Распространенное руководство по выращиванию грибочков

Руководство по выращиванию грибочков.
Собрано и озвучено Ejik.
Москва 2004
Оглавление.
1 часть
Набор гровера. Инструменты, препараты и т.д. .................................................................................................. 2
Изготовление отпечатка. ........................................................................................................................................ 3
Изготовление споровой взвеси. ............................................................................................................................. 4
Подготовка банок. .................................................................................................................................................. 5
Подготовка субстрата. ............................................................................................................................................ 9
Инокуляция субстрата. ......................................................................................................................................... 13
Уход за банками. ................................................................................................................................................... 15
Приготовление покровного грунта. .................................................................................................................... 20
Покров. .................................................................................................................................................................. 33
Подготовка парника. ............................................................................................................................................ 25
Плодоношение. ..................................................................................................................................................... 27
2 часть
Выращивание мицелия в жидкой среде. ............................................................................................................. 30
1
Набор гровера. Инструменты, препараты и т.д.
Всё что нужно для выращивания грибочков в соответствии с изложенной далее инструкцией.
Название инструмента
Банка 720-800 мл. с
накручивающейся крышкой
Крышечка от пластиковой бутылки
Простой карандаш
Нож, ножницы
Отвертка для загибания краев дырки
для клапана
Бинт, шириной 12 см.
Вата
Зерно пшеницы
Кастрюля для варки зерна
Столовая ложка
Скороварка
Спирт
Шприц 10 мл.
игла для шприца
Зажигалка Criket
Перчатки резиновые
Вермикулит
Торф
Контейнер для продуктов 1.1 л.
Фольга
Мелкий керамзит
Пищевая пленка
Любое лекарство для капельницы в
бутылочках 400 мл.
Фруктоза
Кол-во
4 шт.
1 шт.
1 шт.
1 шт.
1 шт.
1 шт.
1 комочек.
0.5 литра
1 шт.
1 шт.
1 шт.
5-10 пузырь.
5 шт.
10 шт.
3 шт.
10 пар
2 пакета
Вермикулит Х 2
3 шт.
2 рулона
???
1 рулон
5 бутылочек
100 гр.
Чашка петри
Мерный стакан для жидкостей и
сухих продуктов (зерна)
10 шт.
Террариум
1 шт.
0.5 л.
Отметка о
наличии
Предполагаемое место покупки
Хоз.маг. Или купить огурцов и
закусить ими водку
+
+
+
+
+
Мир сои на 6-й парковой
+
+
+
+
Аптека
Аптека
лоточки табак
Аптека
цветы на 16-й парковой
цветы на 16-й парковой
Хоз.маг.
оптовка
цветы на 16-й парковой
оптовка
Аптека
Мир сои на 6-й парковой
лабораторная техника на 3-й
парковой
лабораторная техника на 3-й
парковой
Зоо магазин на 3-й, 5-й, 9-й или 13-й
парковой
Предполагается изготовление своего отпечатка, при покупке оного – следующую главу можно пропустить.
2
Изготовление отпечатка.
Необходимо.
1. Гриб!!!
2. Бритва (нож).
3. Спирт.
4. Пинцет.
5. Чашка Петри (по кол-ву грибов).
Процесс.
1. Продезинфицировать чашку Петри, пинцет, бритву.
2. Держась за ножку, шляпкой вниз, отделить шляпку от ножки.
3. Пинцетом положить шляпку в чашку Петри, спорами вниз.
4. Закрыть, оставить на 24 часа.
5. Изъять шляпку, закрыть чашку.
3
Изготовление споровой взвеси.
Необходимо.
1. Отпечаток в чашке Петри.
2. Шприц.
3. Спирт.
4. Пакетик с зип-локом.
5. Кастрюлька для варки зерна.
Процесс.
1. Спиртом продезинфицировать пакет.
2. Вскипятить воду в кастрюльке.
3. Набрать в шприц.
4. Подождать пару минут.
5. Вылить из шприца в сторону.
6. Набрать снова полный 10 мл. шприц.
7. Убрать шприц в пакет, отложить остывать.
8. Как в пункте 3,4 продезинфицировать еще 2 шприца.
9. После остывания, вылить всю воду из шприца в чашку Петри, перемешать им же.
10. Набрать в 3 шприца примерно по 3.5 мл. закрыть колпачками иглы.
11. Убрать шприцы в чистые зип-лок пакеты.
12. Инокуляцию проводить минимум через 12 часов.
4
Подготовка банок.
В нашем случае, будут использоваться 720 мл (800 г) банки, из-под огурцов, или помидоров.
(Подойдут любые похожие банки, необязательно использовать именно такие).
Снимаем металлическую крышку и, используя любой предмет округлой формы, (например крышку
от бутылки), очерчиваем на ее поверхности круг, диаметром 20-30 мм.
Затем, используя обычные ножницы, вырезаем в крышке отверстие.
После того, как мы вырезали отверстие, необходимо загнуть его края внутрь. Это можно сделать
тупым, деревянным предметом, например скалкой, или ручкой от чего-либо, прилагая усилия в
двух направлениях, (вниз и вбок).
5
Если все сделано правильно, должно получиться что-то вроде этого.
Изготовление ватно-марлевого тампона.
Теперь необходимо изготовить ватно-марлевый тампон.
Для этого отрезаем бинт или кусок марли (бинт должен быть довольно широким, 10-12 см), и
складываем его в два слоя.
Кладем на бинт кусок ваты (ваты должно быть много, чтобы тампон получился достаточно
плотным).
Поднимаем края бинта, и перевязываем их веревкой (если используется нитка, то ее необходимо
сложить в несколько слоев).
6
После этого, обрезаем излишки бинта и веревки.
Готовый тампон, вставляем в проделанное нами отверстие,в крышке банки.
Тампон необходимо вставить таким образом, чтобы с обеих сторон крышкион выступал одинаково,
(т.е. необходимо расположить крышку примерно по центру тампона).
осле того, как мы вставили тампон в отверстие, необходимо, одновременно, сильно прижать его
ладонями сверху и снизу. Это делается для того, чтобы края тампона заходили дальше краев
отверстия, что в свою очередь, предотвратит попадание бактерий через зазор между тампоном и
крышкой.*
*Для того чтобы исключить попадание бактерий, тампон должен быть плотным, чем плотней
он будет, тем меньше вероятность проникновения бактерий (но перебарщивать тоже не
стоит, иначе воздух не сможет проходить сквозь тампон). Тампон делают, примерно в 1.5 раза
большего размера, чем размер отверстия, в которое он будет вставляться.
Банка с тампоном выглядит так:
7
8
Подготовка субстрата.
Зерно необходимо предварительно отварить.
На каждую используемую нами банку, потребуется 150-170 мл (не грамм) зерна. Необходимое
количество, легко определить, используя для этой цели мерный стаканчик.
Зерно, насыпаем в кастрюлю или ковшикв том объеме, который потребуется для приготовления
необходимого нам количества банок.
Заливаем водой.
И ставим вариться на плиту.
Варить зерно до готовности*, нужно примерно 30-40 мин. (все зависит от количества).
9
*Зерно считается готовым тогда, когда на поверхности появляются отдельные, разваренные
зерна, их должно быть немного, примерно 5-7% от общей массы.
Вода к этому времени, практически полностью выкипает.
После того, как зерно сварилось, его необходимо промыть холодной водой.
начала вода будет мутно-коричневой, а потом станет совершенно прозрачной. Это делается для
того, чтобы зерно не слипалось.
Затем воду нужно полностью(!) слить, а зерно разложить по банкам.
10
Если все сделано правильно, зерно будет занимать, примерно 1/2 объема банки.
Теперь, банки с зерном, необходимо стерилизовать. Для стерилизации лучше использовать
скороварку, но также подойдет и обычная кастрюля.*
*Перед стерилизацией, на дно кастрюли, необходимо положить кусок тряпки, или использовать
какую-нибудь другую “подставку” (например, перевернутую тарелку), для того, чтобы банки не
соприкасались с дном кастрюли, и не лопнули во время стерилизации. Воду в кастрюлю,
следует наливать таким образом, чтобы она закрывала нижнюю часть банок, и чтобы она не
выкипела за то время, пока банки будут стерилизоваться.
Оптимальное время стерилизации 1 час.
Банки лучше не вынимать из скороварки или кастрюли до тех пор, пока они полностью не остынут.
Если банки вынуть сразу же после стерилизации, из-за разницы давления, они начнут затягивать в
себя холодный воздух, а это может привести к тому, что вместе с воздухом, внутрь банки попадут
микроорганизмы, которые в дальнейшем могут вызвать заражение субстрата.
После стерилизации, банки с субстратом должны остыть до комнатной температуры,
(инокуляцию лучше проводить спустя сутки (гарантированный срок) после окончания
стерилизации).
После стерилизации, зерно еще немного увеличилось в размере, и теперь занимает примерно 2/3
от объема банки.
11
Нигде в банке, не должно присутствовать ни какой свободной воды, а зерно должно выглядеть
сухим и при постукивании кулаком по банке, легко рассыпаться на отдельные зерна.
Если все так – значит, все было сделано правильно.
12
Инокуляция субстрата.
Инокуляция готовым шприцом со споровой взвесью.
Если вы используете уже готовый шприц со споровой взвесью, то процесс инокуляции не должен
вызвать особых проблем.
Благодаря тому, что субстрат и споровая взвесь остаются в герметично закрытых емкостях, для
проведения инокуляции не требуется предварительная стерилизация помещения, в котором вы
будете проводить работы. Так же можно обойтись без применения резиновых перчаток и
марлевой повязки на лицо (хотя конечно, все эти меры предосторожности,существенно снижают
риск заражения субстрата).
Берем банку и обильно смачиваем тампон спиртом, но так, чтобы спирт не начал капать на зерно.
После этого, берем приготовленный шприц со споровой взвесью, и прокаливаем иглу над
пламенем горелки.
Иглу необходимо прокалить докрасна.
Затем опускаем иглу в банку со спиртом, (это делается для того, чтобы остудить иглу и не прожечь
ей тампон).
13
И тут же, прокалываем смоченный спиртом тампон* и впрыскиваем некоторое количество
споровой взвеси в банку с зерном. Для инокуляции одной банки, достаточно 2-3 мл споровой
взвеси.
*Следите за тем, чтобы игла прошла тампон насквозь, и ее кончик показался внутри банки.
Если этого не произойдет, то все споры окажутся в тампоне.
Если по каким-либо причинам тампон проколоть не удается, инокуляцию можно провести,
аккуратно приоткрыв крышку банки (перед инокуляцией банку необходимо протереть спиртом).
14
Уход за банками.
После инокуляции, банки с зерном необходимо убрать в темное и теплое (25-30С) место.
Поскольку присутствие света даже в небольших количествах тормозит развитие мицелия, если у
вас нет возможности убрать банки в темное место их следует обернуть фольгой или каким-нибудь
другим светонепроницаемым материалом.
Через 2-3 дня после инокуляции, (если инокуляция прошла успешно), кусочек агара начнет
обрастать пухом мицелия, а в местах соприкосновения с зерном мицелий начнет перебираться на
субстрат.
Мицелий растет довольно быстро и с каждым днем осваивает все большую поверхность
субстрата, перебираясь по зернам и образовывая полностью заросшие участки.
Как только мицелий начал активно распространяться по субстрату, и появились полностью
обросшие участки из нескольких зерен, субстрат можно “перетряхнуть”.
Во время перетряхивания, обросший мицелием участок субстрата разбивается на отдельные
зерна, которые, попадая в новые места, образуют сразу несколько новых очагов развития мицелия
– это существенно сокращает время освоения мицелием субстрата, и способствует более
равномерному его зарастанию.
Но, поскольку большая часть зерна еще не обросла мицелием и риск ее заражения еще слишком
велик, перетряхивать субстрат следует очень аккуратно. При перетряхивании, нужно следить за
тем, чтобы зерно как можно меньше касалось крышки банки и самого тампона. В этих местах могут
находиться посторонние микроорганизмы пробравшиеся “из вне” которые могут привести к
заражению субстрата. Следует не “трясти” банку из стороны в сторону, а удерживая её в одной
руке, другой рукой наносить удары по нижней части банки.
15
Таким образом, субстрат будет перемешиваться внизу банки, почти не попадая в ее верхнюю
часть.
Сразу после перетряхивания субстрата, зёрна обросшие мицелием теряют свою “пушистость” и их
практически невозможно отыскать в общей массе.
Но уже через 1-2 дня на некоторых зёрнах, становятся видны белые точки мицелия, которые
быстро увеличиваются в размере и перебираясь на соседние зерна завоевывают новые
территории.
Через несколько дней, мицелий разрастается по субстрату и снова образовывает полностью
заросшие участки.
16
Когда это произошло, перетряхивание субстрата следует повторить.
С каждым новым перетряхиванием субстрата, очагов развития мицелия становиться все больше.
И зарастание происходит все быстрее.
Для полного обрастания субстрата мицелием, обычно требуется 3-5 недель, в зависимости от
температуры окружающего воздуха.
Чем меньше остается неосвоенного мицелием субстрата, тем меньше риск его заражения при
перетряхивании.
17
Но все равно, перетряхивать субстрат следует как можно аккуратней, т.к. если заражение все-таки
произойдет, субстрат придется выбросить, а банку придется заново стерилизовать. И будет очень
обидно, если это случиться уже в самом конце колонизации субстрата.
Если заражение субстрата все же произошло, субстрат из этой банки необходимо выбросить.
Некоторые виды плесени содержат токсины и могут быть очень опасны для здоровья человека.
Поэтому зараженный субстрат проще выкинуть и приготовить все заново.
Нормальный цвет мицелия – белый, допускаются лишь белый цвет с легким голубоватым или
желтоватым оттенком. Нормальный запах мицелия – грибной, но запах мицелия практически не
чувствуется, его можно почувствовать либо сразу после перетряхивания субстрата (уже на
завершающей стадии, когда почти все зерно обросло мицелием), либо при перекладывании
субстрата из банки в контейнер. Все другие цвета и запахи – признак заражения субстрата.
Полностью обросшее мицелием зерно выглядет так:
18
После того, как субстрат будет полностью(!) колонизирован мицелием, его можно пересыпать в
контейнеры для стимуляции плодоношения.
19
Приготовление покровного грунта.
Покровный грунт готовится из смеси торфа и вермикулита в соотношении 2 / 1 соответственно.
Берем подходящую емкость и насыпаем в нее 2 части торфа.
Затем туда же насыпаем одну часть вермикулита.
Затем все это перемешиваем до получения однородной массы.
Теперь покровный грунт необходимо увлажнить. Для этого добавляем в нашу смесь воду. Обычно
для достижения оптимальной влажности, воды требуется примерно столько же, сколько
вермикулита (1 часть), может быть чуть больше.
Тщательно перемешиваем до получения однородной массы.
20
Влажность покровного грунта легко проверить, сжав его в кулаке. Если при этом между пальцами
выступают капли воды - значит влажность оптимальная, если капли не выступают - воды следует
немножко добавить, если вода вытекает ручьями - в смесь следует добавить вермикулита, либо
торфа (вермикулит лучше впитывает влагу).
После того, как смесь приготовлена, покровный грунт необходимо стерилизовать. Для этого
накладываем его в банку.
Закрываем банку крышкой (крышку можно закрывать плотно, поскольку покровный грунт довольно
рыхлый, при избыточном давлении банка не взорвется).
Ставим ее в скороварку.
21
И стерилизуем в течение 30-60 минут. После стерилизации, покровная смесь должна остыть до
комнатной температуры, (использовать покровный грунт, лучше спустя сутки после окончания
стерилизации).
Покров.
Теперь, нам необходимо пересыпать обросший мицелием субстрат в пластиковый контейнер и
"укрыть" его покровным грунтом.
Все операции необходимо проводить в стерильных условиях, работая в резиновых перчатках и
марлевой повязке. Все рабочие поверхности перед началом работы необходимо протереть
спиртом.
В нашем случае будет использоваться обыкновенный, пластиковый контейнер для пищевых
продуктов емкостью 1.1 л.
Протираем контейнер спиртом (изнутри и снаружи).
Затем, предварительно протерев спиртом банку с субстратом, открываем крышку* и высыпаем
зерно** обросшее мицелием в контейнер.
*Для того, чтобы крышка банки легко открылась, ее необходимо отвернуть заранее, а потом
неплотно прикрыть и протереть спиртом.
**Для того, чтобы зерно легко высыпалось из банки, зерно необходимо предварительно
"разбить" (т.е. проделать то же самое, что и при перетряхивании субстрата).
22
Затем, разламывая крупные куски мицелия, более-менее выравниваем поверхность.
После этого, предварительно протерев спиртом банку с покровным грунтом, "укрываем" субстрат,
насыпая грунт слоем 2-3 см.
Не прижимая грунт (!) более-менее выравниваем поверхность.
Покровный грунт должен выглядеть “воздушным” и не образовывать крупных комков, если комки
все же присутствуют их необходимо удалить, либо просто измельчить. Мицелия, не должно быть
видно на поверхности покровного слоя. Если это вдруг произошло, присыпьте это место грунтом.
23
Теперь необходимо обернуть контейнер фольгой. Удобней всего, проделывать это в следующей
последовательности: Расстилаем фольгу, ставим на нее контейнер
и оборачиваем его сверху.
Затем отрезаем фольгу от рулона и загибаем ее с одной стороны.
После этого поднимаем все края и загибаем их к верху.
Теперь контейнер(ы) необходимо убрать в темное и теплое место сроком на 1 неделю. Поскольку
фольга не пропускает свет, контейнеры достаточно поставить в помещение с температурой 2530С. Через неделю, мицелий пробьется сквозь покровный грунт, и контейнер можно будет
выставлять в парник, для начала плодоношения.
24
Подготовка парника.
В нашем случае, в качестве парника будет использоваться обычный террариум, который
продается в любом зоомагазине. Почему террариум? Потому что его конструкция, не требует
практически никаких доработок, и вместе с тем отвечает всем предъявленным ей требованиям.
Террариум очень удобно открывается, в него можно установить до 6 контейнеров (необходимо
подобрать по размеру), у него прозрачный верх отлично пропускающий дневной свет, а также
имеется несколько технологических отверстий, которые можно использовать по своему
усмотрению (например для автоматизации системы вентиляции и(или) увлажнения).
Перед использованием, террариум необходимо тщательно вымыть.
Если вы не собираетесь использовать автоматическую систему вентиляции и увлажнения, то
технологические отверстия лучше закрыть фольгой.
На дно террариума насыпается мелкий керамзит, (предварительно тщательно промытый), слоем
1-2 см.
После того как мы насыпали керамзит, его необходимо разровнять.
25
Затем в террариум необходимо налить воды так, чтобы слой керамзита оказался погруженным в
воду примерно наполовину, (т.е. чтобы уровень воды доходил примерно до середины
керамзитового слоя). Таким образом, достигается наиболее эффективная площадь поверхности,
для максимального испарения воды.
В крышке террариума установлена съемная вентиляционная решетка, (чтобы животные
находящиеся в террариуме могли свободно дышать) для создания парника, ее необходимо
обернуть 2-3 слоями пищевой пленки по всей поверхности. Пищевая пленка надежно
удерживается на решетке, на протяжении всего периода эксплуатации террариума, не позволяет
влаге испаряться и прекрасно пропускает свет. Щели, которые остаются в местах крепления
решетки к крышки террариума, закрывать не нужно, они создают дополнительную циркуляцию
воздуха и обеспечивают необходимую вентиляцию парника.
Увлажняют парник, путем разбрызгивания воды из обыкновенного хозяйственного распылителя на
крышку террариума. Такое увлажнение необходимо проводить 2 раза в день (утром и вечером).
Дополнительно подливать воду в террариум нет необходимости. Избытки влаги, скатываясь с
крышки террариума, собираются внизу и вновь испаряются благодаря увеличенной за счет
керамзита поверхности.
26
Плодоношение.
Спустя неделю после покрытия (неделя - это оптимальный срок, подобранный опытным путем)
достаем наш контейнер(ы) и снимаем фольгу. Проще не разматывать фольгу, а вырезать верх
ножом или скальпелем (процедура напоминает открывание сметаны). ;)
К этому времени, мицелий должен местами показаться на поверхности покровного слоя. Если
мицелия на поверхности слишком много, это значит, что, либо контейнер стоял дольше недели,
либо толщина покровного слоя была меньше 2-3 см.
Еще раз хочу напомнить, что и толщина покровного слоя, и время отведенное на фазу активного
роста мицелия в покровном слое, были подобраны мной опытным путем, в течение довольно
длительного времени и являются, на мой взгляд, оптимальными.
Мицелий должен только-только начать пробиваться сквозь покровный слой.
Устанавливаем наши контейнеры в террариум.
И предварительно увлажнив, закрываем крышку.
27
Теперь, террариум необходимо установить в таком месте, где будет присутствовать дневной свет,
но где на него не будут попадать прямые солнечные лучи. Наиболее подходящим, является место
не вдалеке от окна.
Через несколько дней, мицелий пробивается практически по всей поверхности покровного соля.
Затем рост мицелия как бы замедляется, и на его поверхности начинают появляться круглые
уплотнения - примордии.
Буквально на следующий день, в этих уплотнениях уже можно различить шляпку и ножку будущего
гриба.
28
Террариум следует продолжать проветривать и увлажнять дважды в день (утром и вечером).
Если температура и влажность в парнике оптимальные, то грибы развиваются довольно быстро.
И уже за 2-4 дня вырастают до размера 5-10 см. (зависит от вида грибов).
Собирать грибы следует в тот момент, когда вуаль прикрывающая спороносный слой, у
большинства грибов начинает рваться.
После этого момента, грибы визуально все еще продолжают расти, но роста грибной массы уже не
происходит. Одновременно с разрывом вуали снижается и количество психоактивных веществ
содержащихся в теле гриба.
29
Поэтому, если вы не планируете изготавливать споровый отпечаток, грибы необходимо собирать
тут же, после разрыва вуали.
Выращивание мицелия в жидкой среде.
В любой аптеке покупаем любое лекарство для капельницы. Лекарство продается в 400 мл. и 200 мл.
стеклянных бутылочках с резиновой пробкой.
Так выглядит эта бутылочка:
Далее, выламываем предохранительный, алюминиевый кружок, находящейся на самом верху пробки, но НЕ
удаляем алюминиевый ободок, который удерживает саму пробку.
Должно получиться вот так:
Затем с помощью двух иголок и одного шприца (желательно большого объема), выкачиваем содержимое
бутылочки. Пользоваться удобнее именно двумя иголками, и не высасывать жидкость из бутылочки, а
наоборот, заполнять бутылочку воздухом. В результате избыточного давления, жидкость полностью
удаляется из бутылочки в течении нескольких минут.
30
Естественно, чтобы жидкость вытекала, бутылку нужно перевернуть вверх ногами.
После того, как вся жидкость удалена из бутылки. Закачиваем в бутылку, примерно 100 мл. чистой воды и
энергично трясем. Это делается для того, чтобы промыть бутылочку и окончательно избавиться от остатков
лекарства. Проделать эту процедуру лучше 2-3 раза.
Теперь мы готовим питательный раствор. Раствор можно приготовить и из меда, но, на мой взгляд, удобнее
использовать фруктозу. Во-первых, проще контролировать концентрацию раствора, отмеряя нужное кол-во
вещества, во-вторых, раствор абсолютно не имеет цвета, (что облегчает обнаружение мицелия :) ), к тому же,
фруктоза продается везде и по своему составу, она совершенно одинаковая, а также, фруктоза может
храниться довольно длительный промежуток времени, без видимых изменений.
Для приготовления раствора необходимо полностью растворить фруктозу в воде. Рекомендуемая
концентрация 2 грамма фруктозы, на 100 мл. воды. Повышенные концентрации фруктозы в растворе,
приводят к образованию более «жидкого» мицелия, то есть при приготовлении 4 % раствора фруктозы,
мицелий, даже через длительный промежуток времени, будет легко засасываться в шприц через иглу. А при
пониженных концентрациях, например, при приготовлении 1 % раствора фруктозы, мицелий, через некоторое
время, будет образовывать довольно плотные сгустки, которые очень трудно втягиваются через иглу, но зато
в таком виде, мицелий дольше хранится.
Раствора, следует приготовить около 300 мл. (если используется бутылка емкостью 400 мл.). Если
используется бутылка меньшего объема, то раствора следует приготовить примерно на 2/3 от объема
бутылки. Не следует заполнять бутылочку раствором «под завязку», так как при дальнейшей стерилизации, в
результате нагревания, алюминиевый ободок который удерживает пробку, может не выдержать. Далее,
закачиваем раствор в бутылочку. Для этого также, лучше использовать две иглы и один шприц. Вторая игла,
позволит воздуху выходить из бутылки, не образовывая избыточного давления. После того, как мы залили
раствор в бутылку, ее следует простерилизовать.
Стерилизовать бутылочку, можно как в кастрюле, так и в скороварке. Единственное условие, стерилизацию
следует проводить, не более 30 мнут, иначе может произойти карамелизация фруктозы, и на ней ничего не
вырастет.
После стерилизации, даем бутылочке остыть, до комнатной температуры. И только после полного остывания,
производим инокуляцию споровой взвесью. Затем помещаем бутылочку в теплое (~ 25C), темное место и
ждем результатов. По прошествии 24-48 часов, обычно начинается бурное разрастание мицелия. Но в
некоторых случаях, первые признаки разрастания мицелия проявляются лишь на 5-7 день. В любом случае,
неделя - контрольный срок, если за это время ничего не произошло, и раствор по-прежнему, абсолютно
прозрачный, стоит все переделать заново.
Хранить мицелий, выращенный таким способом, следует в холодильнике. Для длительного хранения этот
метод не подходит. Максимальный, гарантированный срок хранения: 2 месяца.
Основы работы с агаром
31
Содержание:
Что такое агар и где его достать
Питательная среда из зернового отвара
-Процедура приготовления
Питательная среда из картофельного отвара
-Процедура приготовления
Изготовление инокуляционной петли
Инокуляция
Инкубация
Хранение культур
Выделение чистой культуры
-Удаление очага заражения
-Пересадка мицелия
Агар (устаревшее название агар-агар) – продукт, получаемый из красных и бурых водорослей (таких как Eucheuma
spinosum Ag., E. gelatinae Ag., Gelidium cartilagineum (Grev. и др.) и образующий в водных растворах плотный студень.
Представляет собой белый, похожий на муку порошок.
Состоит в основном из полисахаридов. Применяется в составе питательных сред для культивирования бактерий, грибов,
водорослей, а также в кондитерской промышленности, при производстве желейного мармелада, желе, пудингов, мясных
и рыбных студней, и т.д.
Биологический (лабораторный) агар отличается от пищевого более высоким качеством, стоимость пищевого агара при
этом намного ниже. При использовании в домашних условиях, качество агара является не столь значимым, поэтому есть
смысл, брать именно агар используемый в кондитерской промышленности.
Пищевой агар разделяется по плотности, например: Агар М 500, Агар G 700, Агар –900, и т.д. Чем больше число в
названии, тем большей вязкостью / плотностью будет обладать полученный гель / студень. Пропорционально
увеличению плотности, уменьшается расход агара, но при этом увеличивается его цена.
Если плотность агара неизвестна, его расход можно подобрать экспериментальным путем, получив среду
напоминающую по консистенции мармелад. Если среда будет слишком мягкая, Вам будет неудобно переносить
отрезанные кусочки.
Найти где продается агар, можно на сайте журнала товары и цены, набрав слово "агар" в строке поиска.
Для выращивания мицелия высших базидиомицетов используются различные питательные среды на
агаровой основе. В зависимости от выращиваемого вида, а так же от поставленных целей, питательные среды
могут различаться по составу, уровню Ph, вязкости и т.д.
Не будем подробно останавливаться на приготовлении сложных агаровых сред, кому интересен этот вопрос,
без труда сможет отыскать необходимую информацию в соответствующей литературе. Рассмотрим
приготовление двух самых простых, и в тоже время, подходящих для выращивания огромного количества
видов грибов, питательных средах - среды на зерновом, и среды на картофельном отваре.
32
2 часть
Питательная среда из зернового отвара
Состав: Зерновой отвар* -100 мл**; агар - 1,5 г.***
* Можно использовать отвар, который остается у Вас после приготовления зерна (если Вы используете зерно
в качестве субстрата), но только если зерно варилось без добавления Н2О2. В противном случае, агар
попросту не застынет.
**Расход среды на одну 100 мм чашку Петри ~ 30-50 мл.
*** При использовании девятисотого агара.
Процедура приготовления
Берем около 100 мл зерна (пшеница, рожь, ячмень, овес и т.д.),
высыпаем в емкость,
заливаем 500 мл воды (используется обычная вода из-под крана),
ставим на газ,
33
доводим до кипения,
делаем маленький огонек, и варим в течение 30 минут.
За это время часть воды выкипит, а оставшаяся часть окрасится в приятный, темно-коричневый цвет.
Получившийся отвар необходимо профильтровать. В качестве фильтра можно использовать сложенную в
несколько слоев марлю, или хлопчатобумажную ткань. Их укладывают в сито или воронку и аккуратно
выливают отвар.
Зерно и мелкие частицы, оставшиеся на фильтре выбрасывают.
Если количество отвара получилось меньше, чем Вы рассчитывали, доведите его до нужного объема долив
34
необходимое количество воды (используется обычная вода из-под крана).
Получившийся отвар переливаем в небольшую емкость,
ставим на газ, доводим до кипения и уменьшаем огонь.
Добавляем необходимое количество агара, постепенно* высыпая его в кипящий отвар. *(Если агар высыпать
сразу, он слипнется в комок, который будет потом очень нелегко растворить в жидкости).
Размешивая, снова доводим отвар до кипения.
Продолжая постоянно помешивать, добиваемся ПОЛНОГО растворения агара. Как только это произойдет среда готова.
35
После приготовления, тут же разливаем готовую среду по чашкам Петри. (Чашки Петри сделаны из
закаленного стекла, поэтому они не лопнут.)
Наливать среду, следует слоем 3-5 мм.
После этого накрываем чашки Петри,
и установив их одна на другую в какую-нибудь тарелку или блюдце, (так будет удобнее переносить их с места
на место),
ставим в скороварку (или кастрюлю),
36
и стерилизуем в течение 1 часа.
Питательная среда из картофельного отвара
Состав: Картофельный отвар -100 мл; агар - 1,5 г.
Процедура приготовления
Берем 150 г картофеля,
тщательно отмываем его от земли,
не очищая, нарезаем кубиками ~1х1 см,
37
высыпаем в емкость,
заливаем 500 мл воды (используется обычная вода из-под крана),
ставим на газ,
доводим до кипения,
делаем маленький огонек, и варим в течение 30 минут.
За это время часть воды выкипит, а оставшаяся часть окрасится в светло-желтый цвет.
Полученный отвар, так же необходимо профильтровать.
38
С готовым отваром, поступаем точно так же, как и в предыдущем случае.
Изготовление инокуляционной петли
Берем самую длинную, какую сможем найти иглу (замечательно подходит "набор игл для шитья кукол"),
нагреваем докрасна,
и не очень сильно, расплющиваем молотком 1-2 см ее острия.
Должно получиться что-то подобное.
39
Зажав самый кончик иглы (5-7 мм) в тисках, загибаем его под прямым углом (буквой "Г"),
и слегка приплющиваем по бокам.*
*Это делается это для того, чтобы обеспечить лучший контакт инокуляционной петли при соприкосновении с
поверхностью.
Теперь делаем ручку - оборачиваем противоположенный конец иглы изолентой.
В результате получается вот такая, (очень удобная для работы со спорами) инокуляционная петля.
40
Инокуляция
Аккуратно, стараясь не сдвигать крышки, вынимаем чашки Петри из остывшей скороварки, и откачиваем
шприцем воду скопившеюся в блюдце.
Конденсат образовавшийся внутри, на крышках чашек Петри, опасности не представляет.
Работы по проведению инокуляции, должны проводиться в стерильных условиях! Для этого, все
необходимые инструменты (инокуляционную петлю, скальпель, вату, спирт, горелку и т.д.), а так же
приготовленные чашки Петри, переносят в помещение, которое затем, в течение некоторого времени*
обрабатывают бактерицидной лампой.
*(30-60 мин., зависит от площади помещения и мощности лампы.)
Зайдя в помещение, расставляем инструменты так, чтобы нам было удобно работать. Протираем спиртом все
поверхности.
Инокуляционную петлю погружаем в спирт,
и прокаливаем ее докрасна над пламенем горелки.
41
Затем снова погружаем в спирт,
подносим к горелке, и тут же (пока горит спирт) несем петлю к чашке Петри.
Слегка приоткрыв крышку (не смещая ее в сторону), погружаем инокуляционную петлю в агар*.
*Это делается для того, чтобы инокуляционная петля стала липкой от оставшегося на ней расплавленного
агара. (Так же, при этом происходит охлаждение инокуляционной петли до безопасной для спор
температуры.)
Сразу же после этого, слегка приоткрыв пакетик с отпечатком, не касаясь его краев, соскребаем
инокуляционной петлей часть спор*.
*Если отпечаток хорошего качества, достаточно едва коснуться петлей, чтобы к ней прилипли тысячи спор.
Если отпечаток совсем бледный, можно основательно поскрести острым концом инокуляционной петли по
бумаге, чтобы вместе с частичками бумаги наверняка захватить часть спор.
42
После этого, сразу же переносим инокуляционную петлю обратно к чашке Петри, и так же, слегка приоткрыв
крышку (не смещая ее в сторону), касаемся поверхности агара в нескольких местах.
Если спор было достаточно много, они будут заметны на поверхности агара. Если спор было мало, на агаре
останутся только следы от контакта с инокуляционной петлей. В любом случае, споры попали на питательную
среду, в благоприятные условия, и через несколько дней должны прорасти.
Обязательно подписывайте свои чашки Петри (название вида, дату инокуляции и т.д., все, что считаете
нужным), иначе потом Вы запутаетесь, что, где растет.
Теперь, чашки Петри необходимо обернуть пищевой пленкой. Это делается для того, чтобы предотвратить
проникновение в них посторонних микроорганизмов.
Накладываем пленку поверх чашки Петри,
поднимаем чашку Петри, опуская при этом пленку
43
и обрезаем ее с небольшим запасом.
Теперь стягиваем края пленки вниз по всему периметру чашки Петри,
и закручиваем их (как фантик).
Закрученные края плотно прижимаем рукой
и в таком виде, убираем чашки Петри в темное, теплое (23-27С) место, на весь период инкубации.
44
Инкубация
Через 3-10 дней (в зависимости от количества и качества спор) споры прорастают - в местах инокуляции
появляется белый пух мицелия.*
* Мицелий любого другого цвета, или консистенции, (например пленка, или слизь) является явным признаком
заражения и должен быть немедленно удален.
Через несколько дней, очагов мицелия становится больше, и он продолжает разрастаться.
Очаги мицелия могут появляться не только в местах, контакта с инокуляционной петлей, но и по всей
поверхности агара. Это происходит потому, что пока Вы совершали манипуляции внутри чашки Петри,
некоторые споры упали с инокуляционной петли сами по себе, и теперь они проросли. Так же, споры могли
переместиться в результате движения жидкости (упавшие капли конденсата).
Если во время инкубационного периода, заражения среды посторонними микроорганизмами не происходит,
через 3-4 недели, мицелий полностью осваивает поверхность агара.
45
Хранение культур
После того, как мицелий полностью освоит поверхность агара, чашки Петри убирают на хранение в
холодильник. При температуре +3-5С процессы жизнедеятельности мицелия замедляются, и он может
сохраняться в таких условиях несколько лет. В течение этого времени мицелий постепенно поедает
питательную среду, поэтому, чем толще был ее слой, тем дольше мицелий сможет питаться.
По мере надобности, чашки Петри с мицелием достают из холодильника и отрезают кусочки агара для
проведения инокуляции*, или для пересадки культуры на свежую питательную среду.**
*Для проведения инокуляции отрезают небольшой (~ 1х1 см) кусочек агара с мицелием и помещают его в
емкость с субстратом. Через несколько дней мицелий перебирается на субстрат и постепенно осваивает его
целиком. Фото работ по проведению инокуляции кусочками агара, можно посмотреть в иллюстрированном
руководстве по выращиванию грибов.
Поскольку для проведения одной инокуляции, достаточно малюсенького кусочка агара, одной 100 мм чашки
Петри, хватает на проведение 20-30 инокуляций.
**Такой метод хранения, называется "метод вегетативных пассажей", он позволяет сохранять полученную
культуру практически в неизмененном виде. Чем реже происходит пересев, тем меньше клеточных делений
претерпевает культура и тем ближе она по своим свойствам к исходному изолянту. Пересадку мицелия на
новую среду, в этом случае, рекомендуется проводить не чаще одного раза в год.
Для длительного хранения культур, удобно использовать пробирки со скошенным агаром. Готовую среду
разливают по пробиркам, закрывают их ватно-марлевой пробкой, и после стерилизации, пока агар не застыл,
устанавливают в наклонном положении - скашивают агар. После того как агар застынет, пробирки
инокулируют мицелием, дожидаются полного обрастания поверхности агара, и убирают на хранение в
холодильник.
Длительность хранения при этом, достигается за счет уменьшении площади роста мицелия и увеличении
толщины питательного слоя (по сравнению с чашкой Петри).
Более подробную информацию о методе хранения культур в пробирках на скошенном агаре, а так же о
выделении чистой культуры из плодового тела гриба, Вы сможете найти в тексте "Отечественные техники
выращивания грибов в домашних условиях".
Выделение чистой культуры*
* Чистая культура - это клетки микроорганизмов одного вида. (В нашем случае, это мицелий культивируемого
гриба).
Если во время роста мицелия, произошло заражение среды посторонними микроорганизмами, необходимо как
можно быстрее отделить чистый мицелий, от конкурирующей микрофлоры. Это можно сделать двумя
способами.
1. Удаление очага заражения
В случае "точечного заражения", (когда очаг заражения небольшой и локализован в одном месте), его проще
вырезать и выбросить, оставив не тронутой основную часть мицелия.
Работы по выделению чистой культуры, должны проводиться в стерильных условиях!
Берем чашку Петри, в которой произошло заражение,
46
входим с ней в стерильное помещение, протираем все поверхности спиртом, погружаем скальпель в спирт,
прокаливаем его над пламенем горелки, снова погружаем в спирт, подносим к горелке, и тут же (пока горит
спирт), несем его к чашке Петри.*
*Смотри фото аналогичных действий при работе с инокуляционной петлей.
Слегка приоткрыв крышку (не смещая ее в сторону), вырезаем скальпелем кусок агара, с растущей на нем
плесенью,
подцепляем его кончиком скальпеля и удаляем.
Чашку Петри с удаленным очагом заражения оборачиваем пищевой пленкой и убираем в темное, теплое
место, на весь период инкубации.*
*Смотри фото аналогичных действий при проведении инокуляции.
Если заражения посторонними микроорганизмами не произойдет, через некоторое время (зависит от того, на
какой стадии роста мицелия произошло удаление очага заражения), мицелий полностью освоит поверхность
агара.
2. Пересадка мицелия
В случае, когда посторонняя микрофлора занимает значительную часть, и вырезать ее не представляется
возможным, из зараженной чашки Петри извлекают кусочек агара с чистым мицелием, и пересаживают его на
новую среду в другую чашку Петри.
47
Берем чашку Петри, в которой произошло заражение, входим с ней в стерильное помещение, протираем все
поверхности спиртом, погружаем скальпель в спирт, прокаливаем его над пламенем горелки, снова погружаем
в спирт, подносим к горелке и тут же (пока горит спирт) несем его к чашке Петри.*
*Смотри фото аналогичных действий при работе с инокуляционной петлей.
Слегка приоткрыв крышку (не смещая ее в сторону), вырезаем скальпелем кусочек агара с чистым мицелием,
подцепляем его кончиком скальпеля
и переносим на новую среду, в другую чашку Петри.
Чашку Петри накрываем, подписываем, оборачиваем пищевой пленкой и убираем в темное, теплое место на
весь период инкубации.*
*Смотри фото аналогичных действий при проведения инокуляции.
Через несколько дней, пересаженный кусочек опушится мицелием, а еще через несколько дней мицелий
48
переберется на новую среду. Если заражения посторонними микроорганизмами не произойдет, через 3-4
недели, мицелий полностью освоит поверхность агара.
49