и в кисломолочной сыворотке «ЭМ

advertisement
РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК
СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ
ВОСТОЧНО - СИБИРСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР
ГУ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР МЕДИЦИНСКОЙ ЭКОЛОГИИ
ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ
INSTITUTE OF EPIDEMIOLOGY AND MICROBIOLOGY
EAST-SIBERIAN SCIENTIFIC CENTRE
SIBERIAN BRANCH
RUSSIAN ACADEMY OF MEDICAL SCIENCES
ул. К. Маркса, 3, 664000
Иркутск Irkutsk
Россия Russia
3,K. Marx St., 664000
Тел./ Факс: (395 2) 333445 Tel./ Fax (395 2) 333445
ОТЧЕТ О РЕЗУЛЬТАТАХ ИССЛЕДОВАНИЙ ПО
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ХАРАКТЕРИСТИКЕ И ЭФФЕКТИВНОСТИ
СУХОГО КОНЦЕНТРАТА «ЭМ-КУРУНГА» (таблетизнрованная форма) И
КИСЛОМОЛОЧНОЙ СЫВОРОТКИ «ЭМ-КУРУНГА»
Задачи исследования: 1. В экспериментальных исследованиях изучить
количественный и качественный состав микробного комплекса «ЭМ- Курунга»
(таблетки) и кисломолочной сыворотки «ЭМ-Курунга» (курунговая
сыворотка); 2. Оценить эффективность применяемых препаратов на группах
амбулаторных больных с разными клиническими проявлениями.
Материалы и методы.
I. В работе использованы:
сухой концентрат «ЭМ-Курунга» (таблетки) - 3 образца;
кисломолочная сыворотка «ЭМ-Курунга» - 3 образца;
в качестве контроля - сухая закваска «ЭМ-Курунга» (порошок) для получения
кисломолочного напитка, утвержденная по результатам санитарномикробиологического заключения от 20.01.2003 г.
Образцы препаратов для исследования представлены ООО «ЭМ- кооперация»,
изготовленные в Иркутской области, Осинский район (И.П. Иванова М.А.).
в качестве контроля - коммерческие препараты:
а)
бифидумбактерин сухой (г.Пермь, серия 421-3-1202, годен до янв 2004;
б)
лактобактерин сухой (г.Пермь, серия 405-3-0302, годен до апр 2004;
в)
биовестин-лакто (ОО Био-Веста, Новосибирск, годен до 26.07.2003).
II. Количественный учет микроорганизмов проводился методом предельных
разведений и высевом на соответствующие питательные среды.
Для определения качественного состава микроорганизмов изучались
морфологические, культуральные признаки с применением общепринятых
микробиологических методов анализа с использованием дифференциальных
питательных сред.
Для культивирования микроорганизмов применяли следующие питательные
среды: полужидкая Блаурокка, Тиогликолевая, MRS, среда Богданова с мелом,
агар Сабуро, стерильное молоко.
Количественный учет микроорганизмов производили в 1 г (суточная
доза) таблетизированной формы «ЭМ-Курунга» и в 1 мл сывороточной
курунги. Указанную навеску (4 таблетки «ЭМ-Курунги») растирали в
стерильной ступке с добавлением дистиллированной воды и осуществляли
дальнейшую работу с полученной взвесью (таблетизированная форма и сухая
закваска «Эм-Курунга» полностью не растворяются в воде и физ.растворе).
Для
идентификации
выделенных
микроорганизмов
использовались
литературные источники:
Краткий определитель Берги, 2001 г.
Методические указания МУК 4.2.999-00 от 8.02.2001.
Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Раздел
«Определение количества бифидобактерий в кисломолочных продуктах».
Микробиология молока молочных продуктов. Учебник для ВУЗов. Степаненко
JI.П., 1999.
Молочнокислые бактерии и пути их использования. - М., 1975. Квасников Е.И.,
Нестеренко О.А.
Микробиологическая диагностика дисбактериозов кишечника. - С.Петербург,
1996; Хабаровск, 1987.
Результаты исследований
I. Количественный учет наличия бифидобактерий и
лактобактерий в представленных образцах таблетизированной
«ЭМ-Курунги» и в кисломолочной сыворотке «ЭМ-Курунга» по
классической методике посева их серийных разведений на
элективные питательные среды Блаурокка и тиогликолевую.
Результаты представлены в табл.1.
Как видно из таблицы, максимальная концентрация определяемых бактерий
отмечается в препарате Биовестин-лакто (108). Однако, данный препарат
представляет собой жидкую микробную массу бифидо- и лактобактерий. В
сухих коммерческих препаратах «Бифидумбактерин» и «Лактобактерин»
(производства г.Пермь) титр бифидобактерий и лактобактерий ниж е.
Сухой таблетизированнй концентрат «ЭМ-Курунга» содержит титр бифидои лактобактерий 10 4 , т.е. такой же, как и сухая закваска «ЭМ- Курунга»
(порошок). Следует отметить массивный рост биомассы.
Кисломолочная курунговая сыворотка содержит бифидо- и лактобактерий
в титре 10 2 .
Бифидобактерии (Bifidobakterium) идентифицировались до рода согласно их
типичной клеточной морфологии и с помощью теста на активность
Ф6ФФК (фруктозо-6-фосфат-фосфокеталазы).
Род Lactobacillus первично идентифицировали по морфологии клеток и
отсутствию каталазной активности. Выделенные в чистой культуре на
твердой питательной среде MRS молочно-кислые бактерии (Грам палочки) при идентификации близки по свойствам и видам
Lactobacterium Bulgaricum, L.acidophilus, L. casei.
Молочно-кислые стрептококки определяли классическим методом путем
посева исследуемых проб таблетизированной «ЭМ-Курунги» и
курунговой сыворотки на стерильное молоко с последующим пересевом
на обезжиренное стерильное после свертывания молоко и подтверждения
наличия большого количества диплококков, цепочек разной длины,
положительно окрашенных по-Граму при микроскопировании. В
дальнейшем при высеве на плотную питательную среду Богданова с
мелом с последующей идентификацией выдленные культуры были
отнесены к роду Streptococcus. При видовой идентификации культуры
были подразделены на основании определенных признаков на виды Str.
lactis, Str. cremoris.
Дрожжи (Torolopsis) определялись на среде Сабуро в концентрации 101 102.
Таким образом, проведенные исследования убедительно показывают, что
«ЭМ-Курунга» (таблетизированная форма) имеет многокомпонентный
состав молочно-кислых бактерий. Несмотря на несколько пониженное
количественное содержание бифидо- и лактобактерий в пробах по
сравнению с коммерческими препаратами (Бифидумбактерин и
Лактобактерин), уникальность «ЭМ-Курунги» заключена в синергизме
входящих в ее состав молочнокислых бактерий. Уникальность «ЭМКурунги» проявляется с одной стороны в синергизме молочнокислых
бактерий, с одной стороны, с другой стороны, - наличием
антагонистических и бактерицидных свойств отдельных штаммов.
Таблетизированная форма «ЭМ-Курунги» может найти широкое
применение для лечения и профилактики целого ряда заболеваний, таких
как ангины, тонзиллиты стафилококковой и стрептококковой этиологии,
в стоматологической практике (кариес, воспалительные процессы).
II. ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА «ЭМКУРУНГА» (ТАБЛЕТКИ) ДЛЯ САНАЦИИ ВЗРОСЛЫХ ПРИ
ХРОНИЧЕСКИХ ТОНЗИЛЛИТАХ.
Под наблюдение были взяты и обследованы в динамике
бактериологического контроля 10 взрослых лиц, мужчин и женщин,
имеющих в анамнезе хронический тонзиллит с жалобами на частые
ангины.
Бактериологическое обследование (мазки из зева) до проведения
санации показали наличие кокковой микрофлоры (массивный рост),
которая была представлена стафилококками (St.aureus, St.epidermidis) и
стрептококками (Str.haemolyticus, Str.viridans).
В период оценки эффективности биологических препаратов
больные иных средств лечения не использовали.
Таблетизированную форму «ЭМ-КУРУНГА» больные получали в
течение 10-20 дней по схеме: утром и вечером после еды по 2 табл. (0,5
г), тщательно их разжевывая и не запивая.
Переносимость
препарата
хорошая,
тошноты,
рвоты,
диспепсических явлений не отмечалось ни в одном случае.
Проведенные бактериологические исследования (мазки из зева)
после санации у больных показали следующие результаты:
 отмечено отсутствие в посевах микробов стрептококковой группы;
 значительное количественное- снижении стафилококков (наличие
единичных колоний).
 Во всех случаях больные отмечали улучшение самочувствия.
Полученные результаты позволяют сделать вывод о целесообразности
применения таблетизированной формы «ЭМ-КУРУНГА» для санации
больных с хроническими тонзиллитами. Результаты микробиологических
исследований представлены в табл. 3.
Отсутствие полного освобождения от стафилококковой микрофлоры
делает оправданным рекомендации по более длительному приему
данного биологического препарата у больных с диагнозом хронического
тонзиллита, т.е. проведение повторного курса лечения.
Таблица 3
Бактериологические показатели у больных хроническим тонзиллитом до и
после санации «ЭМ-Курунга» (таблетки)
Результаты бактериологического исследования мазков из зева
NN
До санации
После санации
1.
St.aureus (массивный рост)
St.aureus (единичные колонии)
M.B.
2.
St.epidermidis
St.aureus (единичные колонии)
B.B.
St.aureus (массивный рост)
3.
Str.haemolyticus
St.epidermidis
А.П.
4.
С.П.
5.
А.К.
6.
М.С.
7.
А.Л.
8.
С.П.
9.
З.К.
10.
В.Л.
St.epidermidis
St.aureus
Str.viridans
St.epidermidis
St.aureus (Массивный рост)
St.aureus
Str.viridans
St.aureus
Str.haemolyticus
St.epidermidis
St.aureus
St.aureus (слабый рост)
St.aureus (изолированные колонии)
St.aureus (изолированные колонии)
St.aureus (изолированные колонии)
St.aureus (единичные колонии)
St.aureus (Массивный рост)
St.aureus (изолированные колонии)
St.aureus (Массивный рост)
St.aureus (изолированные колонии)
ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ «ЭМ-КУРУНГА» ДЛЯ
КОРРЕКЦИИ ДИСБАКТЕРИОЗА КИШЕЧНИКА
Вторая группа лиц, находящихся под наблюдением, состояла из 10
человек, взрослых лиц мужского и женского пола, имеющих
дисбактериоз кишечника I степени: количественное нарушение состава
нормальной микрофлоры и у части - качественное изменение нормальной
E.coli. Основная жалоба больных - хронические запоры, боли, метеоризм
в кишечнике.
Для санации слизистой кишечника у этой группы больных была
использована следующая схема применения препаратов «ЭМКУРУНГА»:
 таблетизированная форма «ЭМ-КУРУНГА» - по 1 т (0,25 г) 4 раза в
день;
 кисломолочный
напиток
«ЭМ-КУРУНГА»,
приготовленный
согласно инструкции в домашних условиях из сухой закваски (2 г в
пакетике) - принимать по 0,5 - 1 стакану (200 мл) перед сном.
Курс санации - 20 дней.
После окончания санации у всех больных повторно были проведены
исследования кала на дисбактериоз. Результаты бактериологических
исследований микрофлоры кишечника в динамике (до и после санации)
представлены в табл.4.
У всех больных отмечалось увеличение концентрации (титров)
бифидобактерий, лактобактерий, исчезновение атипичных форм нормальной
E.coli.
Таким образом, курунговые препараты перспективны при дисбактериозах
кишечника, как средство, корректирующее нарушения биоценоза кишечника.
Определение качества напитка «ЭМ-Курунга»
Нами были проведены исследования по определению качества напитка
из сухой закваски «ЭМ-Курунга», приготовленного в домашних условиях.
Исследовано 38 проб, предоставленных от 8 больных. Исследования
проведены на наличие бифидобактерий, лактобактерий, дрожжей и отсутствие
патогенной и условно-патогенной микрофлоры (БГКП, стафилококк).
Все пробы кисломолочного напитка «ЭМ-Курунга» соответствовали по
качественным и количественным характеристикам требованиям ТУ и СанПиН
2.3.2.1078.02., что позволяет сделать вывод об устойчивой воспроизводимости
напитка из сухой закваски, благодаря уникальному синергизму входящих в ее
состав микроорганизмов.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. Экспериментальные
исследования
показали,
что
таблетизированная форма сухого концентрата «ЭМ-Курунга»
имеет многокомпонентный состав бактерий: Bifidobacterium spp.,
Lactobacterium spp., молочнокислые стрептококки (Str.lactis,
Str.cremoris), дрожжи (Torolopsis).
2. Использование «ЭМ-Курунги» в таблетках для санации больных с
хроническими тонзиллитами при проведении бактериологического
контроля в динамике позволили выявить наличие положительного
эффекта, проявляющегося в исчезновении в посевах мазков из зева
бактерий стрептококковой группы и значительное количественное
снижение стафилококков (до единичных колоний) с улучшением
общего самочувствия обследуемых. В то же время для полного
освобождения организма от стафилококков оправданы
рекомендации по повторному курсу санации.
3. При комплексном использовании «ЭМ-Курунга» (таблетки и
кисломолочного напитка) «ЭМ-Курунга», приготовленного из сухой
закваски в домашних условиях у взрослых при кишечном дисбактериозе,
проявляющемся в снижении концентрации нормальной микрофлоры
(бифидо-, лактобактерий, нормальной кишечной палочки) и появлении
атипичных
форм
кишечной
палочки
(слабоферментативная,
лактозонегативная, гемолитические формы), у всех обследуемых
отмечалось увеличение титров бифидо- и лактобактерий, исчезновение
атипичных форм нормальной кишечной палочки.
Клинически
отмечалось
улучшение
общего
самочувствия,
нормализация стула, уменьшение метеоризма и болей в кишечнике.
Таким образом, указанные курунговые препараты перспективны для
восстановления нормальной микрофлоры толстого кишечника у
взрослых.
4. Проведение контроля качества приготовляемого в домашних
условиях кисломолочного напитка из сухой закваски «ЭМКурунга» (порошок) на наличие бифидо-, лактобактерий,
молочно-кислых стрептококков и отсутствие патогенной и
условно-патогенной микрофлоры показали соответствие
напитка по качественным и количественным характеристикам
требований ТУ и СанПиН 2.3.2.1078.02., тем самым
характеризует устойчивую воспроизводимость напитка,
благодаря уникальному синергизму входящих в его состав
микроорганизмов.
Ответственные исполнители:
Кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник
А.Г. Леонтьева
Кандидат биологических наук, зав.лаб.микроэкологии С.М. Попков а
Таблица 1
Количественный учет бифидобактерий и лактобактерий в исследуемых пробах «ЭМ-Курунги» на среде
Блаурокка и тиогликолевой (через 48 часов)
Наименование препарата
титр
Среда Блаурокка
морфология
титр
Тиогликолевая среда
морфология
104
Кисломолочная сыворотка «ЭМ-Курунга» 1 мл
Сухая закваска «ЭМ-Курунга» (порошок) 1 г
102
104
___***___
___***___
102
104
___***___
___***___
Бифидумбактерин(сухой), 1 мл = 1
доза
10 5
Типичные для бифидобактерий
скопления китайских иероглифов
10 5
Типичные полиморфные палочки
Лактобактерин(сухой), 1 мл = 1 доза
106
Грам(+)длинные палочки
106
Грам(+)длинные и короткие
палочки
108
1) скопления грам(+)
полиморфных палочек в виде
китайских иероглифов 2)грам(+)
длинные палочки
108
1)типичные бифидобактерии
2) типичные лактобактерии
Коммерческие
препараты
(контроль)
Сухой концентрат «ЭМ-Курунга» (таблетки) 1 г
1) полиморфные палочки,
скопления в виде китайских
иероглифов; 2) грам(+) длинные и
короткие палочки
Биовестин-лакто 1 мл
104
1)типичные скопления грам(+)
полиморфных палочек;
2)грам(+) длинные палочки,
коккобациллы
Таблица 2
Количественная и качественная характеристика микроорганизмов в исследуемых образцах таблетизированной «ЭМКурунги» и молочно-кислой сыворотки «ЭМ-Курунга» (КОЕ/1г (1 мл))
Образец
Bifidobacterium spp.
«Эм-Курунга»
Молочно-кислая
сыворотка «ЭМКурунга»
1,0 * 104
Lactobacillus spp.
(молочно-кислые
бактерии)
1,0 * 104
1,0 * 102
1,0 * 102
Молочно-кислые
стрептококки
(Str.laktis, Str.cremoris)
1,0 * 104
1,0 * 102
Дрожжи (Torulopsis)
1,0 * 102
1,0 * 101
Таблица 4
Микробиологическая характеристика кишечного дисбактериоза у взрослых до и после санации «ЭМ-Курунга» (таблетки)
и кисломолочным напитком «ЭМ-Курунга»
Результаты бактериологического исследования кала на дисбактериоз
До санации
После санации
NN
1.
А.С.
2.
Е.Л.
3.
С.И.
4.
А.В.
5.
У.М.
6.
В.В.
7.
О.И.
8.
В.С.
9.
М.И.
10.
А.Ф.
Бифидоб.
Лактоб.
Норм.E.coli
Атипичн.
E.coli
Патоген.м/флора
Бифидоб.
Лактоб.
Норм.E.coli
Атипичн.
E.coli
Патоген.м/флора
106
105
104
0
0
108
106
104
0
0
107
106
105
Л(-)
0
108
106
105
0
0
106
106
105
Г(+)
0
109
107
105
0
0
106
105
106
0
0
108
106
106
0
0
105
106
104
0
0
108
107
104
0
0
106
105
105
0
0
109
107
105
0
0
107
105
104
Сл.ф.
0
109
106
104
0
0
106
106
105
Сл.ф.
0
108
107
105
0
0
107
105
105
0
0
108
106
105
0
0
106
105
104
Л(-)
0
108
106
104
0
0
Скачать