотности. В стаканчик усеченной формы кладут пробу фекалий (3г), добавляют 5-7 мл денатурированного спирта или 1-1,5г кальцинированной соды (для растворения жира и лучшего отделения яиц), растирают. Добавляют при постоянном помешивании малыми порциями воду до объема 50 мл, полученную взвесь фильтруют через металлическую или капроновую сетку в другой стакан, оставляют для отстаивания на 5 мин. Далее сливают верхний слой до осадка, доводят полученный объем водой до 50 мл, снова отстаивают 5 мин. После этого опять сливают надосадочную жидкость, а осадок полностью помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют 1,5-2 мин при 1000 об/мин. Жидкость сливают, а к полученному осадку добавляют флотационный раствор. В качестве флотационных растворов используют насыщенный раствор хлорида цинка (1,82), кадмия азотнокислого четырехводного (1,73, 250г/100 мл воды) или йодида калия (1,71). Пробирку взбалтывают, вновь центрифугируют при тех же режимах. С поверхности взвеси петлей снимают не менее 3-х капель на предметное стекло и микроскопируют, добавляя по 1 капле 50% водного раствора глицерина и прикрыв покровным стеклом. 2. Метод П.П. Горячева (1949). Метод предложен для диагностики описторхоза и др. описторхидозов плотоядных и человека и представляет собой применение флотационного солевого раствора для избавления осадка от грязевых частиц и седиментации тяжелых яиц в воде (частицы грязи флотируются, яйца седиментируются в чистом осадке). Для этого используется насыщенный раствор хлорида натрия и процеженная взвесь суспензии фекалий (1г) в дистиллированной воде (20-25 мл), которая осторожно, не перемешивая, вливается в цилиндр с флотационным раствором (80-100 мл). Происходит медленная диффузия между солевым 33 раствором и дистиллированной водой со взвешенными частицами фекалий, яйца описторхиса оседают на дно в течение 2-3 ч. Далее верхний слой жидкости из цилиндра отсасывают пипеткой, а осадок центрифугируют или отстаивают 15-20 ч, после чего переносят пипеткой на предметное стекло и микроскопируют. Методика громоздка, требует больших временных затрат, к тому же возможна деформация яиц в процессе ее проведения (Котельников, 1984). 8.1.2. Иммунологические методы . Известно, что эффективность паразитологических овоскопических методов прямо зависит от яйцепродукции гельминтов в период исследования и отсутствие яиц в пробах при диагностике описторхоза может быть обусловлена несколькими причинами: - отсутствие марит в местах локализации (ранняя стадия болезни); - цикличность яйцепродукции гельминта; - неравномерное распределение яиц по содержимому толстого кишечника; - низкая ИИ. Таким образом, существенным дополнениям к имеющимся каноническим паразитологическим методам диагностики описторхоза являются иммунологические тесты, имеющие широкие перспективы для ветеринарной и медицинской практики (Ткаченко, Офицеров, 2001). Они основаны на выявлении в сыворотке крови антител, специфичных к антигенам описторхиса. 1. Иммуноферментный анализ (ИФА). Чувствительность метода достаточна для детекции антител (АТ) к антигенам (АГ) описторхисов в преимагинальный и имагинальный период их развития, специфичность – зависит от степени очистки АГ и качества конъюгата АТ с ферментом, используемых для производства диагностикума. Для производства тест-систем используется очищенная фракция иммунодоминантных белков O.felineus, моноклональные АТ (МАТ) к этим белкам, МАТ к Iм и Ig, а также соответствующие конъюгаты МАТ с пероксидазой хрена (Ткаченко, Офицеров, 2001). 34 В настоящее время в медицинской практике существует 3 тест-системы для ИФА-диагностики описторхоза по 3 специфическим маркерам заболевания, вырабатываемым в разные периоды течения болезни (периоды выделения Iм, Ig, ЦИК (см. главу «Иммунитет при описторхозе)): - «описторх-Iм-стрип» - в острой фазе течения болезни, эффективность при применении – 39%; - «Тиатоп -стрип» - в хронической стадии, эффективность – 70%; -«описторх-ЦИК-стрип» - при хронической, многолетней, длительно протекающей инвазии, эффективность – 48%. Эффективность диагностики при комплексном применении всех 3-х тест систем – 98% (производство ЗАО «Вектор-Бест») (Ткаченко, Офицеров, 2001). 2. Другие иммуноферментные и серологические методы. Для диагностических исследований на описторхоз применяются также реакция иммунодиффузии в геле (РИД), относительно которой еще в 1970г было показано, что она становится положительной уже через 20 дней после заражения гельминтозом (Гиновкер и др., 1970), а также РНГА. При постановке РНГА может выявляться ложноположительная перекрестная реакция с сыворотками больных эхинококкозом и альвеококкозом (Лысенко А.Я. и др., 1982). На сегодняшний день чувствительность этих реакций при диагностике острого течения достаточно высока (РНГА – 82,4%, РИД – 74% (Лысенко А.Я. и др., 1982)), но при диагностике хронического течения заболевания они практически неэффективны (Ткаченко, Офицеров, 2001). Так, эффективность РИД в этом случае не превышает 8% (Лысенко А.Я. и др., 1982). 8.2. Исследования дополнительных хозяев. Диагностические исследования рыб – дополнительных хозяев направлены на выявление у них личиночных стадий описторхисов, а также и других описторхид – метацеркариев, инвазионных для плотоядных животных и человека. В неблагополучных районах исследованию подвергают не только свежую, но и 35 соленую, вяленую, копченую рыбу. Исследуют дорзальные (спинные) мышцы с помощью компрессориума или методом переваривания. 1. Компрессионный метод. В дорзальной части тела рыбы удаляют чешую. Кожу надрезают в 2-х направлениях: впереди спинного плавника перпендикулярно до боковой линии и от конца первого разреза вдоль боковой линии до хвостового плавника. Кожу приподнимают и отпрепаровывают, оставляя подкожную клетчатку на поверхности мышц. Делают общий срез мышц толщиной 2-4мм, который целиком или разрезав на кусочки, помещают между стекол компрессориума или раздавливают между 2-мя предметными стеклами, микроскопируют при среднем увеличении. Метацеркарии описторхиса можно заметить в срезах и макроскопически – по величине и цвету они напоминают манные крупинки (Котельников, 1984). Вяленую или копченую рыбу предварительно вымачивают в воде не менее 1 сут. В случае диагностики описторхидозов, возбудители которых локализуются на чешуе, жабрах, лучах плавников рыб (например, метагонимус, нанофиетус), пробы помещают между предметными стеклами (с нижней стороны чешуек удаляют пленку) и просветляют 50% водным раствором глицерина. 2. Метод переваривания. 10-15г мышечной ткани измельчают, заливают искусственным желудочным соком (100 мл 0,5% раствора поваренной соли, 0,5г пепсина, 0,75 мл 35% раствора соляной кислоты) в соотношении 1:10, выдерживают в термостате при Т0 37-40 0 С 2-3 ч, процеживают через марлю. Через 15-20 мин верхний слой фильтрата сливают, а осадок микроскопируют. 3. Определение жизнеспособности метацеркариев. В целях ВСЭ рыбного сырья или в научных целях бывает необходимо определить жизнеспособность метацеркариев в мышцах рыб. Для этого исследуют: 36 - изменения структуры личинок: у мертвых метацеркариев экскреторный пузырь слабопигментирован, с признаками зернистого распада, цвет цисты пожелтевший, мутноватый; - подвижность личинок в цистах: отсутствие ее после нагрева (до Т0 37-40 Сс 0 добавлением 2-3 капель желчи или 0,5% раствора трипсина) или стимуляции двигательной активности (в капле теплого физраствора препаровальными иглами освобождают личинку из наружней оболочки цисты, прикрывают покровным стеклом, слегка придавливают) говорит о гибели метацеркариев. 4. Определение видовой принадлежности описторхид, полученных на стадии метацеркария. В случае необходимости производят видовое определение по методам: - изучения морфологии метацеркария, полностью освобожденного от оболочек цисты (помещение в раствор трипсина (1 г) и поваренной соли (1%, 100 мл) при Т0 22-24 0С ; - биопробы (скармливание подопытным животным – котятам, в крайнем случае – крысам, хомякам живых метацеркариев в мясе рыб, учет результатов овоскопии или вскрытия – через 2-3 недели, при появлении марит). 9. Л Е Ч Е Н И Е. Лечение описторхоза и других описторхидозов у животных и человека разработано недостаточно и затруднено (особенно при описторхозе и др. описторхидозах с локализацией трематод в печени и поджелудочной железе). В ветеринарной практике в качестве этиотропного препарата применяют празиквантел в дозе 100 мг/кг массы тела, перорально, однократно, после 12 ч голодной диеты, собакам – с небольшим количеством фарша, кошкам – через зонд с небольшим количеством воды (Сидоркин, 2006). Применение в столь высоких дозах по отношению к терапевтической для плотоядных животных (5 мг/кг) возможно, т.к. коэффициент безопасности препарата – 200, то есть плотоядные переносят дозы, превышающие терапевтическую в 40 раз (Кузьмин, 2000). При нанофиетозе собак и кошек празиквантел (дронцит) эффективен в 37 терапевтической дозе – 5 мг/кг, перорально или подкожно (дронцит), а при парагонимозе – в дозе 25 мг/кг 2 дня подряд (……). В медицинской практике применяется аналог ветеринарного препарата празиквантела – билтрицид (75 мг/кг м.т., в 3 приема в течение 24 ч, или 60 мг/кг м.т. в сутки (Наумов и др., 2002)). Ранее для лечения плотоядных животных применяли трематодоциды гексахлорэтан (100-200 мг/кг - собакам, кошкам, 500-600 мг/кг - пушным зверям, после голодной диеты, перорально в желатиновых капсулах, однократно (Паразитология .., 1998; Кузьмин, 2000), в настоящее время гексахлорэтан снят с производства в виду его высокой токсичности), и гексахлорпараксилол (хлоксил) (400-600 мг/кг, перорально, однократно, после 12 ч голодной диеты, в смеси с мясным фаршем) (Кузьмин, 2000). Однако по данным Н.Н. Плотникова (1981), гексахлорпараксилол при описторхозе кошек оказался эффективен при даче препарата 2 дня подряд в суточной дозе 100-150 мг/кг (0,1-0,15 г/кг): при такой схеме лечения произошла гибель значительной части описторхисов в желчных протоках печени, побочных эффектов у кошек не отмечалось. Автор отмечает также хорошую переносимость кошками препарата при его однократном применении даже в дозе 6000 мг/кг (6 г/кг). Гексахлорпараксилол (гексихол, гетол, хлоксил) в настоящее время применяется в ветеринарной и медицинской практике ограниченно; установлен ряд побочных эффектов на организм (Михеев, Чернокоч, 1974). Тем не менее, ранее препарат широко использовался и для лечения описторхоза человека. По данным Н.Н. Плотникова (1969) и Н.Н. Озерецковской с соавт.(1973), его экстенсэффективность при применении в дозе 60 мг/кг/сут 5 дней подряд (в 3 приема, с молоком или водой) составила 75%. Однако эти же авторы отмечают, что молодые, неполовозрелые формы O.felineus нечувствительны к хлоксилу, а массовая гибель их от воздействия препарата вскоре после достижения половой зрелости влечет обострение 38 аллергических явлений. Таким образом, терапию с использованием хлоксила рекомендовано проводить не ранее, чем через 1,5 мес после заражения. Отмечена эффективность хлоксила и при других описторхидозах плотоядных животных и человека – клонорхозе, меторхозе, псевдамфистоматозе, нанофиетозе (Кузьмин, 2000; Плотников, Синович, 1964). Отмечена эффективность при парагонимозе плотоядных фенбендазола в дозе 50 мг/кг, ежедневно, в течение 10-14 дней. При лечении описторхоза плотоядным животным назначают полный курс симтоматической и патогенетической терапии, направленной на восстановление функций печени и поджелудочной железы, нормализацию обмена веществ, иммунного ответа и т.д. (при преимущественном поражении гепатобилиарной системы – иммуномодуляторы, цитостатики, аминохинолины, десенсибилизирующие средства, препараты калия, липотропные средства, желчегонные и спазмолитические препараты, витамины группы В, С, К,А; при выявлении панкреатического синдрома – спазмолитики и обезболивающие, ганглиоблокаторы, препараты антиферментативного действия (Контрикал), препараты, регулирующие панкреатическую секрецию (панзинорм, фестал), желчегонные, витамины (группы В, С, никотиновая кислота), показаны паранефральные и паравертебральные новокаиновые блокады (Пальцев А.И. и др., 1982). Одновременно проводится диетотерапия с применением легкоусваиваемых кормов с высокобиодоступными компонентами, витаминами, биологически активными добавками в виде антиоксидантов, пребиотиков и пр., в частности, кормление профессиональными лечебными диетическими кормами премиум-класса в течение 1-3 мес (Prescription Diet I/d (Hills), Purina Veterinary Diet–EN, Eukanuba intestinal и др.), содержащими контролируемый уровень макро- и микроэлементов, аминокислот, биодоступных протеинов, позволяющих снизить нагрузку на печень, улучшить функции ЖКТ, замедлить происходящие в печени патологические процессы, обеспечить более быстрое восстановление органа. 39 10. П Р О Ф И Л А К Т И К А. Одной из важнейших задач в борьбе с описторхозом является профилактика болезни среди животных и людей. В этой связи обезвреживанию рыбы, выловленной в очагах описторхоза, отводится ведущая роль. По данным, полученным А.М. Шумиловой (1963), был установлен временный регламент и режимы технологической обработки рыбы, обеспечивающие гибель метацеркариев: - замораживание рыбы при Т0 -20 0 С0 - за 21-60 ч, -300 С – за 5 ч, -40 0С0 – за 2-3ч; - льдо-солевое замораживание – через 14-30 дней, рассольное замораживание – через 13-19 дней, холодильный крепкий рассол – через 25 дней, теплый крепкий рассол – через 6-15 дней; - холодное копчение после предварительного посола – через 3 -14 дней, горячее копчение – за время от 40 мин до 5ч; - варка куском 10-16г – за 12-15 мин, в виде фрикаделей – за 12 мин; - жарка пластованным куском – за 20 мин, выпечка пирогов – за 40-60 мин; - вяление – через 15-35 дней. Недопустимо также скармливание необеззараженной речной рыбы собакам, кошкам, пушным зверям, свиньям. Учитывая используются зональные методы особенности распространения эпизоотологического надзора и описторхоза, экологического мониторинга, на основании данных которых определяется степень риска гельминтозооноза, мероприятий, разрабатывается включающих система противоописторхозных ветеринарно-санитарный контроль и санпросветработу. Минздравом РФ принята целевая комплексная долгосрочная программа «Описторхоз». В рамках программы необходимо осуществлять и ряд ветеринарных мероприятий (Зимин, Мачнев, 2000): - обо всех случаях выявления возбудителей описторхидозов у рыб информировать органы Госветслужбы; - в неблагополучных водоемах регулярно проводить контрольные выловы рыб и исследования на наличие метацеркариев; 40 - районным, краевым, областным и др. ветлабораториям – обеспечить прием проб рыбы и исследования на описторхоз в сроки, установленные Главным ветеринарным инспектором территории. Отчет о результатах вносится в пояснительную записку к отчету по форме 5-вет с приложением соответствующих материалов в случае обнаружения возбудителей в пробах, прошедших первичное исследование с отрицательным результатом на рынках, предприятиях, хозяйствах; - рекомендовать местным органам самоуправления запрещать любительский лов рыбы в неблагополучных рыбохозяйственных водоемах, а также контролировать выдачу лицензий на лов рыбы из неблагополучных рыбопромысловых водоемов с учетом сведений об их неблагополучии, предоставляемых Госветслужбой; - справки формы №4 и ветсвидетельства формы №2 на рыбу выдавать только после получения результатов ветсанэкспертизы; - не принимать на переработку и реализацию на рыбоперерабатывающие, торговые предприятия, предприятия общественного питания рыбу и других гидробионтов без соответствующих ветеринарных документов; - при подготовке ветеринарных врачей и специалистов-ихтиопатологов особое внимание уделять вопросам ВСЭ рыбы и рыбопродуктов для выявления возбудителей описторхидозов; - обязать районные (межрайонные), городские, областные (краевые, республиканские) ветлаборатории оказывать методическую помощь в работе ветлабораторий на рынках; - усилить контроль за аттестацией предприятий по лову, переработке, хранению и реализации рыбы и др. гидробионтов с учетом соответствия критериев технологических требований ветеринарно-санитарным нормативам; - проводить разъяснительную работу среди населения. 11. С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы. 1. Акбаев М.Ш., Есаулова Н.В. Гельминтозы плотоядных животных. Курс лекций. – М.: ФГОУ ВПО «МГАВМиБ им.К.И.Скрябина», 2004. 41 2. Беэр С.А. Гельминтозы, передаваемые через рыб // Проблемы охраны здоровья рыб в аквакультуре: Тез.докл.науч.-практ.конф., М., 21-22 ноября, 2000. – М., 2000. – С.28-30. 3. Болезни рыб. Справочник. / под ред. В.С. Осетрова.- М.: Агропромиздат, 1989. – 228с. 4. Бычков В.Г. Трудности и ошибки диагностики описторхоза и его осложнений // Вопросы патогенеза, клиники и диагностики описторхоза: Сб.науч.трудов – Л., 1982. – С. 62-65. 5. Вскрытие и патологоанатомическая диагностика болезней сельскохозяйственных животных /под ред. В.П. Шишкова, Н.А. Налетова. – М.: Колос, 1982. – С. 260-261. 6. Вьюшкова Л.А., Проскурина В.В. Опасные для человека паразиты промысловых рыб дельты Волги // Рыбоводство и рыболовство. – 2000. - №4. – С. 29-30. 7. Гиновкер И.А., Забозлаева Е.А., Доронин А.В. Реакция преципитации в геле как диагностический тест в ранней фазе описторхоза // Мед.паразитология и паразитарные болезни. – 1970. – т.39, вып.4. – С.402. 8. Горчакова Н.Г. Функционирование открытых паразитарных систем на примере описторхоза – Н.Новгород, 2003. – 170с. 9. Завойкин В.Д. Структура ареала описторхоза и задачи борьбы с инвазией // Мед.паразитология. – 1990. – №3. – С.26-30. 10. Зиганшин Р.В., Кульчиев А.А. Рентгенологическая характеристика протоков поджелудочной железы при описторхозе // Вопросы патогенеза, клиники и диагностики описторхоза: Сб.науч.трудов – Л., 1982. – С. 70-71. 11. Зимин Н.Л., Мачнев А.Н. ветеринарные мероприятия по борьбе с описторхозом и дифиллоботриозом // Проблемы охраны здоровья рыб в аквакультуре: Тез.докл.науч.-практ.конф., М., 21-22 ноября, 2000. – М., 2000. – С.63-64. 42 12. Зубков В.Г. Морфогенез холангиоэктазов при хроническом описторхозе у человека // Вопросы патогенеза, клиники и диагностики описторхоза: Сб.науч.трудов – Л., 1982. – С. 49-50. 13. Жигилева О.Н., Цой Р.М. Сравнительный анализ генетических систем паразитов и хозяев // Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке: Материалы межрегион.науч.конф., Новосибирск, 8-10 окт., 2002. – Новосибирск, 2002. – С.63-66. 14. Казьмина Н.П. Экскреторные ферменты печени при описторхозе // Вопросы патогенеза, клиники и диагностики описторхоза: Сб.науч.трудов – Л., 1982. – С. 59-62. 15. Кассирский И.А., Плотников Н.Н., Токарев Ю.Н., Лысенко Н.Я. Руководство по тропическим болезням – М.:Медицина, 1974. – С.248-260. 16. Коваленко Ф.И., Экспериментальное Черникова обоснование Е.А., новой Михелев концепции В.Ю., Шатверян становления Г.А. инвазии O.felineus у окончательного хозяина // Паразитология. – 2005. – т.39,№3. – С.257260. 17. Котельников Г.А., Малков С.Н. Ситуация по описторхозу в Камско-Вятском бассейне // Мед.паразитология. – 1991. – №2. – С.9-10. 18. Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды – М.:Колос, 1984. 19. Кривенко В.В., Филатов В.Г. Яйцепродукция описторхов в разных фазах инвазионного процесса и влияние экстремальных условий на выделение яиц паразита во внешнюю среду // Вопросы патогенеза, клиники и диагностики описторхоза: Сб.науч.трудов – Л., 1982. – С. 39-40. 20. Кузьмин А.А. Антгельминтики в ветеринарной медицине – М.: Аквариум, 2000. 21. Лысенко А.Я., Пономарева А.М., Постникова Т.Ф. Иммунологическая диагностика описторхоза // Вопросы патогенеза, клиники и диагностики описторхоза: Сб.науч.трудов – Л., 1982. – С. 53-56. 43 22. Михайлов В.Я. Сочетание описторхоза и рака поджелудочной железы // Мед.паразитология и паразитарные болезни. – 1964. – т.33, вып.4. – С.410. 23. Михеев В.И., Чернокоч З.М. Об эффективности лечения описторхоза хлоксилом // Вопросы описторхоза – Томск, 1974. – С.122-125. 24. Наумов В.А., Кузнецова В.Г., Федоров К.П. О рецидивных формах описторхоза // Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке: Материалы межрегион.науч.конф., Новосибирск, 8-10 окт., 2002. – Новосибирск, 2002. – С.129-132. 25. Новикова Т.В. Лабораторная диагностика эндопаразитозов собак и кошек – М.: аквариум, 2005. 26. Озерецковская Н.Н. актуальные проблемы описторхоза – Томск, 1986. 27. Описторхоз: теория и практика / под ред. В.П. Сергиева, С.А. Беэр – М., 1989. 28. Пальцев А.И., Финченко А.Ф., Сидорова Л.Д., Лукьянов И.В., Финченко Е.А., Долгополова Ф.И. Постописторхозные поражения гепатопанкреодуоденальной системы в практике врача-терапевта // Вопросы патогенеза, клиники и диагностики описторхоза: Сб.науч.трудов – Л., 1982. – С. 105-107. 29. Паразитология и инвазионные болезни животных /под ред. проф.М.Ш.Акбаева. – М.: КолосС, 2006. 30. Патологическая анатомия животных /под ред. проф. А.В.Жарова. - М.: КолосС, 2006.- С.588. 31. Плотников Н.Н. Современное состояние проблемы описторхоза // Работы по гельминтологии. – М.: Наука, 1981. – С.152-161. 32. Плотников Н.Н. Сравнительная эффективность лечения описторхоза человека хлоксилом при разных методах его назначения // Мед.паразитология и паразитарные болезни. – 1969. – т.38, вып.5. – С.537. 33. Плотников Н.Н., Синович Л.И. Экспериментальная терапия клонорхоза гексахлорпараксилолом // Мед.паразитология и паразитарные болезни. – 1964. – т.33, вып.3. – С.301. 44 34. Плющева Г.Л., Герасимов И.В., Дарченкова Н.Н. Влияние гидростроительства в бассейне Волги на ситуацию по описторхозу и дифиллоботриозу // Мед.паразитология. – 1994. - №3. – С.20-22. 35. Постникова Т.Ф. Клеточный и гуморальный иммунитет при описторхозе // Вопросы патогенеза, клиники и диагностики описторхоза: Сб.науч.трудов – Л., 1982. – С. 56-59. 36. Практикум по диагностике инвазионных болезней животных /под ред. проф.М.Ш.Акбаева. – М.: КолосС, 2006. 37. Ромашов Б.В., Ромашов В.А., Семенов В.А., Филимонова Л.В. Описторхоз в бассейне верхнего Дона – Воронеж: Изд-во ВГУ, 2005. – 200с. 38. СанПин 3.2.569-96. Профилактика паразитарных болезней на территории РФ. – М.: Минздрав РФ, 1997. 39. Сапожников Г.И. О некоторых возбудителях трематодозов, паразитирующих у рыб, млекопитающих и птиц // Проблемы охраны здоровья рыб в аквакультуре: Тез.докл.науч.-практ.конф., М., 21-22 ноября, 2000. – М., 2000. – С.100-103. 40. Сапожников Г.И., Седов В.А., Быков В.П., Кушалиева А.Д., Евдокимова М.И. Эпизоотическая ситуация по трематодозам, передающимся человеку и животным через рыб, в Астраханской области // Проблемы охраны здоровья рыб в аквакультуре: Тез.докл.науч.-практ.конф., М., 21-22 ноября, 2000. – М., 2000. – С.105-107. 41. Сидоркин В.А. Справочник по диагностике и терапии гельминтозов животных и птиц – М.: Аквариум, 2001. 42. Скрябин К.И. Трематоды животных и человека. Том Х1Х. – М.: Изд-во Академии наук СССР, 1961. – С.370-379. 43. Смирнова пресноводных Н.С., рыб, Акбаев М.Ш., поступающих Давыдова в г. О.Е. Инвазированность Москву, гельминтами, потенциальноопасными для человека и животных // Agricoulture and national Resourses: Abstr. The 3-rd International Iran and Russia Conf., M., Sept.18-20, 2002. – М.: МСХА им.Тимирязева, 2002. – С. 161. 45 44. Соусь С.М., Малышев Ю.Ф. Очаги описторхоза и их эволюция на юге ОбьИртышского бассейна // диагностика, профилактика и меры борьбы с болезнями сельскохозяйственных животных и птиц: Тр. Новосибирского СХИ, 1976. – Т.95. – С.82-89. 45. Старостина О.Ю., Клебановская И.А. Природноочаговые болезни человека – Омск, 1991. 46. Ткаченко Т.Н., Офицеров В.И. Описторхоз и его диагностика // Новости «Вектор-Бест», 2001. - №1(19). 47. Третьяк И.А., Исмагилова Э.Р., Сковородин Е.Н. патоморфологические изменения печени кошек при описторхозе // Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных: Материалы Всеросс.науч.-метод.конф. патологоанатомов ветеринарной медицины. – Уфа, 17-19 сент., 2003. – М., 2003. – С.315-316. 48. Шайн А.А., Горщеня Ю.Б., Гольдина Г.И. рак и описторхоз печени // Успехи гепатологии – Рига, 1973. - №4. – С. 345. 49. Шлычков А.В. Клинико-иммунологические параллели при сочетании описторхоза с неспецифическими заболеваниями // Вопросы патогенеза, клиники и диагностики описторхоза: Сб.науч.трудов – Л., 1982. – С. 96-99. 50. Шумилова А.М. Инструкция по технической обработке рыбы, пораженной личинками описторхиса, и по гельминтологическому контролю продуктов, выпускаемыми рыбзаводами // Гигиена и санитария. – 1963. - №2. – С.117-119. КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ (ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ) 1. Локализация марит O.felineus: - кишечник - желчные протоки печени и протоки поджелудочной железы - различные органы и ткани -мышцы рыб. 2. Локализация марит M.yokagawai: - кишечник - желчные протоки печени и протоки поджелудочной железы - различные органы и ткани -мышцы рыб. 46 3. Дополнительными хозяевами O.felineus являются: - пресноводные рыбы отр.окунеобразных - морские хищные рыбы - ракообразные - рыбы отр.карпообразных 4. Локализация метацеркариев O.felineus: - жабры, чешуя - мышцы ракообразных - мышцы рыб - внутренние органы плотоядных и человека 5. Локализация метацеркариев P.westermani: - жабры, чешуя - мышцы ракообразных - мышцы рыб - внутренние органы плотоядных и человека 6. Промежуточные хозяева O.felineus: - моллюски р.Viviparus - моллюски р. Yuga - моллюски р.Codiella - моллюски р. Planorbis 7. Сроки достижения половой зрелости большинства особей O.felineus в организме дефинитивного хозяина: - менее 20 дней - 20-25 дней - более 40-65 дней 8. Ареал описторхидоза, вызываемого С.sinensis: - Дальний Восток - Западная Сибирь - Дельта Волги, Европейский регион - Южная Азия 9. Основные клинические проявления хронического описторхоза: - аллергические реакции - поражения кишечника, хронический энтерит - гепатобилиарный цирроз, гепаторенальный синдром - поражения многих органов и тканей 10. Метод диагностики описторхидозов по Котельникову-Вареничеву относится: - к методам седиментации - комбинированным методам - методам гельминтоскопии - к методам флотации 11. Формалин-эфирный метод диагностики описторхидозов относится: - к методам седиментации - комбинированным методам - методам гельминтоскопии - к методам флотации 12. ИФА «Тиатоп-стрип» применяют для диагностики: - острой фазы течения описторхоза: - длительно протекающей, многолетней инвазии - хронического течения - рецидивирующего описторхоза 13. При исследовании дополнительных хозяев применяют: - метод Флотации 47 - серологические методы - гельминтоскопию - компрессионный метод 14. Препаратом выбора в современных условиях для лечения описторхидозов плотоядных животных является: - гексахлорэтан - празиквантел - хлоксил - фенбендазол 15. Основными мерами профилактики в очагах описторхидозов является: - запрет на вылов рыбы в естественных водоемах - уничтожение промежуточных хозяев в биотопах - дезинвазия внешней среды от яиц гельминтов - ВСЭ и обезвреживание рыбного сырья. Ответы на тесты. 1- 2 8-1 2-1 9-3 3-4 10 - 2 4- 3 11 - 1 5- 2 12 - 3 6- 3 13 - 4 7- 2 14 - 2 15 - 4 48 13. ПРИЛОЖЕНИЯ а Рис. 1. а – марита; б – яйцо Opisthorchis felineus. а Рис. 2. а – марита; б – яйцо Clonorchis sinensis. б б 49 Рис. 3. Яйцо Pseudoamphistomum truncatum. а Рис. 4. а – марита; б – яйцо Metagonimus yakogawai. б 50 а Рис. 5. а – марита; б – яйцо Nanophyetus salmincola. Рис. 6. Яйцо Echinochasmus perfoliatus. б 51 а б Рис. 7. а – марита; б – яйцо Paragonimus westermani. а б Рис. 8. Метацеркарии: а - Opisthorchis felineus (по Е.Г. Сидорову); б - Clonorchis sinensis (по П.С. Посохову). а б Рис. 9. Метацеркарии: а - Pseudoamphistomum truncatum (по В.И. Заболоцкому); б - Metagonimus yakogawai. 52 а б Рис. 10. Метацеркарии: а – Metorchis bilis; б - Paragonimus westermani. Рис. 11. Метацеркарий Nanophyetus salmincola (по Л.В. Филимоновой). Рис. 12. Яйцо Apophallus muehlingi 53 Рис. 13. Внешняя морфология С. inflate (a) и С. tentaculata (б): МО – устье, ON – завиток; 1 – ступенчатообразные, резко очерченные обороты раковины, 2 – крышечка, запирающая устье, 3 – пупок (узкая щель между стенкой устья и последним оборотом раковины); (по Старобогатову, 1977, Ромашову, 2005). Рис. 14. Печень, правая долька. Диффузный разрост рубцовой соединительной ткани, уходящий в глубь органа с ложными дольками и гиперплазией клеточных элементов гематогенного происхождения. Окраска по Ван Гизону пикрофуксином. Окуляр 20, объектив 7. (по В.А. Салимову, О.М. Козыревой, Ю.Ю. Пожидаеву, А.И. Цыганковой, 2008). 54 Рис. 15. Печень. Opisthorchis felineus в поперечном разрезе. Вокруг паразита полипозный разрост желчных протоков – элементы билиарного цирроза. Окраска по Ван Гизону пикро-фуксином. Окуляр 20, объектив 7. (по В.А. Салимову, О.М. Козыревой, Ю.Ю. Пожидаеву, А.И. Цыганковой, 2008). Рис. 16. Печень. В поле зрения паразит. Под указкой участок нарушения балочного строения и зернисто жировое перерождение гепатоцитов. Окраска по Ван Гизону пикро-фуксином. Окуляр 20, объектив 7. (по В.А. Салимову, О.М. Козыревой, Ю.Ю. Пожидаеву, А.И. Цыганковой, 2008). 55 Рис. 17. Печень. Участок дискомплексации с жировой декомпозицией и инфильтративным ожирением гепатоцитов. Окраска по Ван Гизону пикрофуксином. Окуляр 20, объектив 7. (по В.А. Салимову, О.М. Козыревой, Ю.Ю. Пожидаеву, А.И. Цыганковой, 2008).