выводы - Кубанский государственный аграрный университет

На правах рукописи
ИВАНАСОВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА
ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ГЕПАВЕТА
И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ В ЖИВОТНОВОДСТВЕ
06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Краснодар – 2014
1
Работа выполнена в лаборатории терапии Государственного научного учреждения
Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт
Россельхозакадемии и в хозяйствах Краснодарского края
Научный руководитель:
Антипов Валерий Александрович, доктор ветеринарных наук, член-корреспондент РАСХН, заслуженный деятель науки РФ, профессор
Официальные оппоненты: Никулин Иван Алексеевич, доктор ветеринарных
наук, профессор кафедры терапии и фармакологии
ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный
университет имени императора Петра I»
Кильметова Инна Робертовна, доктор ветеринарных наук, доцент, заместитель директора по ветеринарии ООО «Поливит»
Ведущая организация:
ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии
и терапии Россельхозакадемии
Защита состоится «05» сентября 2014 г. в «1400» часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский
государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар,
ул. Калинина, 13.
Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» http://www.kubsau.ru «03» июля 2014 г.
и официальном сайте ВАК РФ – http://vak.ed.gov.ru
Автореферат разослан «____» _________ 2014года
Ученый секретарь
диссертационного совета
Родин Игорь Алексеевич
2
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Качественный или количественный недостаток
элементов питания в рационе, концентратный тип кормления, интоксикация
(эндогенные и экзогенные токсины), недостаток одного, а чаще одновременно
нескольких жизненно важных витаминов способствуют нарушению функции
печени и гомеостаза в организме животных. Круглогодовое содержание животных в закрытых помещениях на ограниченных площадях, использование некачественных кормов, прошедших механическую и термическую обработку, сопровождаются нарушением обменных процессов, снижением защитных сил организма животных, уменьшением их продуктивности (Самохин В. Т., 1984;
Антипов В. А., Трошин А. Н., 2010).
В практике уровень продуктивности животных, состояние в их организме
обмена веществ и функции печени во многом определяются мероприятиями
с применением витаминных и гепатотропных препаратов (Уша Б. В., 1979;
Байматов В. Н., 2000; Кузнецов Н. И. и др., 1999, Кузьминова Е. В., Семененко М. П., 2014). Гепатотропные препараты блокируют действие токсинов в организме животных, чем способствуют антитоксической функции печени и тем
уменьшают в определенной степени, функциональную нагрузку на этот жизненно важный орган и предупреждают развитие нарушений его морфофункционального состояния (Колб В. Г., Камышников В. С., 1982; Левченко В. И.,
1984; Байматов В. Н., 1990; Кузнецов Н. И., 1990).
Наиболее перспективной группой в этом направлении являются эссенциальные фосфолипиды, которые входят в состав гепавета.
Оригинальный препарат гепавет, автором и производителем которого является компания ООО «ЮВИКС-ФАРМ» совместно с ЗАО «Премикс», предназначен для профилактики и лечения болезней печени животных и птиц. Поэтому изучение токсикологических параметров и фармакологических свойств
гепавета, послужило основанием для выбора темы исследований.
Цели и задачи исследований. Целью настоящей работы является ранее
не изученное комплексное исследование фармако-токсикологических свойств
гепавета и экспериментальное обоснование его гепатопротекторной эффективности в птицеводстве и свиноводстве.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
 изучить основные токсикологические и фармакологические свойства
гепавета;
 изучить параметры общетоксического действия гепавета на организм
подопытных животных (острая, хроническая токсичность, местнораздражающие свойства);
3
 изучить механизм фармакологического гепатопротекторного действия
гепавета на биохимические показатели крови продуктивных животных;
 изучить профилактическую и лечебную эффективность гепавета на
продуктивных животных.
Научная новизна. Впервые проведены комплексные токсикологические
исследования и изучены основные стороны фармакологического действия гепавета, а также использование препарата в качестве гепатопротектора на сельскохозяйственных животных.
Впервые в результате проведенных экспериментальных исследований нового препарата гепавет разработаны его показания к применению при гепатозах
в птицеводстве и свиноводстве.
Практическая значимость. Для сельского хозяйства и ветеринарной
практики предложен новый препарат гепавет, обладающий выраженными гепатопротекторными свойствами. Установленная фармакодинамическая характеристика может служить основанием его использования в условиях современной
повышенной заболеваемости гепатозами и гепатитами. Гепавет рекомендуется
применять в практике ветеринарии в качестве профилактического и лечебного
средства при патологиях печени.
Данные проведенных нами экспериментов учтены при разработке НТД.
Разработана временная инструкция по применению, утвержденная начальником
Управления ветеринарии Краснодарского края В.Н. Шевкопляс. Препарат выпускает ООО «ЮВИКС-ФАРМ» (г. Краснодар).
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Характеристика физико-химических свойств гепавета.
2. Экспериментальные данные токсикологических и фармакологических
свойств гепавета.
3. Результаты изучения ростостимулирующего действия гепавета на птице и свиньях.
4. Результаты изучения лечебно-профилактических свойств гепавета на
птице и свиньях.
5. Практические предложения по применению гепавета в ветеринарии.
Степень достоверности и апробация результатов. Экспериментально
полученный цифровой материал обрабатывали методом вариационной статистики с применением пакета прикладных программ Microsoft Excel. Для получения
достоверных результатов все опыты проводили повторно не менее трех раз.
Результаты экспериментальных и клинических исследований, являющихся основой диссертации, доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ученого совета Краснодарского НИВИ (2006–2011 гг.); на Международной научнопрактической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИ4
ВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» (Краснодар,
2006); на Международной научно-практической конференции, посвященной 65летию ветеринарной науки Кубани (Краснодар, 2011).
Публикации материалов диссертации. Основные материалы диссертации опубликованы в 5 научных статьях, 2 из которых – в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 123 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора
литературы, материалов и методов исследований, собственных исследований,
заключения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Список использованной литературы включает 143 источника, в том числе
иностранных – 35. Работа иллюстрирована 35-ю таблицами и 19-ю рисунками.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Работа выполнена в период с 2006 по 2013 год на базе лаборатории терапии ГНУ Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института,
а так же в хозяйствах Краснодарского края: ЗАО «Премикс» Тимашевского
района, ООО «Кубанский бекон» Павловского района, ОАО племзавод «Индустриальный» Тимашевского района, ФГУП ППЗ «Русь» Кореновского района и
ООО «Первомайская ИПС» Ленинградского района в соответствии с научной
тематикой Краснодарского НИВИ (№ госрегистрации 15070.3666026906.06.08.004.5).
В ходе исследований была проведена серия научных экспериментов
и производственные испытания. Общая схема представлена на рисунке 1.
Кровь для морфологических и биохимических исследований брали от
животных до кормления. При гематологических исследованиях проводили подсчет форменных элементов крови на автоматическом счетчике крови «Пикоскель» (ВР). Уровень гемоглобина определяли гемоглобинцианидным методом.
Уровень глюкозы определяли с помощью наборов фирмы «Labsystems» (Финляндия), общий белок, креатинин и мочевину, а также активность щелочной
фосфатазы – с помощью наборов фирмы «Диаком-Синтеко» (Россия). Уровень
содержания и активность аспартат- и аланинаминотрансфераз определяли с помощью наборов фирмы «KONE» (Финляндия), уровень общего холестерина с
помощью наборов фирмы «RANDOX» (США).
Биохимические показатели и активность ферментов определяли на биохимическом полуавтоматическом анализаторе ФП-901, «Labsystems» (Финляндия).
Острую и хроническую токсичность, в том числе раздражающее действие
на слизистую оболочку глаза и кожно-резорбтивное действие гепавета определяли согласно методическим рекомендациям по изучению общетоксического дей5
ствия фармакологических средств, методическим указаниям по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней
животных; ГОСТ Р 54063-2010 «Средства лекарственные для животных. Методы
определения безвредности»; Методическим указанием по изучению общетоксического действия фармакологических веществ (Хабриев Р. У., 2005).
Фармако-токсикологические свойства Гепавета и его применение
в животноводстве
Действие на морфо-биохимические
показатели крови
Ростостимулирующее действие
Профилактический и лечебный эффект
при патологиях печени
Свиноводство
Птицеводство
Изучаемые параметры: общеклиническое действие
Экономическая эффективность
Выводы
Предложения производству
Рисунок 1 – Общая схема исследований
Раздражающее действие препарата проводили в двух сериях опытов
на 4 молодых кроликах-альбиносах, массой 2300–2700 г и 20 морских свинках
массой 250–270 г в соответствии с Методическими указаниями по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных, разработанных сотрудниками ВНИИНБЖ (Воронеж, 1987).
Реакцию кожи учитывали ежедневно по шкале оценки проб через 1 час после удаления образца. После последней аппликации регистрировали состояние
каждого участка через 5 мин, 30 мин, 1, 24, 48 и 72 часа после снятия образцов.
Во второй серии опыта нами измельчался препарат до пылеобразного состояния и вводился в нижний отдел конъюнктивального мешка глаза кролику.
Во второй глаз закапывали 0,1 мл дистиллированной воды в качестве контроля.
6
После инсоляции веки соединяли и удерживали в течение 1 сек. Осмотр обеих
глаз кроликов проводили через 1, 24, 48 и 72 часа после воздействия и оценивали по приведенной шкале в ГОСТе.
Терапевтические свойства препарата проверяли на больных гепатозами
животных и птице (цыплята-бройлеры), профилактические свойства исследовали на клинически здоровых животных. И здоровые, и больные животные,
и птица, участвовавшие в экспериментах, подвергались клиническим испытаниям по общепринятым методикам.
Комплексные испытания велись с учетом условий кормления подопытных животных, их содержания и ухода.
При проведении экспериментов на больных животных учитывали их общее состояние, активность, снижение упитанности, замедление в росте и отставания развития.
Выводы о положительном влиянии препарата делали по полученным результатам комплексных клинических, биохимических, гематологических методов исследования.
Постановка опытов, состав рационов каждой группы животных и птиц
(цыплят-бройлеров), представлен в работе. В экспериментах был использован
концентратный тип кормления животных.
За всеми подопытными животными в период назначения гепавета вели
клинические наблюдения и регистрировали их общее состояние, изменения
аппетита, продуктивность, заболеваемость и сохранность животных. Показателем продуктивности считали прирост массы тела животных. Взвешивали животных индивидуально до применения препарата и по завершению опытов. Используя полученные данные, высчитывали средний прирост массы животного и
его среднесуточный привес.
Для патоморфологического исследования образцы свежей ткани подвергали криостатированию с получением срезов в 5–7 мкм или фиксировали их
в 10%-м нейтрализованном растворе формалина для получения в последующем
парафиновых срезов толщиной в 2–5 мкм.
Обезвоживание, обезжиривание и проводку тканей с их уплотнением
в парафинах с различной температурой плавления (37–57 °С) проводили в микропроцессорном автомате «Сакура» (Япония) по заранее составленной программе.
Заливка тканей в парафин с воском и формирование тканевых блоков – ручным
способом. Микротомирование парафиновых блоков тканей осуществляли с помощью санного (Россия) и ротационных (Райхерт, Австрия; АО-820, США) микротомов, что позволяло получить серийные срезы. После депарафинирования,
срезы окрашивали гематоксилин-эозином, заключали в пихтовый (канадский)
7
бальзам под покровные стекла и готовили для визуального просмотра постоянные
микропрепараты.
Результаты исследований проходили биометрическую обработку с помощью программного обеспечения фирмы Microsoft Excel 2007. Критерий достоверности определяли по таблице Стъюдента.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Фармако-токсикологические свойства гепавета
Гепавет представляет собой сухой порошок серого цвета без запаха
и вкуса. Для производства гепавета применяют следующее сырье и материалы:
1. Фосфолисан, полученный из пищевого фосфатидного продукта или
фосфатидной эмульсии по ТУ 9146-002-57531875-2000.
2. Экстракты натуральные растворимые из растительного сырья
по ТУ 9140-004-57531875-004.
3. Бентонит по ТУ 2164-002-00136716-2001.
4. Диацетофенонилселенид, получаемый организацией – производителем
(ООО «Сульфат», г. Саратов) по ТУ, утвержденному Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ, 02.07.1996 г.
5. Мука кормовая по нормативной документации.
Гепавет по содержанию токсичных элементов, микотоксинов, пестицидов, нитратов и нитритов, радионуклеидов, по микробиологическим показателям и токсичности не должен превышать нормативы, установленные ветеринарно-санитарными требованиями, утвержденными в установленном порядке.
Гепавет в воздушной среде в присутствии других веществ не образует токсичных соединений и в организме не аккумулируется. Хранят гепавет при относительной влажности 75 % – 6 месяцев со дня изготовления.
3.2 Оценка острой токсичности гепавета
Изучение токсичности гепавета проводили в остром опыте на лабораторных
животных (крысах). С этой целью было взято 72 белых крысы массой 180–200 г.
Животных разделили на 9 групп по 8 крыс в каждой и поместили в специальные клетки для адаптации. Кормили животных полноценным кормом, состоящим из смеси пшеницы, овса, ячменя, подсолнечника. Доступ к воде – свободный.
Гепавет задавали с кормом, предварительно смешав его с вареным яичным желтком. Каждой группе соответствовала своя доза гепавета от 1,4 г/кг
до 24 г/кг. Контрольным животным 9-й группы вводили яичный желток в тех
же количествах. Введение гепавета крысам в выше представленных дозах не вызывало каких-либо признаков интоксикации. У крыс не отмечали изменений
8
в поведении, сохранялись рефлексы. Гибель животных не зарегистрирована.
Данные опыта представлены в таблице 1.
Таблица 1 – Определение острой токсичности для крыс при применении гепавета
№
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Масса тела, г
187±2,08
190±1,15
189±3,04
194±3,12
186±2,46
193±1,93
196±2,38
195±3,01
–
Доза, г/кг массы тела
1,4
2,1
3,2
4,7
7,1
10,7
16,0
24,0
–
Доза, г/ животное
0,26
0,40
0,61
0,91
1,32
2,07
3,14
4,68
–
Смертность
–
–
–
–
–
–
–
–
–
При паталогоанатомическом исследование внутренних органов опытных
крыс патологических изменений в организме животных обнаружено не было.
Гепавет по степени воздействия на теплокровных животных относится
к веществам малоопасным 4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76.
3.3 Параметры хронической токсичности гепавета
Исследования выполнены на 80 крысах массой 150–200 г, которые были
разделены на 4 группы по принципу аналогов по 20 животных в каждой. Гепавет задавали с кормом, предварительно смешав его с вареным яичным желтком.
Первая опытная группа животных получала терапевтическую дозу гепавета
(1 г/кг массы тела), вторая опытная группа – трехкратную дозу гепавета (3 г/кг
массы тела), третья опытная группа – пятикратную (5 г/кг массы тела) дозу препарата. Четвертая группа животных служила контролем.
В течение всего эксперимента отмечали изменения в общем состоянии
и поведении животных (изменения массы тела, подвижность, аппетит, состояние шерсти и кожного покрова).
В начале, середине и конце опыта у крыс исследовали морфологический состав периферической крови, а также биохимические показатели сыворотки крови.
На протяжении хронического эксперимента не выявлено статистически
значимых отклонений в количестве эритроцитов, тромбоцитов и уровне гемоглобина у животных, получавших гепавет, по сравнению с контролем. Также не
замечено существенных изменений в уровне общего белка в сыворотке крови,
что подтверждает стабильность белковообразующей функции печени.
Исследования активности аспартат- и аланинаминотрансфераз, щелочной
фосфатазы сыворотки крови показали, что через 3 месяца введения крысам гепавета активность этих ферментов не выходила за пределы нормы для данного
9
вида лабораторных животных и поэтому ее колебания могут быть расценены
как функциональные.
Применение гепавета не влияло на уровень глюкозы, мочевины и креатинина, а также уровень холестерина в крови опытных крыс.
При измерении массы тела крыс, выявили возрастание массы тела животных всех опытных групп. Отмечено, что максимальный прирост наблюдался
при введении гепавета в дозе 3 г/кг массы тела. Непосредственно в первой
группе прирост массы тела на 1 крысу составил 115,8 %, во второй – 121,9 %,
а в третьей – 117,1 % по отношению к контролю.
Таким образом, по результатам проведенных экспериментов установлено,
что в период длительного назначения препарата гепавет не только не оказывал
негативного влияния на рост и развитие лабораторных животных, но и способствовал увеличению их массы тела.
3.4 Местно-раздражающее действие гепавета
Местно-раздражающее действие гепавета изучали на 4-х кроликах
и 20 морских свинках. В период наблюдения за морскими свинками контролировали толщину кожной складки на месте аппликации, а в частности наличие
эритемы, пузырей, микровизикул, определяли местную кожную температуру.
Каких-либо изменений в месте аппликации гепавета не обнаружено как в период использования препарата, так и после его применения. Эластичность и упругость кожи подопытных животных оставалась в пределах нормы. При пальпации в местах аппликации болевая реакция не выявлена. Покраснения, отека
кожи и геморрагий не отмечалось.
Кроликам под верхнее веко правого глаза вводили измельченный гепавет.
Для контроля в левый глаз этим же животным закапывали дистиллированную
воду. Через 5 мин у кроликов регистрировалось повышенное выделение слезы,
которое исчезало через 15–20 мин. Наблюдение за животными велось в течение
14 дней. Гиперемии конъюнктивы, химатоза, помутнения роговицы и сужения
зрачка не наблюдалось. Радужная оболочка оставалась без видимых изменений.
На основании всего перечисленного местно-раздражающую реакцию организма животных оценили как отрицательную.
3.5 Действие гепавета на биохимические и морфологические показатели животных
Изучение действия гепавета на морфо-биохимические показатели крови
свиней проводилось на свиньях 122-дневного возраста в период откорма
в сравнении с фосфатидным концентратом.
10
По принципу аналогов было сформировано 3 группы: 1-я контрольная
(26 голов – задавали с кормом 3 % фосфатидного концентрата); 2-я опытная –
(26 голов – 5 % гепавета) и контрольная группа, которой никаких препаратов
не давали.
Установлено, что при проведении опыта животные опытных групп вели
себя активно и не страдали потерей аппетита.
Было установлено, что в контрольной группе вначале опыта отмечали
уменьшение количества эритроцитов, а в дальнейшем данный показатель недостоверно возрастал. С 22-го дня было отмечено незначительное снижение количества эритроцитов, которое фиксировалось до завершения опыта. Нами
также отмечалось, что количество гемоглобина у животных на начало опыта
составляло в контроле 115,2±1,52 г/л, на момент завершения эксперимента
снижалось до 112,45±0,45 г/л, в то время как в двух опытных группах количество гемоглобина крови увеличивалось к концу опыта до 108,2±1,47 г/л
и 108,5±1,22 г/л соответственно.
Количество лейкоцитов в контрольной группе было ниже физиологической нормы и составляло на 20 день опыта 6,12±0,22 109/л, а на 60 день опыта
8,78±0,39 109/л, в то время как количество лейкоцитов у опытных животных
было в пределах возрастной нормы.
Результаты биохимического анализа крови показали, что количество общего белка в опытных группах находилось в пределах нормы, чего нельзя сказать об этом показателе в контрольной группе. Он возрастал, начиная с 40 дня,
превышая верхние границы нормы, и был выше, чем в опытных группах
на 12,9 % относительно группы животных, которым применяли фосфатиды
и на 4,2 % по сравнению с группой, в которой применяли гепавет. В опытных
группах показания общего белка находились в пределах нормы. В группе, получавшей гепавет, отмечено повышение количества общего белка в сравнении
с начальными показателями в данной группе животных. Показания аланинаминотрансферазы снизились на 21,5 %, а аспартатаминотрансфераза на 44 %
в сравнении с контрольной группой.
Резюмируя выше приведенные результаты, мы отмечаем, что применение
гепавета приводит к стабилизации функциональной работы печени и к нормализации биохимических и морфологических показателей крови.
Во втором опыте исследования гепавета были проведены на цыплятахбройлерах кросса «СК Русь 6» с 7-го дня вылупления до 7-ми недельного возраста. В период выращивания цыплят-бройлеров использовали гепавет в дозе
5 % к корму и изучали его влияние на развитие и рост птицы.
11
Контрольную и опытную группы подбирали по принципу аналогов. В качестве сравнения использовали фосфотидный концентрат, как добавку к основному
корму. По результатам опыта были получены следующие данные (таблица 2).
Таблица 2 – Содержание общего белка и белковых фракций, щелочной фосфатазы,
кальция и фосфора в сыворотке крови цыплят-бройлеров, (n=20)
Показатели
Общий белок, г/л
Альбумины, %
α–глобулины, %
β–глобулины, %
γ–глобулины, %
Глобулины всего, %
Отношение альбуминов
к глобулинам
Щелочная фосфатаза, Ед.
Кальций, ммоль/л
Фосфор, ммоль/л
АлАТ, Е/л
АсАТ, Е/л
1 контрольная
42,7±2,16
31,9±0,16
18,8±1,13
11,9±0,08
37,4±5,15
68,1
Группы
2 опытная (фосфот.)
43,3±3,18
33,7±0,16
18,2±4,18
10,6±0,09
37,5±5,18*
66,3
3 опытная (гепавет)
44,3±2,14
34,9±0,25
17,2±3,21
10,2±0,15
37,7±6,18*
65,1
0,47
0,51
0,54
505,2±3,68
2,7±3,16
2,01±0,07
4,27±0,15
221,3±2,21
430,8±0,9
2,6±0,18
1,96±1,07
3,34±1,12
198,1±5,43*
440,3±1,36
2,8±2,14
1,98±0,07
3,17±9,13*
183,8±8,83*
*Разница с контролем достоверна (Р< 0,05)
Согласно приведенным данным можно отметить незначительное повышение общего белка в опытных группах, которое превысило контроль на 1,4 %
и на 3,7 % соответственно. Небольшое повышение альбуминов в крови цыплятбройлеров опытных групп на 5,6 % и на 9,4 % соответственно. Вероятно, содержание альбуминов повышает синтез белков в тканях. Отмечено незначительное
повышение γ-глобулинов, которое способствует повышению защитных функций
организма. Щелочная фосфатаза в опытных группах находилось в пределах
нормы и составила 430,8±0,9 Ед и 440,3±10,36 Ед, а в контрольной группе было
выше нормы (505,2±3,68 Ед). Фосфор в контроле чуть превышал норму,
но в опытных группах показания стабилизировались и составили
1,96±0,07 ммоль/л и 1,98±0,07 ммоль/л соответственно. Активность аланинаминотрансферазы в группах, которых применяли препараты, была ниже контрольной на 21,8 % и 25,8 % соответственно. Активность аспартатаминотрансферазы в опытных группах понижается на 10,5 % и на 17 % соответственно.
На основании полученных данных этого опыта можно судить о стабилизирующем действии гепавета на биохимический состав крови цыплятбройлеров. Снижение активности трансаминаз указывает на отсутствие патологии печени у подопытной птицы.
12
3.6 Патморфология и ВСЭ при применении гепавета
Исследования были проведены на поросятах, которые участвовали в эксперименте по изучению морфо-биохимических показатели крови. Был проведен
убой по 1-му животному в каждой группе (опытной и контрольной). При
осмотре внутренних органов поросенка опытной группы, макроскопически патологоанатомических изменений не обнаружено. Расположение органов в полостях было анатомически правильным. Печень не увеличена, края ее заостренные.
Капсула гладкая, блестящая. Цвет с поверхности и на разрезе темно-вишневый.
Рисунок хорошо выражен, соскоб с поверхности разреза небольшой, кровянистый. Консистенция органа умеренно плотная. Желчный пузырь заполнен желчью темно-зеленого цвета, жидкой консистенции. Проходимость желчных протоков сохранена. Проведенные гистологические исследования печени животных,
находящихся в опытной группе, указывают на отсутствие в ней различных патологических процессов. При гистологическом исследовании органов поросенка
контрольной группы выявлена гидроническая дистрофия эпителия канальцев
почек. В цитоплазме обнаружены вакуоли. Клетки увеличены в размере, округлой формы, в отдельных клетках наблюдается кариолизис.
В печени животного контрольной группы выявлена белковая зернистая
дистрофия печени. В цитоплазме отдельных гепатоцитов отмечена ацидофильная зернистость. В отдельных местах наблюдалось дискомплексация балочной
структуры, атрофия гепатоцитов.
Таким образом, данные исследований показали, что введение в корм свиней гепавета не оказывает токсического действия на органы и ткани и не вызывает в них структурных изменений.
По результатам ветеринарно-санитарной экспертизы, которая включала в
себя органолептическую и дегустационную оценку мяса и бульона, а также
биохимические исследования, состоящие из определения концентрации водородный ионов с помощью pH-метра, реакции на пероксидазу и с сернокислой
медью в бульоне, установили, что использование гепавета в дозе 5 % к корму
отрицательно не влияет на качество и вкусовые особенности мяса свиней.
3.7.Фармакологические свойства гепавета
3.7.1 Ростостимулирующее действие гепавета
Исследования были проведены на цыплятах-бройлерах ППЗ «Русь». Зоогигиенические и технологические параметры выращивания были идентичными для птиц и соответствовали технологическим нормам. Вся подопытная птица находилась в одинаковых условиях ухода, кормления и содержания, кроме
13
дополнительного включения в рацион опытных групп испытуемых препаратов.
Схема научно-хозяйственного опыта приведена в таблице 3.
Таблица 3 – Схема опыта на цыплятах-бройлерах при применении гепавета
Группа
1-контрольная
2-я опытная
3-я опытная
Характеристика кормления
Стандартный комбикорм (СК)
СК + фосфотидный концентрат
СК + 1 % гепавета
О влиянии исследуемого препарата гепавет на организм подопытных
цыплят судили по динамике массы. В таблице 4 приведены данные об изменении массы птиц.
Таблица 4 – Динамика массы и сохранность бройлеров при применении гепавета, г
Возраст, недель
2-я
3-я
4-я
5-я
6-я
7-я
Сохранность, %
1-я контроль
157,6±2,21
413,6±7,65
793,3±4,05
1243,6±1,97
1752,3±2,21
2212,6±7,73
94
Группы
2-я опыт (фосфотид.)
159,1±3,72
424,3±3,01
822,1±3,48
1259,1±1,71
1755,1±2,07
2250,1±1,48
96
3-я опыт (гепавет)
155,1±2,11
425,6±3,22
808,2±2,05
1238,6±1,39
1742,6±1,06
2261,6±3,29
98
Так, к 7-ми недельному возрасту средняя масса цыпленка 3-опытной группы
составила 2261,6г, что на 49г (2,2 %) превысило показатели контроля. Цыплята 2й опытной группы по живой массе примерно были равны 3-й опытной группе.
Следовательно, мы можем сделать вывод, что введение гепавета в количестве
1 % к корму оказало положительное действие на рост и развитие цыплят. Сохранность бройлеров всех подопытных групп была довольно высокой и находилась в пределах 94–98 %.
Также нами установлено, что суточный расход корма у цыплят-бройлеров
третьей опытной группы, в которой применяли гепавет, постепенно увеличивается до 5-недельного возраста по сравнению с контролем. На 6-й неделе расход
корма уменьшается на 1,36 %. К концу опыта расход корма в третьей опытной
группе превышает контроль на 0,43 %. Установлено, что включение гепавета
в кормосмеси для цыплят-бройлеров, способствует повышению перевариваемости и усвояемости питательных веществ корма. Положительное влияние гепавета отразилось на более высокой скорости роста опытной группы, по сравнению с контролем, при меньших затратах корма на прирост массы.
Исследование ростостимулирующего действия препарата гепавет проводили на свиньях 120-дневного возраста, порода – крупная белая. По принципу
14
аналогов было сформировано две группы – опытная (25 голов) и контрольная
(23 головы).
Результаты проведенного опыта показали, что свиньи переносили применение препарата в указанных выше дозировках хорошо. Животные во все дни
наблюдения были активными, поведением и аппетитом не отличались от поросят контрольной группы. Заболеваний среди поросят всех групп не регистрировали в течение всего срока опыта.
Полученные данные указывают, что препарат гепавет стабильно стимулирует рост массы тела свиней. Средняя масса тела опытной и контрольной
группы составила 58 и 55,5 кг соответственно. Среднесуточный прирост
в опытной группе на 21,7 % выше, чем в контроле.
Результаты исследований биохимии сыворотки крови в начале опыта, как
в контрольной, так и в опытной группах у большинства животных, показали на
наличие нарушения обменных процессов в организме, а в частности в печени,
которые отразились в виде снижения содержания общих белков от нормы, снижения количества γ-глобулинов и понижения α-глобулиновых фракций. После
30 дней опыта результатами исследований биохимии сыворотки крови установлено, что включение в рацион препарата оказало нормализующее влияние на
обмен веществ и состояние печени свиней. У животных опытной группы на конец опыта уровень белковых фракций: альфа-, бетта-, глобулинов- стал выше
на 8,2 % и 7,3 % по сравнению с контролем, количество гамма глобулинов поднялось на 31,5 % за период опыта ,тогда как в контроле этот показатель снизился. Наблюдалось понижение содержания билирубина на 4,6 % по сравнению
с контрольными данными. Активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови понижалась на 36,3 % по сравнению с фоном, а по сравнению
с контролем на 43,1 %, уровень аспартатаминотрансфиразы понизился (АсАТ)
на 43,1 % в сравнении с фоном за период опыта.
Таким образом, применение препарата свиньям в первый период откорма
способствует лучшему усвоению корма, стимулирует рост массы тела, а также
нормализует основные показатели работы печени в организме.
3.7.2 Действие гепавета на обменные процессы поросят-сосунов
Изучение проводили на глубоко-супоросных свиноматках и поросятахсосунах. В первой серии опытов было подобрано 3 группы глубоко-супоросных
свиноматок. Животным опытных групп за 15–20 дней до опороса назначали гепавет, свиноматкам первой группы (n = 12) в дозе 1 % и второй (n = 12) – 3 %
гепавета к корму. Свиньям третьей группы (n = 35) препарат не назначали, и
они служили контролем.
15
Данные свидетельствуют о том, что назначение гепавета глубокосупоросным свиноматкам положительно влияло на развитии новорожденных поросят. При опоросе свиноматок в контрольной и опытных группах количество поросят было практически одинаковыми по (9,2–10,1 поросенка на свиноматку).
Осмотр новорожденных поросят, как в опытных, так и в контрольной группах показал, что поросята были хорошо и удовлетворительно развитыми. Однако уже к
30-дневному возрасту количество поросят на 1 матку в опытных группах было на
2,9–3,5 % больше, а хорошо и удовлетворительно развитых на 4,3–5,9 % больше.
К отъему в опытных группах свиноматок в помете в среднем было
8,7–8,75 поросенка, что на 7,2–7,8 % больше, чем в контрольной группе, а количество хорошо и удовлетворительно развитых – на 1,5 % и 8,6 % больше.
Таким образом, назначение гепавета глубоко-супоросным свиноматкам
существенно сказалось: на приросте массы тела поросят к отъему. Поросята
от свиноматок первой опытной группы, получавших гепавет в дозе 1 % к корму
имели массу тела к отъему на 3,9 кг (на 38,6 %), а второй (3 % к корму) –
на 2,1 кг (на 20,7 %) больше, чем свиньи контрольной группы.
Во второй серии опытов по применению гепавета под наблюдением
находились 3 группы глубоко-супоросных свиноматок: контрольная и 2 опытные, по 10 голов в каждой.
Свиноматкам первой и второй опытных групп гепавет назначали в течение 10–15 дней до и после опороса в дозах соответственно 1 и 3 % к корму.
Свиньям контрольной группы препараты не назначали. Результаты исследований представлены в таблице 5.
Таблица 5 – Эффективность действия препарата гепавета на прирост поросят,(n=10)
Доза гепавета
(% к корму)
Контрольная
–
Опытная 1
1
%
к контр.
Опытная 2
3
%
к контр.
Группы
Получено поросят Масса тела поросят, дни Среднесуточный
на 1 свиноматку
прирост, г
1
6
35
8,5
1,06
2,5
7,7
220
8,75
1,12
2,8
8,2
234,3
102,9
105,7
112,0
106,4
106,5
8,8
1,08
2,6
9,2
262,8
103,5
101,9
104,0
119,4
119,4
Данные таблицы 6 дают основание утверждать, что назначение свиноматкам гепавета до и после опороса благоприятно влияет на рост и развитие поросят. Так, масса тела поросят опытных групп на 6 день после рождения была на
0,1–0,3 кг (на 4,0–12,0 %) выше, чем у поросят контрольной группы. Эта же
тенденция сохранилась и к 35 дню.
Среднесуточный прирост массы тела был наиболее высоким у поросят
полученных от свиноматок опытных групп – на 19,4 % выше, чем у поросят
контрольной группы.
16
Назначение гепавета свиноматкам до и после опороса способствовало
значительному улучшению состояния обмена веществ в организме поросят
опытных групп. Результаты гематологических и биохимических исследований
проб крови от поросят на 20 день после их рождения отражают, что применение
гепавета оказывает положительное влияние на организм животных, что проявляется увеличением в сыворотке крови общего белка на 19,5 %; 21,1 % и снижением в крови поросят количества лейкоцитов на 26,6 %; 20,4 % относительно контроля. Активность аланинаминотрансфераз снизилась на 30,8 %, 35,8 % в сравнении с контролем, активность аспартатаминотрансфераз снизилась на 68 %,
73,1 % в сравнении с контролем, что говорит о снижении патологии печени.
После 45 дней опыта изучена оплодотворяющая способность семени путем искусственного осеменения свиноматок разбавленными эякулятами.
Установлено, что у хряков, получавших комбикорм с 3 % гепавета к корму, объем эякулята, концентрация спермиев и их общее количество в эякуляте
были выше, чем у животных других групп (таблица 6).
Таблица 6 – Качество спермы хряков после применения гепатета
Показатели
контроль
Уровень гепавета в составе комбикорма, %
Кол-во исследованных эякулятов
Объем эякулята, мл
Концентрация спермиев, млн/мл
Общее кол-во живых спермиев в эякуляте, %
Оплодотворяющая способность семени
(при двухкратном осеменении), %
Количество полученных спермодоз от одного хряка
–
48
307
190
58,3
Тип комбикорма
опытная
I-я
II-я
1%
3%
1
3
48
48
239,8
351
210
162
69,2
73,7
III-я
5%
5
48
275,6
146
44,6
76
78
79,4
78
187
189
236
223
Итак, объем эякулята в I опытной группе снизился на 21,9 %, во II опытной группе увеличился на 14,3 % и в III опытной группе уменьшился на 10,3 %
в сравнении с контролем. Концентрация спермиев в I опытной группе увеличилась на 10,5 %, во II опытной группе уменьшилась на 14,8 %
и в III опытной группе уменьшился на 23,2 % в сравнении с контролем. Общее
количество спермиев в эякуляте в первой опытной группе выросло на 18,6 %,
во второй опытной на 25,5 %, в третьей опытной уменьшилось на 23,5 %
по сравнению с контролем. Увеличилась оплодотворяющая способность семени
во всех опытных группах на 2,6 %; 4,4 % и 2,6 % соответственно. Количество
полученных спермодоз выросло на 1 %, на 26,2 % и на 13,1 % соответственно.
Снижение эффективности гепавета в других опытных группах скорее связано
с известной закономерностью: при повышении липидов после определенного
17
уровня на каждый процент ввода в состав комбикорма необходимо увеличить
на 0,5 % уровень протеина.
Оплодотворяющая способность спермы хряков всех подопытных групп
составила 78 % и превысила на 4 % технологический норматив. Использование
комбикорма с уровнем гепавета 3 % отмечено как более эффективное.
3.8. Лечебно – профилактическое действие гепавета
3.8.1 Лечебно-профилактическое действие гепавета при гепатозах птиц
Группа цыплят-бройлеров из 100 голов трехнедельного возраста была
разделена на три равные группы. Первая группы была контрольной и получала
обычный кормовой рацион. Во второй опытной группе цыплятам-бройлерам
добавляли 3 % фосфотидный концентрат к основному корму. В третьей опытной группе добавляли гепавет 1 % к основному корму. Цыплят всех групп подвергали систематическим исследованиям, в начале и конце опыта взвешивали.
Данные представлены в таблице 7.
Таблица 7 – Динамика массы и сохранность цыплят-бройлеров при профилактике
гепатозов (n=32), г
Возраст,
недель
контроль
%
3-я
4-я
5-я
6-я
7-я
Сохранность, %
403,5±5,03
793,8±3,25
1243,3±9,93
1738,3±2,25
2212,2±3,72
69
100
100
100
100
100
100
Группы
2-я опытная
(фосфотид.)
426,3±5,02
821,2±6,41*
1269,3±5,71
1765,1±2,34
2251,5±1,49
85
%
105,6
103,4
102
101,5
101,7
130
3-я опытна
(гепавет 1 %)
428,7±8,21
818,4±2,25
1280,6±3,41*
1748,6±4,36*
2281,7±3,26
94
%
106,2
103,1
103
100,5
103,1
136,2
*Разница с контролем достоверна (Р< 0,05)
К концу опыта средняя масса цыпленка 3-й опытной группы составила
2281,7±3,26 г, что на 3,1 % превысило показатели контроля. Был отмечен падеж
животных, в контрольной группе погибло 10 цыплят-бройлеров, во 2-й опытной 2
цыпленка. Сохранность третьей опытной группы превысила контроль на 36,2 %.
Отсюда можно сделать вывод, что введение гепавета в количестве 1 %
к корму положительно сказалось на росте и развитие цыплят. Использование
гепавета в рационах исследуемой птицы оказало стимулирующее действие
на развитие внутренних органов.
По данным убоя мы установили, железистый желудок цыплят-бройлеров,
получавших гепавет, имеет большую массу, чем в контроле (на 8,6 %). Тогда
как мышечный желудок у цыплят опытных групп имеет сниженную массу,
а в отношении развития кишечника у цыплят-бройлеров, получавших гепавет,
18
масса его выше, чем в контроле, что создает условия для более полного усвоения питательных веществ рациона в организме подопытной птицы.
Вычисление процентного отношения массы печени цыплят к массе непотрошеной тушки установило, что печень составляет следующее отношение:
2-я опытная – 2,27 %; 3-я опытная – 2,12 %. Эти значения не выходят за пределы норм для птиц.
Показатели массы печени в опытных группах ниже на 15,7 %, чем в контрольной, так как гепавет оказывает благоприятное влияние на процессы обмена, происходящего в печени.
Анализ биохимических показателей сыворотки крови цыплят-бройлеров
показал, что в течение опыта во всех группах цыплят-бройлеров показатели
общего белка находились в пределах физиологической нормы. Опытная группа,
получавшая фосфотидный концентрат, снизила показатели белка в сравнении
с контролем на 3,4 %, а получавшая гепавет превысила на 4,4 % в сравнении
с контролем. Альбумины в опытных группах увеличились соответственно
на 12,5 % и на 15,6 % и составили 34,04±1,03 % и 34,98±0,12 %. Уверенно снизились показания γ-глобулинов в опытных группах на 3,4 % и 12,1 % соответственно и составили 38,81±0,56 и 35,29±0,54. Аланинаминотрансфераза снизилась в опытных группах на 10,3 % и на 17,2 %, аспартатаминотрансфераза
уменьшила свои показания в опытных группах соответственно на 6,5 % и 7,4 %.
Общий билирубин снизился на 37,1 % и 39,5 % соответственно.
3.8.2 Лечебно-профилактическое действие гепавета при гепатозах свиней
Эффективность применения гепавета, с целью профилактики гепатозов
проводилась на поросятах отъемного возраста в 60 дней. По принципу аналогов
было сформировано 4 группы поросят крупной белой породы по 10 голов в
каждой. Первая группа служила контролем. Поросятам второй группы внутримышечно вводили селенит натрия в дозе 0,1 мг/кг массы тела в виде 0,1%-ого
водного раствора однократно. Поросятам третьей и четвертой опытных групп
ежедневно скармливали гепавет в дозах соответственно 1% и 3% к корму. При
наблюдении за поросятами общее состояние животных было удовлетворительным, аппетит хороший, щетина гладкая, не наблюдалось отклонений в поведении. Поросята контрольной группы были менее активны при поедании корма,
отмечалась взъерошенность шерстного покрова, жажда. Падежа в данном опыте не наблюдалось. Результаты исследований изложены в таблице 8.
Данные свидетельствуют, что назначение поросятам гепавета положительно сказалось на их привесах. Так, среднесуточный привес у поросят второй
19
опытной группы был на 45,6 % больше, а в третьей на 72,5 %, чем у поросят
контрольной группы.
Таблица 8 – Показатели продуктивности
им разных доз гепавета
Группы
Препарат
Контрольная
Опытная 1
Опытная 2
Опытная 3
–
селенит Nа 0,1 % р-р, 0,1мл/кг
гепавет 1 % к корму
гепавет 3 % к корму
поросят-отъемышей после назначения
Масса тела (кг)
до опыта после опыта
7,2
12,4
10,2
14,2
6,0
13,6
7,8
16,8
Среднесуточный
прирост массы, г
186,0
183,0
271,0
321,0
О степени дистрофических изменений в печени судили по активности
трансфераз, снижение уровня которой во второй и третьей опытной группе говорило о положительном влиянии гепавета на функцию печени. Так аланинаминотрансфераза снизилась на 32,5 % и на 29,9 % соответственно,а аспартатаминотрансфераза снизилась на 22,7 % и на 27,8 %, соответственно в сравнении
с контролем.
Научно-производственный опыт по применению гепавета в качестве профилактирующего средства гепатозов у молодняка свиней в период доращивания проведен на поросятах 3,5–4-х месячного возраста.
Результаты свидетельствуют, что за время проведения опыта масса тела поросят в контрольной группе увеличилась на 5,2 кг, а в опытной группе – на 10,7 кг,
что почти в 2,1 раза больше. Падежа поросят в опытной группе не наблюдалось,
в то время как в контроле три поросенка пало. Кроме того, назначение поросятам
гепавета способствовало значительному улучшению их общего состояния.
По результатам биохимического анализа крови поросят нами отмечено, что
повысилось содержание общего белка на 63,6 % в опытной группе, количество
альбуминов выросло на 13,9 %. Также отмечается в опытной группе понижение
гамма-глобулинов по отношению к фоновым данным на 44,3 %. Нами выявлено,
что после применения препарата происходит понижение аланинаминотрансферазы по сравнению с фоновыми показателями на 32,3 %. Также отмечено снижение
аспартатаминотрансферазы на 35,1 % по сравнению с фоновой группой.
Таким образом, проведенные биохимические исследования крови до постановки опыта, дают нам основание утверждать о возможном развитии у поросят гепатоза, а использование гепавета в качестве профилактического нормализует показатели крови и снижает риск заболеваемости поросят гепатозом,
повышая при этом привесы и снижая падеж.
20
ВЫВОДЫ
1. Гепавет, новый отечественный препарат, представляет собой сухой порошок серого цвета без запаха и вкуса. В состав гепавета входят: фосфолисан, растительные экстракты натуральные, бентонит, диацетофенонилселенид, мука кормовая.
2. Гепавет является малотоксичным препаратом для животных, и в острых, и в хронических опытах гепавет не вызывал гибели животных в диапазоне
доз от 1,4 г/кг до 24 г/кг массы тела. Также для гепавета не выявлена среднесмертельная доза (LD50) и доза, провоцирующая появление клинической картины токсикоза, что по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» дает возможность
отнести его к 4-му классу опасности (малоопасные вещества).
3. Длительное введение гепавета в дозах 1 г/кг; 3 г/кг; 5 г/кг не оказывает
отрицательного воздействия на общее состояние подопытных животных и изменения их клинического статуса, на функциональную активность печени, на
процессы пищеварения и мочеотделения, на работу центральной нервной системы, на морфологические и биохимические показатели крови и на патоморфологию внутренних органов.
4. Гепавет не проявляет местного раздражающего действия, не нарушает
физико-биохимических свойств, а также и вкусовые качества мяса.
5. Гепавет обладает хорошо выраженной фармакологической активностью,
нормализующей основные виды обмена веществ, в том числе белкового – за счет
увеличения показателей в среднем от 20 % до 60 %. Повышает синтеза белка в организм в результате увеличения альбуминов до 15% в сыворотке крови.
6. Гепавет оказывает выраженное ростостимулирующее действие при выращивании цыплят-бройлеров, увеличивая среднесуточный прирост массы
на 11,29 % при введении в объеме 1 % к корму, уменьшая при этом затраты
корма на 1,53 % на 1 кг прироста. При введении 1 % гепавета к корму свиньям
среднесуточный привес увеличивается в среднем от 19 % до 27,6 %, уменьшая
затраты на 1 кг прироста на 9 %.
7. Гепавет
повышает
оплодотворяющую
способность
хряковпроизводителей на 3,4 %, а количество живых спермиев увеличивает на 26,4 %
при введении 3 % препарата к корму.
8. Гепавет обладает профилактической и лечебной эффективностью при гепатозах цыплят-бройлеров и поросят. Под действием препарата прекращается падеж, исчезают признаки заболевания, увеличивается прирост массы тела у цыплятбройлеров на 3,1 %, у поросят на 33 %, происходит увеличение белка у цыплятбройлеров на 4,4 %, у поросят на 21,1 % и 63,6 %, происходит снижение аланинаминотрансферазы у цыплят-бройлеров на 32,5 %, у поросят на 57,4 %, снижение
аспартатаминотрансферазы у цыплят-бройлеров на 27,8 %, у поросят на 52,1 %.
21
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
Для практического животноводства и ветеринарии предлагается препарат
гепавет. Это малотоксичный препарат, очень удобный для группового применения, обладающий хорошо выраженным гепатопротекторным действием.
Препарат гепавет рекомендуется для профилактики и лечения болезней печени
животных в дозе 1 % и 3 % к корму. Применение препарата регламентируется
временной инструкцией по применению, утвержденной начальником Управлении ветеринарии Краснодарского края.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Якимов, Г. В. Эффективность гепавета при гепатозах свиней /
Г. В. Якимов, В. А. Антипов, Е. В. Иванасова // Материалы Международной
научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях». –
Краснодар. – 2006. – С. 93–94.
2. Антипов, В. А. Применение гепавета в птицеводстве / В. А. Антипов,
Е. В. Иванасова, В. В. Чикова // Материалы Международной научнопрактической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях». – Краснодар. – 2006. – С. 260–261.
3. Антипов, В. А. Влияние фосфолипидов на резистентность и продуктивность свиней / В. А. Антипов, Е. В. Иванасова // Труды Кубанского
государственного аграрного университета. – 2009. – № 1. – Ч. 2. –
С. 236–237.
4. Антипов, В. А. Использование препарата гепавет при выращивании
цыплят-бройлеров // В. А. Антипов, Е. В. Иванасова // Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани «Актуальные проблемы современной ветеринарии». – Краснодар. – 2011. – Ч. 1. – С. 19–20.
5. Иванасова Е. В. Оценка эффективности премикса гепавет при
профилактике гепатозов поросят-отъемышей /Е. В. Иванасова // Ветеринарный врач.– Казань. – 2014. – № 3. – С. 47-50.
22
Подписано в печать
. 2014 г. Усл. печ. л. – 1,0.
Тираж 100. Заказ №___
Типография Кубанского государственного аграрного университета.
350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13
23