Оценка функции скелетных и сердечной мышцы после длительного...

Оценка функции скелетных и сердечной мышцы после длительного лечения Тимозин β-4 у дистрофин дефицитных
мышей.
Введение
Мышечная дистрофия Дюшенна (МДД) является наследственным Х-хромосомым заболеванием с частотой 1 на 3500
новорожденных мальчиков, которое
связано с отсутствием дистрофина, крупного белка, связывающего
внутриклеточный цитоскелет с внеклеточным матриксом. [1] Животная модель МДД, мыши MDX генетически
похожи на человеческое заболевание [1] - [3]. хотя основной дефект гена такой же как у человека, но клиническая
картина совершенно иная. MDX скелетные мышцы подвергаются ранней острой фазе дегенерации на 3-4 недели с
последующей успешной фазой регенерации. Гистопатология после острой фазы показывает относительно мягкую
картину, хотя в конкретных мышцах (например, диафрагме) и у старых мышей может показать более тяжелую
патологию совместимую с человеческими мышцами при МДД . Соизмеримые с патологией, физические симптомы
мыши MDX, как правило, сравнительно мягче, с мышечной слабостью более очевидной после физических
упражнений [4] - [6]. У Mdx мышей также развивается снижение функции сердца. Это снижение функции могут
быть измерены при неинвазивной эхокардиографии в возрасте около девяти месяцев. [7], [8]В целях выявления
новых потенциальных терапевтических агентов, исследователи посмотрели профили генной экспрессии в скелетных
мышцах MDX мышей во время прогрессирования заболевания. [9] - [17] Тимозин бета-4 (Tβ4) имел повышенную
экспрессию при недостаточности дистрофина в клетках скелетных мышц, и может играть роль в компенсации
этого состояния [11], [16] - [18]. Tβ4 представляет собой пептид из 43 аминокислот, который впервые выделен из
вилочковой железы, а затем повсеместно обнаружен в природе [19] - [21]. Tβ4 выступает как актин-изолирующие
молекулы, регулирующие миграцию клеток, пролиферацию и дифференцировку [22] -. [ 25] Он также способствует
заживлению ран и модулирует медиаторы воспаления. [26], [27] Tβ4, как недавно было показано, содействует
миграции кардиомиоцито. [28]. На основе этих механизмов, мы изучали влияние длительного лечения Tβ4
скелетной и сердечной мышечной функции у дистрофин дефицитных мышей. Пока мы не обнаружили
существенных различий в мышечной функции, но мы увидели значительное увеличение регенерации скелетных
мышц, и эти регенерирующие волокна отчетливо окрашивались на содержание Tβ4.
Методы.
Животные.
Все животные были обработаны в строгом соответствии с надлежащей практикой работы с животными, как
определено в соответствующих национальных и / или местных органах по защите животных, и все работы были
одобрены комитетом по уходу и использованию животных в Национальном детском медицинском центре в
Вашингтоне, округ Колумбия (протокол № 01079). Восьми - десяти недельные самки C57BL/10ScSn-Dmdmdx/J
(MDX) и C57BL/10ScSnJ (дикий тип) мышей весом 20-30 г были приобретены у Jackson Laboratory (Bar Harbor, Ma).
Все мыши были размещены в индивидуально вентилируемых клетки с системой с 12-часовом цикле свет-темнота и
получали стандартный корм и воды вволю. Всех мыши отдыхали по крайней мере 10-14 дней до начала
эксперементов. Лечение тимозином бета-4Tβ4 (RegeneRx Biopharmaceuticals Inc, Bethesda, MD) проводилось через
внутрибрюшинное введение два раза в неделю в течение 6 месяцев MDX и мышам дикого типа в дозе 150 мкг в
200 мкл PBS. Буфер был введен в те же сроки MDX и диким мышам.
Беговая дорожка
Беговая дорожка использует общие коммерчески доступные настройки (Columbus Instruments, Колумбус, штат
Огайо). Мы подвергали всех подопытных мышей 30-минутному бегу на горизонтальной беговой дорожке 12 м /
мин, два раза в неделю. Этот тест проводился в утренние часы два раза в неделю в течение 6 месяцев, за
исключением тех дней, когда функциональные данные были получены.
Тест силы захвата.
Сила была оценена с помощью измерителя силы хвата (Columbus Instruments, Колумбус, Огайо). Пять успешных
измерений силы задних конечностей и передних конечностей в течение 2 минут были записаны и рассчитаны на
массу тела, как описано ранее [29].
Rotarod тест
Мыши были обучены (Ugo Basile, VA, Италия) за два дня до сбора данных. Каждая сессия акклиматизации состояла
из четырех учебных занятий, 2 в день, и каждый сеанс длится 120 секунд при скорости 5 мин. Общее время
тестирования составляет 240 секунд (60 секунд Время стабилизации и 180 секунд времени тестирования). Каждое
испытание было проведено два раза в день (разрыв 2 ч. между сессиями) в течение 3 дней подряд. Задержка в
падении (в секундах) была записана и данные были усреднены на каждую мышь.
Эхокардиография.
Мышей анестезировали 1-2% изофлурана в 100% кислороде и сканирование было выполнено более 20 минут,
используя высокие частоты ультразвукового зонда (РМЗ 702A, Vevo 660, VisualSonics, Торонто, Канада), как
описано ранее [8]. Качественные и количественные измерения были сделаны с использованием аналитических
программ (VisualSonics, Торонто, Канада).
Гистологическая оценка.
В конце исследования всех животных умерщвляли, и образцы ткани были взяты для дальнейшего тестирования.
Гистологическая оценка была сделана слепым способом с использованием закодированных H & E окрашенных
слайдов и их результаты были усреднены. Число исследованных тканей в группе менялось на основе тканевой
доступности. Количественная стереология (Olympus CAST, Olympus America Inc, Center Valley, штат Пенсильвания)
была использована для оценки слайдов. Критерии оценки включают: оценку общего числа волокон, общее число
волокон с центральными ядрами, периферическими ядрами, общее число центральных ядер, регенерирующие
волокна (волокна высоко базофильные), вырождающееся волокна, и воспаление в пяти неперекрывающихся полях
высокой мощности (40x) у нормальных и MDX мышей в икроножной мышцы. Для иммуногистохимии ткани
необработанных MDX икроножных мышц были помещены в парафин. Слайды были погружены в цитратный
буфер (0,01 М, рН 6,0) и нагреты дважды в микроволновой печи (700 Вт или высокий) в течение 5 мин. Эндогенную
пероксидазу инактивировали путем инкубации с 3% раствором перекиси водорода в течение 5 минут и промывали
три раза в PBS в течение 5 минут. Слайды подвергли иммунному окрашиванию с кроличьими поликлональными
антителами к тимозину β4 (1:2000 разбавления; ALPCO диагностики, Windham, Нью-Гэмпшир, США) при 4 ° С в
течение ночи. После первичной инкубации с антителами, слайды промывали три раза в PBS в течение 5 минут и
инкубировали с вторичными антителами в течение 1 часа. Тогда, слайды промывали четыре раза в PBS в течение 5
минут каждый и цветная реакция была разработана с DAB и слайды были контрастно гематоксилином Майера
(DAKO, Carpinteria, Калифорния, США) в течение 20 секунд (Fisher Scientific, Питтсбург, Пенсильвания, США).
Количественная оценка фиброза.
Использование икроножной мышцы, диафрагмы и сердечной мышечной ткани обработанного и необработанного
дикого типа и MDX мышей, пять секций для каждой группы были окрашены гематоксилином и эозином (H & E)
(Sigma, Сент-Луис, Миссури) и Гомори Три-Хром содержащие (Sigma, St Louis, Mo). Ткани исследовались под
световым микроскопом при увеличении 10х и цифровые изображения были получены с использованием
компьютерных программ (Olympus CAST стереология системы, Olympus America Inc, Center Valley, PA). Цифровые
изображения были скопированы в NIH Image J программу. Общая площадь синего окрашивания коллагена была
выражена в виде процента от общей площади ткани на изображении.
Креатинкиназа (КK)
Кровь была получена из сердца сразу же после эвтаназии. 250 мкл крови собирали в пробирки Эппендорфа, дают
свернуться и хранят при комнатной температуре, чтобы сформировался сгусток до центрифугирования и
отделилась сыворотка. КK определение было выполнено в соответствии с инструкциями производителя, используя
стандартный спектрофотометрический метод с реагентами от Fisher Scientific (CK10) [30]. Поглощение при 340 нм
измеряли каждую минуту в течение 2 мин при 37 ° С для расчета активности фермента. Повторяющиеся измерения
проводились на каждом образце сыворотки и данные выражали как U / L.
Статистический анализ.
Для сравнения измерений между диким типом и MDX мышами в каждый момент времени использовали
дисперсионный анализ с настройками для множественных сравнений (масса тела, GSM, Rotarod, эхокардиография,
процент коллагена). Нормальность каждого количественного измерения была подтверждена до анализа.
Гистологические измерения (дегенерация волокон, регенерирующие волокна, воспаление, обызвествление, и
центральной и периферической ядер) впервые были сопоставлены между двумя исследователями, чтобы определить
их последовательность. Сравнения были сделаны с использованием регрессии Пуассона или с помощью
отрицательной биномиальной регрессии, где модель Пуассона не соответствовали данным из-за чрезмерной
дисперсии.
Результаты
Дикий тип и MDX мыши получали лечение Tβ4 в течение 6 месяцев и поведенческие данные были собраны в начале
исследования (3-месячный возраст), средине исследования (5-6 месяцев) и конце исследования (9 месяцев) . Все
результаты представлены как среднее ± стандартное отклонение за исключением тех, на рисунках 1 и 2.
Вес тела.
Нет существенных различий, замеченых при определении массы тела между обработанными и необработанными
мышами. При сравнении MDX и мышей дикого типа, наблюдалось значительное увеличение массы тела мышей
MDX в начале исследования и через 6 месяцев, но не через 9 месяцев (таблица S1).
Сила захвата.
Необработанные мыши MDX значительно сократили нормированную силу сцепления передних конечностей
(килограмм силы на килограмм; кгс / кг) по сравнению с необработанными мышами дикого типа через 3, 6 и 9
месяцев. Сравнение нормированной силы сцепления задних конечностей этих же групп показали значительное
снижение у MDX мышей через 3 и 6 месяцев, но не в 9-месячном возрасте. Не существовало никаких существенных
различий в нормированной силе сцепления передних конечностей или задних конечностей между обработанными и
необработанными мышами в ходе исследования (таблица S1).
Вращательный тест.
Не существовало никаких существенных различий в латентном времени между диким типом и мышами MDX. Не
было также никаких различий между обработанными и необработанными мышами , но MDX мыши показали
значительно более низкую производительность по сравнению с обработанными мышами дикого типа в 9-месячном
возрасте (табл. S1).
Эхокардиография.
Высокочастотная эхокардиография обнаружила снижение функции сердца, которое измеряется в процентах у
необработанных MDX (27,9 ± 1,86%) мышей по сравнению с необработанными (30,6 ± 2,6%) и получившими
лечение (32,0 ± 5,2, р = 0,045) мышами дикого типа (рис. 1 ). Обработанные MDX (26,2 ± 3,1%) мыши также
показали значительное снижение сердечной функции по сравнению с получавшими лечение (р <0,01) и
необработанными (р <0,05) мышами дикого типа. Не существовало никаких существенных различий между
обработанными и необработанными мышами . Никаких существенных различий в измерении размеров левого
желудочка или толщины стенки между MDX и мышами дикого типа. Не обнаружено значимых различий в частоте
сердечных сокращений или доплеровских измерениях аорты, легочных, трехстворчатой или митральной скоростей
кровотока между обработанными и необработанными MDX мышей (табл. S2).
Гистология скелетных мышц.
Оценка гистологии икроножных мышц обнаружила значительное увеличение количество волокон у мышей MDX
(11,6 ± 13,5) по сравнению с необработанными мышами MDX (2,6 ± 1,1, р = 0,03). Обработанных и необработанных
мышей MDX возросло число центральных ядер, центральных ядер в волокне по сравнению с обработанными и
необработанными мышами дикого типа. Необработанные мыши MDX показали значительное увеличение общего
числа периферических ядер по сравнению с лечеными MDX мышами (р = 0,014). Был также значительное
увеличение воспаления (3 +) между MDX и мышами дикого типа, который не был значительно изменен у
обработанных групп (табл. S3).
Количественная оценка фиброза.
Использование три-хром окрашивания Гомори для анализа процента коллагена показали значительное увеличение
коллагена в левом желудочке необработанных (3,83 ± 0,9%) и обработанных (4,39 ± 1,2%) MDX мышей по
сравнению с обеих необработанными (1,6 ± 1,1%) и лечеными (1,82 ± 0,9%) мышами дикого типа (все значения р
<0,05) (рис. 2 и 3). Икроножная мышца также показала значительное увеличение процента коллагена у
необработанных мышей MDX (6,25 ± 1,7%) по сравнению с необработанными контрольными мышами (3,0 ± 1,1%, р
<0,05) (рис. 2). Не существовало никаких существенных различий в процентах коллагена между обработанными и
необработанными группами.
Сывороточная креатинкиназа.
Существовал значительное увеличение в сыворотке крови креатинкиназы в обоих группах, получавших лечение
(5205 ± 1785 U / L, N = 8) и необработанных (5788 ± 2494 U / L, N = 10) мышей по сравнению с MDX мышами,
получавшими лечение (141 ± 108 U / L , п = 14) и необработанными (85 ± 75 U / L, N = 13) мышами дикого типа (р
<0,001). Не существовало никаких существенных различий между обработанными и необработанными мышами
MDX.
Tβ4 локализация с помощью иммуногистохимии.
Окрашивание необработанного дикого типа и MDX скелетных мышц (икроножной) анти-Tβ4 антителами
показывает локализованное окрашивание регенирирующих волокон. Последовательные слайды были окрашены на
наличие десмина, маркера для регенерирующих волокон, и эта окраска соответствовала Tβ4 окрашиванию.
Обсуждение.
Мы завершили шестимесячное испытание с использованием Tβ4 у MDX и мышей дикого типа. Мы не обнаружили
значительные улучшения в процессе лечения функции MDX скелетной или сердечной мышц по сравнению с
необработанными мышами MDX. Тем не менее, мы нашли значительное увеличение регенерирующих волокон у
обработанных MDX скелетных мышц, и эти волокна убедительно окрашивают в течение Tβ4. В то время как Tβ4
привело к увеличению регенерации у MDX скелетных мышц, это не улучшило фиброз в сердечной, скелетных
мышцах и диафрагме леченых MDX мышей. Это исследование показывает, что длительное лечение Tβ4 выгодно
для регенерации скелетных мышечных волокон у дистрофин дефицитных мышей. Предыдущие эксперименты
показали, что генное профилирование увеличило экспрессию Tβ4 в скелетных мышцах мышей MDX. Цзэн и соавт.
(2002) показали, что у 16-недельных мышей MDX в икроножной мышце обнаружено двукратное увеличение Tβ4
экспрессии мРНК. Бур и др.. (2002) показали, что другой член семьи тимозина с аналогичными свойствами,
тимозина бета-10, показал 4-кратное увеличение экспрессии у 13-15 недельных мышей MDX в икроножной мышце
по сравнению с диким типом. [9] Накаяма и соавт. (2004) показали повышающую регуляцию Tβ4 у 2-месячных
MDX в культуре клеток и показали, что он не был изменен после введения микро-дистрофина в культуру. [11] Тем
не менее, авторы не обнаружили аналогичное увеличение в культурах клеток МДД пациентов. Турок и соавт. (2005)
обнаружили значительное увеличение промиозина бета-4 (Ptmb4), белка-предшественника, в 8 из 9 моментов
времени от 1 до 20 недель в мышцах задней конечности MDX. [17] Хара и соавт. (2005) обнаружили корегуляцию
экспрессии Tβ4 в клеточных культурах MDX скелетных мышц, и что Tβ4 стимулировало миграцию и хемотаксис
миобластов. [18] Все эти исследования использовали мышей от 1 до 20 недель, период быстрой дегенерации и
регенерации MDX скелетных мышц и продемонстрировали, что Tβ4 важен в скелетных мышцах на пути
регенерации. Наше исследование подтверждает эти предыдущие доклады. Мы продемонстрировали наличие Tβ4 в
регенерирующих волокнах (рис. 4) MDX икроножной мышцы. Мы также показали значительное увеличение
количества регенерирующих волокон в икроножных мышцах Tβ4 мышей MDX (таблица S3). Этот параметр имеет
существенные различия, потому что в икроножной мышце развиваются очаги регенерации. В другом исследовании,
Tβ4 стимулировал миграцию стволовых клеток в волосяных фолликулах, что приводит к увеличению роста волос.
[31] Tβ4 может также стимулировать спутниковую миграцию клеток в клетки скелетных мышц, что приводит к
улучшению регенерации. Важно отметить, что это первая корреляция данных экспрессии генов в естественных
условиях с администрацией и гистологической локализацией, и подтверждает важную роль Tβ4 в мышечной
регенерации. Другой потенциальный механизм опосредованного воздействия Tβ4 на регенерацию - ингибирование
апоптоза. Tβ4, как было показано, снижает апоптоз в модели эпителия роговицы и подавляет активацию NF-Кб во
время TNF-α стимуляции в человеческом эпителиальных клетках роговицы. [32], [33] В сердечной ткани BockMarquette и соавт. (2004) показали, что Tβ4 снижает сердечный фиброз, вторичный по отношению к ишемическим
повреждениям. Это благотворное влияние Tβ4 на миоциты было также связано со снижением апоптоза. [28]
Предыдущие исследования
C2C12 мышечных клеток
из нашей лаборатории показали также, что Tβ4
непосредственно снизил NF-Кб активацию с TNF-α стимуляцией. [34] Эти исследования подтверждают прямое
действие Tβ4 на мышечные клетки для ингибирования NF-Кб и, следовательно, апоптоз и, возможно, улучшают
способность мышц регенерировать. Исследование Tβ4 в нескольких моделях тканей показало модуляцию различных
воспалительных цитокинов. [35] - [37] В то время как эти изменения могут остро способствовать заживлению ран,
последствия длительного Tβ4 лечения на разные уровни цитокинов не известно. Хроническое лечение может
вызвать более длительный цитокиновой ответ, что может увеличить провоспалительные и
про-фиброзные, уменьшая положительный эффект от острого лечения Tβ4. Это может
объяснить, почему это исследование не выявило никаких существенных изменений в количестве коллагена в
скелетных и сердечной мышци у Tβ4 мышей MDX. Кроме того, предыдущие исследования показали, что снижение
уровня Ac-СДКП, активного тетрапептида, которые освобождены от Tβ4, привело к увеличению периваскулярного
фиброза сердца и почек [38]. Pokharel и соавт. (2004) также показали, что у крыс экспрессирующих ангиотензинпревращающий фермент, который уменьшает уровни Ac-СДКП, было увеличение содержание коллагена. [39] Таким
образом, хроническое воздействие Tβ4 на сердечную и скелетные мышцы может привести к понижающей регуляции
экспрессии Tβ4 или активность рецепторов и снижение Ac-СДКП. Хотя мы не измеряли уровни Tβ4 у мышей,
предыдущие исследования показали значительное повышение уровней в сердце и скелетных мышцах мышей после
обработки 400 мкг Tβ4 с помощью внутрибрюшинного введения [40]. Хроническое воздействие Tβ4 потенциально
может привести к образованию анти-Tβ4 антител. Эти антитела могут нейтрализовать Tβ4 и предотвращать любое
благотворное влияние на выживаемость клеток и уменьшение фиброза. Наличие любых антител, не было оценено в
данном исследовании. Это исследование показало значительное увеличение Tβ4 позитивных волокон
в
регенерирующих скелетных мышцах мышей MDX. Не существовало благотворного влияния длительного Tβ4
лечения на функцию мышц или фиброз.
Ссылки
1. Hoffman EP, Brown RH Jr, Kunkel LM (1987) Dystrophin: the protein product of the Duchenne muscular dystrophy locus.
Cell 51: 919–928. Find this article online
2. Ryder-Cook AS, Sicinski P, Thomas K, Davies KE, Worton RG, et al. (1988) Localization of the mdx mutation within the
mouse dystrophin gene. EMBO J 7: 3017–3021. Find this article online
3. Sicinski P, Geng Y, Ryder-Cook AS, Barnard EA, Darlison MG, et al. (1989) The molecular basis of muscular dystrophy
in the mdx mouse: a point mutation. Science 244: 1578–1580. Find this article online
4. Anderson JE, Bressler BH, Ovalle WK (1988) Functional regeneration in the hindlimb skeletal muscle of the mdx mouse. J
Muscle Res Cell Motil 9: 499–515. Find this article online
5. De Luca A, Pierno S, Liantonio A, Cetrone M, Camerino C, et al. (2003) Enhanced dystrophic progression in mdx mice by
exercise and beneficial effects of taurine and insulin-like growth factor-1. J Pharmacol Exp Ther 304: 453–463. Find this
article online
6. Lefaucheur JP, Pastoret C, Sebille A (1995) Phenotype of dystrophinopathy in old mdx mice. Anat Rec 242: 70–76. Find
this article online
7. Quinlan JG, Hahn HS, Wong BL, Lorenz JN, Wenisch AS, et al. (2004) Evolution of the mdx mouse cardiomyopathy:
physiological and morphological findings. Neuromuscul Disord 14: 491–496. Find this article online
8. Spurney CF, Knoblach S, Pistilli EE, Nagaraju K, Martin GR, et al. (2008) Dystrophin-deficient cardiomyopathy in mouse:
expression of Nox4 and Lox are associated with fibrosis and altered functional parameters in the heart. Neuromuscul Disord
18: 371–381. Find this article online
9. Boer JM, de Meijer EJ, Mank EM, van Ommen GB, den Dunnen JT (2002) Expression profiling in stably regenerating
skeletal muscle of dystrophin-deficient mdx mice. Neuromuscul Disord 12: Suppl 1S118–124. Find this article online
10. Marotta M, Ruiz-Roig C, Sarria Y, Peiro JL, Nunez F, et al. (2009) Muscle genome-wide expression profiling during
disease evolution in mdx mice. Physiol Genomics 37: 119–132. Find this article online
11. Nakayama Y, Nara N, Kawakita Y, Takeshima Y, Arakawa M, et al. (2004) Cloning of cDNA encoding a regenerationassociated muscle protease whose expression is attenuated in cell lines derived from Duchenne muscular dystrophy patients.
Am J Pathol 164: 1773–1782. Find this article online
12. Porter JD, Khanna S, Kaminski HJ, Rao JS, Merriam AP, et al. (2002) A chronic inflammatory response dominates the
skeletal muscle molecular signature in dystrophin-deficient mdx mice. Hum Mol Genet 11: 263–272. Find this article online
13. Porter JD, Merriam AP, Leahy P, Gong B, Feuerman J, et al. (2004) Temporal gene expression profiling of dystrophindeficient (mdx) mouse diaphragm identifies conserved and muscle group-specific mechanisms in the pathogenesis of
muscular dystrophy. Hum Mol Genet 13: 257–269. Find this article online
14. Porter JD, Merriam AP, Leahy P, Gong B, Khanna S (2003) Dissection of temporal gene expression signatures of affected
and spared muscle groups in dystrophin-deficient (mdx) mice. Hum Mol Genet 12: 1813–1821. Find this article online
15. Rouger K, Le Cunff M, Steenman M, Potier MC, Gibelin N, et al. (2002) Global/temporal gene expression in diaphragm
and hindlimb muscles of dystrophin-deficient (mdx) mice. Am J Physiol Cell Physiol 283: C773–784. Find this article online
16. Tseng BS, Zhao P, Pattison JS, Gordon SE, Granchelli JA, et al. (2002) Regenerated mdx mouse skeletal muscle shows
differential mRNA expression. J Appl Physiol 93: 537–545. Find this article online
17. Turk R, Sterrenburg E, de Meijer EJ, van Ommen GJ, den Dunnen JT, et al. (2005) Muscle regeneration in dystrophindeficient mdx mice studied by gene expression profiling. BMC Genomics 6: 98. Find this article online
18. Hara T, Nakayama Y, Nara N (2005) [Regenerative medicine of skeletal muscle]. Rinsho Shinkeigaku 45: 880–882. Find
this article online
19. Oates K, Goldstein A (1995) Thymosin. In: DeVita VT, Hellman S, Rosenberg SA, editors. Biologic Therapy of Cancer.
Philadelphia: JB Lippincott. pp. 841–852.
20. Pantaloni D, Carlier MF (1993) How profilin promotes actin filament assembly in the presence of thymosin beta 4. Cell
75: 1007–1014. Find this article online
21. Weber A, Nachmias VT, Pennise CR, Pring M, Safer D (1992) Interaction of thymosin beta 4 with muscle and platelet
actin: implications for actin sequestration in resting platelets. Biochemistry 31: 6179–6185. Find this article online
22. Hannappel E, Huff T (2003) The thymosins. Prothymosin alpha, parathymosin, and beta-thymosins: structure and
function. Vitam Horm 66: 257–296. Find this article online
23. Safer D, Elzinga M, Nachmias VT (1991) Thymosin beta 4 and Fx, an actin-sequestering peptide, are indistinguishable. J
Biol Chem 266: 4029–4032. Find this article online
24. Safer D, Golla R, Nachmias VT (1990) Isolation of a 5-kilodalton actin-sequestering peptide from human blood platelets.
Proc Natl Acad Sci U S A 87: 2536–2540. Find this article online
25. Sanders MC, Goldstein AL, Wang YL (1992) Thymosin beta 4 (Fx peptide) is a potent regulator of actin polymerization
in living cells. Proc Natl Acad Sci U S A 89: 4678–4682. Find this article online
26. Malinda KM, Sidhu GS, Mani H, Banaudha K, Maheshwari RK, et al. (1999) Thymosin beta4 accelerates wound healing.
J Invest Dermatol 113: 364–368. Find this article online
27. Sosne G, Szliter EA, Barrett R, Kernacki KA, Kleinman H, et al. (2002) Thymosin beta 4 promotes corneal wound
healing and decreases inflammation in vivo following alkali injury. Exp Eye Res 74: 293–299. Find this article online
28. Bock-Marquette I, Saxena A, White MD, Dimaio JM, Srivastava D (2004) Thymosin beta4 activates integrin-linked
kinase and promotes cardiac cell migration, survival and cardiac repair. Nature 432: 466–472. Find this article online
29. Spurney CF, Gordish-Dressman H, Guerron AD, Sali A, Pandey GS, et al. (2009) Preclinical drug trials in the mdx
mouse: Assessment of reliable and sensitive outcome measures. Muscle Nerve 39: 591–602. Find this article online
30. Tietz N (1982) Fundamentals of clinical chemistry. Philadelphia: WB Saunders Co. pp. 682–689.
31. Philp D, Nguyen M, Scheremeta B, St-Surin S, Villa AM, et al. (2004) Thymosin beta4 increases hair growth by
activation of hair follicle stem cells. FASEB J 18: 385–387. Find this article online
32. Sosne G, Qiu P, Christopherson PL, Wheater MK (2007) Thymosin beta 4 suppression of corneal NFkappaB: a potential
anti-inflammatory pathway. Exp Eye Res 84: 663–669. Find this article online
33. Sosne G, Siddiqi A, Kurpakus-Wheater M (2004) Thymosin-beta4 inhibits corneal epithelial cell apoptosis after ethanol
exposure in vitro. Invest Ophthalmol Vis Sci 45: 1095–1100. Find this article online
34. Baudy AR, Saxena N, Gordish H, Hoffman EP, Nagaraju K (2009) A robust in vitro screening assay to identify NFkappaB inhibitors for inflammatory muscle diseases. Int Immunopharmacol 9: 1209–1214. Find this article online
35. Sosne G, Chan CC, Thai K, Kennedy M, Szliter EA, et al. (2001) Thymosin beta 4 promotes corneal wound healing and
modulates inflammatory mediators in vivo. Exp Eye Res 72: 605–608. Find this article online
36. Reti R, Kwon E, Qiu P, Wheater M, Sosne G (2008) Thymosin beta4 is cytoprotective in human gingival fibroblasts. Eur
J Oral Sci 116: 424–430. Find this article online
37. Zhang Y, Feurino LW, Zhai Q, Wang H, Fisher WE, et al. (2008) Thymosin Beta 4 is overexpressed in human pancreatic
cancer cells and stimulates proinflammatory cytokine secretion and JNK activation. Cancer Biol Ther 7: 419–423. Find this
article online
38. Cavasin MA, Liao TD, Yang XP, Yang JJ, Carretero OA (2007) Decreased endogenous levels of Ac-SDKP promote
organ fibrosis. Hypertension 50: 130–136. Find this article online
39. Pokharel S, van Geel PP, Sharma UC, Cleutjens JP, Bohnemeier H, et al. (2004) Increased myocardial collagen content in
transgenic rats overexpressing cardiac angiotensin-converting enzyme is related to enhanced breakdown of N-acetyl-Ser-AspLys-Pro and increased phosphorylation of Smad2/3. Circulation 110: 3129–3135. Find this article online
40. Mora CA, Baumann CA, Paino JE, Goldstein AL, Badamchian M (1997) Biodistribution of synthetic thymosin beta 4 in
the serum, urine, and major organs of mice. Int J Immunopharmacol 19: 1–8. Find this article online
Переведено проектом МОЙМИО: www.mymio.org
Оригинал статьи: http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.pone.0008976