АМИНОКИСЛОТНЫЙ СОСТАВ ЛИСТЬЕВ ШЕЛКОВИЦЫ БЕЛОЙ ... L.), ШЕЛКОВИЦЫ ЧЕРНОЙ (MORUS NIGRA ...

advertisement
АМИНОКИСЛОТНЫЙ СОСТАВ ЛИСТЬЕВ ШЕЛКОВИЦЫ БЕЛОЙ (MORUS ALBA
L.), ШЕЛКОВИЦЫ ЧЕРНОЙ (MORUS NIGRA L.) И ШЕЛКОВИЦЫ КРАСНОЙ
(MORUS RUBRA L.).
И.И. Селина
Пятигорский медико-фармацевтический институт – филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ
Минздрава России, г. Пятигорск
Исследование качественного и количественного состава биологически активных
соединений, в частности, аминокислот, является одной из важных задач при
исследовании растительного сырья.
Идентификацию свободных аминокислот проводили в трех образцах сырья: листья
шелковицы белой (Morus alba L.) (образец №1), листья шелковицы черной (Morus nigra
L.) (образец №2) и листья шелковицы красной (Morus rubra L.) (образец №3).
Исследование состава свободных аминокислот проводилось методом ТСХ, с
применением в качестве неподвижной фазы хроматографических пластин “Kiselgel“
размером 15х20 см, а в качестве подвижной фазы использовали смесь растворителей: нбутанол – ледяная уксусная кислота – вода в соотношении 80:40:40. Смесь
растворителей помещали в стеклянную камеру для хроматографии, которую насыщали
в течение 2-х часов [1,2].
В качестве исследуемых растворов использовали растворы экстрактов, полученных из
образцов сырья в разведенной хлористоводородной кислоте. Для этого к 0,100 г
образца. № 1,0,100 г образца №2, 0.100 г образца №3 прибавляли по 5 мл разведенной
хлористоводородной кислоты, перемешивали (исследуемый раствор).
В качестве растворов сравнения использовали 0,05 % растворы стандартных образцов
аминокислот: аргинин, аспарагиновая кислота, глицин, серин, глутаминовая кислота,
треонин, валин, метионин, триптофан, фенилаланин, тирозин, пролин, лейцин,
гистидин, серин.
Для приготовления растворов стандартных образцов 0,05 (точные массы)
соответствующих аминокислот помещали в мерные колбы вместимостью 100 мл,
прибавляли по 50 мл воды дистиллированной, перемешивали до растворения в
ультразвуковой бане при температуре 50°C и доводили до метки тем же растворителем.
На линию старта хроматографической пластины наносили по 20 мкл исследуемых
растворов и по 5 мкл рабочих стандартных образцов аминокислот. Длина пробега
растворителей 15 см. Хроматограмму высушивали при комнатной температуре в
вытяжном шкафу до полного улетучивания растворителей и опрыскивали 0.2 %
раствором нингидрина в 95 % этаноле (1,0 г нингидрина, 2,5 г ацетата кадмия, 10 мл
уксусной кислоты ледяной растворяют в 500 мл спирта этилового) и нагревали в
сушильном шкафу при температуре 100-105 °С в течение 5 минут. На хроматограммах
в исследуемых растворах после проявления 0,2 % раствором нингидрина обнаружены
окрашенные зоны[3].
В исследуемом образце №1 и №2 обнаружено 6 окрашенных зон, из которых
идентифицировано 4, в образце №3 обнаружены 5 зон, из которых идентифицированы
4. Испытание проводилось в нескольких системах растворителей. Наилучшее
разделение наблюдается в системе н-бутанол-уксусная кислота-вода (80:40:40), что
представлено в таблице 1.
Таблица 1
Результаты хроматографического исследования аминокислотного состава экстрактов
листьев шелковицы белой, черной и красной методом ТСХ-хроматографии
Образец № 1 и № 2
Образец № 3
№ зоны,
значения Rf около
1) 0,35 (розовая)
2) 0,40 (фиолетовая)
3) 0,48 (розовая)
4) 0,56 (розовая)
5) 0,60 (розовая)
6) 0,69 (розовая)
Идентифицировано
Глицин
Неидентифицировано
Глутаминовая кислота
Неидентифицировано
Метионин
Тирозин
№ зоны,
значения Rf около
1) 0,35 (розовая)
2) 0,40 (фиолетовая)
3) 0,48 (розовая)
4) 0,60 (розовая)
5) 0,69 (розовая)
Идентифицировано
Глицин
Неидентиф
Глутаминовая кислота
Метионин
Тирозин
Более точное определение аминокислотного состава в изучаемых образцах проводили
на аминокислотном анализаторе АА-33. Результаты исследования представлены в
таблице 2.
Таблица 2
Результаты определения аминокислотного состава экстрактов листьев шелковицы
белой, черной и красной
№
п/п
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
Аминокислоты
аспарагиновая кислота
треонин
серин
глутаминовая кислота
глицин
аланин
валин
метионин
изолейцин
лейцин
тирозин
фенилаланин
гистидин
лизин
аргинин
Всего:
Шелковица
черная
С, г/%
1,02
0,45
0,28
2,88
1,31
0,61
0,74
1,57
0,40
0,68
1,11
0,57
0,27
0,36
0,87
13,12
Шелковица
белая
С, г/%
0,97
0,38
0,19
2,26
1,02
0,48
0,54
1,34
0,26
0,57
0,96
0,41
0,24
0,21
0,75
10,58
Шелковица
красная
С, г/%
0,98
0,34
0,12
2,01
1,12
0,43
0,52
1,18
0,18
0,19
0,84
0,37
0,21
0,17
0,68
9,34
Выводы: в результате проведенных исследований определили содержание
аминокислот; наибольшее их содержание установлено в листьях шелковицы белой
(13,12 С, г/%). Все три объекта исследования содержат в своем составе 15 аминокислот,
из которых, в наибольшем количестве содержатся: глутаминовая кислота, глицин,
метионин и тирозин.
Литература:
1. Химический анализ лекарственных растений: Учеб.пособие для фарм. вузов /
Ладыгина Е.Я. [и др.].- М.: Высш. шк., 1983.-176 с.
2. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Е.А. Краснов [и
др.]. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 1987.-184 c.
3. Дроздова, И.Л. Аминокислотный и микроэлементный состав листьев лопуха / И.Л.
Дроздова // Фармация. – 2004.- № 3. – С.18-19.
Скачать