81.41Kb - G

НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМУ АНАЛИЗУ
БИСОПРОЛОЛА
Ордабаева С.К., Кулаева С.Ю., Серикбаева А.Д., Каракулова А.Ш., Есенова Ж.Х.,
Асильбекова А.Д.
Южно-Казахстанская государственная фармацевтическая академия,
Шымкент, Казахстан
Введение. Будучи одной из самых старых групп препаратов, применяемых в
кардиологии, β-адреноблокаторы не только сохранили свою актуальность, но и укрепили
свои позиции благодаря данным многочисленных рандомизированных контролируемых
испытаний, доказавших положительное влияние этих средств на конечные точки:
смертность, частоту осложнений, качество жизни. Особое, уникальное место в этом ряду
занимает бисопролол (Преображенский Д.В. и др., 2003г.).
Бисопролол относится к высокоселективным β-адреноблокаторам, обладающим
кардиоселективным свойством. При пероральном приеме практически полностью
всасывается из желудочно-кишечного тракта. Максимальные концентрации в крови
достигаются через 2-4 часа после перорального приема. Он умеренно растворяется в
липидах быстро и широко распределяется в организме. Приблизительно 50% введенной
дозы метаболизируется в печени до фармакологически неактивного полярного метаболита,
который, также как и нативное соединение, экскретируется почками. Бисопролол
растворяется как в жирах, так и в воде, поэтому он имеет 2 пути элиминации - почечную
экскрецию и печеночный метаболизм (Семьянов Б.А. и др., 2007).
В стандартной дозе препарат почти не оказывает блокирующего действия на β-2адренорецепторы и поэтому лишен многих нежелательных эффектов. В терапевтических
дозировках (2,5-10,0 мг/сут) не вызывает бронхоспазма и не нарушает дыхательную
функцию у лиц с хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ). Эффект
первичного прохождения через печень выражен весьма незначительно, благодаря чему
препарат имеет высокую биодоступность - около 90%. Более 95% активного вещества
выделяется почками, 50% - в неизмененном виде (Belson et all. 2000).
Степень
тяжести
клинического
течения
отравлений
β-адреноблокаторами
преимущественно связана со степенью выраженности первичного специфического
кардиотоксического эффекта. Нарушения гомеостаза соответствуют шоковой реакции,
сопровождающейся гипокалиемией, ацидозом, снижением показателей кислородного
градиента в крови (Ходасевич А.П. и др., 1983).
В случае летальных исходов при судебно-химических исследованиях и острых
отравлениях наиболее удобными объектами исследования являются кровь и моча. Однако
существующие методы, разработанные ранее, не отвечают требованиям современной
аналитической диагностики. Поэтому разработка надежных и достоверных методов
идентификации и количественного определения бисопролола из биологических жидкостей
является актуальной проблемой для судебно-медицинской практики (Лагуткина Т.П. и др.,
2011).
Целью настоящего исследования является разработка эффективной методики
идентификации бисопролола в биологической жидкости методом газожидкостной
хроматографии.
Материалы
и
методы.
В
работе
использована
бисопролола (British Pharmacopoeia, 2009.-V.I&II);
лекарственная
субстанция
растворители и реактивы категории
«х.ч.» и «ч.д.а.». Для идентификации использован газовый хроматограф «Кристалл люкс4000М». Температура инжектора 70-1200С, объем вводимой пробы 0,5 см3, тип детектора –
катарометр, газ-носитель – гелий, расход газа носителя через колонку – 20-30 см3/мин. В
работе использована насадочная колонка длиной 2м, диаметром 3мм, сорбент: фаза 7%
ПФМС-4, твёрдый носитель хроматон AW-DMCS фракция 0,16 – 0,20 мм.
Результаты и их обсуждение. Предлагаемый способ основан на гидролизе
бисопролола с кислотой хлороводородной в присутствии натрия нитрита со спиртом
пропиловым в качестве внутреннего стандарта.
Газохроматографические свойства полученного продукта гидролиза, а также
различные экспериментальные параметры, влияющие на хроматографическое разделение и
стабильность полученного продукта, были тщательно изучены и оптимизированы. В
качестве дериватизирующих агентов были изучены кислота трихлоруксусная и кислота
хлороводородная. В среде трихлоруксусной кислоты наблюдалось неэффективное
хроматографическое разделение пиков. Поэтому в дальнейшем мы использовали кислоту
хлороводородную, которая показала высокоразделяющую способность. Максимальное
хроматографическое разделение происходит при добавлении 2 мл 10 М кислоты
хлороводородной к пробе с содержанием вещества 1 мкг/мл и добавлением 0,5 мл натрия
нитрита. Время удерживания полученного продукта составляет 1,11 мин.
Разработанная методика использована нами для обнаружения бисопролола в крови.
Для приготовления модельных смесей использованы образцы цельной крови, полученные
от здоровых добровольцев, не принимавших лекарственные препараты в течение месяца до
отбора проб.
Модельные смеси крови готовили путем добавления растворов с содержанием
вещества 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 мкг/мл. Полученные растворы далее переносили в
пенициллиновые флаконы и добавляли к ним 3 мл хлороводородной кислоты, 0,5 мл спирта
пропилового и 0,5 мл нитрита натрия. Время удержания полученного продукта в условиях
разработанной нами методики, как в субстанции, так и в биологической жидкости
совпадает и составляет 1,11 мин. (рис. 1,2).
Рисунок 1 - Хроматограмма бисопролола, выделенного из крови.
по оси ординат – высота/площадь
хроматографического пика, мкм2;
по оси абсцисс – время удержания, мин.
Выводы.
Предложена
экспрессная
бисопролола в субстанции и
методика
количественного
обнаружения
биологической жидкости с применением
газовой
хроматографии, позволяющая точно и быстро идентифицировать исследуемый препарат с
минимальной затратой времени и в малых количествах. Методика определения
бисопролола по продуктам гидролиза методом газовой хроматографии может быть
применена
для
скрининга
в
судебно-химических
и
клинико-токсикологических
исследованиях и позволяет идентифицировать исходные вещества, а также их метаболиты.