Изоляция источника инфекции (изолирующий сестринский уход)

advertisement
Министерство здравоохранения и социального развития Российской
Федерации
Государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего профессионального образования
«Иркутский государственный медицинский университет»
(ГБОУ ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития России)
Т.В.СЕРОВА
ОСНОВЫ ОБЩЕЙ МИКРОБИОЛОГИИ
Учебное пособие
Иркутск
ИГМУ
2011
УДК 579(075.32)
ББК 52.64я73
С 32
Рекомендовано Методическим советом Института сестринского образования ГБОУ ВПО ИГМУ
Минздравсоцразвития России в качестве учебно-методического пособия для студентов,
обучающихся по программе СПО
№ 4 от 28 декабря 2011 г.
Автор:
Т.В.Серова
–
преподаватель
высшей
категории
кафедры
общепрофессиональных дисциплин Института сестринского образования ГБОУ
ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития России
Рецензенты:
Г.Ю. Коган –заведующая центром лабораторной
«Мечников» ГБОУ ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития России
И.Г.Балабанова – преподаватель высшей
Иркутского базового медицинского колледжа
категории
диагностики
ГБОУ
СПО
Серова Т.В.
С 32 Основы общей микробиологии : учебное пособие /Т.В.Серова; ГБОУ
ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития России.- Иркутск: ИГМУ,2011 – 40с.
Настоящее пособие рекомендовано для изучения разделов общей микробиологии и
основ инфектологии студентами 1-го курса специальности 060501«Сестринское дело» по
дисциплине «Основы микробиологии и иммунологии».
Учебно-методическое пособие предназначено для студентов при реализации программ
ФГОС среднего профессионального образования.
УДК 579(075.32)
ББК 52.64я73
© Серова Т.В.,2011
©ГБОУ ВПО ИГМУ Минзравсоцразвития России, 2011
2
Содержание
Содержание…………………………………………………………………. 3
Введение……………………………………………………………………… 4
Раздел 1. Основы общей микробиологии
Тема 1. Введение. Классификация и номенклатура микроорганизмов…. 5
Тема 2. Морфологии микроорганизмов.. Микроскопический методов
исследования…………………………………………………………………. 9
Тема 3. Физиология микроорганизмов. Микробиологические методы
исследования ………………………………………………………………… 23
Тема 4. Действие факторов внешней среды на микроорганизмы………… 30
Тема 5.Основы вирусологии .Вирусологические исследования.
Применение бактериофагов…………………………………………………. 34
Тема 6. Основы экологической микробиологии…………………………… 43
Тема 7. Микробиологические основы химиотерапии и
химиопрофилактики инфекционных болезней. Внутрибольничные
инфекции……………………………………………………………………… 54
Раздел 2. Основы инфектологии и эпидемиологии
Тема 8. Учение об инфекции………………………………………………... 71
Тема. 9. Противоэпидемические мероприятия в очаге инфекции……...… 78
Рекомендованная литература………………………………………………... 90
3
ВВЕДЕНИЕ
Микробиология относится к наукам, которые объясняют природу многих
заболеваний, решает вопросы диагностики, профилактики и лечения этих
заболеваний. Дисциплина "Основы микробиологии и иммунологии" является
достаточно сложной для изучения, поэтому данный краткий курс должен
помочь, в первую очередь студентам, на начальных этапах овладеть этими
знаниями.
Данное учебное пособие состоит из двух разделов: общая микробиология
и основы инфектологии. Каждый раздел включает
краткое изложение
материалов в виде лекции по конкретной тематике с использованием схем и
иллюстраций.
Пособие предназначено для студентов Института сестринского
образования при прохождении курса теоретических занятий по дисциплине
Основы микробиологии и иммунологии.
4
ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
Тема 1. Введение. Предмет и задачи микробиологии.
Классификация и номенклатура микроорганизмов.
Разделы темы:
Введение. Значение микроорганизмов в жизни человека.
 Предмет и задачи медицинской микробиологии.
 Роль и место микробиологии в подготовке медсестры.
 История развития медицинской микробиологии.
 Систематика и классификация микроорганизмов.

ВВЕДЕНИЕ.
ЧЕЛОВЕКА
ЗНАЧЕНИЕ
МИКРООРГАНИЗМОВ
В
ЖИЗНИ
Наша планета населена огромным числом живых существ. Одни из них
составляют макромир – это животные, растения и другие видимые
невооруженным глазом организмы. Микромир образуют мельчайшие
организмы, которые мы можем рассмотреть только с помощью специальных
оптических приборов. Микроорганизмы наиболее древняя форма жизни на
Земле, они появились 3-4 млрд. лет тому назад. Их можно обнаружить в почве,
в пыли, в воде, в воздухе, на покровах животных и растений, внутри
организмов
и
даже
в
горячих
источниках,
в
космосе.
Значение микроорганизмов
Бактерии и грибы разрушают органическое вещество и участвуют в
круговороте веществ в природе.
 Разлагая органические вещества, микроорганизмы являются причиной
порчи продуктов.
 Некоторые микроорганизмы в результате своей жизнедеятельности
разрушают человеческие строения, чем наносят огромный ущерб.
 Человек использует бактерии для очистки сточных вод.
 Человек получает с помощью микроорганизмов множество незаменимых
продуктов (хлеб и сыр, вино и кумыс, льняная пряжа).
 Некоторые
микроорганизмы являются причиной инфекционных
заболеваний человека.
 В кишечнике человека и других животных живут многие бактериисимбионты, которые приносят огромную пользу организму.
 Бактерии, живущие внутри организма, выделяют дополнительное
тепло.

5
Человек заставил микробы вырабатывать бактериальные удобрения,
антибиотики, витамины, препараты для защиты растений. Такое
техническое использование микроорганизмов называется биотехнологией.
 Методом
генетической инженерии получают многие белковые
биологические вещества, представляющие ценность для медицины.

ПРЕДМЕТ И ЗАДАЧИ МЕДИЦИНСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ
Микробиология (греч.micros – малый, лат.bios – жизнь, logos- учение) – наука,
предметом изучения которой являются микроскопические существа,
называемые микроорганизмами, или микробами, их биологические признаки,
систематика, экология, взаимоотношения с другими организмами,
населяющими нашу планету, - животными, растениями и человеком.
Медицинская микробиология и иммунология тесно связаны со всеми
медицинскими дисциплинами (инфектологией, терапией, педиатрией,
хирургией, фтизиатрией, гигиеной, фармакологией и др.). Значительно возросла
роль
микробиологии,
вирусологии
и
иммунологии
в
решении
многих проблем здравоохранения.
Цель медицинской микробиологии – глубокое изучение структуры и
важнейших биологических свойств патогенных микробов, взаимоотношения их
с организмом человека в определенных условиях природной и социальной
среды, совершенствование методов микробиологической диагностики,
разработка новых, более эффективных лечебных и профилактических
препаратов, решение такой важной проблемы, как ликвидация и
предупреждение инфекционных болезней.
РОЛЬ И МЕСТО МИКРОБИОЛОГИИ В ПОДГОТОВКЕ МЕДСЕСТРЫ
Задачи, стоящие перед студентом, по изучению материала дисциплины:
изучить биологию, классификацию, экологию паразитов человека, влияние их
на организм человека, изучить структуру и функции иммунной системы
человека. Получить представление о работе микробиологической лаборатории,
о лабораторной диагностике инфекционных болезней. Изучить назначение и
применение иммунобиологических препаратов.
ИСТОРИЯ
РАЗВИТИЯ
МЕДИЦИНСКОЙ
МИКРОБИОЛОГИИ
Медицинская микробиология развилась в результате изучения инфекционных
болезней. Историю становления медицинская микро-биология как области
медицины
можно
разделить
на
несколько
периодов.
Открытие мира микробов. Открытие невидимого мира стало возможным
6
после изобретения увеличивающего оптического устройства. Первым, кому
бесспорно удалось проникнуть в мир микробов, был Антони ван Левенгук.
Рис. 1. Левенгук Антони ван (1632-1723)
Эпоха Пастера и Коха. Середина XIX века явилась поворотным этапом в
развитии микробиологии. Луи Пастер является основоположником
микробиологии как науки. Его пионерские исследования о брожении,
выяснении роли микробов в круговороте веществ в природе и
самопроизвольном зарождении составили теоретическую базу современной
микробиологии. Пастер установил, что в определенных условиях
культивирования патогенные микробы теряют свою вирулентность. На основе
этого открытия он создает вакцины. Успехи медицинской микробиологии в
области этиологии инфекционных болезней обусловили необходимость
изучения механизмов защитных реакций организма от инфекционных агентов.
Первым ученым, показавшим, что многие клетки организма способны
захватывать и переваривать чужеродные различные элементы, в том числе и
бактерии, был И.И.Мечников. Такие клетки он назвал «фагоцитами», а
открытое
явление
«фагоцитозом».
Рядом с именем Пастера встало имя Роберта Коха, выдающегося мастера
прикладных исследований, он открыл возбудителя сибирской язвы, холеры,
туберкулеза и других микроорганизмов.
Рис. 2. Пастер Луи (1822-1895), Мечников Илья Ильич (1845-1916), Кох Роберт
(1843-1910).
7
Развитие микробиологии в первой половине XX века. Совершенствование
уже известных бактериологических методов позволило выделить новые
патогенные бактерии - бледную спирохету, лептоспиры, боррелии, риккетсии,
хламидии и др. Были открыты фильтрующиеся инфекционные агенты - вирусы,
L-формы бактерий, микоплазмы. Более интенсивно развивались прикладные
аспекты иммунологии: были разработаны многие диагностические реакции.
Широкое использование лечебных сывороток породило проблему анафилаксии
и
иммунопатологических
реакций
вообще.
Второй важной вехой этого периода явились становление и первые
сенсационные успехи химиотерапии инфекционных болезней. Ее основные
принципы заложили П.Л.Романовский и Пауль Эрлих, которого считают
основоположником химиотерапии.
Современный период развития микробиологии. На рубеже середины
столетия выход естественных наук на молекулярный уровень стимулировал
дальнейшее развитие микробиологии, вирусологии и иммунологии. Создание
электронного микроскопа сделало видимым мир вирусов и макромолекулярных
соединений. Генетика бактерий пролила свет на когда-то запутанные проблемы
их изменчивости, внесла поистине революционизирующий вклад в генетику в
целом, «вскормила» целую область биохимии, что в значительной степени
обусловило рождение молекулярной биологии. Расшифровка генома кишечной
палочки сделала возможными искусственное конструирование генов и
пересадку отдельных генов из одних клеток в другие. К настоящему времени
генная инженерия внесла принципиально новые идеи и методы в производство
широкого
спектра
биологически
активных
веществ.
В начинающемся ХХI в. микробиология составляет одно из основных
направлений медицины, открывая новые горизонты для различных ее
дисциплин.
СИСТЕМАТИКА И КЛАССИФИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ
Базовая категория (таксон) биологической классификации, отражающая
определенную стадию эволюции отдельной популяции организмов - вид.
Вид – эволюционно сложившаяся совокупность особей, имеющая единый
генотип, который в стандартных условиях проявляется сходными
морфологическими, биохимическими и другими признаками.
Принципы таксономии и номенклатуры микроорганизмов
Живые организмы (микроорганизмы)
Прокариоты:
Эубактерии
1. Грациликуты (тонкая клеточная стенка)
2. Фирмикуты (толстая клеточная стенка)
8
3. Тенерикуты (нет клеточной стенки)
Спирохеты, риккетсии, хламидии, микоплазмы, актиномицеты.
Архебактерии
4. Мендосикуты
Эукариоты: Животные
Растения
Грибы
Простейшие
Неклеточные формы жизни:
Вирусы
Прионы
Плазмиды
Категории таксономической иерархии.
Для микроорганизмов приняты следующие категории (таксоны)
таксономической иерархии (по восходящей): Вид – Род – Семейство – Порядок
–
Класс
–
Отдел
–
Царство.
Названия видов биноминальны (бинарны), то есть обозначаются двумя
словами. Первое слово обозначает Род и пишется с заглавной буквы, второе
слово
обозначает
Вид
и
пишется
со
строчной
буквы.
Специализированные термины:
Штамм - культура микроорганизмов, выделенная из определенного
конкретного источника (организма или объекта окружающей среды).
Тема 2. Морфология микроорганизмов. Микроскопический
метод исследования
Разделы темы:
Форма бактерий. Размер бактерий.
 Строение бактериальной клетки.
 Характеристика некоторых групп микроорганизмов.
 Знакомство с микробиологической лабораторией .Основные методы
выявления микроорганизмов.
 Приготовление препаратов для микроскопического исследования.
 Методы окраски мазков.
 Знакомство с микроскопической техникой, работа с биологическим
микроскопом.
 Характеристика культуры микроорганизмов по морфологическим
признакам.

ФОРМА БАКТЕРИЙ. РАЗМЕР БАКТЕРИЙ.
Отдельным видам бактерий с достаточным постоянством присущи
определенные формы и размер.
Выделяют три основные формы бактерий – шаровидные, палочковидные и
извитые.
9
Шаровидные бактерии, или кокки
Форма шаровидная или овальная.
По характеру расположения клеток в мазках выделяют:
Микрококки – отдельно расположенные клетки.
Диплококки – располагаются парами.
Стрептококки – клетки округлой или вытянутой формы, составляющие
цепочку.
Сарцины – располагаются в виде «пакетов» из 8 и более кокков.
Стафилококки – кокки, расположенные в виде грозди винограда в результате
деления в разных плоскостях.
Рис. 1. Шаровидные бактерии (энтерококки). Электронная микрофотография (ЭМ).
Палочковидные бактерии
Форма палочковидная, концы клетки могут быть заостренными,
закругленными, обрубленными, расщепленными, расширенными. Палочки
могут быть правильной и неправильной формы, в том числе ветвящиеся,
например у актиномицетов.
По характеру расположения клеток в мазках выделяют:
Монобактерии – расположены отдельными клетками.
Диплобактерии – расположены по две клетки.
Стрептобактериии – после деления образуют цепочки клеток.
Палочковидные бактерии могут образовывать споры: бациллы и клостридии.
Рис. 2. Палочковидные бактерии (кишечная
палочка). ЭМ.
10
Извитые бактерии
Форма - изогнутое тело в один или несколько оборотов.
Вибрионы – изогнутость тела не превышает одного оборота.
Спирохеты – изгибы тела в один или несколько оборотов.
Рис. 3. Извитые бактерии (холерный вибрион). ЭМ.
Размер бактерий
Микроорганизмы измеряются в микрометрах и
нанометрах.
Средние размеры бактерий – 2 – 3 х 0,3 – 0,8 мкм.
Форма и размер - важный диагностический признак.
Способность бактерий изменять свою форму и величину называется
полиморфизм.
СТРОЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ
Бактериальная клетка состоит из клеточной стенки, цитоплазматической
мембраны, цитоплазмы с включениями и так называемым нуклеоидом.
Имеются дополнительные структуры: капсула, микрокапсула, жгутики,
пили. Некоторые бактерии в неблагоприятных условиях способны образовывать споры.
Рис. 4. Строение бактериальной
клетки (схема). Сapsule - капсула; Сell
wall - клеточная стенка; Cytoplasmic
membrane - цитоплазматическая
мембрана; Mesosome - мезосома;
Flagellum - жгутик; Pili - пили;
Cytoplasma - цитоплазма; Nucleoid нуклеоид; Ribosomes - рибосомы;
Granular inclusion - включения.
11
Рис. 5. Определите форменные
элементы бактериальной клетки.
Грамположительные бактерии имеют толстую (многослойную)
клеточную стенку.
Окрашиваются по Граму в фиолетовый цвет .
Грамотрицательные бактерии имеют тонкую клеточную стенку, прикрытую
снаружи тройным липидсодержащим слоем (внешняя мембрана).
Окрашиваются по Граму в красный
цвет.
Рис. 6. Строение клеточной стенки
грамположительных (А) и грамотрицательных
(Б) бактерий (схема).
У грамположительных бактерий (А) основной
слой - пептидогликан - многослойный и пронизан
тейхоевыми кислотами (толстая клеточная
стенка); у грамотрицательных бактерий (Б) тонкий
пептидогликан и над ним расположена внешняя
мембрана, содержащая липиды (тонкая клеточная
стенка).
Тинкториальные свойства – восприимчивость микроорганизмов к
различным красителям.
12
L-формы – бактерии, полностью лишенные клеточной стенки и способные
размножаться.
Споры и спорообразование
Споры бактерий - своеобразная форма покоящихся бактерий, форма
сохранения наследственной информации в неблагоприятных условиях внешней
среды и не является способом размножения, как у грибов.
Процесс спорообразования: спорогенная зона - проспора - спора.
В благоприятных условиях споры прорастают за 4-5 часов. Образуют споры в
течение 18-20 часов.
Рис. 7. Спора внутри бактериальной клетки (ЭМ). Рис. 8. Споры сибиреязвенной
палочки (светооптическая микроскопия, СМ).
ХАРАКТЕРИСТИКА
НЕКОТОРЫХ
ГРУПП
МИКРООРГАНИЗМОВ
Спирохеты – тонкие, длинные, извитые (спиралевидной формы),
грамотрицательные бактерии. Размеры клеток 0,05-3 х 5-500 мкм. Спирохеты
имеют
наружную
мембрану
клеточной
стенки,
окружающую
протоплазматический цилиндр с цитоплазматической мембраной. Под
наружной мембраной клеточной стенки (в периплазме) расположены фибриллы
(жгутики), которые, как бы закручиваясь вокруг протоплазматического
цилиндра спирохеты, придают ей винтообразную форму.
Рис. 9. Спирохеты (ЭМ).
13
Риккетсии мелкие, грамотрицательные палочковидные бактерии (0,3-2,0 мкм),
облигатные внутриклеточные паразиты.
Рис. 10. Риккетсии (слева - структура клетки; справа - риккетсии внутри клетки).
Хламидии относятся к облигатным внутриклеточным кокковидным
грамотрицательным бактериям. Они размножаются только в живых клетках.
Вне клеток имеют сферическую форму - элементарные тельца (ЭТ), не
активны, являются инфекционными агентами. Внутриклеточная форма ретикулярные тельца (РТ).
Рис. 11. Хламидии (ЭТ - элементарные тельца; РТ - ретикулятные тельца), (фото слева,
ЭМ). Хламидии внутри клеток (фото справа, СМ).
Микоплазмы
–
мелкие
бактерии
14
(0,15-1,0
мкм),
окруженные
цитоплазматической мембраной и не имеющие клеточной стенки. Имеют
разнообразную форму: кокковидную, нитевидную, колбовидную.
Рис. 12. Микоплазмы (ЭМ).
Актиномицеты – ветвящиеся, нитевидные или палочковидные
грамположительные бактерии. Свое название они получили в связи с
образованием в пораженных тканях друз – гранул из плотно переплетенных
нитей в виде лучей, отходящих от центра и заканчивающихся колбовидными
утолщениями. Актиномицеты могут делиться путем фрагментации мицелия на
клетки, похожие на палочковидные и кокковидные бактерии. На воздушных
гифах актиномицетов могут образовываться споры, служащие для
размножения.
Рис. 13. Актиномицеты (СМ).
ЗНАКОМСТВО С МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИЕЙ
Цель микробиологических исследований - установить факт наличия или
отсутствия возбудителя в организме больного и на объектах окружающей
среды.
Объект изучения медицинских микробиологических лабораторий патогенные биологические агенты.
Задачи микробиологических исследований - идентифицировать
микроорганизмы в исследуемом материале, определить их видовую
принадлежность, а также установить чувствительность выделенных
микроорганизмов к антимикробным препаратам.
15
Основные методы выявления микроорганизмов
1.
Микроскопические методы включают приготовление мазков и
препаратов для микроскопирования. В большинстве случаев результаты
микроскопических исследований носят ориентировочный характер, так как
многие микроорганизмы лишены морфологических и тинкториальных
особенностей.
2.
Микробиологические методы позволяет точно установить факт
наличия возбудителя в исследуемом материале: включает культивирование,
выделение чистой культуры и идентификацию микроорганизмов с учетом
морфологических,
тинкториальных,
культуральных,
биохимических,
токсигенных и антигенных свойств.
3.
Биологические методы направлены на определение наличия
токсинов возбудителя в исследуемом материале и на обнаружение возбудителя,
включают заражение лабораторных животных с последующим исследованием
их.
4.
Серологические методы выявления специфических антител и
антигенов возбудителя - важный инструмент в диагностике инфекционных
заболеваний.
5.
Аллергологические методы. Антигены многих возбудителей
обладают сенсибилизирующим действием, что используют для диагностики
инфекционных заболеваний (кожно-аллергические пробы).
Оборудование микробиологической лаборатории
Для выращивания, хранения культур, стерилизации лабораторной посуды и
других целей используется следующая аппаратура.
1.
Термостат. Аппарат, в котором поддерживается постоянная
температура.
2.
Микроанаэростат. Аппарат для выращивания микроорганизмов в
анаэробных условиях.
3.
Холодильник. Используется в микробиологических лабораториях
для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, крови, вакцин,
сывороток и прочих биологически активных препаратов при температуре
около 4°С.
4.
Центрифуги. Применяются для осаждения микроорганизмов,
эритроцитов и других клеток, для разделения неоднородных жидкостей
(эмульсии, суспензии).
5.
Сушильно-стерилизационный
шкаф
(печь
Пастера).
Предназначена для воздушной стерилизации лабораторной посуды и других
материалов.
6.
Стерилизатор
паровой
(автоклав).
Предназначен
для
стерилизации паром под давлением.
16
Основные правила поведения и работы в микробиологической
лаборатории
1.
В помещение микробиологической лаборатории нельзя входить без
специальной одежды - халата и белой шапочки или косынки, сменной обуви.
2.
Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или
надевать верхнее платье на халат.
3.
В помещении бактериологической лаборатории категорически
запрещается курить, принимать пищу, хранить продукты питания.
4.
Весь материал, поступающий в лабораторию, должен
рассматриваться как инфицированный.
5.
При распаковке присланного заразного материала необходимо
соблюдать осторожность: банки, содержащие материал для исследования, при
получении обтирают снаружи дезинфицирующим раствором и ставят не прямо
на стол, а на подносы или кюветы.
6.
Переливание жидкостей, содержащих патогенных микробов,
производят над сосудом, наполненым дезинфицирующим раствором.
7.
О случаях аварии с посудой, содержащей заразный материал, или
пролевания жидкого заразного материала надо немедленно сообщить
заведующему лабораторией или его заместителю. Мероприятия по
обеззараживанию загрязненных патогенным материалом осуществляется
немедленно.
8.
Поступающий в лабораторию материал для исследования
регистрируют в специальном журнале и маркируют.
9.
По окончании работы руки, инструменты, рабочее место
обрабатывают дезинфицирующим раствором. Зараженный материал и
ненужные культуры подлежат обязательному уничтожению, по возможности в
тот же день.
Микроскопические методы исследования морфологии бактерий и
грибов
ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ
ДЛЯ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
Для приготовления препарата исследуемый материал берут из пробирки,
колбы или чашки Петри бактериологической петлей или стерильной пипеткой.
В некоторых случаях используют для этой цели препаровальные иглы.
Приготовление препарата для изучения микроорганизмов в нативном
виде.
Метод «висячей капли». Препарат готовят на покровном стекле, в центре
которого наносят одну каплю бактериальной культуры. Затем предметное
17
стекло с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином,
прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки.
Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В
правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над
лункой,
не
касаясь
ее
дна
или
края.
Для микроскопии вначале используют малый сухой объектив 8Х, под
увеличением которого находят край капли, а затем устанавливают объектив
40Х
и
исследуют
препарат.
Метод «раздавленной» капли. На поверхность обезжиренного предметного
стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и
покрывают ее покровным стеклом. Капля должна быть небольшой, не
выходящей за край покровного стекла. Микроскопируют препарат с
объективом
40Х.
После микроскопии препараты «раздавленной» капли или «висячей» капли
опускают в дезинфицирующий раствор.
Приготовление фиксированных препаратов-мазков.
Для приготовления препарата на обезжиренное предметное стекло наносят
каплю воды или изотонического раствора хлорида натрия, в которую петлей
вносят исследуемый материал и распределяют его таким образом, чтобы
получить тонкий и равномерный мазок. При таком распределении материала в
мазке при микроскопии можно увидеть изолированные бактериальные клетки.
Если исследуемый материал содержится в жидком виде, то его
непосредственно наносят петлей на предметное стекло и готовят мазок. Мазки
высушивают на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем горелки, не
давая
капле
закипать.
Для фиксации мазка предметное стекло (мазком вверх) медленно проводят 3
раза через пламя горелки. Микроорганизмы при фиксации погибают, плотно
прикрепляясь к поверхности стекла, и не смываются при дальнейшей
обработке. Более длительное нагревание может вызвать деформацию
клеточных структур. Мазки крови, мазки-отпечатки органов и тканей и в
некоторых случаях мазки из культур микроорганизмов фиксируют
погружением на 15-20 мин. в метиловый или этиловый спирт, смесь
Никифорова, сулемовый спирт и другие фиксирующие жидкости.
18
Рис. 1. Фиксация прапарата-мазка пламенем.
МЕТОДЫ ОКРАСКИ МАЗКОВ
Простой метод. Фиксированный мазок окрасить каким-либо одним
красителем, например фуксином водным (1-2 мин) или метиленовым синим (35 мин), промыть водой, высушить и микроскопировать.
Сложные методы. Последовательно нанести на препарат определенные
красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты,
кислоты и др. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и
дифференцировать одни виды микроорганизмов от других. Окрас методом
Грама является сложным методом.
Рис.2. Окрас методом Грама (схема).
На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор
генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2
мин ее снять, а краситель слить.

19
Нанести раствор Люголя на 1-2 мин.
 Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 с до прекращения
отхождения фиолетовых струек красителя.
 Промыть водой.
 Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 мин, промыть водой,
высушить и микроскопировать.

Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый
цвет,
грамотрицательные - в красный.
ЗНАКОМСТВО С МИКРОСКОПИЧЕСКОЙ ТЕХНИКОЙ.
РАБОТА С БИОЛОГИЧЕСКИМ МИКРОСКОПОМ.
Для микроскопических исследований используют несколько типов
микроскопов (биологический, люминесцентный, электронный и другие) и
специальные методы микроскопии (фазово-контрастный, темнопольный и др.
Рис. 3. Светооптический биологический
микроскоп.
При микроскопии препаратов с иммерсионным объективом следует строго
придерживаться определенного порядка в работе:
1.
на приготовленный и окрашенный мазок на предметном стекле
нанести каплю иммерсионного масла и поместить его на предметный столик,
укрепив зажимами;
2.
повернуть револьвер до отметки иммерсионного объектива Х90;
3.
осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в
каплю масла;
4.
установить
ориентировочный
фокус
при
помощи
макрометрического винта;
5.
провести
окончательную
фокусировку
препарата
микроскопическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота.
20
Рис. 4. Иммерсионный объектив (с черной полосой) погружают в каплю масла на
препарате-мазке.
По окончании работы с микроскопом необходимо вытереть масло с
иммерсионного объектива и перевести револьвер на малый объектив Х8.
ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУРЫ ПО МОРФОЛОГИЧЕСКИМ И
ТИНКТОРИАЛЬНЫМ ПРИЗНАКАМ
При микроскопии мазков изучают морфологические и тинкториальные
свойства культур бактерий: форму, структуру и размер клеток, наличие спор,
капсулы, жгутиков, пилей, расположение клеток относительно друг друга, цвет
в соответствии с использованными методами окраски, наличие и характер
подвижности.
21
Рис. 5. Стрептококки (род. Streptococcus), стафилококки (род Staphylococcus),
менингококки (род Neisseria).
Рис. 6. Кишечная палочка (род. Escherichia), дифтерийная палочка (род
Corynebacterium), микобактерии туберкулеза (род Mycobacterium).
22
Рис. 7. Возбудитель сибирской язвы (род Bacillus), возбудитель газовой гангрены
(род Clostridium).
.
Тема 3. Физиология микроорганизмов. Микробиологический
метод исследования.
Разделы темы:
Химический состав бактерий.
 Питание, дыхание, рост и размножение бактерий.
 Ферменты и пигменты бактерий.
 Принципы культивирования микроорганизмов.
 Отбор и доставка материала в лабораторию.
 Бактериологические методы исследования.
 Питательные среды.
 Методы посевов.
 Методы культивирования и выделения чистых культур бактерий.
 Идентификация бактерий.
 Принципы диагностики микозов.


ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ БАКТЕРИЙ
По химическому составу микроорганизмы мало отличаются от других живых
клеток.
Вода составляет 75-85% , в ней растворены химические вещества.
 Сухое вещество 15-25%, в состав входят органические и минеральные
соединения

23
ПИТАНИЕ, ДЫХАНИЕ, РОСТ И РАЗМНОЖЕНИЕ БАКТЕРИЙ
Питание бактерий
Поступление
в
бактериальную
клетку
питательных
веществ
осуществляется несколькими способами и зависит от концентрации веществ,
величины молекул, рН среды, проницаемости мембран и др.
По типу питания микроорганизмы делятся на:
автотрофы – синтезируют все углеродсодержащие вещества из СО2;
 гетеротрофы – в качестве источника углерода используют органические вещества;
 сапрофиты
– питаются органическими веществами отмерших
организмов;
 паразиты – живу за счет органических веществ живой клетки.

Дыхание бактерий
Дыхание, или биологическое окисление основано на окислительновосстановительных реакциях, идущих с образованием молекулы АТФ.
По отношению к молекулярному кислороду бактерии можно разделить на три
основные группы:
облигатные аэробы – могут расти только при наличии кислорода;
 облигатные анаэробы – растут на среде без кислорода, который для них
токсичен;
 факультативные анаэробы – могут расти как при кислороде, так и без
него.

Рост и размножение бактерий
Большинство прокариот размножаются бинарным делением пополам, реже
почкованием и фрагментацией.
Рис. 13. Клетка делится пополам (фото слева - вначале внутреннее содержимое
клетки делится пополам, затем образуется поперечная мембранная перегородка,
синтезируется клеточная стенка, завершающая деление). Делящиеся клетки (фото
справа).
24
Бактерии, как правило, характеризуются высокой скоростью размножения.
Время деления клетки у различных бактерий колеблется довольно в широких
пределах: от 20 минут у кишечной палочки до 14 часов у микобактерий
туберкулеза.
На плотных питательных средах бактерии образуют скопления клеток,
называемые колониями.
На жидких средах рост бактерий характеризуется образованием пленки на
поверхности, равномерного помутнения либо осадка.
ФЕРМЕНТЫ БАКТЕРИЙ
Важную роль в обмене веществ микроорганизмов играют ферменты.
Различают:
эндоферменты – локализуются в цитоплазме клеток;
 экзоферменты – выделяются в окружающую среду.

Ферменты агрессии разрушают ткань и клетки, обусловливая широкое
распространение микробов и их токсинов в инфицированной ткани.
Биохимические свойства бактерий определяются составом ферментов:
сахаролитические –расщепление углеводов;
 протеолитические – расщепление белков,
 липолитические – расщепление жиров,

и являются важным диагностиче6ским признаком при идентификации
микроорганизов.
Для многих патогенных микроорганизмов оптимальными являются
температура 37°С и рН 7,2-7,4.
Пигменты бактерий.
Многие микроорганизмы в процессе своей жизнедеятельности
синтезируют пигменты, различающиеся по цвету, химическому составу и
растворимости.
Если пигменты нерастворимы в воде, окрашивается только колонии микроба,
растущая на питательной среде, а если растворимы - окрашивается и
питательная среда. Цвет пигмента используется в качестве теста для
идентификации пигментообразующих бактерий.
Пигменты обеспечивают:

защиту от УФ радиации
25
участвуют в реакциях синтеза
 обладают антибиотическим действием.

ПРИНЦИПЫ
КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
МИКРООРГАНИЗМОВ
Большинство бактерий и грибов культивируются на естественных и
искусственных, плотных и жидких питательных средах, в оптимальных для
них условиях. На питательных средах микроорганизмы при размножении
образуют определенной морфологии колонии, что определяет их
культуральные свойства. Идентификацию бактерий в исследуемом материале
проводят на основании определения морфологических, биохимических,
культуральных и других свойств микроскопическими, микробиологическими и
другими методами исследования.
ОТБОР И ДОСТАВКА МАТЕРИАЛА В ЛАБОРАТОРИЮ
Основные правила взятия и направления материала в
микробиологическую лабораторию.
Результаты микробиологических исследований во многом зависят от
правильного выбора, соблюдения всех правил отбора материала и направления
его в лабораторию. Выбор материала определяется клинической картиной
заболевания, предполагаемой локализацией возбудителя в организме на данном
этапе и путей его выделения в окружающую среду.
1.
Материал берут в ранние сроки заболевания, до начала
антимикробной терапии в достаточном количестве.
2.
Следует исключить попадание в материал антибиотиков,
антисептиков, дезинфектантов.
3.
При заборе, хранении и направлении материала в лабораторию
строго соблюдаются правила техники бактериологической безопасности.
4.
Материал
собирают,
соблюдая
правила
асептики
для
предупреждения его возможной контаминации нормальной микрофлорой
организма больного и микроорганизмами окружающей среды. Используют
стерильные инструменты и стерильную посуду, закрывающуюся ватномарлевыми пробками. После взятия материала его в максимально короткие
сроки направляют в лабораторию. При отсутствии такой возможности
материал, за исключением ликвора, сохраняют непродолжительное время в
холодильнике при 4°С.
5.
Материал транспортируют в специальных биксах, пеналах или
металлических контейнерах, которые после использования подвергают
дезинфекции.
26
6.
В микробиологической лаборатории все остатки патологического
материала подлежат уничтожению (путем автоклавирования или сжигания).
Все материалы, направляемые в лабораторию, должны иметь
сопроводительный документ - направление на специальном бланке, где
указаны фамилия, имя, отчество больного, возраст, вид материала, дата взятия,
предполагаемый клинический диагноз и другие сведения.
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Бактериологические методы исследования - это совокупность методов
изучения свойств микроорганизмов, определения их систематического
положения. Для этого необходимо прежде всего изолировать отдельные виды
микробов и вырастить их в виде так называемых «чистых культур», а затем
идентифицировать, т.е. установить соответствие выделенных микроорганизмов
видам, описанным в специальных определителях.
Колония - это популяция микробных клеток одного вида,
сформировавшаяся в результате деления одной микробной клетки в условиях
культивирования на плотной питательной среде при оптимальной температуре.
Чистая культура - масса клеток, состоящая из микроорганизмов,
принадлежащих одному виду и полученных как потомство одной клетки.
Чистую культуру обычно получают путем пересева на стерильную
питательную среду клеток, взятых из отдельно стоящей колонии бактерий.
Культуральные свойства бактерий устанавливаются по морфологии колоний
и
особенности
роста
культуры
на
питательных
средах.
Биохимические признаки (свойства) бактерий определяются набором
ферментов,
присущих
определенному
роду,
виду,
варианту.
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАКТЕРИЙ
Питательные среды предназначены для накопления, выделения, изучения и
сохранения микроорганизмов. По составу питательные среды могут быть
синтетическими и натуральными.
По консистенции питательные среды могут быть жидкими, полужидкими (0,20,7%
агара)
и
плотными
(1,5-2%
агара).
Различают питательные среды общего назначения (универсальные) и
специальные питательные среды. Питательные среды общего назначения
пригодны для выращивания многих видов микроорганизмов и применения в
качестве основы для приготовления специальных питательных сред.
Специальные питательные среды предназначены для избирательного
культивирования определенных видов микроорганизмов, изучения их свойств и
хранения.
27
Рис. 1. Плотные питательные среды в чашках Петри.
МЕТОДЫ ПОСЕВОВ
В зависимости от цели исследования, характера посевного материала и среды
используют различные методы посева. Все они включают обязательную цель:
оградить посев от посторонних микробов, поэтому посев производят в
асептических условиях.
Для посевов на плотные питательные среды применяют шпатель,
бактериологическую петлю, иглу, тампон. При посеве проводят петлей по
поверхности среды линии, оставляя при этом клетки бактерий на среде. После
посева чашки закрывают и переворачивают их вверх дном. Надписи на чашках
делают со стороны дна, а на пробирках - в верхней части.
Рис. 2. Посев культуры на плотную питательную среду (слева); результат посева:
видны колонии бактерий (в центре и справа).
При посеве на жидкую среду петлю слегка погружают в жидкость и
растирают посевной материал на стенке пробирки, после чего смывают его
средой.
МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
И ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ БАКТЕРИЙ
Для успешного культивирования, помимо правильно подобранных сред и
правильно произведенного посева, необходимы оптимальные условия:
температура, влажность, аэрация (снабжение воздухом). Культивирование
28
анаэробов сложнее, чем аэробов, для удаления воздуха из питательной среды
используют различные способы.
Выделение отдельных видов бактерий (чистой культуры) из
исследуемого материала, содержащего, как правило, смесь различных
микроорганизмов, является одним из этапов любого бактериологического
исследования. Чистой культурой микробов получают из изолированной
микробной
колонии.
При выделении чистой культуры из крови (гемокультуры) ее предварительно
«подращивают» в жидкой среде: 10-15 мл стерильно взятой крови засевают в
100-150 мл жидкой среды. Соотношение засеваемой крови и питательной среды
1:10 не случайно - так достигается разведение крови (неразведенная кровь
губительно действует на микроорганизмы).
Этапы выделения чистой культуры бактерий
I этап (нативный материал)
Микроскопия (ориентировочное представление о микрофлоре).
Посев на плотные питательные среды (получение колоний).
II этап (изолированные колонии)
Изучение колоний (культуральные свойства бактерий).
Микроскопическое изучение микробов в окрашенном мазке
(морфологические свойства бактерий).
Посев на скошенный питательный агар для выделения чистой культуры.
III этап (чистая культура)
Определение культуральных, морфологических, биохимических
и других свойств для идентификации культуры бактерий
ИДЕНТИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ
Идентификацию выделенных бактериальных культур проводят путем
изучения морфологии бактерий, их культуральных, биохимических и других
признаков, присущих каждому виду.
А
Б
Рис. 3. А. Стрептококки (микроскопия препарата). Б. Характерный для
гемолитического стрептококка бета-гемолиз на кровяном агаре.
ПРИНЦИПЫ ДИАГНОСТИКИ МИКОЗОВ
Один из основных методов выявления возбудителей микозов - микроскопия.
29
Методы выявления возбудителей микозов: выделение возбудителя
(микологический), серологические исследования, определение нуклеиновых
кислот.
Рис. 4. Методы выявления возбудителей микозов разные, но основной микроскопия.
Тема 4. Действие факторов внешней среды на
микроорганизмы.
Разделы темы:
Влияние физических факторов на микроорганизмы.
 Действие химических факторов на микроорганизмы.
 Влияние биологических факторов на микроорганизмы.

Микроорганизмы подвержены постоянному воздействию факторов внешней
среды. Неблагоприятные воздействия могут приводить к гибели
микроорганизмов, то есть оказывать микробицидный эффект, либо подавлять
размножение микробов, оказывая статическое действие. Некоторые
воздействия оказывают избирательный эффект на отдельные виды, другие проявляют широкий спектр активности. На основе этого созданы методы
подавления жизнедеятельности микробов, которые используются в медицине,
быту, сельском хозяйстве и др.
ВЛИЯНИЕ ФИЗИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА МИКРООРГАНИЗМЫ
Температура
По отношению к температурным условиям микроорганизмы разделяют на
термофильные, психрофильные и мезофильные.
Термофильные виды. Зона оптимального роста равна 50-60°С, верхняя
зона задержки роста - 75°С. Термофилы обитают в горячих источниках,
участвуют в процессах самонагревания навоза, зерна, сена.
 Психрофильные
виды
(холодолюбивые)
растут
в
диапазоне
температур
0-10°С,
максимальная зона задержки роста
20-30°С.
К
ним
относит
большинство
сапрофитов,
обитающих в почве, пресной и
морской воде. Но есть некоторые

30
виды, например, иерсинии, психрофильные варианты клебсиелл, псевдомонад,
вызывающие заболевания у человека.
 Мезофильные виды лучше растут в пределах 20-40°С; максимальная 4345°С, минимальная 15-20°С. В окружающей среде могут переживать, но
обычно не размножаются. К ним относится большинство патогенных и
условно-патогенных микроорганизмов.
Высокая температура вызывает коагуляцию структурных белков и
ферментов микроорганизмов. Большинство вегетативных форм гибнет при
температуре 60°С в течение 30 мин, а при 80-100°С – через 1 мин. Споры
бактерий устойчивы к температуре 100°С, гибнут при 130°С и более
длительной экспозиции (до 2 ч.).
Для сохранения жизнеспособности относительно благоприятны низкие
температуры (например, ниже 0°С), безвредные для большинства микробов.
Бактерии выживают при температуре ниже –100°С; споры бактерий и вирусы
годами сохраняются в жидком азоте (до –250°С).
Влажность
При
относительной
влажности
окружающей
среды
ниже
30%
жизнедеятельность большинства бактерий прекращается. Время их отмирания
при высушивании различно (например, холерный вибрион – за 2 суток, а
микобактерии – за 90 суток). Поэтому высушивание не используют как метод
элиминации микробов с субстратов. Особой устойчивостью обладают споры
бактерий.
Широко распространено искусственное высушивание микроорганизмов,
или лиофилизация. Метод включает быстрое замораживание с последующим
высушиванием под низким (вакуумом) давлением (сухая возгонка).
Лиофильную сушку применяют для сохранения иммунобиологических
препаратов (вакцин, сывороток), а также для консервирования и длительного
сохранения культур микроорганизмов.
Влияние концентрации растворов на рост микроорганизмов опосредовано
изменением активности воды как меры доступной для организма воды. И если
содержание солей вне клетки окажется выше их концентрации в клетке, то вода
будет выходить из клетки. Угнетение патогенных бактерий хлористым натрием
обычно начинается при его концентрации около 3%.
Излучения
Солнечный свет губительно действует на микроорганизмы, исключением
являются фототрофные виды. Наибольший микробицидный эффект оказывает
коротковолновые УФ-лучи. Энергию излучения используют для дезинфекции, а
также
для
стерилизации
термолабильных
материалов.
УФ-лучи (в первую очередь коротковолновые, т.е. с длиной волны 250-270 нм)
действуют на нуклеиновые кислоты. Микробицидное действие основано на
разрыве водородных связей и образовании в молекуле ДНК димеров тимидина,
31
приводящем к появлению нежизнеспособных мутантов. Применение УФизлучения для стерилизации ограничено его низкой проницаемостью и высокой
поглотительной
активностью
воды
и
стекла.
Рентгеновское и g-излучение в больших дозах также вызывает гибель
микробов. Облучение вызывает образование
свободных радикалов,
разрушающих нуклеиновые кислоты и белки с последующей гибелью
микробных клеток. Применяют для стерилизации бактериологических
препаратов, изделий из пластмасс.
Микроволновое излучение применяют для быстрой повторной
стерилизации длительно хранящихся сред. Стерилизующий эффект достигается
быстрым подъемом температуры.
Ультразвук
Определенные частоты ультразвука при искусственном воздействии способны
вызывать деполимеризацию органелл микробных клеток, под действием
ультразвука газы, находящиеся в жидкой среде цитоплазмы, активируются и
внутри клетки возникает высокое давление ( до 10 000 атм). Это приводит к
разрыву клеточной оболочки и гибели клетки. Ультразвук используют для
стерилизации пищевых продуктов (молока, фруктовых соков), питьевой воды.
Давление
Бактерии относительно мало чувствительны к изменению гидростатического
давления. Повышение давления до некоторого предела не сказывается на
скорости роста обычных наземных бактерий, но в конце концов начинает
препятствовать нормальному росту и делению. Некоторые виды бактерий
выдерживают давление до 3 000 – 5 000 атм, а бактериальные споры - даже
20000атм.
В условиях глубокого вакуума субстрат высыхает и жизнь невозможна.
Фильтрование
Для удаления микроорганизмов применяют различные материалы
(мелкопористое стекло, целлюлоза, коалин); они обеспечивают эффективную
элиминацию микроорганизмов из жидкостей и газов. Фильтрацию применяют
для стерилизации жидкостей, чувствительных к температурным воздействиям,
разделения микробов и их метаболитов (экзотоксинов, ферментов), а также для
выделения вирусов.
ДЕЙСТВИЕ ХИМИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА МИКРООРГАНИЗМЫ
Способность ряда химических веществ подавлять жизнедеятельность
микроорганизмов зависит от концентрации химических веществ и времени
контакта с микробом. Дезинфектанты и антисептики дают неспецифический
микробицидный эффект; химиотерапевтические средства проявляют
избирательное противомикробное действие.
32
По механизму действия противомикробные вещества разделяются на:
а) деполимеризующие пептидогликан клеточной стенки,
б) повышающие проницаемость клеточной мембраны,
в) блокирующие те или иные биохимические реакции,
г) денатурирующие ферменты,
д) окисляющие метаболиты и ферменты микроорганизмов,
е) растворяющие липопротеиновые структуры,
ж) повреждающие генетический аппарат или блокирующие его функции.
У микроорганизмов химической деструкции прежде всего подвергаются
белки и липиды цитоплазматической мембраны, белковые молекулы жгутиков,
фимбрий, секс-пили, порины клеточной стенки грамположительных бактерий,
связывающие белки периплазмы, протеиновые капсулы, экзотоксины,
ферменты-токсины и ферменты питания. Деструкция гетерогенных полимеров
(белки, полиэфиры и др.) происходит как при действии окислителей, так и при
действии гидролизующих и детергентных антисептиков ( кислоты, щелочи,
соли двух- и поливалентных металлов и др.).
ВЛИЯНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА
МИКРООРГАНИЗМЫ
К биологическим средствам могут быть отнесены препараты, содержащие
живых особей - бактериофагов и бактерий, обладающих выраженной
конкурентной активностью по отношению к патогенным и условнопатогенным для человека и животных видам микробов. Они вводятся в
организм в жизнеспособном состоянии. Фаги и антагонисты оказывают прямое
повреждающее действие на патогенных и условно-патогенных микробов;
изготовленные из них лекарственные препараты предназначены для местного
применения, для них характерна специфичность действия на микроорганизмы и
безвредность для пациента; целью их внесения в организм человека и
животных является лечение или профилактика инфекционных заболеваний. По
механизму
действия
они
близки
к
химическим
антисептикам.
Необходимо также помнить и о молочно-кислых бактериях, которые вызывают
процесс молочно-кислого брожения. Некоторые молочно-кислые бактерии
способны синтезировать антибиотики и с их помощью подавлять развитие
болезнетворных микробов.
Препараты, содержащие бактерии (эубиотики или пробиотики):
колибактерин, лактобактерин, бифидумбактерин, бификол, микрококкобактерин,
линекс,
бактисубтил
и
другие.
Препараты, содержащие бактериофаги: бактериофаг брюшнотифозный,
бактериофаг дизентерийный, бактериофаг сальмонеллезный, бактериофаг
коли-протейный,
бактериофаг
стафилококковый,
бактериофаг
33
стрептококковый, бактериофаг пиоцианеус, бактериофаг синегнойный,
бактериофаг клебсиеллезный, пиофаг комбинированный и другие.
Тема 5. Основы вирусологии. Вирусологические исследования.
Применение бактериофагов
Разделы темы:
Морфология и структура вирионов.
 Классификация вирусов.
 Взаимодействие вируса с клеткой хозяина.
 Прионы.
 Вирусы бактерий: структура, распространение, практическое применение
в медицине.
 Культивирование вирусов.
 Лабораторные методы диагностики вирусных инфекций.
 Практическое применение бактериофагов

МОРФОЛОГИЯ И СТРУКТУРА ВИРИОНОВ
Предметом изучения медицинской вирусологии является: вирусы –
паразиты человека, их морфология, физиология, генетика, экология и др.
Вирусы – неклеточные формы жизни,
имеющие геном, окруженный белковой
оболочкой, являющиеся облигатными
паразитами. В настоящее время известны
вирусы бактерий, грибов, растений,
животных.
Внеклеточная форма - вирион - включает
в себя все составные элементы (капсид,
нуклеиновую
кислоту,
структурные
белки,
ферменты
и
др.).
Внутриклеточная форма – вирус - может
быть представлена лишь одной молекулой
нуклеиновой кислоты.
По морфологии выделяют вирусы
палочковидные,
пулевидные,
сферические,
овальные,
комбинированные. По размерам вирусы бывают от крупных (до 400 нм) до
мелких (20-30 нм).
34
Рис. 1. Морфология вирусов.
В общем виде зрелая вирусная частица (вирион) состоит из нуклеиновой
кислоты, белков и липидов – сложные вирусы (одетые), либо в его состав
входят только нуклеиновые кислоты и белки - простые вирусы (голые).
Рис. 2. Структура сложного вируса (слева); структура простого вируса (справа),
белковая оболочка - капсид, внутри находится нуклеиновая кислота; стрелками снизу
указаны вершины пентамера.
Вирусы содержат только один тип нуклеиновой кислоты, ДНК или РНК,
но не оба типа одновременно.
Капсид – белковая капсула защищающая геном. Капсид образуют
одинаковые по строению субъединицы -капсомеры, организованные в один или
два слоя по двум типам симметрии - кубическому или спиральному .
Организация по принципу спиральной симметрии придает вирусам
палочковидную форму.
Организация по принципу кубической симметрии придает вирусам
сферическую форму.
Нуклеокапсид – комплекс капсида и вирусного генома. В состав
нуклеокапсидов также входят внутренние белки, обеспечивающие правильную
упаковку генома, а также выполняющие структурную и ферментативную
функции.
35
Суперкапсид – особая оболочка, организованная двойным слоем липидов и
вирусными белками, покрывающая капсид (имеют сложные вирусы).
Рис. 3. Капсид вируса табачной мозаики построен по спиральному типу
симметрии: электонная микрофотография (слева), структура нуклеокапсида (справа).
Рис. 4. Капсид вируса гепатита А (слева) и аденовируса (справа) построены по
кубическому типу симметрии.
КЛАССИФИКАЦИЯ ВИРУСОВ
Вирусы отнесены к царству Vira. В основу классификации положен тип
нуклеиновой кислоты. Выделяют рибовирусы (РНК-содержащие вирусы) и
дезоксирибовирусы (ДНК-содержащие вирусы). Для вирусов разработаны
следующие таксономические категории
(по восходящей):
Вид - Род - Подсемейство - Семейство - Подцарство - Царство.
При систематизировании вирусов выделяют следующие основные критерии:
сходство нуклеиновых кислот, размеры, наличие или отсутствие суперкапсида,
тип симметрии нуклеокапсида, характеристика нуклеиновой кислоты и так
далее.
ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ
ВИРУСА
С
КЛЕТКОЙ
ХОЗЯИНА
(особенности вирусных инфекций)
Вирусы не способны самостоятельно размножаться. Синтез вирусных
белков и воспроизведение копий вирусного генома обеспечивают
биосинтетические
процессы
клетки-хозяина.
При
этом
белковые
макромолекулы и нуклеиновые кислоты образуются отдельно, после чего
происходит самосборка дочерних популяций. Такой тип репродукции
называется
дизъюнктивный
(разобщенный).
Реализация репродуктивного цикла в существенной степени зависит от типа
инфицирования клетки и характера взаимодействия вируса с чувствительной
(могущей быть инфицированной) клеткой.
Известны следующие типы взаимодействий «вирус-клетка».
36
Продуктивный (образуется дочерняя популяция).
 Интегративный (вирогения).
 Абортивный (дочерняя популяция не образуется).

Продуктивное взаимодействие «вирус-клетка» чаще носит литический
характер, то есть заканчивается гибелью инфицированной клетки, что
происходит после полной сборки дочерней популяции и выхода вирусов из
клетки.
Рис. 5. Репродукция ВИЧ. Вирус прикрепляется к рецепторам клетки и,
освободившись от суперкапсида, проникает в клетку. РНК вируса, проникнув в ядро,
встраивается в ДНК после того, как с помощью фермента обратной транскриптазы
РНК вируса трансформируется в ДНК. В дальнейшем на рибосомах синтезируются
вирусные белки, образующие капсид. Происходит транскрипция РНК. Формируются
вирионы, которые "одеваются" в мембрану.
37
Рис. 6. Репродукция простого
вируса.
Интегративное взаимодействие, или вирогения не приводит к гибели клетки.
Нуклеиновая кислота вируса встраивается (интегрирует) в геном клеткихозяина и в последующем функционирует как его составная часть.
Вирус, интегрированный в клеточный геном, называется провирус . При
этом вирусная частица может стать неактивной, иногда остается в клетке очень
долго, ничем не выдавая своего присутствия. Такие бессимптомные, скрытые
инфекции называются латентными. Неблагоприятные для организма
воздействия холодом, рентгеновскими лучами, химическими веществами и т.п.
может возбудить их агрессивность. Возможны периодические реактивации с
переходом в продуктивное взаимодействие «вирус-клетка», либо клетка
трансформируется, давая начало злокачественному росту (онкогенные вирусы)
.
ПРИОНЫ
Прионы - это белковые инфекционные агенты, кодирующиеся в нормальной
или мутантной форме геномом хозяина, не обладающие автономными
механизмами репликации и вызывающие в процессе развития инфекционного
процесса накопление фибриллярных белков, ассоциирующихся в амилоид.
Прионы - возбудители летальных дегенеративных изменений центральной
нервной системы человека и животных. Прионы высокоустойчивы к действию
ионизирующих и УФ-лучей, ультразвука, к высоким температурам и многим
дезинфектантам. Разрушаются под действием эфира и фенола. Прионы могут
персистировать в организме хозяина длительное время (годами и
десятилетиями)
не
вызывая
иммунного
ответа.
Прионные инфекции - категория трансмиссивных нейродегенеративных
болезней животных и человека из группы медленных вирусных инфекций.
38
ВИРУСЫ БАКТЕРИЙ
(БАКТЕРИОФАГИ)
Бактериофаги (фаги) - вирусы, обладающие способностью проникать в
бактериальные клетки, репродуцироваться в них и вызывать их лизис.
Большинство фагов имеют сперматозоидную форму. Они состоят из головки,
которая содержит нуклеиновую кислоту и отростка. Большинство из фагов
содержат
двунитевую
ДНК,
которая
замкнута
в
кольцо.
Проникновение фага в бактериальную клетку происходит путем инъекции
нуклеиновой кислоты через канал отростка.
Рис. 7. Бактериофаги
на бактерии (слева); бактериофаг вводит нуклеиновую кислоту в клетку бактерии
(справа).
Выход зрелых фагов из бактериальной клетки происходит путем «взрыва»,
зараженные бактерии лизируются (вирулентные фаги). Лизогения - тип
взаимодействия фага с бактериальной клеткой, при котором бактериофаг
встраивает свою ДНК в бактериальный геном. Фаги, вызывающие данный тип
инфекции, получили название умеренных. Фаговая ДНК, ассоциированная с
геномом
своего
хозяина,
носит
название
профаг
.
Фаги широко распространены в природе. Фаги более устойчивы к действию
физических и химических факторов, чем многие вирусы человека.
Практическое применение фагов в медицине. Препараты бактериофагов
выпускают в жидком виде, в таблетках, в форме мазей, аэрозолей и свечей и
применяют
для
лечения
и
профилактики.
Строгая специфичность бактериофагов позволяет использовать их для
фаготипирования
и
дифференцировки
бактериальных
культур
(фагодиагностика).
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВИРУСОВ
В
вирусологической
практике
для
репродукции
вирусов
с
диагностическими целями используются организмы чувствительных животных,
куриные эмбрионы и культуры клеток, полученные из нормальных и
злокачественных клеток людей и животных.
Культивирование вирусов помогает решить ряд теоретически проблем,
связанных с изучением особенностей взаимодействия "вирус-клетка". Кроме
того, решение целого ряда прикладных задач, связанных с диагностикой и
39
производством препаратов для профилактики вирусных инфекций невозможно
без накопления вируссодержащего сырья.
ЛАБОРАТОРНЫЕ
МЕТОДЫ
ДИАГНОСТИКИ
ВИРУСНЫХ
ИНФЕКЦИЙ
Различные инфекции могут проявляться в организме больного в очень
сходных симптомах, и в тоже время клиническая картина инфекции, вызванная
определенным вирусом, может быть весьма разнообразной по своей
симптоматике.
Определить возбудителя, особенно при тяжелых заболеваниях, важно и
для прогноза дальнейшего течения болезни, установления ее отличий от
неинфекционных заболеваний со сходными симптомами и выбора правильного
способа лечения. Быстрая лабораторная диагностика позволяет провести
неотложные и правильные противоэпидемические мероприятия и обнаружить
источник вирусной инфекции.
Лабораторные методы при диагностике вирусных инфекций включают:
 выделение и идентификацию возбудителя;
 обнаружение и определение титров противовирусных антител;
 обнаружение антигенов вирусов в образцах исследуемого материала;
 микроскопическое исследование препаратов исследуемого материала.
Забор материала. При заборе материала для исследований необходимо
выполнять следующие условия:
образцы следует отбирать как можно раньше либо с учетом ритма
циркуляции возбудителя;
 материал следует отбирать в объеме, достаточном для всего комплекса
исследований;
 образцы следует доставлять в лабораторию незамедлительно (!), при
относительно кратковременной транспортировке (не более 5 сут) образцы
сохраняют на льду, при более длительной - при температуре -50°С.

Выделение и культивирование вирусов
Вирусы размножаются только в живых клетках. В лаборатории их
культивируют в культурах клеток, куриных эмбрионах или организмах
чувствительных животных.
Для диагностики вирусных заболеваний применяют следующие методы:
Вирусоcкопический.
 Иммунной электронной микроскопии.
 Вирусологический.
 Серологический.

40
Иммунофлюоресцентный.
 Биологический.
 Использование ДНК-(РНК)-зондов.
 Цепная полимеразная реакция.

Рис. 1. Для лабораторной диагностики вирусных
инфекций чаще используют серологические методы исследования.
Идентификация вирусов
Идентификацию вирусов проводят качественным и количественным
определением вирусов, по морфологии вирусов и с помощью серологических
методов.
41
Рис. 2. Герпесвирус (слева), вирус гепатита В (справа) электронная микроскопия.
Рис. 3. Вирус гриппа (слева), вирус иммунодефицита человека (справа)
электронная микроскопия.
ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИОФАГОВ
В практической работе фаги применяют для:
фаготипирования бактерий, т.е. определения фаготипа по лизису
штаммов бактерий одного и того же вида типоспецифическими фагами, что
важно для маркировки исследуемых при эпидемиологическом анализе
заболеваний с целью установления их видовой принадлежности;
 фагодиагностики, заключающейся в выделении фага из организма
больного (например, из испражнений), что косвенно свидетельствует о наличии
в материале соответствующих микроорганизмов;
 фагопрофилактики
- предупреждения некоторых заболеваний
(например, дизентерии) среди лиц, находящихся в эпидемическом очаге;
 фаготерапии
- лечения некоторых инфекционных заболеваний,
вызванных, например, шигеллами, протеем, стафилококком.

42
Бактериофаги с целью терапии применяют местно путем аппликации на
раневую или ожоговую поверхность, введением в полости (брюшную,
плевральную, суставную, мочевой пузырь), через рот, а также ректально.
Соответственно способу применения препараты бактериофагов выпускают в
различных лекарственных формах –
жидком виде,
 таблетках с пектином или кислотоустойчивым покрытием,
 мазях,
 свечах,
 аэрозолях.

Рис. 4. Бактериофаг кишечной палочки (электронная фотография).
Тема 6. Основы экологической микробиологии.
Разделы темы:
Основные понятия по микроэкологии.
 Микрофлора тела здорового человека.
 Значение микрофлоры тела в жизни человека.
 Микрофлора окружающей среды.
 Основы санитарной микробиологии.

ОСНОВНЫЕ ПОНЯТИЯ ПО МИКРОЭКОЛОГИИ
Экология микроорганизмов - наука о взаимоотношениях микробов друг с
другом и с окружающей средой. В медицинской микробиологии объектом
изучения служит комплекс взаимоотношений микроорганизмов с человеком.
43
Популяция – совокупность особей одного вида, обитающих в пределах
определенного биотопа.
Биотоп – территориально ограниченный участок биосферы с
относительно однородными условиями жизни.
Микробиоценоз – сообщество популяций микроорганизмов, обитающих в
определенном биотопе.
Типы взаимоотношений микробов в биоценозах
Симбиоз - совместное длительное существование микроорганизмов в
долгоживущих сообществах. При этом обе популяции извлекают для себя
пользу.
Коменсализм - разновидность симбиоза, при которой выгоду извлекает только
один
партнер,
не
принося
видимого
вреда
другому
Паразитизм
Антагонистический симбиоз - симбиотические отношения, наносящие
хозяину более или менее выраженный вред; его крайнее проявление
паразитизм. Паразитические виды живут за счет живых тканей растений и
животных. Проникая в организм хозяина, они могут вызывать у него
заболевание, поэтому их обозначают как патогенные микроорганизмы.
Факультативные паразиты в зависимости от внешних условий могут вести
себя как паразиты, либо как сапрофиты. К ним относятся большинство условнопатогенных бактерий.
Облигатные паразиты в естественных условия размножаются только в
организме хозяина, вне организма они могут сохраняться лишь некоторое
время, не размножаясь. В организме они размножаются внеклеточно или
внутриклеточно.
Факультативно внутриклеточные паразиты лучше размножаются в
цитоплазме или ядре клеток, но могут размножаться и вне клетки
(менингококки,
гонококки,
микобактерии
туберкулеза
и
др.).
Облигатно внутриклеточные паразиты размножаются только в клетках
организма-хозяина (риккетсии, хламидии, вирусы).
Антагонизм
При антагонизме (конкуренции) происходит подавление жизнедеятельности
одной популяции другой. Формы истребления могут быть вариабельными - от
банального поглощения более мелких видов до выделения высокоспецифичных
продуктов, токсичных для конкурента (бактериоцины, антибиотики,
фитонциды, интерферон, органические и жирные кислоты и др.)
МИКРОФЛОРА ТЕЛА ЗДОРОВОГО ЧЕЛОВЕКА
44
Организм человека в норме содержит сотни видов микроорганизмов; среди
них доминируют бактерии. Вирусы и простейшие представлены значительно
меньшим числом видов.
Термин «нормальная микрофлора» объединяет микроорганизмы, более
или менее часто выделяемые из организма здорового человека. Провести
четкую границу между сапрофитами и патогенными микробами, входящими в
состав
нормальной
микрофлоры,
часто
невозможно.
Кровь и внутренние органы здорового человека и животных практически
стерильны. Не содержат микробов и некоторые полости, соприкасающиеся с
внешней средой - матка, мочевой пузырь. Быстро уничтожаются микробы в
легких. Но в ротовой полости, в носу, в кишечнике, во влагалище имеется
постоянная нормальная микрофлора, характерная для каждой области тела
(аутохтонная). При этом человек служит источником поступления в
окружающую
среду
множества
микроорганизмов.
В течение внутриутробного периода организм развивается в стерильных
условиях полости матки, и его первичное обсеменение происходит при
прохождении через родовые пути и в первые сутки при контакте с окружающей
средой. Затем в течение ряда лет после рождения формируется характерный для
определенных биотопов его организма микробный «пейзаж». Среди
нормальной микрофлоры выделяют резидентную (постоянную) облигатную
микрофлору и транзиторную (непостоянную) микрофлору, не способную к
длительному существованию в организме.
Основные микробные биотопы
Кожа
На кожных покровах микроорганизмы подвержены действию бактерицидных
факторов сального секрета, повышающих кислотность. В подобных условиях
живут преимущественно Staphylococcus epidermidis, микрококки, сарцины,
аэробные и анаэробные дифтероиды. Соблюдение элементарных правил
гигиены может уменьшить число бактерий на 90%.
Дыхательная система
В верхние дыхательные пути попадают пылевые частицы, нагруженные
микроорганизмами, большая часть которых задерживается в носо- и
ротоглотке. Здесь растут бактероиды, коринеморфные бактерии, гемофильные
палочки,
пептококки,
лактобактерии,
стафилококки,
стрептококки,
непатогенные нейссерии и др. Трахеи и бронхи обычно стерильны.
Мочеполовая система
Микробный биоценоз органов мочеполовой системы более скудны.
Верхние отделы мочевыводящих путей обычно стерильны; в нижних отделах
доминируютStaphylococcus epidermidis, негемолитические стрептококки,
дифтероиды; часто выделяют грибы родов Candida. В наружных отделах
доминируют Mycobacterium smegmatis. В микробиоценоз влагалища включены
45
молочнокислые бактерии, энтерококки,
коринебактерии, палочки Додерлайна.
стрептококки,
стафилококки,
Рис. 2. Нормофлора влагалища.
Полость рта
Ротовая полость является удобным местом для развития микроорганизмов.
Влажность, обилие питательных веществ, оптимальная температура, слабо
щелочная реакция среды являются благоприятными факторами для развития
микроорганизмов. Поэтому микрофлора полости рта чрезвычайно обильна и
разнообразна.
Среди бактерий доминируют стрептококки, составляющие 30-60% всей
микрофлоры ротоглотки. Менее аэрируемые участки колонизируют анаэробы актиномицеты, бактероиды, фузобактерии и вейлонеллы. В полости рта также
обитают спирохеты,микоплазмы, грибы рода Candida и разнообразные
простейшие.
Нормальная микрофлора ротовой полости может быть причиной
воспалительных процессов и кариеса зубов, однако, при огромном количестве
микробов в полости рта воспалительные процессы возникают сравнительно
редко. Защитное значение имеют барьерная функция слизистой оболочки и
эмали зубов, фагоцитоз.
Рис. 3. Трехдневный зубной налет (электронная
фотография).
Желудочно-кишечный тракт (ЖКТ)
Наиболее активно бактерии заселяют ЖКТ; при
этом колонизация осуществляется «по этажам».
В желудке здорового человека микробов
практически
нет,
что
вызвано
действием
желудочного сока. Тем не менее отдельные виды
46
(например, Helicobacter pylori) адаптировались к обитанию на слизистой
оболочке желудка.
Рис. 4. Хеликобактер (электронная фотография).
Верхние отделы тонкой кишки также относительно свободны от
бактерий, что связано с неблагоприятным действием щелочного рН и
пищеваритель-ных ферментов. Тем не менее в этих отделах можно обнаружить
кандиды, стрептококки и лактобациллы.
Нижние отделы тонкой и, особенно, толстая кишка - огромный резервуар
бактерий; их содержание может достигать 1012 в 1 г фекалий (30% сухой массы
кала).
Микрофлора кишечника представлена тремя основными группами.
К 1-й группе относятся грамположительные бесспоровые анаэробы бифидобактерии и грамотрицательные бактероиды, составляющие 95%
микробиоценоза.
Рис. 5. Бифидобактерии (слева) и бактероиды (справа) кишечника (световая
микроскопия).
47
2-я группа (сопутствующая микрофлора) представлена в основном
аэробами (лактобактерии, кокковая флора, Еscherichia coli) удельный вес ее
невелик и не превышает 5%. Лактобактерии и нормальная E. coli являются
синергистами бифидобактерий.
Рис. 6. Лактобактерии (слева), кокковая флора (в
центре), кишечная палочка (справа) (световая микроскопия).
В 3-ю группу включают редко встречающуюся микрофлору условнопатогенную или факультативную). Ее удельный вес не превышает 0,01-0,001%
от общего количества микробов. Представителями факультативной
микрофлоры являются протей, синегнойная палочка, стафилококк, кандида,
серрацина, цитро-, энтеро- и кампилобактерии.
Представители 2-й и 3-й групп в физиологических условиях являются
симбионтами 1-й группы, прекрасно с ней сосуществуют, не нанося вреда,
проявляя агрессивные свойства лишь при определенных условиях.
Значение микрофлоры тела для человека
1.
Барьер. Пристеночная микрофлора кишечника колонизирует
слизистую оболочку в виде микроколоний, образуя своеобразную
биологическую пленку. При этом бактерии препятствуют проникновению
внутрь организма и вредных микробов, и продуктов их жизнедеятельности.
48
2.
Защита. Нормальная микрофлора является одним из важнейших
факторов естественной резистентности (устойчивости) организма, так как
проявляет высоко антагонистическое действие по отношению к другим, в том
числе патогенным бактериям, препятствуя их размножению в организме.
3.
Метаболизм. Микрофлора, особенно толстого кишечника,
участвует в процессах пищеварения, в том числе в обмене холестерина и
желчных кислот. Важная роль микрофлоры заключается также в том, что она
обеспечивает организм человека различными витаминами, которые
синтезируются ее представителями (витамин В1, В2, В6, В12, К, никотиновая,
пантотеновая, фолиевая кислоты и др.) Эти витамины обеспечивают большую
часть потребностей в них организма. Микрофлора регулирует водно-солевой
обмен и газовый состав кишечника.
4.
Детоксикация. Микроорганизмы ингибируют выделение токсина
некоторыми микроорганизмами, принимают участие в детоксикации
попадающих из внешней среды в организм ксенобиотиков (чужеродные
вещества) и образующихся токсичных продуктов метаболизма путем их
преобразования в нетоксичные продукты, разрушают концерогенные вещества.
5.
Стимуляция
иммунной
системы.
Микрофлора
своими
антигенными факторами стимулирует развитие лимфоидной ткани организма,
образование антител и таким образом способствует поддержанию гомеостаза
слизистых оболочек.
Инфекция. Однако представители нормальной микрофлоры не всегда
приносят только пользу. При определенных условиях, в частности, при
воздействии факторов, снижающих естественную резистентность, особенно в
результате ионизирующего облучения, практически все представители
нормальной микрофлоры, за исключением бифидобактерий, могут стать
виновниками различных эндогенных инфекций, чаще всего гнойновоспалительных заболеваний с различной локализацией: ангины, менингиты,
циститы, отиты, нефриты, аппендициты, абсцессы, флегмоны и т.п.
Дисбактериоз
Состояние эубиоза - динамического равновесия микрофлоры и организма
человека может нарушаться под влиянием факторов окружающей среды:
состава и качества пищи, курения и употребления алкоголя, нормальной
перистальтики и своевременного опорожнения кишечника и мочевого пузыря,
качества пережевывания пищи и даже характера трудовой деятельности
(сидячий или иной), стрессовых воздействий, широкого и бесконтрольного
применения антимикробных препаратов, лучевой и химиотерапии. В результате
нарушается колонизационная резистентность. Аномально размножившиеся
микроорганизмы продуцируют токсичные продукты метаболизма - индол,
49
скатол, аммиак, сероводород. Такое состояние, развивающееся в результате
утраты нормальных функций микрофлоры, называется дисбактериозом или
дисбиозом (дисбиоценоз). При дисбактериозе происходят изменения
количественного соотношения и состава нормальной микрофлоры организма,
главным образом его кишечника, при котором происходит уменьшение
количества или исчезновение обычно составляющих ее микроорганизмов и
появление в большом количестве редко встречающихся или несвойственных ей
микробов, а также изменение сферы их обитания. Наиболее тяжелые формы
дисбактериозов - стафилококковый сепсис, системный кандидоз и
псевдомембранозный колит; среди всех форм доминируют поражения
микрофлоры кишечника.
Для лечения дисбактериоза используют длительное время препараты,
содержащие
представителей
нормальной
микрофлоры,
например,
бифидобактерии
(бифидумбактерин),
лактобактерии
(лактобактерин),
бифидобактерии и кишечную палочку (бификол) и др. Кроме того необходимо
соблюдать определенную диету с преобладанием в рационе молочнорастительной пищи, а также психотерапию с настроем на добрые чувства.
Рис. 7.Слизистая тонкого кишечника: сверху
биопленка, покрывающая кишку (фотография).
50
МИКРОФЛОРА ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
Микрофлора почвы
Почва - главный резервуар и естественная среда обитания
микроорганизмов, принимающих участие в процессах ее формирования и
самоочищения, а также в круговороте веществ (азота, углерода,серы) в
природе. В почве обитают бактерии, грибы, лишайники и простейшие.
В почве большинство представителей нормальной и патогенной микрофлоры
человека и животных длительно не выживают. Однако некоторые бактерии,
входящие в состав нормальной микрофлоры человека, включаются в биоценоз
почвы. В почву они попадают с фекально-бытовыми и сточными водами
различных предприятий.
В нормально функционирующей почве интенсивно протекает процесс
самоочищения, в результате чего относительно быстро перерабатываются
органические вещества в гумус и почва освобождается от несвойственных ей
микроскопических грибов и бактерий.
Аспорогенные патогенные и условно-патогенные бактерии, вирусы
выживают в течение нескольких дней, недель или месяцев; споры возбудителей
сибирской язвы, столбняка, газовой гангрены, ботулизма могут сохраняться
много лет.
Микрофлора воды
Вода - естественная среда обитания разнообразных микроорганизмов:
бактерий,
простейших,
грибов,
водорослей
и
вирусов.
В прибрежной зоне открытых водоемов, особенно вблизи крупных населенных
пунктов, вода содержит большое количество заносных микробов, в том числе
патогенных и условно-патогенных для человека, обитающих в кишечнике
животных и самого человека и возбудители кишечных инфекций (брюшного
тифа, паратифов, дизентерии, холеры, лептоспироза, энтеровирусных инфекций
и др.).
Хотя вода и неблагоприятна для существования патогенных и условнопатогенных микробов, многие из них способны переживать в ней определенное
время, а в некоторых случаях даже размножаться (холерный вибрион,
легионеллы). Споры возбудителя сибирской язвы могут сохраняться в воде
годы; многие месяцы переживают в воде энтеровирусы, сальмонеллы,
лептоспиты, вирус гепатита А; меньше (дни, недели) - возбудители дизентерии,
холеры, бруцеллеза. Условно-патогенные аспорогенные бактерии выживают в
воде
в
течение
нескольких
недель.
Основной путь самоочищения воды - конкурентная активация сапрофитической
микрофлоры, приводящая к быстрому разложению органических веществ и
уменьшению численности бактерий, особенно фекального происхождения.
51
Микрофлора воздуха
Воздух не пригоден для размножения микроорганизмов, так как в нем
недостаточно влаги и питательных веществ, а солнечная радиация и
высушивание действуют на микроорганизмы губительно. Большее количество
микроорганизмов присутствует в воздухе крупных городов, меньше - в воздухе
сельской местности. Особенно мало микроорганизмов в воздухе над лесами,
горами и морями. Воздух закрытых помещений содержит в основном
микрофлору дыхательных путей и кожи человека, многие представители
которой способны переживать в воздухе в течение времени, достаточного для
инфицирования находящихся в нем людей.
Микрофлора пищевых продуктов
Многие пищевые продукты молоко и молочные продукты, мясо и мясные
изделия, рыба, яйца, фрукты, овощи и др.) являются благоприятной средой для
размножения микроорганизмов.
Микроорганизмы могут попасть в пищевые продукты при их заготовке,
доставке, переработке и хранении. Источником этих микробов являются сырье,
воздух, вода, оборудование, люди, занятые в процессе заготовки, доставки,
переработки продуктов, а также животные (обычно грызуны), вступающие в
контакт с продуктами. Через пищевые продукты (алиментарным путем)
передаются возбудители кишечных инфекций, пищевых токсикоинфекций,
зоонозов, микозов.
Микрофлора других сред
Кроме почвы, воды, воздуха, пищевых продуктов, микроорганизмы
обнаруживаются на разнообразных предметах в окружении человека. В
медицинских учреждениях, кроме бытовых предметов, имеются также
специфические медицинские объекты (медицинский инструментарий и
оборудование, перевязочный и шовный материалы, лекарственные препараты,
растворы дезинфектантов, антисептиков, спецодежда, предметы ухода за
больными). В перечисленных объектах обнаруживаются как свободноживущие,
так и паразитические, микроорганизмы. Главным источником контаминации
(загрязнения) условно-патогенными видами микроорганизмов являются
выделения человека и реже - животных. Ряд возбудителей инфекционных
заболеваний (легионеллы, псевдомонады, протеи, клебсиелла пневмонии,
иерсинии) способны размножаться на некоторых объектах внешней среды
(ванны, душевые и др.). Другие микроорганизмы – возбудители контактных,
кишечных и капельных инфекций - сохраняются в окружающей среде в течение
определенных сроков, достаточных для передачи новому хозяину. Эти сроки
колеблются от нескольких минут (возбудители коклюша, кори, сифилиса) до
многих месяцев (возбудитель туберкулеза) и лет (споры возбудителя сибирской
язвы).
ОСНОВЫ САНИТАРНОЙ МИКРОБИОЛОГИИ
52
Санитарная микробиология - раздел медицинской микробиологии, изучающий
микроорганизмы, содержащиеся в окружающей среде и способные оказывать
неблагоприятное воздействие на здоровье человека. Она разрабатывает
микробиологические показатели гигиенического нормирования, методы
контроля эффективности обеззараживания объектов окружающей среды, а
также выявляет в объектах окружающей среды патогенные, условнопатогенные
и
санитарно-показательные
микроорганизмы.
Для оценки санитарно-гигиенического состояния различных объектов
окружающей среды, воды, пищевых продуктов и напитков проводятся
санитарно-бактериологические исследования, целевое назначение которых
состоит в определении эпидемической безопасности указанных объектов.
Выявление в них патогенных микроорганизмов служит показателем
эпидемической
опасности.
О микробной обсемененности судят по микробному числу - общему
количеству микроорганизмов, содержащихся в единице объёма или массы
исследуемого объекта ( 1 см3 воды, 1г. почвы, 1м3 воздуха) . Содержание
санитарно-показательных бактерий оценивается по двум показателям - титру и
индексу. Титром называется тот минимальный объём или масса, в которой
обнаруживаются данные бактерии; индексом - количество санитарнопоказательных бактерий, содержащихся в 1 литре жидкости, 1г. плотных
веществ,
1м3
воздуха.
К
санитарно-показательным бактериям относятся представители
облигатной микрофлоры организма человека и теплокровных животных, для
которых средой обитания являются кишечник и воздушно-дыхательные пути.
Возбудители кишечных инфекций имеют общий путь выделения (с фекалиями)
с такими санитарно-показательными бактериями, как бактерии группы
кишечной палочки - БГКП (в эту группу, кроме кишечной палочки, входят
сходные по свойствам бактерии рода Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella ),
энтерококки, клостридии перфрингенс; возбудители воздушно-капельных
инфекций имеют общий путь выделения с бактериями, постоянно обитающими
на слизистой оболочке верхних дыхательных путей, выделяющимися в
окружающую среду при кашле, чиханье, разговоре. В связи с этим в качестве
санитарно-показательных бактерий для воздуха закрытых помещений
предложены гемолитические стрептококки и золотистые стафилококки.
53
Тема 7. Микробиологические основы химиотерапии и
химиопрофилактики инфекционных болезней. Внутрибольничные
инфекции.
Разделы темы:
Антимикробные мероприятия в профилактике и лечении инфекционных
болезней.
 Определение чувствительности бактерий к антибиотикам.
 Методы
стерилизации и дезинфекции в микробиологической
лаборатории.
 Диагностика дисбактериоза.
 Принципы санитарно-бактериологического исследования.

АНТИМИКРОБНЫЕ
МЕРОПРИЯТИЯ
В
ПРОФИЛАКТИКЕ
И
ЛЕЧЕНИИ
ИНФЕКЦИОННЫХ
БОЛЕЗНЕЙ
В основе методов профилактики и борьбы с инфекционными болезнями лежат
прямые, косвенные и комплексные методы уничтожения или подавления
жизнедеятельности патогенных и условно-патогенных для человека
микроорганизмов. Главная цель проводимых мероприятий – прерывание
возможной передачи возбудителей от источника их выделения (больных или
практически здоровых носителей) к восприимчивым индивидуумам.
Прямые антимикробные методы обозначают термином микробная
деконтаминация, под которой понимают полное или частичное удаление
микроорганизмов с объектов внешней среды и биотопов человека с помощью
факторов прямого повреждающего действия. Может быть выделено два
принципиально различных типа деконтаминации:
Микробная деконтаминация
живых организмов
Микробная деконтаминация
объектов внешней среды
Стерилизация
 Дезинфекция
Антисептика
 Химиотерапия


Асептика
СТЕРИЛИЗАЦИЯ
Стерилизация – освобождение объекта внешней среды от всех
микроорганизмов (в том числе споры бактерий) с помощью физических и/или
химических способов.
Основные цели стерилизации: предупреждение заноса микробных
клеток в организм человека при медицинских вмешательствах; исключение
контаминации питательных сред и культур клеток при диагностических
54
исследованиях; предупреждение микробной биодеградации материалов, в том
числе
диагностических
и
лекарственных
средств.
Различают
следующие
методы
стерилизации:
Физические
–
термический,
радиационный
и
механический.
Химические – растворами и газами.
Термическая стерилизация предметов.
Паровой стерилизации подвергают изделия из текстиля, из резины,
стекла, некоторых полимерных материалов, питательные среды, лекарственные
препараты. Обработка насыщенным водяным паром под давлением в паровых
стерилизаторах (автоклавах) при температуре 132°С в течение 20 минут (могут
быть и другие режимы).
 Воздушной
стерилизации
(сухой
жар
в
воздушных
стерилизаторах)подвергают изделия из металла, стекла, силиконовой резины
при температуре 180°С 60 мин.
 Дробная (многоразовая) стерилизация (тиндализация) текучим паром в
автоклаве при 100°С или нагревание в водяной бане при 60-80°С применяют
при стерилизации сывороток и углеводов, некоторых лекарственных
препаратов.
 Прокаливанием на пламени горелки в течение 0,5 – 1 мин можно
стерилизовать бактериальные петли, иглы.

Кипячение, даже с содой, не может быть отнесено к стерилизации, так
как эта процедура не освобождает объект от всех микроорганизмов.
Пастеризация - щадящий способ температурной обработки, при котором
инактивируется большинство вегетативных форм бактерий, однако споры
бактерий сохраняются. Используется для обезвреживания некоторых жидких
продуктов (молока, вина, пива, соков) с целью сохранить их вкусовые качества
и ценные компоненты, а также для продления срока их хранения (60-70°С в
течение 20-30 мин и другие режимы).
Химическую
стерилизацию
используют
при
обработке
крупногабаритных изделий, приборов, а также аппаратов и термолабильных
изделий.
Для газовой («холодной») стерилизации обычно используют
герметичные контейнеры, которые заполняют парами летучих веществ:
формальдегида, смесью паров формальдегида и этилового спирта, окисью
этилена, смесью окиси этилена и бромистого метила.
 Для химической стерилизации растворами применяют отечественные
(первомур - смесь пергидроля и муравьиной кислоты, перекись водорода,
бианол, анолит и др.), импортные препараты (гигасепт, глутаровый альдегид,
дюльбак и др.).

55
Радиационный метод, или лучевую стерилизацию g-лучами, применяют
обычно на специальных установках при промышленной стерилизации изделий
однократного применения - полимерных шприцев, систем для переливания
крови, полимерных чашек Петри, пипеток и других термолабильных и хрупких
средств.
Для частичного обеспложивания воздуха в микробиологических
лабораториях, боксах и операционных применяют обработку помещения
ультрафиолетовыми лучами с помощью бактерицидных ламп различной
мощности. Поскольку при этом нет полного освобождения от микробов,
стерилизации воздуха не происходит.
Механический метод стерилизации. Стерилизацию фильтрованием
применяют в тех случаях, когда высокая температура может резко ухудшить
качество стерилизуемых жидких материалов (сыворотки, питательные среды,
реактивы, антибиотики, лекарства, бактериофаги). Стерилизация достигается
пропусканием растворов и взвесей через мелкопористые фильтры различных
типов, задерживающих только клеточные формы микробов и их споры.
Контроль объектов, подвергшихся стерилизации, как правило, не
производится, его заменяют контролем работы стерилизаторов с помощью
физических, химических и биологических способов. Для проведения
микробиологического контроля объектов, подвергшихся стерилизации,
производят посевы кусочков материала, смывов с предметов на питательные
среды, позволяющие обнаружить аэробные и анаэробные бактерии и грибы.
Отсутствие роста после 14 дней инкубации в термостате свидетельствует о
стерильности предмета.
Рис. 1. Одна из основных целей стерилизации - предупреждение заноса микробных
клеток в организм человека при медицинских вмешательствах.
ДЕЗИНФЕКЦИЯ
Дезинфекция– мероприятия направленные на уничтожение или резкое
56
подавление численности патогенных и условно-патогенных микроорганизмов
во
внешней
среде.
Для обеззараживания объектов в ЛПУ и в микробиологической лаборатории
используют механические, физические и химические методы и средства.
Механический метод дезинфекции не убивает микроорганизмы,
он основан на удалении микроорганизмов, включая патогенные и условнопатогенные, с объектов. Это достигается путем фильтрации воздуха, воды через
фильтры, изготовленные из специальных материалов (ткани, волокна,
керамические фильтры и другие); обработки твердых и мягких поверхностей
пылесосом, механической очистки объектов и др.
Физический метод дезинфекции обеспечивает гибель микроорганизмов
за счет антимикробного действия физических дезинфицирующих агентов.
К ним относятся высокая температура, ультрафиолетовое и ионизирующее
излучения.
Химический метод дезинфекции основан на применении химических
дезинфицирующих средств, содержащих активно действующие вещества (ДВ).
Процесс обеззараживания объектов сложен, его эффективность зависит
от следующих факторов:
от химической природы ДВ и его механизма действия, от концентрации
ДВ в препарате и его концентрации в рабочем растворе;
 от вида микроорганизма, являющегося возбудителем инфекции, его
устойчивости к применяемому дезинфицирующему средству и количества
на обрабатываемом объекте;
 от физико-химических свойств обрабатываемого объекта, его формы,
величины, наличия на нем загрязнений органической и неорганической
природы;
 от способа обработки объекта дезинфицирующим средством (орошение,
мытье, погружение в растворы, протирание ветошью, смоченной в дезрастворе,
обработка направленными аэрозолями поверхности, заполнение аэрозолями
герметичного помещения, газация или создание бактерицидных паров и дымов
в обрабатываемом помещении;

от времени
на микроорганизмы.

воздействия
дезинфицирующего
раствора
Контроль за дезинфекционными мероприятиями проводят
визуальным, бактериологическим, биологическим и химическим методами.
АНТИСЕПТИКА
Антисептика – совокупность способов уничтожения и подавления роста и
57
размножения потенциально опасных для здоровья человека микроорганизмов в
ранах, на коже, слизистых и полостях.
Главным методом антисептики является обработка химическими
веществами
с
преимущественно
микробостатическим
действием
(антисептиками) с учетом спектра их антимикробной активности и
чувствительности конкретных возбудителей.
Деконтаминация с помощью антисептиков предполагает подавление
патогенных и условно-патогенных микроорганизмов при условии сохранения
непатогенных видов. Исключение составляет антисептическая обработка рук
оператора и операционного поля пациента, а также ран и слизистых оболочек
иммунодефицитных лиц, когда необходимо более полное освобождение
названных биотопов от всех микроорганизмов.
Для антисептики применяют растворы кислородсодержащих препаратов,
спирты и другие вещества с дезинфицирующими свойствами.
Рис 2. Антисептика. Обработка операционного поля пациента.
ХИМИОТЕРАПИЯ
Химиотерапия – лечение инфекционных и паразитарных заболеваний
химиотерапевтическими средствами, которые избирательно подавляют
развитие и размножение инфекционных агентов в организме человека.
Антимикробные агенты действуют только на вегетативные клетки, но не на
споры или цисты.
Выбор препарата для химиотерапии определяет спектр его активности и
чувствительности к нему микроорганизмов. Препараты по специфической
активности
включают
антибактериальные,
противогрибковые,
антипротозойные и противовирусные препараты.
58
Препараты узкого спектра действия активны в отношении небольших
групп микроорганизмов.
 Препараты широкого спектра активны в отношении больших групп
микроорганизмов.

Антибактериальные, противогрибковые и антипротозойные
препараты тормозят рост либо вызывают гибель микроорганизмов.
Противовирусные препараты ингибируют репликацию вирусов, блокируя их
адсорбцию на чувствительных клетках, высвобождение вирусного генома либо
подавляя вирусспецифические синтезы.
Активность химиотерапевтических препаратов выражают в единицах
действия (ЕД) или в микрограммах (мкг).
Антибактериальные препараты проявляют бактериостатическую и/или
бактерицидную активность.
 Противогрибковые препараты проявляют фунгистатическую и/или
фунгицидную активность.
 Противовирусные препараты проявляют вирусостатическую и/или
вирулицидную активность.

К антибактериальным химиотерапевтическим средствам относят
антибиотики, сульфаниламидные препараты, синтетические антибактериальные
средства различного химического строения, противосифилитические и
противотуберкулезные
средства.
Антибиотики – химические вещества биологического происхождения
избирательно тормозящие рост и размножение или убивающие
микроорганизмы.
В соответствии с типом продуцента выделяют антибиотики, синтезируемые
грибами,
актиномицетами,
бактериями
и
другими
организмами.
Антибиотики подавляют различные процессы: синтез компонентов клеточной
стенки, функции цитоплазматической мембраны, синтез белка, транскрипцию и
синтез
нуклеиновых
кислот
микробов.
59
Рис.
3. Действие антибиотиков на бактериальную клетку.
Негативное действие антибиотиков
Токсические реакции (печень, почки, органы кроветворения).
 Дисбактериозы.
 Аллергизирующее действие.
 Иммунодепрессивные эффекты.

Сульфаниламиды антибактериальные препараты широкого спектра
действия относятся к системным бактериостатикам.
Сульфаниламиды, являясь структурными аналогами парааминобензойной
кислоты, блокируют синтез ферментов, которые катализируют синтез
пиримидиновых оснований нуклеиновых кислот. В результате подавляется рост
и размножение микроорганизмов.
АСЕПТИКА
Асептика – совокупность прямых и косвенных методов воздействия на
микроорганизмы с целью создания безмикробной зоны или зоны с резко
сниженной численностью микроорганизмов.
Асептическая практика применяется в операционных, родильных залах,
лабораторных и инфекционных боксах, в абактериальных палатах для лиц с
трасплантационными органами, в кювезах для недоношенных детей и др.
60
Рис. 4. Применение асептики.
ДЕЗИНСЕКЦИЯ
Медицинская дезинсекция – это методы, средства и способы регулирования
численности и уничтожения членистоногих – переносчиков возбудителей
инфекционных
и
паразитарных
заболеваний.
Дезинсекционные мероприятия по своему характеру разделены на
профилактические и истребительные.
К профилактическим мероприятиям относятся соблюдение правил
личной гигиены, санитарных и санитарно-технических мероприятий,
направленных на предупреждение размножения членистоногих и на защиту от
них человеческих жилищ: соблюдение чистоты в жилых и кухонных
помещениях, содержание в чистоте территории двора, уборка общественных
уборных
и
т.д.
Истребительные дезинсекционные мероприятияможно осуществлять
механическими,
физическими,
химическими,
биологическими
и
комбинированными методами.
Механические методы дезинсекции включают: удаление членистоногих
вместе с пылью и мусором при уборке территории. Удаление их из одежды,
предметов обстановки, истребление мухоловками, липкими лентами.
 Физические методы дезинсекции. Уничтожение сухим горячим
воздухом, водяным паром, кипячением, проглаживание горячим утюгом,
сжигание малоценных вещей и мусора, вымораживание помещений, УВЧ,
ультразвуком.
 Биологические
методы дезинсекции. Применение возбудителей
болезней членистоногих: бактерии, вирусы, грибы, простейшие, гельминты, а
также хищников – энтомофагов. Препараты: бактокулицид, дендробациллин,
инсектин и др.
 Химические методы дезинсекции. Применение различных средств –
ядов. Химические вещества, уничтожающие насекомых - инсектициды, клещей

61
- акарициды, яйца членистоногих - овициды, личинок - ларвициды, взрослых
членистоногих - имагоциды
ДЕРАТИЗАЦИЯ
Дератизация - система профилактических и истребительных мероприятий,
направленных на уничтожение или снижение численности грызунов, опасных в
эпидемиологическом отношении и приносящие экономический ущерб.
Эпидемиологическое значение грызунов весьма значительно, поскольку
они являются источниками возбудителей многих инфекционных и
паразитарных заболеваний человека и животных.
Профилактические мероприятия направлены на то, чтобы лишить
грызунов убежищ и затруднить им доступ к пище. Это достигается в
населенных пунктах улучшением санитарного содержания и санитарнотехнического
состояния
территорий
и
отдельных
объектов.
Истребительные мероприятия слагаются из трех основных методов:
Химический метод - это главный метод истребления грызунов,
основанный на применении отравленных приманок и газообразных веществ,
которые называются родентициды.
o
Механический метод - использование капканов или ловушек. Для
этого тщательно готовят приманки.
o
Биологический метод- использование хищников (кошки, собаки)
и культуры бактерий для создания эпизоотии в популяции крыс, приводящей к
ее полной ликвидации.
o
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ
К АНТИБИОТИКАМ.
МИКРООРГАНИЗМОВ
Циркуляция антибиотикорезистентных микроорганизмов в современный
период столь широка, что только точное определение чувствительности к
антибиотикам каждого конкретного возбудителя инфекции может обеспечить
правильный выбор препарата для химиотерапии.
Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам делятся
на 2 группы: диффузионные и методы разведения.
Определение чувствительности бактерий к антибиотикам:
диффузионные методы
 с использованием дисков с антибиотиками
 с помощью Е-тестов
методы разведения
 разведение в жидкой питательной среде (бульоне)
 разведение в агаре
62
При определении чувствительности диско-диффузионным методом на
поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию
определенной плотности (обычно эквивалентную стандарту мутности 0,5 по
McFarland) и затем помещают диски, содержащие определенное количество
антибиотика. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны
подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в
термостате при температуре 35о-37оС в течение ночи учитывают результат
путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах (рис. 1).
Рис 1. Определение чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным
методом.
культуры
вокруг
диска,
Рис. 2. Зона
пропитанного
задержки роста
антибиотиком.
Рис
3. Культура стрептококка, чувствительная (слева) и устойчивая (справа) к
антибиотику Р.
63
Определение чувствительности микроорганизма с помощью Е-теста
проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие
состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста,
содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к
минимальной (4). В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с
полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей
концентрации (МПК).
Рис 4. Определение чувствительности микроорганизмов с помощью Етестов.
Несомненным достоинством диффузионных методов является простота
тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической
лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной
работы обычно используют диско-диффузионный метод.
Методы
разведения
основаны
на
использовании
двойных
последовательных разведений концентраций антибиотика от максимальной к
минимальной (например от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д. до 0,5 мкг/мл,
0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). При этом антибиотик в различных концентрациях
вносят в жидкую питательную среду (бульон) или в агар. Затем бактериальную
суспензию определенной плотности, соответствующую стандарту мутности 0,5
по MсFarland, помещают в бульон с антибиотиком или на поверхность агара в
чашке. После инкубации в течение ночи при температуре 35о-37оС проводят
учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне
(помутнение бульона) или на поверхности агара свидетельствует о том, что
данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его
жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост
микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика
(из серии последовательных разведений), где визуально не определяется
64
бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей
концентрацией (МПК). Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл (5).
Минимальная подавляющая концентрация (МПК) - наименьшая
концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая in vitro полностью
подавляет видимый рост бактерий
Рис 5. Определение значения МПК методом разведения в жидкой питательной
среде.
Методы стерилизации и дезинфекции в микробиологической
лаборатории.
В микробиологической практике применяют различные дезинфицирующие
вещества: 0,2% раствор жавель-солида, 3-5% растворы фенола, 5-10% растворы
лизола, 1-5% растворы хлорамина, 3-6% растворы перекиси водорода, 1-5%
растворы формалина, растворы сулемы в разведении 1:1000 (0,1%), 70% спирт
и др.
Дезинфекции подвергают отработанный патологический материал (гной,
кал, моча, мокрота, кровь, спиномозговая жидкость) перед сливом его в
канализацию. Обеззараживание проводят сухой хлорной известью или 3-5%
раствором хлорамина.
Загрязненные
патологическим
материалом
или
культурами
микроорганизмов пипетки, стеклянные шпатели, предметные и покровные
стекла опускают на сутки в стеклянные банки с 0,2% раствор жавель-солида,
3% раствором фенола или перекиси водорода. Препаровальные иглы,
бактериальные петли после употребления немедленно прокаливают на огне.
65
Рис. 3. Обработка перчаток и стекол 0,2% раствором жавель-солида.
По окончании работы с заразным материалом лаборант должен обработать
дезинфицирующим раствором рабочее место и руки. Поверхность рабочего
стола протирают кусочком ваты, смоченным 3% раствором фенола. Руки
дезинфицируют 1% раствором хлорамина.
Рис. 4. Сброс патологического материала в дезинфицирующий раствор.
Выбор дезинфицирующего вещества, его концентрация и длительность
воздействия (экспозиция) зависят от биологических свойств микроба и от той
среды, в которой будет происходить контакт дезинфицирующего вещества с
патогенными микроорганизмами. Например, сулема, фенол, спирты
непригодны для обеззараживания белковых субстратов (гной, кровь, мокрота),
так как под их влиянием происходит свертывание белков, а свернувшийся
белок предохраняет микроорганизмы от воздействия дезинфицирующего
вещества.
При дезинфекции материала, инфицированного споровыми формами
микроорганизмов, применяют 5% раствор хлорамина, 1-2, 5% растворы
активированного хлорамина, 5-10% растворы формалина и другие вещества.
Дезинфекцию, которую проводят на протяжении всего дня по ходу работы,
называют текущей, а по окончании - заключительной.
Стерилизацию питательных сред осуществляют различными способами
в зависимости от тех ингредиентов, которые входят в их состав.
66
Синтетические среды и все агаровые среды, не содержащие в своем
составе нативного белка и углеводов, стерилизуют 15-20 мин в автоклаве при
температуре 115-120°С.
 Среды с углеводами и молоком, питательный желатин стерилизуют
текучим паром при температуре 100°С дробно или в автоклаве при 112°С.
 Среды, в состав которых входят белковые вещества (сыворотка крови,
асцитическая жидкость), обеспложиваются тиндализацией или фильтрованием.
 Для стерилизации питательных сред, содержащих в своем составе
нативные белки, пользуются фильтрацией через мембранные фильтры Зейтца.

Подготовленные к употреблению питательные среды проверяют на
стерильность.
Подготовка к стерилизации лабораторной посуды
Перед стерилизацией лабораторную посуду тщательно моют и сушат.
 Пробирки, флаконы, бутылки, матрацы, колбы закрывают ватномарлевыми пробками. Поверх пробки на каждый сосуд (кроме пробирок)
надевают бумажный колпачек.
 Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1-5 штук или в
пеналах.
 Пастеровские пипетки по 3-5-10-15 штук заворачивают в плотную
оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек
ваты. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец.

Рис. 5. Подготовка пробирок с тампонами перед стерилизацией (слева) и хранение
в закрывающемся шкафу ограниченный срок после стерилизации (справа).
Лабораторную посуду стерилизуют:
67
а) сухим жаром при температуре 150, 160 и 180С соответственно 2 часа, 1
час и 30 минут.
б) в автоклаве при давлении 1 атм. В течение 20-30 минут
Рис. 6. Автоклав – аппарат для стерилизации паром под давлением.
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ДИСБАКТЕРИОЗА
Дисбактериоз (дисбиоценоз) - изменение количественного соотношения и
состава нормальной микрофлоры организма, главным образом его кишечника,
при котором происходит уменьшение количества или исчезновение обычно
составляющих ее микроорганизмов и появление в большом количестве редко
встречающихся или несвойственных ей микробов.
Показания
для
бактериологической
диагностики
дисбактериоза
кишечника: длительно протекающие инфекции и расстройства, при которых не
удается
выделить
патогенные
энтеробактерии;
затяжной
период
реконвалесценции после перенесенной кишечной инфекции; дисфункции ЖКТ
на фоне или после проведенной антибиотикотерапии или у лиц, постоянно
контактирующих с антимикробными препаратами. Исследования также следует
проводить при болезнях злокачественного роста, у страдающих
диспептическими расстройствами, лиц подготавливаемых к операциям на
органах
брюшной
полости,
недоношенных
или
травмированных
новорожденных, а также при наличии бактериемий и гнойных процессов,
трудно поддающихся лечению (язвенные колиты и энтероколиты, пиелиты,
холециститы и др.).
68
Посевы изучают на наличие патогенных микроорганизмов и на
нарушение соотношения различных видов микробов. Результаты исследования
следует считать объективными при анализе роста изолированных колоний в
том числе, если можно изучить морфологию и подсчитать количество колоний
на чашку Петри. После идентификации проводят пересчет содержания
микроорганизмов каждого вида на 1 г исследуемого материала. При
обнаружении
патогенной
микрофлоры
необходимо
изучить
ее
чувствительность к антибактериальным препаратам и бактериофагам.
Отбор и доставка материала на дисбактериоз
Материалом для исследования является кал не позже 2 часов после
дефекации.
Для получения достоверного результата стул должен быть обязательно
утренним, самостоятельным, не на фоне лечения. У грудных детей забирать
материал не с памперсов и пеленок.
Одну столовую ложку фекалий помещают в прокипяченную стеклянную
баночку.
Лабораторная диагностика дисбактериоза кишечника
Метод исследования - бактериологический: мерный посев исследуемого
материала с целью определения количества микроорганизмов наиболее
значимых групп.
Этапы исследования:
приготовление серийных разведений суспензии испражнений;
 посев на питательные среды из разведений;
 учет
результатов посева и ориентировочная идентификация
микроорганизмов;
 оценка результатов.

ПРИНЦИПЫ САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО
ИССЛЕДОВАНИЯ
Для определения
различные методы:
количества
микроорганизмов
используют
1.
прямой подсчет под микроскопом в счетных камерах (этот метод
применяется крайне редко);
2.
количественный посев на плотные среды с последующим
подсчетом выросших колоний;
3.
титрационный посев на жидкие питательные среды;
69
4.
специальные методы, учитывающие особенности исследуемого
материала.
Количество санитарно-показательных микроорганизмов
исследуемом материале выражают в виде титра или индекса.
в
Определение микробного числа воды
Водопроводную воду засевают в объеме 1см3 (1 мл). Пробу вносят в
стерильную чашку Петри, заливают 10-12 мл расплавленного и остуженного до
45°С питательного агара, перемешивают с водой. Посев инкубируют при 37°С в
течение 1-2 сут. Затем подсчитывают количество выросших на поверхности и в
глубине среды колоний и вычисляют микробное число воды - количество
микроорганизмов в 1 мл.
Титрационный метод
Для исследования водопроводной воды делают посевы трех объемов по
100 мл, трех объемов по 10 мл и трех объемов по 1 мл в глюкозопептонную
среду. Посевы инкубируют в течение суток при 37°С. О брожении судят по
наличию пузырьков газа в поплавке. Из забродивших или помутневших проб
производят посевы на среду Эндо.
Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму и ставят
оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia,
CitrobacterиEnterobacterот
грамотрицательных
бактерий
семейства
Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в
воде.
Коли-титр воды измеряется минимальным количеством воды (мл), в
котором обнаруживаются БГКП, коли-индекс - количеством БГКП,
содержащихся в 1 л исследуемой воды.
Определение микробного числа воздуха
Количественные микробиологические методы исследования воздуха
основаны на принципах осаждения (седиментации), аспирации или
фильтрации.
Седиминтационный метод. Две чашки Петри с питательным агаром
оставляют открытыми в течение 60 мин, после чего посевы инкубируют в
термостате при 37°С. Результаты оценивают по суммарному числу колоний,
выросших на обеих чашках: при наличии менее 250 колоний воздух считается
чистым; 250-500 колоний - загрязненным в средней степени, при количестве
колоний
более
500
загрязненным.
Аспирационный метод - более точный количественный метод определения
микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью приборов
(прибор
Кротова
и
пробоотборник
ПАБ-1).
Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью
70
просачивается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей
чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с
содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей
поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной
щелью.
После инкубации посева в термостате проводят расчет микробного числа.
Основы инфектологии и эпидемиологии
Тема 8. Учение об инфекции.
Содержание:
Инфекционный процесс.
 Патогенность микроорганизмов.
 Особенности инфекционных заболеваний.

ИНФЕКЦИОННЫЙ ПРОЦЕСС
Инфектология
наука,
изучающая
инфекционный
процесс,
инфекционную болезнь, инфекционную патологию, возникающую в результате
конкурентного взаимодействия организма человека с патогенными или
условно-патогенными микроорганизмами, и разрабатывающая методы
диагностики, лечения и профилактики инфекционных болезней.
Инфекционный процесс - это комплекс взаимных приспособительных
реакций на внедрение и размножение патогенного микроорганизма в
макроорганизме, направленный на восстановление нарушенного гомеостаза и
биологического
равновесия
с
окружающей
средой.
Современное определение инфекционного процесса включает взаимодействие
трех основных факторов – возбудителя, макроорганизма и окружающей
среды, каждый из которых может оказывать существенное влияние на его
результат.
Патогенные микроорганизмы вызывают инфекционные заболевания у
здоровых лиц. Патогенные микробы активно проникают в чувствительные
организмы, так как паразитирование - важная часть их жизненного цикла.
Условно-патогенные микроорганизмы, как правило, лишены болезнетворных
свойств и не вызывают инфекционных заболеваний у здорового человека.
Условно-патогенные микробы вызывают поражения после пассивного
переноса во внутреннюю среду организма. Важные условия их развития массивность инфицирования и нарушения сопротивляемости организма.
71
Условно-патогенные и непатогенные (точнее, не способные вызывать
поражения у здорового человека) микробы могут при определенных условиях
вызывать оппортунистические (от англ. opportunity, возможность, удобный
случай) инфекции. Подразделение микроорганизмов на непатогенные и
условно-патогенные
виды
имеет
нечеткие
границы.
Некоторые микробы (например, условно-патогенные) способны размножаться в
организме человека, не причиняя ему вреда. Это явление можно рассматривать
как взаимную адаптацию микро- и макроорганизма. Такая форма паразитизма
называется носительство.
ПАТОГЕННОСТЬ МИКРООРГАНИЗМОВ
Патогенность (от греч. pathos, болезнь + genos, рождение) - это
потенциальная способность микроорганизмов вызывать заболевания, которая
является
видовым
генетически
детерминированным
признаком.
Вирулентность (от лат. virulentus - ядовитый, заразный) отражает степень
патогенности, является мерой патогенности микроба. Это свойство,
индивидуальный признак каждого штамма патогенного микроорганизма.
Штаммы того или иного вида по этому признаку могут быть подразделены на
высоко-, умеренно-, слабовирулентные и авирулентные (например,
вакцинные штаммы).
Определяют вирулентность того или иного штамма культуры в опытах
заражения лабораторных животных с вычислением DLM (Dosis letalis minima) доза бактерий, вирусов, токсинов и других повреждающих агентов,
вызывающих гибель 95% взятых в опыт животных. Более точные данные о
вирулентноти и токсичности дает определение DL50 (Dosis letalis 50), доза
исследуемого агента, вызывающая при данных условиях опыта летальный
эффект у 50% взятых в опыт животных.
Факторы патогенности
Патогенность как биологический признак бактерий реализуется через их
три свойства: инфекциозность, инвазивность и токсигенность.
Под инфекциозностью (или инфективностью) понимают способность
возбудителей проникать в организм и вызывать заболевание, а также
способность микробов передаваться с помощью одного из механизмов
передачи, сохраняя в этой фазе свои патогенные свойства и преодолевая
поверхностные барьеры (кожу и слизистые). Она обусловлена наличием у
возбудителей факторов, способствующих его прикреплению к клеткам
организма и их колонизации.
Под инвазивностью понимают способность возбудителей преодолевать
защитные механизмы организма, размножаться, проникать в его клетки и
распространяться в нем.
Токсигенность бактерий обусловлена выработкой ими экзотоксинов.
Токсичность обусловлена наличием эндотоксинов. Экзотоксины и
72
эндотоксины обладают своеобразным действием и вызывают глубокие
нарушения жизнедеятельности организма.
Инфекциозные, инвазивные (агрессивные) и токсигенные (токсические)
свойства относительно не связаны друг с другом, они по-разному проявляются
у разных микроорганизмов.
Рис. 1. Схема патогенеза дифтерии (слева). При дифтерии коринебактерии
(справа) не проникают за пределы входных ворот инфекции. За счет дифтерийных
экзотоксинов создаются условия для возникновения дифтерического воспаления в
месте проникновения возбудителя в организм (в центре) и развитие различных
органных поражений с нарушением функций и структуры жизненно важных органов и
систем организма.
Характеристика экзо- и эндотоксинов
Экзотоксины - это вещества белковой природы, выделяемые во внешнюю
среду живыми патогенными бактериями. Оказывают избирательное
повреждающее
действие
на
клетки
хозяина.
Экзотоксины высокотоксичны, обладают выраженной специфичностью
73
действия и иммуногенностью (в ответ
специфические нейтрализующие антитела).
на
их
введение
образуются
Рис. 2. Механизм действия бактериальных токсинов. А. Повреждение клеточных
мембран альфа-токсином S. aureus. В. Ингибирование белкового синтеза клетки шигатоксином. С. Примеры бактериальных токсинов, активирующих пути вторичных
мессенджеров (функциональные блокаторы).
Анатоксины - белковые токсины, утратившие свою ядовитость под действием
формалина, но сохранившие при этом иммуногенные свойства. Их используют
для активной иммунопрофилактики токсинемических инфекций.
Эндотоксины - токсические субстанции, входящие в структуру бактерий
(обычно в клеточную стенку) и высвобождающиеся из них после лизиса
бактерий.
Все эндотоксины, кроме пептидогликана, оказывают опосредованное действие
через изменение активности клеток организма. Пептидогликан оказывает
прямое токсическое действие. При очень большом количестве эндотоксина
может возникнуть синдром септического шока. Он выражается в потере
капиллярами крови, нарушении работы центров кровообращения и, как
правило, приводит к коллапсу и смерти.
Эндотоксины в отличие от экзотоксинов более устойчивы к повышенной
температуре, менее ядовиты и малоспецифичны.
Экзоферменты
Важным фактором патогенности следует считать экзоферменты
(например, лецитиназа, гиалуронидаза, коллагеназа и др.), нарушающие
гомеостаз клеток и тканей, что приводит к их повреждению. Способность к
образованию экзоферментов во многом определяет инвазивность бактерий возможность проникать через слизистые оболочки, соединительнотканные и
74
другие барьеры. К этой же группе следует отнести и бактериальные ферменты,
разлагающие антибиотики.
Факторы вирулентности вирусов
Механизмы вирулентности вирусов:
Способность к внутриклеточному паразитированию - цитопатическое
действие (ЦПД) от полного лизиса до полного сохранения жизнедеятельности.
 Некоторые вирусные белки способны оказывать повреждающее действие
на клетку.
 Некоторые вирусы (например, ВИЧ) способны паразитировать в
иммунных клетках, вызывая развитие временного иммунодефицита, который
способствует развитию сопутствующих инфекций.
 Некоторые вирусы способны вызывать деление клетки без ее
разрушения, давая начало злокачественным опухолям.
 Некоторые вирусы способны вызывать интегративную инфекцию,
встраиваясь в геном клетки, что также может приводить к злокачественной
трансформации.

ИНФЕКЦИОННЫЙ ПРОЦЕСС
Инфекционный процесс - это комплекс взаимных приспособительных реакций
на внедрение и размножение патогенного микроорганизма в макроорганизме,
направленный на восстановление нарушенного гомеостаза и биологического
равновесия
с
окружающей
средой.
Современное определение инфекционного процесса включает взаимодействие
трех основных факторов – возбудителя, макроорганизма и окружающей
среды, каждый из которых может оказывать существенное влияние на его
результат.
Инфекционный процесс и инфекционная болезнь наступают тогда, когда
адаптация является односторонней, и микроорганизм размножается и
разрушает макроорганизм, который оказался не в состоянии предотвратить
разрушения.
Инфекционная болезнь - это частное проявление инфекционного процесса,
крайняя степень его развития.
75
ОСОБЕННОСТИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Инфицирующая доза – минимальное количество микробных клеток,
способных вызывать инфекционный процесс.
Входные ворота инфекции – место проникновения возбудителя в
организм человека через определенные ткани, лишенные физиологической
защиты против конкретного вида возбудителя.
Очаг инфекции (очаговая инфекция) – размножение возбудителя в месте
внедрения.
Генерализованная форма инфекции - инфекция, при которой возбудитель
распространяется по организму лимфогенным или гематогенным путем.
Бактериемия – циркуляция в крови бактерий.
Фунгемия - циркуляция в крови грибов.
Вирусемия - циркуляция в крови вирусов.
Паразитемия – циркуляция в крови простейших и гельминтов.
Кровь в таких случаях является только механическим переносчиком
возбудителя,
поскольку
последний
в
ней
не
размножается.
Наиболее тяжелой генерализованной формой инфекции является сепсис или
септицемия. Это состояние характеризуется размножением возбудителя в
крови при резком угнетении основных механизмов иммунитета. Если в
патогенезе инфекционного заболевания ведущим звеном служит интоксикация,
вызванная циркуляцией экзо- или эндотоксинов возбудителя в крови, то такие
состояния определяют термином токсинемия. Некоторые возбудители
распространяются нейрогенным путем, в том числе непосредственно по
отросткам
нейронов
(нейропробазия).
При возникновении гнойных очагов во внутренних органах начинается
септикопиемия, а при массовом поступлении в кровь бактерий и их токсинов
развивается
бактериальный
или
токсико-септический
шок.
Естественное окончание инфекционного процесса - гибель больного или
выздоровление пациента.
Инфекционные
болезни
характеризуются
специфичностью,
контагиозностью и цикличностью.
Периоды инфекционного заболевания
Инкубационный период начинается от момента проникновения
инфекционного агента в организм человека до появления первых
предвестников заболевания. Возбудитель обычно не выделяется из организма в
окружающую среду.
Продромальный период сопровождается первичными клиническими
проявлениями общими для многих заболеваний. В данный период возбудитель
интенсивно размножается и колонизирует ткань, а также начинает
76
продуцировать соответствующие ферменты и токсины. Продолжительность
периода не превышает 24-48 ч. Возбудитель как правило не выделяется во
внешнюю среду.
Разгар болезни характеризуется появлением специфических симптомов.
Возбудитель продолжает интенсивно размножаться в организме. Вместе с тем
происходит выделение возбудителя из организма больного, вследствие чего он
представляет опасность для окружающих. В начале периода обнаруживаются
специфические антитела в сыворотке крови больного.
Реконвалесценция (выздоровление) - период, в течение которого
постепенно восстанавливаются физиологические функции пораженных клеток,
тканей и всего организма. Продолжительность его зависит от состояния
организма хозяина, реабилитационных мероприятий и т.д. Количество антител
достигает максимума. При многих инфекционных заболеваниях в период
реконвалесценции возбудитель выделяется из организма человека в большом
количестве.
Формы инфекционных заболеваний
Экзогенная инфекция развивается в результате проникновения в организм
микроорганизмов из внешней среды.
Эндогенная или аутоинфекция вызывается представителями нормальной
микрофлоры.
Моноинфекция – заболевания, вызываемые одним видом микроорганизмов.
Смешанные инфекции (миксты) развиваются в результате заражения
несколькими видами микроорганизмов.Частным вариантом смешанной
инфекции является вторичная инфекция, когда к уже развившейся
инфекционной болезни присоединяется новая, вызываемая другим
возбудителем.
Реинфекция - случай повторного заражения одним и тем же возбудителем.
Рецидив - возврат клинических проявлений болезни без повторного заражения
за
счет
оставшихся
в
организме
возбудителей.
Манифестная форма инфекции - инфекционный процесс, протекающий с
клиническими проявлениями.
Бессимптомная форма инфекции инфекционный процесс,
протекающий без клинических проявлений.
77
Тема 9. Противоэпидемические мероприятия в очаге
инфекции
Разделы темы:
Эпидемиология инфекционного процесса.
 Организация противоэпидемической работы.
 Профилактика внутрибольничных инфекций.

ЭПИДЕМИОЛОГИЯ ИНФЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА
Эпидемиология - наука о закономерностях распространения
инфекционных
заболеваний
в
популяции
человека.
Эпидемиология изучает эпидемический процесс - сложное социальнобиологическое явление.
Любой эпидемический
компонента:
процесс
включает
три
взаимосвязанных
источник инфекции;
 механизм, пути и факторы передачи возбудителя;
 восприимчивый организм или коллектив.

Источник инфекции - различные одушевленные и неодушевленные
объекты внешней среды, содержащие и сохраняющие патогенные
микроорганизмы.
Антропонозы - инфекции, при которых источником инфекции является только
человек.
Зоонозы - инфекции, при которых источниками инфекций являются
животные, но ими могут болеть и люди. Сапронозы - инфекции,
развивающиеся после проникновения свободноживущих бактерий или грибов в
организм человека с объектов окружающей среды и поверхности тела
(например, при попадании в рану).
Рис. 1. Источником инфекции чаще всего является больной.
78
Механизмы и пути передачи:
фекально-оральный - возбудитель локализуется в кишечнике, передача
алиментарным путем - с пищей, водой;
 аэрогенный (респираторный, воздушно-капельный, аспирационный) возбудитель локализуется в дыхательных путях, передается воздушнокапельным, воздушно-пылевым путем;
 кровяной (трансмиссивный) - возбудитель локализуется в кровеносной
системе (малярия, сыпной тиф), передается кровососущими насекомыми;
 контактный: - возбудитель локализуется на наружных покровах (кожа
и слизистые) а) прямой - передача возбудителя происходит при
непосредственном соприкосновении (венерические болезни), б) непрямой через зараженные предметы окружающей обстановки;
 вертикальный - передача возбудителя через плаценту плоду от
инфицированной матери (внутриутробное заражение) при таких болезнях, как
токсоплазмоз, краснуха, ВИЧ-инфекция, герпетическая инфекция и др.

Восприимчивый
организм
или
коллектив.
Состояние
невосприимчивости человека определяется его реактивностью на внедрение
возбудителя и зависит от внутренних и внешних факторов.
К числу внутренних факторов самого организма относятся следующие:
Генетические особенности, характерные для данного вида индивидуума.
 Состояние центральной нервной системы оказывает существенное
влияние на восприимчивость к инфекции. Известно, что угнетение нервной
системы, психические расстройства, депрессивные и аффективные состояния
снижают резистентность человеческого организма к инфекции.
 Состояние эндокринной системы и гормональная регуляция играют
важную роль как в возникновении так и последующем развитии инфекции.
 Кардинальное значение в инфекционном процессе играет иммунная
система организма, обеспечивающая специфическую резистентность к
инфекции.
 Реактивность организма, а в связи с этим восприимчивость или напротив
устойчивость к инфекции, имеет отчетливую возрастную зависимость.
 Возникновение инфекционного процесса и особенности его течения
находятся в зависимости от характера питания и витаминного баланса.
Дефицит белка ведет к недостаточной выработке антител и к снижению
резистентности. Дефицит витаминов группы В снижает устойчивость к
стафилококковым и стрептококковым инфекциям. Дефицит витамина С также
снижает устойчивость организма к ряду инфекций и интоксикаций. При
дефиците витамина D у детей развивается рахит, при котором снижается
фагоцитарная активность лейкоцитов.

79
Перенесенные заболевания, травмы, а также вредные привычки
(алкаголь, курение и т.д.) снижает резистентность организма и способствуют
развитию инфекции.

Внешние факторы, воздействующие на организм:
Условия труда и быта людей - большие физические нагрузки,
переутомление, отсутствие условий для нормального отдыха снижают
резистентность к инфекциям.
 Климатические условия и сезонные факторы.
 Физические и химические факторы. К их числу следует отнести действие
ультрафиолетовых лучей, ионизирующей радиации, СВЧ-поля, реактивных
компонентов топлива, других химически активных веществ, загрязняющих
внешнюю среду.

Перечисленные составные части - источник возбудителей инфекции,
механизм передачи и восприимчивый коллектив присутствуют при любом
варианте проявлений эпидемического процесса и при различных болезнях они
формируют эпидемический очаг.
Эпидемический очаг – место пребывания источников инфекции с
окружающей территорией, в пределах которой в конкретной обстановке
возможна передача возбудителей и распространение инфекционной болезни.
Эпидемический очаг существует в течение определенного срока,
исчесляемого по длительности максимального инкубационного периода от
момента изоляции больного и проведения заключительной дезинфекции. Это
срок, в течение которого возможно появление новых больных в очаге.
В становлении эпидемических очагов и формировании эпидемического
процесса существенная роль принадлежит природной и социальной среде
обитания людей.
ОРГАНИЗАЦИЯ ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКОЙ РАБОТЫ
Специальные профилактические мероприятия по борьбе с инфекционными
болезнями, делятся на профилактические и противоэпидемические.
Для предупреждения развития инфекционных заболеваний широко применяют
комплекс мероприятий, направленных на различные звенья эпидемического
процесса, а именно, на обезвреживание источника инфекции, разрыв путей
передачи возбудителей и повышение невосприимчивости населения.
Обезвреживание источника инфекции.
80
Мероприятия I группы направлены на выявление, изоляцию и лечение
(санацию) больного или бактерионосителя. Их часто дополняют карантинными
мероприятиями. А также дератизация, т.к. животные (грызуны) являются
источником инфекции.
Разрыв путей передачи инфекции.
Мероприятия II группы представлены комплексом санитарногигиенических мер, направленных на разрыв механизмов и путей передачи
возбудителя. Мероприятия состоят из обеспечения и соблюдения
гигиенических нормативов, разукрупнения организованных контингентов,
санитарного контроля за пищевыми продуктами и предприятиями, их
производящими, соблюдения правил асептики и антисептики в лечебнопрофилактических учреждениях (ЛПУ), проведения дезинфекции и
дезинсекции и т.д.
Повышение невосприимчивости населения.
Мероприятия III группы направлены на увеличение «иммунной
прослойки» популяции. Наиболее эффективный метод - широкомасштабная
активная иммунопрофилактика (вакцинация) различных инфекционных
болезней.
В соответствии с эффективностью проводимых мероприятий по
предупреждению инфекционных заболеваний выделяют управляемые
инфекции (для их предупреждения эффективно используют вышеуказанные
мероприятия) и неуправляемые инфекции (меры предупреждения отсутствуют).
Рис. 2. Введение вакцины (иммунопрофилактика) - мероприятие, направленное на
повышение невостприимчивости населения.
По интенсивности эпидемических процессов выделяют спорадическую
заболеваемость, эпидемии и пандемии.
81
Спорадическая заболеваемость - единичные, как бы не связанные между
собой случаи болезни (не более 10 на 100 тыс. населения).
Эпидемическая заболеваемость (эпидемия) - групповая заболеваемость (20100 на 100 тыс. населения).
Пандемия - массовое распространение инфекционной болезни на большие
территории.
В соответствии с распространенностью инфекционные заболевания также
выделяют повсеместные (убиквитарные) и эндемичные инфекции,
выявляемые
на
определенных,
нередко
небольших
территориях.
Экзотические болезни - не свойственные данной территории. Они могут быть
следствием завоза возбудителей инфицированными людьми или животными, с
пищевыми
продуктами
или
различными
изделиями.
Конвенционные (карантинные) болезни - наиболее опасные болезни, склонные
к быстрому распространению, например, чума, холера, оспа, желтая лихорадка.
Система информации и меры профилактики в этих случаях обусловлены
международными соглашениями (конвенцией).
Основы клинической микробиологии
«Внутрибольничная инфекция (ВБИ) (синонимы: госпитальные,
ятрогенные, нозокомиальные) - это любое клинически выраженное заболевание
микробного происхождения, поражающее больного в результате его
госпитализации или посещения лечебного учреждения с целью лечения, а
также больничный персонал в силу осуществляемой им деятельности,
независимо от того, проявляются или нет симптомы этого заболевания во
время нахождения данных лиц в больнице».
Эпидемиология госпитальной инфекции
Первостепенное значение для возникновения и распространения
госпитальных инфекций имеют: инфицирующая доза, устойчивость
возбудителя, восприимчивость организма хозяина, пути передачи возбудителя
и физические факторы окружающей среды. Госпитальными инфекциями
являются эндогенные и экзогенные инфекции, приобретенные больными в
медучреждениях. Резервуарами госпитальных инфекций являются: кожа,
волосы, полость рта, кишечник, мочеполовой тракт.
Рис. 1. При госпитализации возможны ВБИ.
Этиология госпитальной инфекции
82
Внутрибольничные инфекции
госпитальными штаммами возбудителей.
вызываются,
как
правило,
На долю облигатно-патогенных микроорганизмов в настоящее
время приходится не более 10-15% возбудителей всех регистрируемых
госпитальных инфекций.
Большую часть госпитальных инфекций (85-90%) вызывают условнопатогенные микробы.
Источником госпитальных инфекций могут быть:
медицинские сестры и посетители, страдающие рядом инфекционных
заболеваний, продолжающие работать;
 больные со стертыми формами заболевания;
 больные
с чистыми ранами, являющиеся бактерионосителями
вирулентных стафилококковых штаммов;
 грудные дети с пневмонией, отитом, гриппом и т.д., выделяющие
патогенные штаммы кишечной палочки.

Механизмы передачи госпитальных инфекций
Возбудители ВБИ могут передаваться воздушно-капельным, воздушнопылевым, алиментарным путями, трансфузионно, трасплацентарно, при
прохождении плода по родовым путям, половым и другими способами. Вместе
с тем на различных этапах оказания медицинской помощи возможен
парентеральный путь передачи.
Восприимчивый организм или коллектив
Пациенты с иммунодефицитами. Для данной группы больных характерна
высокая степень риска развития инфекций, вызванных как патогенными, так и
условно-патогенными, обитающими в окружающей среде либо входящими в
состав резидентной микрофлоры.
Микробиологический контроль за внутрибольничными инфекциями
является обязательной частью надзора за лечебно-профилактическими
учреждениями, в первую очередь больничными стационарами. Он включает
исследование больных и медицинский персонала на бактерионостельство,
объектов внешней больничной среды и лекарственных препаратов с целью
установления их микробной контаминации, прежде всего больничными
эковарами.
ПРОФИЛАКТИКА ВНУТРИБОЛЬНИЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
83
Для предупреждения возникновения и распространения случаев ВБИ в
поликлиниках и стационарах, необходимо проведение полного комплекса
санитарно-противоэпидемических мероприятий, основным из которых является
обеспечение соответствующего дезинфекционно-стерилизационного режима во
всех подразделениях.
ПРОФИЛАКТИКА ВНУТРИБОЛЬНИЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
Роль медицинской сестры в системе контроля за госпитальными
инфекциями
На медицинских сестер, традиционно выполнявших функции по уходу за
больными в лечебных учреждениях, возложены новые задачи по развитию
различных форм медицинской помощи, а также по профилактике заболеваний,
сохранению здоровья, гигиеническое воспитание и обучение населения.
Несмотря на кажущееся обилие новых препаратов с усиленным
антимикробным действием проблема госпитальных инфекций по-прежнему
остается чрезвычайно актуальной. Не менее 5% больных, поступающих в
лечебные учреждения, подвергаются внутрибольничному заражению. Во всем
мире на профилактику и борьбу с госпитальными инфекциями затрачиваются
огромные средства.
Возникновение
госпитальных
инфекций
определяется
многими
причинами. До настоящего времени по-прежнему остается нерешенной
проблема правильной обработки медицинских приборов и инвентаря,
являющихся факторами передачи инфекции в каждом лечебном учреждении.
Основными из них являются: аппараты для искусственной вентиляции легких;
электростимуляторы сердца; приборы для гемодиализа; мочевые катетеры,
сосудистые зонды, протезы; эндоскопы, хирургические инструменты;
кондиционеры
и
вентиляторы;
мягкий
инвентарь;
каталки.
Непосредственными переносчиками внутрибольничной инфекции можно
считать и медицинских работников. Источниками инфекции могут являться
хирурги, перевязывающие и осматривающие больных без перчаток, без масок, а
также персонал отделений реанимации, в которых осуществляются
эпидемиологически опасные процедуры: длительная искусственная вентиляция
легких, частая катетеризация сосудов, мочевого пузыря, повторные
бронхоскопии. Не менее опасно наличие в отделении больных с инфекцией и
колонизация слизистых, кожных покровов, желудочно-кишечного тракта
больных
и
рук
медперсонала.
Все вышеперечисленное говорит о том, что необходимо соблюдение
санитарно-противоэпидемического
режима
всеми
без
исключения
сотрудниками стационаров (независимо от занимаемой должности).
Медицинские сестры и здесь оказываются на переднем крае. От уровня
профессиональной дисциплины и знаний зависит выполнение ими всех
84
мероприятий, необходимых для предупреждения возникновения инфекций в
стационаре.
При уходе за пациентами профилактика внутрибольничных
инфекций возможна при соблюдении общих мер предосторожности:
мыть руки сразу после контакта с инфицированным материалом и
пациентами (кровью и другими биологическими жидкостями организма,
инфицированным пациентом или предметами ухода за ним);
o по возможности не прикасаться к инфицированному материалу;
o надевать перчатки при контакте с кровью, инфицированным материалом
и биологическими жидкостями;
o мыть руки сразу после снятия перчаток;
o немедленно убирать просыпанный или пролитый инфицированный
материал, обеззаразив его;
o дезинфицировать оборудование по уходу сразу после использования.
o
Рис 1. Перчатки и маски защищают как медицинского работника, так и пациента
от инфицирования.
Рис. 2. Мытье рук - важнейшая процедура, позволяющая предупредить ВБИ.
Помни! Нельзя брать бинты голыми руками при смене повязок,
только в перчатках или пинцетом! Нельзя бросать перевязочный
материал в мусорные корзины!
85
Помни! Основное правило поведения всех сотрудников хирургического
отделения: ничего не трогать руками - значит, ничего не
контаминировать!
ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ ПРИ
ВНУТРИБОЛЬНИЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ
Заполнение экстренного извещения об инфекционном больном,
пищевом, остром профессиональном отравлении и
необычной реакции на прививку.
Цель: Регистрация инфекционных больных и учет инфекционной
заболеваемости.
Последовательность действий медсестры:
Позвоните в эпидбюро города по телефону.
o Передайте следующие сведения:
o ФИО больного.
o Возраст.
o Домашний адрес. Если пациент живет и прописан по разным адресам,
сообщите оба адреса.
o Место работы или учебы (завод, фабрика, предприятие, отдел, цех,
лаборатория, рабочий табельный номер, институт, училище, факультет,
отделение, курс, группа).
o Адрес места работы или учебы (район, улица, дом).
o Диагноз, поставленный врачом.
o Краткие данные эпиданамнеза (квартира отдельная, коммунальная,
проживают ли пищевики, дети-дошкольники, посещающие дошкольные
учреждения, беременные, доноры, с чем связано заболевание).
o Краткие данные клиники.
o Дата заболевания.
o Дата обращения.
o Дата регистрации.
o Место изоляции (в домашних условиях, госпитализация).
o Кто регистрирует (фамилия врача, ЛПУ).
o Получите эпидномер.
o Запишите его на направление в больницу, в историю болезни пациента,
в журнал регистрации инфекционных больных.
o
Примечание:
86
В местностях, где не развита телефонная связь, регистрация
инфекционных больных осуществляется заполнением бланков экстренного
извещения по этим же вопросам.
o Отправить извещение надо с нарочным не позднее 12 часов после
поставленного диагноза.
o
Изоляция источника инфекции
(изолирующий сестринский уход)
Цель: Предупреждение распространения инфекции за пределы очага
инфекционного заболевания.
Последовательность действий м/с:
Подготовка изолятора.
Поместите у двери надпись «изолятор».
o Перечислите требования для персонала перед входом в изолятор и при
выходе из него.
o Удалите всю ненужную мебель. Оставшаяся мебель должна легко
чиститься; не должна содержать грязь или влагу или же способствовать их
накоплению.
o Положите возле умывальника соответствующее антибактериальное
средство, бумажные полотенца для персонала. Поместите в комнату
пластиковый мешок для сбора мусора (желательно в ящик для мусора,
открываемый нажатием ноги).
o Сведите к минимуму количество личных предметов больного.
Посоветуйте больному носить больничную одежду. Все личные вещи, взятые в
комнату, должны быть моющимися или чистящимися (или резиновыми).
o Если возможно, выделить больному собственный термометр и
сфигмоманометр, графин для воды, стакан и все необходимые предметы
личной гигиены.
o Поместите за дверь тележку с халатами, фартуками, перчатками и
бактерицидной жидкостью для протирания рук, если она используется.
o
Уход за больным.
Прием пищи и посуда. Многоразовая посуда, личный графин с водой и
стакан должны храниться возле кровати. Их следует мыть отдельно от других
предметов, находящихся в палате.
o Выделения. В идеальном случае должен располагать индивидуальным
туалетом. Если это не возможно, в комнате следует поместить подкладное
судно или мочеприемник. При работе с выделениями персонал должен
надевать перчатки. Мочу, кал и рвотные массы следует немедленно
ликвидировать в соответствии с местными правилами борьбы с инфекциями.
Подкладные судна и мочеприемники должны храниться в изоляторе, смываться
o
87
в канализацию и промываться и дезинфицирующие средства, высушиваться и
сразу же возвращаться в комнату больного.
o Случайно пролитая жидкость. Любая жидкость с подозрением на
наличие инфекции должна немедленно удалиться, а место, где она была
пролита, очищаться с помощью дезинфицирующего вещества.
o Меры гигиены и обмывание больного. Инфицированный больной должен
обмываться в отделении в последнюю очередь. Помойте ванну после
предыдущего пациента и после инфицированного больного дезинфицирующим
раствором. (Если больной имеет инфицированные раны, в воду можно добавить
дезинфицирующее средство).
o Постельное белье. Загрязненное белье для стирки помещается в
«двойной мешок» (индивидуальный, плотно закрытый). Эти мешки должны
храниться до отправления в прачечную в безопасном месте.
Уборка комнаты.
Инструктируйте вспомогательный персонал о назначении изоляции
больного, правилах уборки в изоляторе. (Вспомогательный персонал должен
носить соответствующую одежду).
o Помещение, в котором осуществляется изолирующий сестринский уход,
должно убираться в последнюю очередь. Все необходимое для уборки в
изолятор следует хранить отдельно.
o пол следует мыть ежедневно дезинфицирующим средством;
o половую тряпку со шваброй лучше всего стирать ежедневно в горячей
воде;
o мебель и осветительные приборы следует подвергать влажной уборке с
помощью разовой тряпки и раствора моющего или, при необходимости,
дезинфицирующего средства;
o помещение туалета, душа и ванной комнаты следует чистить не реже,
чем раз в день с помощью неабразивного порошка или пасты с низким
содержанием хлора.
o
Выписка пациента.
Оповестите эпидемиолога больницы, когда пациент будет готов к
выписке.
o Комнату следует проветрить.
o все тканевые покрытия следует заметить, а занавески и шторы отправить
в стирку;
o водонепроницаемые поверхности (ящики, табуретки, стойки) следует
промыть водой с мылом;
o пол тщательно вымыть и высушить;
o
88
если известно, что комната подверглась загрязнениям кровью или
кровяными выделениями лиц с положительной реакцией на гепатит В или на
антитела к ВИЧ-инфекции, для чистки следует использовать 3% раствор
хлорамина;
o если в комнате находился больной с кишечной инфекцией, для чистки
следует использовать чистую растворимую карболовую кислоту.
o
89
Рекомендуемая литература
Основная литература:
1.Рудаков Н.В. Краткий курс лекций по медицинской микробиологии,
вирусологии и иммунологии: учеб. пособие в 2-х частях/ Н.В.Рудаков – Омск:
изд-во ОмГМА, 2007. – 294с.
2.Сбойчаков В.Б.Санитарная микробиология: учебное пособие/В.Б.Сбойчаков:
ГЭОТАР-Медиа ,2007.-192с.
3. www.medicolegelib.ru.-эл.библиотека мед.колледжа: Осипова В.Л.
Дезинфекция: учебное пособие: ГЭОТАР-Медиа, 2011.-136с.
Дополнительная литература:
1.Ткаченко К.В. Микробиология. Конспект лекций/ К.В.Ткаченко – М.: Эксмо,
Ростов н/Д Феникс, 2001. – 160 с.
2.Воробъев А.А. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии,
иммунологии: учеб.пособие/ А.А.Воробьев М.:2003.- 236 с.
Нормативные документы:
1. СП 1.3.232208 Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп
патогенности и гельминтами»; СП 1.3.25-18-09 Дополнения и изменения № 1.
2. Методические указания по применению бактерицидных ламп для
обеззараживания воздуха и поверхностей от 28.02.95 г.
3. СанПиН 2.1.7.728-99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебнопрофилактических учреждений».
4. Приказ МЗ СССР № 535 «Об унификации микробиологических методов
исследования в КДЛ ЛПУ».
90
Учебное издание
Серова Татьяна Владимировна
ОСНОВЫ ОБЩЕЙ МИКРОБИОЛОГИИ
91
Скачать