На правах рукописи УСМОНОВА ШОИСТАХОН

На правах рукописи
УСМОНОВА ШОИСТАХОН ХАЙДАРКУЛИЕВНА
БИОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ОСНОВНЫХ КОМПОНЕНТОВ СЕМЯН ЗИРЫ
(BUNIUM PERSICUM (BOISS.) B.FEDTSCH.) В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ЗОНЫ
ПРОИЗРАСТАНИЯ
03.01.04 – биохимия
Автореферат
диссертации на соискание ученой
степени кандидата биологических наук
Душанбе – 2012
Работа выполнена на кафедре Физической и аналитической химии Таджикского
технического университета им. акад. М. С. Осими.
Научные руководители: доктор химических наук, профессор
Халиков Ширинбек Халикович
кандидат химических наук
Иброгимов Дилшод Эмомович
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор,
Член-кор. Академии педагогических наук,
директор малого предприятия ООО «Занд»
Бобиев Гулямкодир Муккамолович
кандидат биологических наук, ведущий
научный сотрудник Института ботаники, физиологии и
генетики растений АН РТ
Давлятназарова Зулфия Буриевна
Ведущая организация: кафедра Фармацевтической и токсикологической химии
Таджикского медицинского университета им. Абуали ибн Сины.
Защита состоится 30 мая 2012 г. в 14.00 час. на заседании Диссертационного
Совета Д 737.004.05 при Таджикском национальном университете по адресу г.
Душанбе, пр. Рудаки, 17.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Таджикского национального
университета.
Автореферат разослан «____» ___________ 2012 г.
Ученый секретарь диссертационного
совета
Хамрабаева З.М.
2
Актуальность темы. Таджикистан является одним из мировых центров многообразия
культурных и дикорастущих растений, характеризующих уникальные экоклиматические условия.
Благодаря ярко выраженному орографическому расчленению и особенностям
географического расположения очень велико видовое разнообразие растений, что даёт
возможность выявить новые источники физиолого – биохимических активных веществ,
которые используются в пищевой и парфюмерной промышленности, а также в
медицине.
Особое место в этой связи имеют те дикорастущие растения, произрастающие в
Таджикистане, которые продуцируют эфирные и жирные масла, а также и другие
биологически активные вещества. Поэтому вполне актуальной задачей является
исследование биохимического состава эфироносных дикорастущих растений
произрастающих в горных зонах Таджикистана. Более того низкомолекулярные
соединения, для которых свойственны полифункциональность действия, играют
ключевую роль не только в адаптации организма к стрессовым условиям
жизнедеятельности, но также поддерживают их патогенную значимость.
Цель работы – изучение изопропеноидных, флавоноидных, глицеридных,
микроэлементных и полисахаридных комплексов семян зиры (Bunium persicum),
произрастающей в Таджикистане, в разных фазах формирования семян, и разработка
оптимальных условий выделения эфирного масла и витаминов группы А.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
- изучить состав эфирных масел семян зиры в разных периодах созревания и
хроматографическими методами определить их компонентный состав в зависимости от
зоны произрастания в Республике Таджикистан;
- определить влияние природного бентонита «Топкок» на улучшение качества
эфирных и жирных масел зиры, с целью повышения их органолептических свойств;
- изучить глицеридный состав семян зиры в разных климатических зонах и дать
качественную и количественную оценку выделенного эфирного и жирного масла;
- разработать новый способ получения эфирного масла и витаминов группы А из
семян зиры;
- изучить флавоноидный состав семян зиры и разработать метод, позволяющий
определить сумму фенольных соединений;
- изучить микроэлементный состав и полисахаридные комплексы семян зиры
методом атомно-эмиссионного спектрального и рентгенофазового анализов.
Научная новизна работы:
- с применением биохимических методов анализа впервые выявлен
компонентный состав семян зиры, произрастающей в разных климатических зонах
Республики Таджикистан;
- разработан новый способ выделения эфирного масла путём вымораживания
масличного экстракта, способствующий улучшению выхода масла по сравнению с
существующими способами, а также с помощью колоночной хроматографии
разработан метод выделения витаминов группы А из масла;
- изучена динамика накопления изопропеноидных, флавоноидных и глицеридных
соединений в семенах зиры в разных фазах развития семян зиры;
- найдена новая константа, характеризующая сумму фенольных соединений
состава растительных масел.
- бентонитом «Топкок» улучшены органолептические свойства эфирных и
жирных масел;
Практическая значимость работы:
- на основе эфирного масла зиры подготовлена душистая композиция, имеющая
хорошее качество и приятный запах;
3
- для улучшения органолептического качества продукта рекомендуется провести
обработку масла бентонитом марки «Топкок» по разработанной нами схеме;
- использованные научно-методические подходы могут быть применены для
выполнения аналогичных исследований других растительных объектов.
Апробация работы
Основные положения диссертационной работы были доложены и обсуждены на
научно-теоретической конференции «Материалы республиканской конференции:
«Новые теоретические и прикладные исследования химии в высших учебных
заведениях Республики Таджикистан» (ТГПУ имени С. Айни, Душанбе 2010 г.);
«Материалы республиканской научной конференции «Химия: исследования,
преподавание, технология», посвященной «году образования и технических знаний»
(ТНУ, Душанбе 29-30 сентября 2010 г.); «Материалы республиканской научной
конференции: «Подготовка научных кадров и специалистов новой формации в свете
инновационного развития государств» (ТУТ, Душанбе 30, 31 октября и 1 ноября 2010
г.); «Международной конференции: «Синтез, выделение и изучение комплексных
свойств новых биологически активных соединений», посвященной 50-летию кафедры
органической химии и 70-летию д.х.н., профессора Ш.Х. Халикова (ТНУ, Душанбе 3-4
октября 2011 г.).
Публикация
По материалам диссертации опубликовано 6 статей, 6 тезисов докладов и 3
авторские заявки.
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 129 страницах компьютерного текста, состоит из
введения, литературного обзора, экспериментальной части, обсуждения результатов,
списка использованной литературы, включающего 65 источников, содержит 28
таблицы и 31 рисунков.
Образец
1. Характеристика эфирного масла зиры
Для изучения и характеристики компонентного состава и определения влияния
климатических факторов на процесс образования эфирного масла в семенах зиры,
использовали семена собранные из двух регионов Республики Таджикистана
(Даштиджумского и Тавильдаринского районов). Для сравнения использована зира
Ирана. Эфирное масло получили перегонкой водяным паром и выделили от водных
растворов двумя способами: вымораживанием (а) и ректификацией (б).
Для характеристики гетерогенности компонентного состава исследуемых
образцов, определяли их основные физико-химические константы (табл.1)
Таблица 1
Основные физико-химические константы образцов эфирного масла
Эфиромасличность
(%)
а
б
[𝑛]20
𝜌
[𝜌]20
4
КЧ мг КОН/г
ЧО мг КОН/г
ЭЧ мг КОН/г
а
б
а
б
а
б
а
Б
а
б
А
2.60
2.50
0.920
0.926
1.4740
1.4753
3.10
2.90
32.40
31.5
29.30
28.60
А1
1.92
1.81
0.870
0.860
1.4738
1.4732
4.92
4.85
26.3
27.1
21.38
22.25
А2
0.86
0.72
0.820
0.825
1.4735
1.4730
8.05
8.35
17.9
19.3
9.85
10.95
В
2.40
2.3
0.916
0.921
1.4739
1.4751
2.95
2.70
34.05
32.0
31.10
29.30
В1
2.00
1.85
0.865
0.850
1.4736
1.4747
3.85
3.56
24.70
24.10
20.85
20.54
В2
0.73
0.68
0.810
0.805
1.4732
1.4715
7.32
7.45
18.00
19.50
10.68
12.05
С
1.9
1.8
0.910
0.915
1.4735
1.4745
3.30
3.10
37.20
35.80
33.90
32.70
ИЧ мг КОН/г
а
б
46.50
47.3
34.32
33.90
26.87
25.92
56.52
59.5
42.30
40.00
24.59
23.80
42.00
44.00
4
а – По новому методу; б – По известному методу;
А – семена зиры из Тавильдары, в фазе после полного созревания; А1 – семена зиры из
Тавильдары, в фазе перед полным созреванием; А2 – семена зиры из Тавильдары, в фазе плодоношения;
В – семена зиры из Даштиджума, в фазе после полного созревания; В1– семена зиры из Даштиджума, в
фазе перед полным созреванием; В2 – семена зиры из Даштиджума, в фазе плодоношения; С – семена
зиры Ирана в фазе после полного созревания.
Как видно из таблицы, в составе образцов семян зиры максимальное количество
эфирных масел накапливается в фазе после полного созревания. Выход эфирного масла
в наибольшем количестве наблюдается в образце А. Данные о климатических условиях
этих регионов (температура воздуха, высота над уровнем моря) и полученные
результаты свидетельствуют о том, что зира с наибольшим выходом эфирного масла
произрастает в Тавильдаринском районе. Климатические условия данной зоны
наиболее благоприятны для роста и развития растений, что создает оптимальные
условия прохождения физиологических и биохимических процессов, способствующих
улучшению процесса максимального светопоглощения и освоения солнечной энергии,
усиливающих фиксации CO2 и регуляции ферментативных процессов клеточного
метаболизма и более интенсивному накоплению эфиромасличных и физиологобиологически активных веществ.
Для изучения динамики накопления основных компонентов эфирного масла
семян зиры был исследован химический состав образцов в фазах плодоношения, до и
после полного созревания методом ГЖХ – анализа (носитель азот, скорость 0.6
см3/мин, от 60 0С до 238 0С, сорбент хроматом N – AV – DNCS, жидкая фаза SE – 30,
5%). Выделенные компоненты идентифицированы по времени удержания, температуре
кипения и сравнением с эталонами. Процентное содержание выделенных компонентов
вычислили по площади пиков хроматограммы (табл. 2).
Хроматограммы приведены на рисунках 1-3.
1
2
3
Рис. 1. ГЖХ анализ эфирного масла семян зиры Тавильдаринского района РТ, в
фазе после полного созревания, в %: 1 – камфора, 4.27; 2 – α-пинен, 8.19; 3 – β-пинен, 11.5; 4 –
цитронеллол, 14.23; 5 – лимонен 0.28; 6 – тимол, 1.07; 7 – п-цимол, 27.69; 8 – куминовый альдегид,32.00;
9 – цитраль,0.26; 10 – олеиновая кислота,0.07; 11 – масляная кислота,0.04; 12 – уксусная кислота, 0.04.
Рис. 2. ГЖХ анализ эфирного масла семян зиры Даштиджумского района РТ, в
фазе после полного созревания, в %: 1 – камфора, 3.89; 2 – α-пинен, 11.80; 3 – β-пинен, 10.29; 4 –
цитронеллол, 10.02; 5 – лимонен, 1.85; 6 – тимол, 0.27; 7 – п-цимол, 21.88; 8 – куминовый альдегид,
38.31; 9 – цитраль, 0.37; 10 – олеиновая кислота, 0.32; 11 – масляная кислота, 0.45; 12 – уксусная кислота,
0.55.
Рис. 3. ГЖХ анализ эфирного масла семян зиры Ирана, в фазе после полного
созревания, в %: 1 – камфора, 2.98; 2 – α-пинен, 9.01; 3 – β-пинен, 19.87; 4 – цитронеллол, 4.76; 5 –
лимонен, 0.26; 6 – тимол, 4.24; 7 – п-цимол, 22.57; 8 – куминовый альдегид, 32.00; 9 – цитраль, 2.38; 10 –
олеиновая кислота, 0.20; 11 – масляная кислота, 0.31; 12 – уксусная кислота, 1.39.
5
Таблица 2.
Динамика накопления основных компонентов эфирного масла образцов
зиры в разных фазах развития, %.
А
В
С
Компоненты
1
2
3
1
2
3
3
α-пинен
6.80
7.93
8.19
8.45
11.44 11.80 9.01
β-пинен
12.9 10.08 11.50 9.85
10.12 10.29 19.87
Лимонен
0.08
0.12
0.28
1.56
1.65
1.85
0.26
п-цимол
23.35 24.55 27.69 20.04
20.8
21.88 22.57
Камфора
3.85
4.05
4.27
3.48
3.65
3.89
2.98
Куминовый
27.00 30.00 32.00 35.45 37.70 38.31 32.00
альдегид
Цитраль
0.12
0.20
0.26
0.12
0.22
0.37
2.38
Цитронеллол
8.90 12.34 14.23 9.32
9.80
10.02 4.76
Тимол
1.00 1. 54 1.07
0.19
0. 35
0.27
4.24
Уксусная кислота
3.80 1. 00 0.04
2.19
1. 27
0.55
1.39
Олеиновая кислота 10.40 7.37
0.07
7.35
1.85
0.32
0.20
Масляная кислота 1.80
0.82
0.04
2.00
1.15
0.45
0.31
А – Зира, произрастающая в Тавильдаринском районе; В – Зира, произрастающая в
Даштиджумском районе; С – Зира, произрастающая в Иране; 1 – фаза плодоношения; 2 – фаза перед
полным созреванием; 3 – фаза после полного созревания.
При исследовании динамики накопления основных компонентов эфирного масла
выявили, что в процессе созревания семян количество органических кислот
уменьшается, а количество других органических компонентов постепенно
увеличивается.
Для улучшения органолептических свойств эфирного масла семян зиры,
использовали бентонит «Топкок» с соотношением масла + бентонит (10:0.1). После
обработки бентонитом определили основные физико-химические константы эфирного
масла. Результаты анализа показали, что в процессе обработки уменьшается
концентрация компонентов, имеющих кислотное свойство.
Для определения кинетики взаимодействия бентонита с эфирным маслом,
провели атомно-эмиссионный спектральный анализ бентонита. Исследование показало,
что основу бентонита составляют оксиды алюминия и кремния. Наряду с
макроэлементами также были обнаружены такие микроэлементы, как: кальций (до 2%),
калий (0.7%), натрий (0.1%), магний (1.5%), которые в процессе обработки
взаимодействуют с компонентами, имеющими кислотное свойство, и в результате
адсорбируются на бентоните.
Для подтверждения результатов кинетики, эфирное масло, обработанное
бентонитом, подвергли ГЖХ анализу. Анализ ГЖХ показал отсутствие кислот и
фенолов, которые были адсорбированы бентонитом. Отсутствие этих компонентов в
эфирном масле, также подтверждено значением кислотного числа, которое составило
0.12 мг КОН/г.
Следует отметить, что обработка эфирных масел бентонитом значительно
увеличивает их качество за счет уменьшения КЧ (кислотного числа) и улучшения
органолептических свойств.
2. Биохимические исследования и характеристика жирных масел семян зиры.
2.1 Определение масличности жирных масел семян зиры
6
Содержание
легколетучих
компонентов (%)
по Сокслету
Масличность, %
по
Рушковскому
Масса обезжиренного
остатка (г)
Масса полученного
масла (г)
Навеска помола с
мешочком (г)
Исследуемый
экстракт
Навеска помола (г)
Масло из семян зиры, произрастающей в Тавильдаринском и Даштиджумском
районе Таджикистана и привезенные из Ирана, собранные в фазе плодоношения, до и
после полного созревания сортов, выделили методом горячей экстракции в аппарате
Сокслета с помощью диэтилового эфира. Масличность масла определили методом
Рушковского и Сокслета (табл. 3).
Между полученными результатами наблюдается различие, которое заключается в
том, что по Сокслету не учитываются компоненты, имеющие наименьшую температуру
кипения, которые в результате упаривания растворителя улетучиваются одновременно
вместе с растворителем. Учитывая данное различие можно вычислить содержание
легколетучих компонентов, растворяющихся в диэтиловом эфире по уравнению С=АВ, где А – масличность по Рушковскому; В – масличность по Сокслету; С – сумма
легколетучих компонентов в %. Условия определения масличности семян зиры
приведены в табл. 3.
Таблица 3
Условия определения масличности семян зиры
А1
А2
А3
В1
В2
20
20.60
0.864
19.253
6.54
4.32
2.2
20
20.58
2.08
18.254
11.30
10.40
0.90
20
20.62
3.404
16.975
17.68
17.02
0.66
20
20.60
0.764
19.430
5.68
3.82
1.86
20
20.62
1.824
18.580
9.89
9.12
0.77
В3
20
20.58
2.930
17.460
15.16
14.65
0.52
С
20
20.61
3.400
17.050
17.27
17.00
0.27
А1 – семена зиры из Тавильдары, в фазе плодоношения; А2 – семена зиры из Тавильдары, в фазе
перед полным созреванием; А3 – семена зиры из Тавильдары, в фазе после полного созревания; В1 –
семена зиры из Даштиджума, в фазе плодоношения; В2 – семена зиры из Даштиджума, в фазе перед
полным созреванием; В3 – семена зиры из Даштиджума, в фазе после полного созревания; С – семена
зиры Ирана в фазе после полного созревания;
Как видно из таблицы, в образцах семян зиры, собранных в фазе после полного
созревания наибольшую масличность имеет зира Тавильдаринского района, что
связано с более интенсивным прохождением фотосинтетической функции и,
следовательно, накоплением физиологических и биохимических активных соединений.
Возможно, их образование неразрывно связано с климатическими факторами зоны
произрастания зиры.
2.2 Физико-химические показатели образцов семян зиры
С целью определения суммы компонентов и характеристики полученных масел
определили их основные физико-химические константы, такие как: температура
плавления, температура застывания, плотность, показатель преломления, кислотное
число, число омыления, йодное число и эфирное число.
Температуру плавления и застывания определили, используя обычный термометр.
Плотность определили с помощью пикнометров. Показатель преломления вычислили,
используя рефрактометр ИРФ-56, а йодное число определили по методу Гануса.
Полученные результаты приведены в табл.4.
7
Таблица 4
Физико-химические константы масла семян зиры
 20
4
n 20
4
Йодное число
г J/100 г
0
t заст C
Эфирное
число мг
КОН/г
0
t пл C
число
Омыления мг
КОН/г
Образец
Кислотное
число мг
КОН/г
Физико-химические константы
А1
21-23
18-20
1.3250
19.74
69.44
49.7
40.2
А2
9-10
8-9
0.791
1.3335
9.64
120.24
110.6
80.5
А3
3-4
2-3
0.865
1.3340
2.50
152.0
149.5
106.0
В1
22-24
19-22
1.3300
20.50
70.8
50.3
45.0
В2
9-10
8-6
0.783
1.335
10.55
126.55
116.0
93.6
В3
3-4
2-3
0.850
1.3380
2.63
147.0
144.37
102.5
С
3-4
2-3
0.905
1.3370
2.35
131.76
129.41
94.3
А1 – семена зиры из Тавильдары, в фазе плодоношения; А2 – семена зиры из Тавильдары, в фазе
перед полным созреванием; А3 – семена зиры из Тавильдары, после полного созревания; В1 – семена
зиры из Даштиджума, в фазе плодоношения; В2 – семена зиры из Даштиджума, в фазе перед полным
созреванием; В3 – семена зиры из Даштиджума, в фазе после полного созревания; С – семена зиры Ирана
в фазе после полного созревания;
Как показывают результаты анализов, в процессе созревания семян уменьшается
значение КЧ и наблюдается рост значений ИЧ (йодного числа). Это объясняется тем,
что насыщенные жирные кислоты под действием ацетил-СоА в цикле лимонной
кислоты, образуют ненасыщенные жирные кислоты из углеводов через пируат и
ацетил-СоА. Рост значений ЭЧ свидетельствует о биохимической реакции
взаимодействия свободных кислот с глицерином, в результате которой образуются
сложные эфиры (этерефикация).
Судя по константе ИЧ, полученные образцы масла относятся к полувысыхающим
маслам, поскольку их среднее значение составляет 102 г I2 в 100 г исследуемого
образца.
2.3 Свободные кислоты состава масла семян образцов зиры
Для качественной и количественной характеристики свободных жирных кислот
образцов масла применили метод бумажной хроматографии (БХ) в системе бутанол –
муравьиная кислота – вода (45:5:22.5). Хроматограмму проявили спиртовым раствором
бромфенола синего, что позволило обнаружить компоненты в виде четких синих и
голубых пятен, относящиеся к органическим кислотам.
Количество свободных жирных кислот определили методом извлечения
продуктов из хроматограмм элюированием хлороформом. Результаты качественной и
количественной характеристики обнаруженных кислот приведены в табл. 5.
Идентичность кислот установили сравнением значений коэффициента распределения
(Rf) с Rf-ом эталонов и использованием литературных данных температуры плавления,
а также с помощью качественных реакций (табл. 5).
Массу идентифицированных кислот (в процентах и в граммах) определили
титриметрически, т.е. титрованием 0.01 н раствором КОН определенного раствора
кислоты. Расчет проводили по реакции взаимодействия КОН с идентифицированной
кислотой.
8
Таблица 5
Качественная и количественная характеристика органических кислот
состава масла B. persicum
Компоненты
СисПроцентное содержание
А2
А3
В1
В2
В3
С
тема А1
Олеиновая кислота
13-14
0.91
1
CH3(CH2)7CH=
0.82
2
0.18 0.32 0.58 0.16 0.35 0.56 0.48
CH(CH2)7COOH
0.50
3
0.70
4
Стеариновая
69-71
0.83
1
(н-октодекановая
0.32
2
0.98 0.71 0.54 0.85 0.64 0.56 0.32
кислота)
0.30
3
CH3(CH2)16COOH
0.39
4
Пальмитиновая (н63-64
0.72
1
гексадокановая кислота)
0.10
2
0.54 0.42 0.38 0.45 0.34 0.28 0.24
CH3(CH2)14COOH
0.25
3
0.37
4
Линолевая кислота
-5…--4
0.50
1
CH3(CH2)4CH=
0.72
2
0.21 0.33 0.42 0.23 0.34 0.42 0.38
CHCH2CН=СН
0.50
3
(СН2)7СOOH
0.42
4
Линоленовая кислота
-11…--10
0.35
1
CH3 CH2CH=CHCH2
0.70
2
0.02 0.08 0.09 0.15 0.24 0.44
CН=СНСН2СH=
0.62
3
СН(СН2)7СOOH
0.50
4
А1 – семена зиры из Тавильдары, в фазе плодоношения; А2 – семена зиры из Тавильдары, в фазе
перед полным созреванием; А3 – семена зиры из Тавильдары, в фазе после полного созревания; В1 –
семена зиры из Даштиджума, в фазе плодоношения; В2 – семена зиры из Даштиджума, в фазе перед
полным созреванием; В3 – семена зиры из Даштиджума, в фазе после полного созревания; С – семена
зиры Ирана в фазе после полного созревания. Системы: 1 – бутанол-муравьиная кислота-вода (45:5:22.5);
2 – хлороформ-метанол-уксусная кислота (1:2:0.1); 3 – амиловый спирт-вода (2:1); 4 – изоамиловый
спирт-метанол-вода (1:2:1).
Температура
плавления,оС
Rf
Из результатов, приведенных в таблице, видно, что в процессе созревания семян
образование ненасыщенных жирных кислот возрастает, а синтез насыщенных кислот
убывает, что напрямую связано с биосинтезом ненасыщенных жирных кислот из
насыщенных, с помощью малонил-СоА.
Исследования показали, что в образцах семян зиры обоих районов Республики
содержание свободных жирных кислот намного больше, по сравнению с зирой Ирана.
2.4 Биохимическая характеристика жирного масла образцов семян зиры
Для решения поставленной цели мы использовали образцы семян зиры,
собранные в фазе после полного созревания.
Для исследования глицеридных соединений образцов масла зиры необходимо
было удалить из них некоторые компоненты, имеющие кислотное свойство, а именно:
свободные кислоты, фенолы и др. Для этого необходимо было выявить общее
количество всех компонентов, содержащихся в масле. Мы решили эту задачу,
используя метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) в системе хлороформ-метанолуксусная кислота (5:1:0.1), проявителем служили пары йода. На хроматограммах
обнаружили присутствие 9 компонентов, затем для удаления вышеупомянутых
компонентов, не относящихся к глицеридам, образцы масла обработали водным
9
раствором КОН, чтобы превратить их в соли калия. Далее глицериды извлекли из
водной вытяжки экстрагированием диэтиловым эфиром.
ТСХ анализ полученного экстракта показал присутствие 4 компонентов,
относящихся к глицеридам. Глицеридные компоненты подвергли ГЖХ анализу на
приборе Хром – 5. Результаты анализа глицеридного состава образцов масла зиры
приведены на рис. 4,5,6.
4
5
6
Рис.4 ГЖХ анализ масла зиры из Тавильдары, в фазе после полного созревания.
Рис.5 ГЖХ анализ масла зиры из Даштиджума, в фазе после полного созревания.
Рис.6 ГЖХ анализ масла зиры Ирана, в фазе после полного созревания.
Из профиля ГЖХ хроматограмм видно, что количество обнаруженных веществ в
исследуемых маслах составляет 6 компонентов, вопреки ТСХ анализу, где было
обнаружено 4 компонента. Вероятно, это несоответствие возникло за счет неполного
разделения глицеридов, которые имеют близкие коэффициенты Rf , находящиеся в виде
оптических рацематов, не разделяемых ТСХ анализом. ГЖХ анализ показал себя более
эффективным методом в плане четкого разделения рацематов.
Для определения и идентификации жирных кислот глицеридов, образцы масел
повторно обработали водным раствором (0.1 н) КОН. Водную часть удалили,
глицериды гидролизовали и полученные свободные кислоты превратили в метиловые
эфиры. Полученные метиловые эфиры жирных кислот повторно подвергли ГЖХ
анализу (носитель азот, скорость 0.6 см3/мин, от 60 0С до 238 0С, сорбент хроматом N –
AV – DNCS, жидкая фаза SE – 30, 5%), хроматограмма которого приведена на рис. 5 –
7.
7
8
9
Рис. 7. ГЖХ анализ метиловых эфиров жирных кислот, зиры из Тавильдары, в
фазе после полного созревания: 1 – С17:0; 2 – С18:1; 3 – С16:0; 4 – С18:3; 5 – С22:0; 6 – С16:1; 7
– С18:2; 8 – С18:0.
10
Рис. 8. ГЖХ анализ метиловых эфиров жирных кислот, зиры из Даштиджума, в
фазе после полного созревания: 1 – С17:0; 2 – С18:1; 3 – С16:0; 4 – С18:3; 5 – С22:0; 6 – С16:1; 7
– С18:2; 8 – С18:0.
Рис. 9. ГЖХ анализ метиловых эфиров жирных кислот, зиры Ирана в фазе после
полного созревания: 1 – С17:0; 2 – С18:1; 3 – С16:0; 4 – С18:3; 5 – С22:0; 6 – С16:1; 7 – С18:2; 8 –
С18:0.
Идентификацию жирных кислот проводили по времени удержания, температуре
кипения, в сравнении с эталонами. Процентное содержание этих кислот, вычислили по
площади пиков, результаты которых приведены в таблице 6.
Таблица 6
Жирно-кислотный состав образцов семян зиры
Образцы
Зира
Тавильдары
Зира
Даштиджума
Зира Ирана
С22:0
0.74
С18:2
61.23
С18:1
10.53
Компоненты, %
С18:0
С17:0
0.84
2.05
С16:1
3.75
С16:0
19.90
С18:3
0.17
58.40
14.10
0.88
0.35
6.02
19.17
0.59
0.76
61.27
8.26
0.76
2.08
3.80
21.75
0.94
0.93
Исследование витаминного состава семян зиры
3.1 Определение каротиноидов (витаминов группы А)
Для качественного и количественного определения каротиноидов образцов семян
зиры Тавильдаринского и Даштиджумского районов Таджикистана и Ирана,
использовали метод тонкослойной хроматографии (ТСХ).
ТСХ – анализ экстрактов семян проводили в системе бензол - этанол амиловый
спирт
(10:5:2).
Содержание
каротиноидов
определили
элюированием
хроматографических пятен продуктов из хроматограммы, а оптическую плотность
определили на приборе ФЭК-56 при длине волны 270 нм в кювете толщиной 1мм,
используя светофильтр, имеющий коэффициент 33. Полученные результаты приведены
в табл. 8
Таблица 8
3
Содержания каротиноидов семян зиры (B. persicum)
Образец
Масса
исследуемого
объекта, г
А
5
В
5
С
5

Rf
Элюат
D 20

0.63
0.86
0.11
0.72
0.63
0.86
0.11
0.72
0.63
0.86
0.11
0.72
Бензол
Бензол
Бензол
Этанол
Бензол
Бензол
Бензол
Этанол
Бензол
Бензол
Бензол
Этанол
1.40
1.25
0.32
0.15
1.40
1.25
0.32
0.15
1.40
1.25
0.32
0.15
0.05
0.63
Бензол
1.30
каротин
А – семена зиры в фазе после полного созревания из Тавильдаринского района;
В – семена зиры в фазе после полного созревания из Даштиджумского района;
Содержание
каротиноидов
мг/г
9.24
8.25
2.10
1.42
8.99
7.80
2.05
1.35
9.85
8.80
2.67
2.10
9.84
11
С – семена зиры в фазе после полного созревания из Ирана.
Идентичность выделенных компонентов определили по оптическим свойствам и
качественными реакциями. Условия идентификации, выделенных каротиноидов,
приведены в табл. 9.
Таблица 9
I
(  -каротин)
II
(ликопин)
III
(цеоксантин)
IV(виалоксантин)
Н2SО4
SbCl3
НNО3
НCI
Rf =0.63
Бензол-петролейный
эфир
(3:1)
Rf =0.86
Бензол-петролейный
эфир-этанол
(3:1)
Rf =0.72
Бензол-петролейный
эфир-этанол
(60:15:4)
синий
-
-
-
синий
синий
пурпуровый
-
-
-
-
Rf =0.11
-
синий
-
Максимумы
поглощения
(нм);
перемещение
спектра →
Качественные реакции
Rf (система)
Проявитель пары
йода
Выделенные
компоненты
Условия идентификации каротиноидных компонентов состава семян B.
persicum
tпл., оС
478.0, 447.5 при
добавлении 1 капли
0.1% SbCl3 → 509 (в
бензоле)
522.0, 487.0, 455.0
186-188
красный
410, 430, 472 под
действием НСl → 425,
400, 460
203-205
оранжевый
463.5, 451.5 423.0
199-201
172-175
Изучение накопления каротиноидных соединений в образце зиры
Тавильдаринского района показало, что их содержание в фазе плодоношения
минимально (0.637%), в фазе перед полным созреванием максимально (2.570%), а при
фазе после полного созревании их содержание уменьшается до 2.092%, что
свидетельствует об их частичном превращении в другие компоненты, в процессе
обмена веществ.
3.2 Токоферолы состава семян зиры
Для определения токоферолов (витаминов группы Е) образцов масла, семена зиры
экстрагировали диэтиловым эфиром и гидролизовали спиртовым раствором
гидроксидом калия в присутствии пирогалола. Гидролизат промыли водой. Экстракт
высушили над безводным Na2SO4 и растворили в бензоле. После упаривания эфира
бензольный раствор пропустили через колонку наполненную силикагелем с целью
очистки основного продукта от других сопутствующих компонентов.
Полученный элюат отгоняли и колориметрировали. Содержание токоферолов
определили по калибровочному графику, построенному на основе растворов
токоферола.
Для характеристики токоферолов, полученные продукты подвергли бумажнохроматографическому анализу обработанным 3 %-ным раствором ZnCO3 в различных
системах.
Идентификацию токоферолов проводили по значению коэффициента
распределения (Rf) после УФ облучения. Количество идентифицированных
токоферолов определили методом соскабливания продукта из полученных
хроматографичесих пятен (таблица 10).
12
Таблица 10
Токоферолы состава масла семян зиры
Образцы
Сумма
токоферолов
(мкг/г)
Семена зиры
Тавильдаринского
района
Семена зиры
Даштиджумского
района
Семена зиры
Ирана
Содержание токоферольных компонентов (мкг/г)
αтокоферол
γтокоферол
γтокотреинол
βтокоферол
397.0
270.0
123.5
27.0
6,5
426.6
260.0
121.7
29.4
15.5
469.4
284.5
132.0
31.6
21.3
Как видно из полученных результатов, семена, собранные в фазе после полного
созревания больше всего в своем составе содержат  - и  - токоферолы. Следует
отметить, что при анализе не учитывались частичные потери выделенных изомеров в
процессе соскабливания продукта из хроматографической бумаги.
С целью изучения динамики накопления витаминов группы Е в составе семян
зиры Тавильдаринского района, семена собирали в разных фазах развития (через
каждые 10 суток). Анализировали сумму токоферолов аналогично, как в предыдущем
случае. Полученные результаты представлены на рис. 10.
(мкг/г)
800
600
400
200
А
5
10
15
Б 20
25 30 В
5
Фазы развития
(июнь-июль)
Рис. 10. Динамика накопления токоферолов в разных фазах развития семян зиры:
A-фаза плодоношения; Б-фаза перед полным созреванием; В-фаза после полного созревания.
Как видно из диаграммного графика, максимальное накопление токоферолов во
всех случаях наблюдается в фазе перед полным созреванием (15-25 июня), т. е. в
период активного роста растений.
4. Фенольные соединения семян зиры
Для выделения фенольных соединений, семена зиры Тавильдаринского и
Даштиджумского районов, а также зиры Ирана, перемололи в кофемолке и подвергли
холодной экстракции, чтобы неустойчивые флавоноиды не разлагались при
термообработке. В качестве экстрагента использовали 70%-ный С2Н5ОН. Затем
13
определили сумму фенолов, фенольное число (ФЧ), кислотное число (КЧ) и показатель
преломления по вышеприведенным методам.
Фенольное число характеризует сумму фенольных соединений состава
растительных масел и экстрактов, характеризующих мг КОН или NaOH в 1 г
исследуемого образца масел. Этот метод разработан и потентирован нами, сущность
которого заключается в блокировании карбоксильных групп свободных кислот,
сопутствующих наряду с фенольными соединениями. Из-за весьма слабой кислотности
флавоноиды не вступают в реакцию с блокиратором. Свободные жирные кислоты
взаимодействуют с блокиратором дициклогексилкарбодиимидом по схеме:
OH
OH
N
*
RCOOH
+
HN
+
C
R
R
N
R
C O C
(E)
O
N
После блокировки свободных жирных кислот сумму свободных фенольных
соединений определили путем титрования спиртовым раствором (0.1 н) КОН или
NаОН по мг израсходованной щелочи в 1 г исследуемого образца по разработанной
нами формуле:
(𝑉−𝑉 )
ФЧ = 𝑚 0 ∗ 𝑇,
где
ФЧ – фенольное число (мг КОН/г); V – объем титранта, израсходованного на
титрование навески (мл); V0 – объем израсходованного титранта, при холостом опыте
(мл); m – масса титранта (г); Т - титр использованного титранта (г/мл).
Также для достоверности полученных результатов определили КЧ. Условия
определения суммы фенольных соединений приведены в табл. 11
Таблица 11
Условия определения суммы флавоноидных соединений в семенах зиры
Содержание
КЧ (мг
ФЧ (мг
экстрагируемых
веществ
Объект исследования
[n]204
КОН/г)
КОН/г)
г
%
Зира Тавильдары
4.46
0.932
4.830
1.92
1.464
Зира Даштиджума
4.35
0.870
4.758
1.80
1.464
Зира Ирана
4.10
0.820
4.645
1.65
1.465
ФЧ (мг KOH/г)
Как видно из значений ФЧ, по количеству флавоноидных соединений семена
зиры Тавильдары превосходят другие объекты.
Для определения регуляции активности образования фенольных соединений в
процессе вегетации в семенах зиры, произрастающих в Тавильдаринском районе
построили график зависимости КЧ и ФЧ от фазы развития. Полученные результаты
приведены на Рис. 11, 12.
4
3
2
1
0
A
B
C
Фаза развития
14
Рис. 11. Зависимость изменения фенольного числа от фазы развития семян зиры.
КЧ (мг KOH/г)
А – фаза плодоношения; В – фаза до полного созревания; С – фаза после полного созревания.
15
10
5
0
A
B
C
Фаза созревания
Рис. 12. Зависимость образования соединений органических кислот от фазы
развития семян зиры. А – фаза плодоношения; В – фаза до полного созревания; С – фаза после
полного созревания.
Как видно из графика зависимости КЧ и ФЧ, при созревании семян наблюдается
значительный спад содержания свободных кислот и фенольных соединений состава
семян зиры, т.е. переход этих соединений в другие соединения через метаболические
системы или циклические регуляции. Применение разработанной константы ФЧ для
определения этих веществ может эффективно характеризовать сумму этих
компонентов в растительных маслах и экстрактах.
Качественный состав выделенных фенольных фракций исследовался в тонком
слое силикагеля на пластинках «Silufol» в системах бензол – этанол – уксусная кислота
(45:3:2), бензол – этанол (9:1) и дихлорэтан – этанол (9:1). Хроматограммы проявлялись
1%-ным раствором FeCl3.
После обработки проявителем (FeCl3) на хроматографических пластинках
обнаружили три пятна с зелеными и темно-зелеными оттенками, свидетельствующими
о присутствии в экстракте, полученного из семян зиры, трех флавоноидов.
По отдельности эти флаваноиды были получены в результате их
хроматографирования на колонке заполненной окисью алюминия. В качестве элюента
подвижной фазы использовали бензол – этанол.
После элюирования и упаривания элюатов из каждого образца получили 3
кристаллических компонента. На основе данных о температуре плавления,
коэффициенте распределения (по сравнению с литературными данными), ИК- и УФспектрах охарактеризовали выделенные компоненты. Из-за того, что эти компоненты
выделили в малом количестве, не смогли определить их содержание весовым методом,
поэтому использовали титриметрический метод. Выделенные флавоноиды растворили
в этаноле (70%) и оттитровали 0.01 н спиртовым раствором КОН до нейтрализации в
присутствии индикатора фенолфталеина. По количеству израсходованного КОН
вычислили их содержание (в граммах и в процентах) в исследуемых семенах зиры
(табл. 12).
15
Таблица 12
Содержание флавоноидов в исследуемых образцах семян зиры
Зира,
Зира, произрастающая
Зира,
произрастающая в
в Тавильдаринском
произрастающая в
Даштиджумском
Компоненты
районе
Иране
районе
г
%
г
%
г
%
Флороглюцин
0.0217
0.108
0.0204
0.102
0.0178
0.0892
Флороглюцин
эфир
0.0132
0.066
0.0128
0.0640
0.0117
0.0585
Крезол
0.0067
0.0338
0.0062
0.0314
0.0282
0.0282
Как видно из таблицы, несмотря на то, что 3 полученных фенольных соединения
были идентичными, они отличались по количественному содержанию. Большое
накопление фенольных соединений наблюдалось в семенах зиры Тавильдаринского
района.
Компонент, который мы называем флороглюцин эфиром, скорее всего, является
флороглюцин глюкозидом. Из-за его недостаточного количества и его сложной
структуры мы не смогли точно установить строение флороглюцин глюкозида.
Флороглюцин и его производные относятся к биологически активным веществам,
обладающим антисептической активностью. Полученные результаты подтверждают
антисептическое свойство помола зиры.
5 Изучение полисахаридных комплексов семян зиры
С целью выделения и идентификации полисахаридных комплексов (ПСК) семена,
собранные в фазе после полного созревания измельчили в кофемолке, а полисахариды
экстрагировали горячей дистиллированной водой. Водный экстракт концентрировали
и подвергли холодной экстракции этиловым спиртом, из которого осаждался ПСК.
Следует отметить, что при ТСХ анализе (система бутанол-вода (2:1), проявитель
бромфенол синий и качественная реакция с раствором йода) наряду с ПСК также
обнаружили соли низкомолекулярных кислот и крахмал в виде кристаллов.
С целью улучшения выхода ПСК и удаления сопутствующих компонентов при их
осаждении, помол сперва экстрагировали хлороформом. Затем аналогично
вышеприведенному способу осадили ПСК из этанола. Полученные результаты
приведены в таблице 13.
Таблица 13
Содержание полисахаридных комплексов в семенах зиры
Содержание ПСК, %
Выход ПСК
Объект исследования
нейтральные
свободные
(г)
сахара
сахара
Семена размельченные
2.60
24.90
0.21
Семена, размельченные и
3.70
21.25
0.27
обработанные хлороформом
Как видно из таблицы очистка хлороформом, также увеличивает выход ПСК.
Предварительная обработка сырья, экстрагированного хлороформом, не изменяет
содержания нейтральных сахаров в ПСК.
16
Далее мы исследовали ПСК из обработанного хлороформом сырья. ПСК
представляют собой порошкообразные вещества, растворимые в воде, нерастворимые в
органических растворителях. Выделенные ПСК не содержат крахмала, о чем
свидетельствует
отрицательная
йодокрахмальная
реакция.
Полученные
полисахаридные комплексы подвергли кислотному и щелочному гидролизу.
В продуктах кислотного гидролиза и анализа методами бумажной хроматографии
обнаружили присутствие раминозы (Rha), арабинозы (Ara), ксилозы (Xul), манната
(Man), глюкозы (Glc) и галактозы (Gal) в заметном количестве (табл. 14).
Продукты
щелочного
гидролиза
анализировали
аналогично
как
вышеприведенные продукты кислотного гидролизата. Полученные результаты
приведены в табл. 14.
Выделенные продукты идентифицировали по коэффициентам Rf, температуре
плавления, показателю преломления (5% - растворы в воде), качественными реакциями
и специальными методами анализа.
Таблица 14
Состав полисахаридных комплексов семян зиры
Соотношение
Образец
Состав гидролизата
компонентов
в гидролизате
ПСК (нейтральные
Rha- Ara- Xul- Man- Glc- Gal
1:11:3:2:19.7:21.3
полисахариды)
ПСК (кислые
GalUA-Rha-Ara- Xul- Man- Glc- Gal 11:10:2.4:2:1.4:12:1
полисахариды)
Также к аналогичному исследованию были подвергнуты семена зиры,
произрастающие в Даштиджумском районе и в Иране. Анализы показали, что
содержание полисахаридов по выходу отличаются. Например, содержание
полисахаридов в зире, произрастающей в Иране (после экстрагирования хлороформом)
составляло 4.2%, а в зире Даштиджумского района – 3.9%. Но мономеры
полисахаридных комплексов в обоих объектах являются идентичными, т.е. не
отличаются по компонентному составу.
После выделения и идентификации ПСК из образцов семян зиры исследовали их
свободные сахара. Как показывает таблица 9, семена зиры, произрастающие в
Тавильдаринском районе в своем составе содержат свободные сахара в количестве 0.21
– 0.27%. Для определения содержания свободных сахаров других образцов семян зиры,
использовали вышеупомянутый метод. Результаты анализа показали, что семена зиры
Даштиджумского района и Ирана содержат в своем составе 0.23 – 0.18% и 0.19 – 0.14%
свободных сахаров соответственно. Это наводит на мысль, что климатические условия
данной зоны Таджикистана благоприятно воздействуют на рост развития и накопления
физиологически и биохимически активных соединений.
Также при идентификации полученных моносахаридов из состава ПСК, нами
впервые был использован рентгенофазовый анализ. Полученные результаты показали
эффективность рентгенофазового анализа при идентификации моносахаридов.
6 Исследование макро- и микроэлементного состава зиры
Для идентификации макро- и микроэлементного состава семян зиры использовали
метод атомно-эмиссионного спектрального анализа. Здесь следует отметить, что этот
анализ является полуколичественным, так как с помощью используемых эталонов
невозможно определить элементы, имеющие концентрацию более 5 %. Поэтому
макроэлементы, которые имеют концентрацию более 5 %, обозначаются символом «>».
17
Анализу подверглись образцы зиры собранные в фазе после полного созревания из
Тавильдаринского и Даштиджумского районов РТ, а также зира, собранная в фазе
после полного созревания, произрастающая в Иране (коммерческие семена).
Количественный спектральный анализ определения элементного состава
заключается в исследовании линейчатого спектра, который возбуждается в зоне
дугового разряда и изменением интенсивности методом визуальной оценки. После
сожжения пробы, фотографирование спектров производили с помощью диафрагмы
Гартмана. Расшифровку спектрограмм и оценку концентрации определенных
элементов осуществляли по стандартным образцам, контрольным пробам и эталонам.
Полученные результаты представлены в табл. 15.
Как видно из таблицы 15, семена зиры, произрастающие в районах Республики в
своем составе содержат ряд микроэлементов, таких как: Са, К, Na, Mg, Zn, Ag, Mo, Cu,
Mn и т.д., имеющих большую роль в жизнедеятельности живых организмов. Самые
важные различия между зирой Даштиджумского, Тавильдаринского районов и зирой
Ирана наблюдаются в микроэлементном составе. Например, семена зиры,
произрастающей в Таджикистане в отличие от семян зиры Ирана в своем составе
содержат такой микроэлемент, как серебро, что указывает на высокое качество и
биологическую активность данной зиры.
Таблица 15
Зольные микро- и макроэлементы состава семян B. рersicum (зиры)
Тавильдаринский район
Присутствующий
элемент
Процентный состав
Присутствующий
элемент
Процентный состав
Присутствующий
элемент
Процентный состав
Присутствующий
элемент
Процентный состав
Присутствующий
элемент
Процентный состав
Присутствующий
элемент
Процентный состав
Mn
Ni
Ti
0.09 0.001 0.03
V
Mo
0.0005 0.0005
Na
Ca
Cu
Pb
Zn
Ag
0.003
0.0001
0.005
0.00001
Si
Fe
P
Li
0.003
0.2
0.001
Pb
Zn
Ag
0.0003
0.005
0.00005
Al
Mg
K
0.05
0.3
3
3
>5
5.3
Даштиджумский район
Mn
Ni
Ti
0.015
-
Al
Mg
K
0.05
0.05
3
2
Иран
Mn
Ni
Ti
V
0.012
-
0.015
-
Al
Mg
K
Na
Ca
0.09
0.05
2
2
2
V
Mo
Cu
0.015 0.0005 0.0002 0.0005
Na
Ca
Si
Fe
P
Li
3
0.05
0.002
0.2
0.001
Mo
Cu
Pb
Zn
Ag
0.0003
0.005
-
Si
Fe
P
Li
0.05
0.002
0.2
0.001
0.0002 0.0002
Выводы
1. Охарактеризован биохимический состав низкомалекулярных соединений, таких
как: флавоноиды, изопропеноиды и низкомолекулярные углеводы семян зиры,
произрастающей в Таджикистане.
2. Установлена идентичность биохимических компонентов зиры, произрастающей
в разных географических зонах Таджикистана и коммерческой зиры Ирана.
3. Установлен состав микроэлементов зиры, произрастающей в Таджикистане и
коммерческой зиры Ирана. В составе зиры Таджикистана обнаружен ион
серебра, который отсутствует в коммерческой зире Ирана.
18
4. С помощью природного бентонита разработана система очистки
эфиромасличных соединений семян зиры, которые отличаются своими
органолептическими свойствами.
5. Разработан способ определения новой константы фенольного числа (ФЧ),
характеризующей количество фенолов в маслах и изучена динамика накопления
эфирных масел, свободных кислот, флавоноидов и витаминов группы Е в
разных фазах развития семян.
По материалам диссертации опубликованы следующие работы:
Ибрагимов Д.Э., Халиков Ш.Х., Усмонова Ш.Х., Зумратов А.Х. Малый патент №
TJ 357 на изобретение «Способ выделения эфирных масел», приоритет
изобретения 11.05.2010 г.
2. Ибрагимов Д.Э., Халиков Ш.Х., Усмонова Ш.Х., Иброхимов Ф.А. Малый патент
№ TJ 359 на изобретение «Способ получения витаминов группы А», приоритет
изобретения 17.05.2010 г.
3. Ибрагимов Д.Э., Зумратов А.Х., Усмонова Ш.Х., Ёдгорова С. Дж. Малый патент
№ TJ 339 на изобретение «Композиция для духов из растительного сирья»,
приоритет изобретения 20.04.2010 г.
4. Ибрагимов Д.Э., Халиков Ш.Х., Усмонова Ш.Х. Каротиноиды семян Bunium
persicum (Boiss.) B. Fedtsch., произраставшего в Таджикистане Доклады Академии
наук Республики Таджикистан, Т.53, № 5, 2010 г. с. 377 -381.
5. Ибрагимов Д.Э., Халиков Ш.Х., Усмонова Ш.Х. Биологически активные вещества
масла семян Bunium persicum(зира). Научно-медицинский журнал «Паёми Сино»
(«Вестник
Авиценны»)
Таджикского
государственного
медицинского
университета имени Абуали ибни Сино, № 2, апрель – июнь, Душанбе, 2010 г. с.
106 -111.
6. Иброгимов Д.Э., Усмонова Ш.Х. Хроматографическая характеристика
флаваноидов семян Bunium persicum. Научно-медицинский журнал «Паёми Сино»
(«Вестник
Авиценны»)
Таджикского
государственного
медицинского
университета имени Абуали ибни Сино, № 3, июль – сентябрь, Душанбе, 2010 г.
с. 123 -126.
7. Ш.Х.Халиков, Д.Э.Иброгимов, А.Х.Зумратов, Ш.Х.Усмонова, Г.М.Муллоева,
Ф.А.Иброгимов. Влияние антиоксидантов на процессы окисления некоторых
растительных масел. Вестник таджикского национального университета (научный
журнал), № 1(65), Душанбе, 2011 г., с. 77-83.
8. Ш.Х.Халиков, Д.Э.Иброгимов, Ш.Х.Усмонова. Свободные кислоты
семян
Bunium persicum (зира). Вестник таджикского национального университета
(научный журнал), № 9 (75), Душанбе, 2011 г., с. 16-19.
9. Ибрагимов Д.Э., Халиков Ш.Х., Усмонова Ш.Х. Новый метод определения
кислотного числа в маслах и экстрактах. Научная перспектива (научноаналитический журнал), № 9, 2010 г., Россия. с. 84-86.
10. Ибрагимов Д.Э., Халиков Ш.Х., Усмонова Ш.Х. ГЖХ анализ глицеридного
состава масла зиры. «Материалы республиканской конференции «Новые
теоретические и прикладные исследования химии в высших учебных заведениях
Республики Таджикистан», Душанбе, 2010 г. с. 30-32.
11. Усмонова Ш.Х. Фенолы эфирных масел семян Bunium persicum. «Материалы
республиканской научной конференции «Химия: исследования, преподавание,
технология», посвященной «году образования и технических знаний» (29-30
сентября 2010 г.). с. 18-19.
12. Ибрагимов Д.Э., Усмонова Ш.Х. Новая технология получения эфирных масел из
дикорастущих растений. «Подготовка научных кадров и специалистов новой
1.
19
формации в свете инновационного развития государств», Материалы
международной конференции (30, 31 октября и 1 ноября 2010 г.). с. 203-205.
13. Иброгимов Д.Э., Усмонова Ш.Х., Ёдгорова С.Ч., Муллоева Г.М. Технология
производства душистых композиций для духов. «Материалы республиканской
конференции «Новые теоретические и прикладные исследования химии в высших
учебных заведениях Республики Таджикистан», Душанбе, 2010 г. с. 137-139.
14. Иброгимов Д.Э., Усмонова Ш.Х. Новый способ определения фенольных
соединений в маслах и экстрактах. Международная конференция экстракция
органических соединений, РФ-Воронеж-2006, с. 112-113.
15. Иброгимов Д.Э., Усмонова Ш.Х., Нажбуддинов С. Модернизирование способа
выделения эфирных масел из некоторых эфироносных растений. Материалы
международной конференции «Синтез, выделение и изучение комплексных
свойств новых биологически активных соединений», посвященной 50-летию
кафедры органической химии и 70-летнему юбилею доктора химических наук,
профессора Халикова Ш.Х.(3-4 октября 2011.) Душанбе. с. 115-117.
20