1 Федеральное государственное образовательное учреждение

1
Федеральное государственное образовательное учреждение
высшего профессионального образования
«Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии
имени К.И. Скрябина»
На правах рукописи
ЯРОВАЯ НАДЕЖДА ВИКТОРОВНА
Эпизоотологический мониторинг при
демодекозе собак в условиях г. Москвы
и разработка комплексной терапии
03.02.11 – паразитология
Диссертация
на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Научный руководитель:
академик РАСХН,
доктор ветеринарных наук, профессор
ВАСИЛЕВИЧ Ф.И.
Москва – 2010
2
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ..............................................................................................
4
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………………...
8
1.1. Этиологические факторы развития демодекоза собак…………
9
1.2. Особенности биологии развития и питания клещей рода Demodex canis…………………………………………………………………
12
1.3. Распространение и характеристика эпизоотического процесса
при демодекозе собак на территории России……………………………..
14
1.4. Морфологические и биохимические аспекты патогенеза при
демодекозе собак…………………………………………………………….
21
1.5. Клинические признаки и диагностика демодекоза собак ……..
26
1.6. Методы терапии и профилактики демодекоза собак……………
28
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ…………………………......
32
2.1. Материалы и методы работы……………………………………..
32
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ…………….............................
38
3.1. Эпизоотология демодекоза собак в современных условиях г.
Москвы……………………………………………………………………….
38
3.1.1. Половая, породная, возрастная и сезонная динамика демодекоза
собак……………………………………………………………………………
38
3.2. Определение острой и хронической токсичности препарата
Амит форте…………………………………………………………………..
45
3.2.1. Изучение острой токсичности препарата Амит форте при
введении в желудок………………………………………………………..
3.2.2. Изучение кумулятивных свойств препарата Амит форте…….
45
50
3.2.3. Изучение местно-раздражающего и кожно-резорбтивного
действия препарата Амит форте…………………………………................
51
3.2.3.1. Местно-раздражающее и кожно-резорбтивное действие
препарата в опытах на мышах…………………………………………….
51
3
3.2.3.2. Местно-раздражающее действие препарата в опытах на
крысах………………………………………………………………………
52
3.2.3.3. Кожно-резорбтивное действие препарата в опытах на крысах…………………………………………………………………………….
52
3.2.3.4. Местное действие препарата на слизистые оболочки в опыте на кроликах…………………………………………………………...
57
3.2.4. Изучение сенсибилизирующего действия препарата Амит
форте……...…………………………………………………………………
58
3.3. Влияния препарата Амит форте на организм животных в терапевтической, двукратноувеличенной и пятикратноувеличенной дозах…
60
3.4. Изучение эффективности препарата Амит форте в комплексной терапии при демодекозе собак………………………………................
65
3.4.1. Эффективность комплексной терапии при чешуйчатой форме демодекоза………………………………………………………………
73
3.4.2. Эффективность комплексной терапии при пустулезной форме демодекоза………………………………………………………………..
80
3.4.3 Эффективность комплексной терапии при смешанной форме
демодекоза…………………………………………………………...………
88
3.5. Определение экономической эффективности разработанного
метода комплексной терапии……………………………………………….
94
4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ……………...
97
5. ВЫВОДЫ…………………………………………………………...
110
6.ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ………………………………………………………………………....
112
7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ……...
ВЫВОДОВ……………………………………………………………...…… 113
8. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ………………...
114
9. ПРИЛОЖЕНИЕ……………………………………………………...
128
4
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность работы. Заболевание, причиной которых служат клещи,
стали настоящей проблемой домашних животных. Одним из таких заболеваний мелких домашних животных, одновременно представляющим опасность и для людей, является демодекоз.
Несмотря на широкое распространение демодекоза, многие вопросы
этиологии и патогенеза остаются недостаточно изученными, что осложняет
разработку мер борьбы и профилактики этого заболевания (16, 19).
В крупных городах России при обследовании собак с поражениями кожи, демодекоз выявили в 34,3 - 67,4% случаев (38).
В результате увеличения количества заболевших животных и причиняемого ими ущерба проблема демодекоза стала весьма актуальной. Лечение
демодекоза длительное, часто неэффективное и дорогостоящее (9, 27, 28,
85).
На сегодняшний день основным методом борьбы с демодекозом животных является применение акарицидов в комплексе с патогенетической терапией.
Однако использование пестицидов и других химических соединений без
надлежащего контроля и токсикологических исследований может иметь непоправимые последствия, в том числе индукции опухолей у человека и животных, возникновение эмбриотоксических, тератогенных и мутагенных эффектов. Как показали многочисленные исследования последних лет, наиболее эффективными для борьбы с эктопаразитами животных является соединение фенилпиразол (33, 94).
Проведение эпизоотологического мониторинга демодекоза в современных условиях г. Москвы и разработка комплексной терапии с использованием акарицидов на основе фенилпиразолов (фипронил) считается актуальной
задачей для ветеринарной науки и практики.
5
Целью нашей работы явилось проведение эпизоотологического мониторинга при демодекозе собак и разработка эффективного метода лечения
зараженных животных.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Изучить распространение, половую, возрастную, породную и сезонную динамику демодекоза собак в условиях г. Москвы.
2. Определить острую и хроническую токсичность нового отечественного препарата Амит форте.
3. Изучить гематологические и биохимические показатели крови здоровых и зараженных демодекозом собак.
4. Определить терапевтическую эффективность Амит форте.
5. Разработать эффективный метод лечения собак при демодекозе с использованием акарицида, гепатопротектора, иммуномодулятора и средств
улучшающих обмен веществ.
6. Определить экономическую эффективность разработанного метода
комплексной терапии.
Научная новизна.
Впервые за последние 10 лет изучен эпизоотический процесс при демодекозе собак в условиях Мегаполиса.
Впервые проведены токсикологические исследования нового отечественного препарата Амит форте. Установлено, что препарат относится к малоопасным веществам (4 класс опасности по ГОСТ 12.01.007-76).
Изучены гематологические, биохимические показатели крови при разных формах течения заболевания с применением нового препарата. Амит
форте в комплексной схеме способствует улучшению кровообращения, пролиферации эозинофилов, снижению активности печеночных ферментов.
Эффективность применения препарата Амит форте в комплексной терапии демодекоза собак при чешуйчатой форме составила 100%, выздоровле-
6
ние наступало на 14 сутки с начала лечения. При пустулезной – 92%, при
смешанной – 50%.
Практическая ценность работы. Материалы по доклиническим и клиническим исследованиям препарата Амит форте вошли в инструкцию по его
применению, утвержденную заместителем руководителя Россельхознадзора
от 30 августа 2008 г., регистрационный номер ПВР-2-5.8/02197.
Исследования по эпизоотическому процессу при демодекозе и терапии
заболевания используются в учебном процессе ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени
К.И.Скрябина» при изучении студентами дисциплины «Паразитология и инвазионные болезни животных».
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на расширенном заседании кафедры паразитологии и инвазионных
болезней животных и ученых советах факультета ветеринарной медицины
ФГОУ ВПО МГАВМиБ, г. Москва, (2008–2009), на Международной ветеринарной конференции «Балтийский форум», Санкт-Петербург, (2009), в Объединенных сессиях Координационных совещаний по ветеринарной паразитологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии имени К.И. Скрябина», г. Москва, (2009, 2010).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 3 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, рекомендаций по практическому использованию полученных результатов и
научных выводов. Работа иллюстрирована 29 таблицами, 29 рисунками, 16
страницами приложения. Список литературы содержит 115 источника, в том
числе 29 зарубежных авторов.
7
Основные положения и результаты, выносимые на защиту:
1. Распространение и особенности половой, породной, возрастной и сезонной динамики заболевания в современных условиях г. Москвы.
2. Результаты токсикологических исследований препарата Амит форте.
3. Комплексная терапия демодекоза собак.
8
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Особенно широко распространены эктопаразиты, а среди них и арахнозы (29, 30, 31, 36, 37, 42, 52, 54, 58, 68, 80, 81, 83, 93, 94, 100, 106, 108, 113).
Демодекоз – широко распространенное паразитарное заболевание млекопитающих, вызываемое клещами рода Demodex. Возможность перекрестного заражения не установлена (45, 51).
Наиболее изученным в настоящий момент является клещ Demodex canis.
В работе Факсона (Faxon W., 1878) указано, что первые клещи демодексов у
собак обнаружил в 1844 году Tulk P. В течение нескольких лет Megnin P.
(Megnin P., 1877, 1880) занимался изучением морфологии клещей рода
Demodex. Он описал и дал названия клещам найденным у собак D.
folliculorum var. сanis; у кошек D. filliculorum var. сati, а также возбудителя
демодекоза у человека - D. filliculorum. В 1859 году Leyding Р. дает детальное
описание и название этого паразита у собак Demodex canis.
Среди заразных паразитарных болезней собак особое распространение
стала приобретать чесотка или демодекоз, обусловленные разными видами
клещей. Демодекоз наносит экономический ущерб служебному и охотничьему собаководству и имеет социальное значение, так как больные собаки постоянно находятся в контакте с их владельцами и членами их семей, что характерно для крупных городов. В первую очередь, это связано с увеличением
темпов и объема бесконтрольного разведения собак различных пород, ввозом
из-за рубежа производителей сомнительного качества, а также неправильными условиями кормления и содержания животных (1). Наряду с известными
острыми летальными инфекциями собак вирусной природы, демодекоз может быть квалифицирован как эпизоотическая заразная болезнь клещевой
этиологии (инфестация). О значительно возросшем научном, практическом
значении демодекоза собак и актуальности его изучения свидетельствуют
материалы целого ряда докторских (18, 36, 83), кандидатских (8, 5, 9, 33, 43,
74) диссертаций и научных публикаций, выполненных в последние годы.
9
В настоящее время широкое распространение приобрел демодекоз собак, осложненный стафилококковой инфекцией (1, 2).
Однако, в последние годы изучению эпизоотологии, патогенеза и клиники при демодекозе посвящено много работ (5, 13, 17, 19, 33, 35, 36, 37, 43,
73, 74, 80, 83). Несмотря на это, многие вопросы этиологии и патогенеза
остаются недостаточно изученными, что осложняет разработку мер борьбы и
профилактики этого заболевания.
Г.Г. Щербаков, С.В. Старченков (1997); М.В. Шустрова (1996); Ф.И. Василевич (1998) указывают на сложность терапии демодекоза и необходимость применения комплексного подхода в лечении данного заболевания.
Ввиду того, что наша работа посвящена изучению эпизоотологии, патологии и мерам борьбы, мы постарались как можно полнее представить литературные данные по эпизоотологии, биологии, диагностике и мерам борьбы с
данным заболеванием.
1.1.Этиологические факторы развития демодекоза собак
Возбудитель демодекоза собак клещ Demodex canis (Leydig, 1859) является постоянным эндопаразитом (частью нормальной фауны) кожи собак и
обнаруживается в небольших количествах внутри волосяных фолликулов,
иногда в сальных и апокриновых потовых железах кожи и внутренних органах (кишечник, селезенка, печень), где они образуют колонии. По некоторым
данным, количество колоний на собаке может доходить до 200 - 300 (16, 65,
98). У собак демодекоз протекает в виде дерматитов и гиперкератозов. Полный жизненный цикл клеща проходит на коже хозяина. Клещ паразитирует в
волосяных фолликулах и редко в сальных железах, где он питается клетками,
секретом сальных желез и чешуйками эпидермиса (16, 17, 19, 36, 64, 83, 107).
Клещей, представителей другого вида, обнаруживали у некоторых собак
при генерализованном демодекозе (6, 36, 37, 96, 97, 107, 108).
Условно-патогенный характер D. canis и связь между заболеванием и
ослабляющими здоровье факторами, такими, как кишечный паразитизм, теч-
10
ка, появление щенков, эндокринные заболевания, глюкокортикотерапия и
химиотерапия предполагают сочетание наследственной предрасположенности и подавления иммунитета (107, 109, 112).
Однако, в отличие от этих предыдущих данных, Barta и др. (1964) обнаружили, что наблюдаемое подавление Т-клеток более тесно коррелировало с
размером вторичной пиодермии и отсутствовало у собак с неосложненным
демодекозом.
Совсем недавно было подтверждено, что иммуносупрессия, связанная с
GDM, не связана с наличием пиодермии. Baring и др. (1976) также продемонстрировали, что подавление иммунитета не является обязательным условием
для собак, чтобы развить клинический демодекоз. Ранее существующая иммуносупрессия, рассматриваемая как причина заболевания на самом деле
коррелировала со степенью и длительностью заболевания и количеством паразитов. Подавление иммунитета, поэтому является следствием, а не причиной GDM. Это может объяснить незначительную частоту демодекоза у собак
под действием некоторых из иммунодепрессивных факторов, связанных с
демодекозом таких, как новообразование, заболевание печени и сахарный
диабет.
Наследственный дефект Т-клеток, специфичных к D. canis, мог бы играть центральную роль в патогенезе GDM. Этот дефект может проявляться
сам по себе или в сочетании с некоторыми иммунодепрессивными факторами и позволил бы размножению клещей и началу генерализированной депрессии Т-клеток, предрасполагая к вторичной пиодермии, а в дальнейшем
угнетая как клеточную, так и гуморальную иммунную реакцию (114).
Заражение восприимчивых животных может происходить только при
контакте и только половозрелыми формами клеща, которые выбираются из
фолликулов на поверхность кожи и активно передвигаются по ней. В это
время они дышат трахеями. Клещи могут передаваться от матери щенкам в
течение первых 2—3 дней после их рождения (38).
11
Характерно, что сигналом для расселения служит повышение температуры, которое происходит на участке контакта больного и здорового животного. Показано и усиление способности к расселению под действием гормона
окситоцина. Окситоцин вырабатывается у сук, кормящих щенков молоком.
Предполагается, что этот сигнал, рефлекторно действуя на паразита, способствует усиленному переползанию клеща от больной матери к потомству (т.е.
заражению при кормлении щенков молоком) (16, 37, 38, 108).
Наиболее часто демодекозные поражения локализуются в местах, где
кожа эластичнее, больше складок и, следовательно, больше влажность прикожного слоя воздуха. Чаще поражаются также участки тела, которые наиболее активны при контакте (голова, грудь).
Не изучена возможность бессимптомного течения болезни (носительства) у собак. Однако, учитывая высокий процент носительства демодекоза у
человека (более 20%), по аналогии можно предполагать, что многие собаки
также являются носителями этого паразита без клинических проявлений болезни (16, 28, 37, 108).
Половой диморфизм у клеща D. canis ярко выражен на фазе имаго. Размер Demodex canis: самки – 250 мкм, самца до 150 мкм (7), а по данным Ларионова С.В. (1991), длина самки D. canis составляет 238,5 мкм, самца 209,9
мкм. Самки обычно крупнее самцов.
Ларионов С.В. (1991) отмечает, что клещи рода D. сanis претерпели
морфологические адаптации к среде местообитания, что им позволило перейти от экто- к эндопаразитизму, так, по данным автора, взрослые клещи
имеют заостренное червеобразной формы тело. Кутикула тонкая, нежная,
эластичная и имеет бледный беловатый цвет, слабовыраженную поперечную
исчерченность и лишена щетинок. Лишь в области гнатосомы имеется одна
пара очень коротких субгнатосомальных щетинок. Ноги короткие, состоят из
трех члеников. Ларионов С.В. (1991) делает вывод, что все морфологические
приспособления наряду с физиологическими адаптациями системы дыхания,
12
пищеварения позволили полностью адаптироваться этим клещам к эндопаразитическому образу жизни.
По данным Kwochka, K.W. (1987) и Scott, D.W. and Walton, D.K. (1985)
Клещи D.canis проводят свой полный жизненный цикл на хозяине, и как
только оказываются вне хозяина или даже на поверхности кожи, они быстро
умирают вследствие высыхания.
Sako (1995) обнаружил, что гермоактивная зона для клеща D. сanis находится между 16 - 41°С. Движение клещей в экзогенных условиях прекращалось при температуре ниже 15°С. В различных лабораторных и искусственных условиях клещи вне хозяина жили в течение 37 дней. Однако эти клещи
потеряли способность заражать собак (волосяные фолликулы). Практически,
такие клещи, попадая на поверхность кожи, погибают от высыхания в течение 45 - 60 минут при температуре 20°С и относительной влажности 40% (36,
37, 107).
По данным Fetscher J. (1921) и Jakob H. (1924) при температуре 12 – 15ºС
и высокой влажности воздуха они живут до 25 дней, если в помещении температура 9 – 18ºС и влажность 70%, они будут активны 3 – 4 суток. Клещи
выживают в течение 434 дней в минеральном масле и 5 дней в 2% глютеральдегиде (101), а в холодильнике погибают через 31 день (23).
Другие же клещи, в отличие от демодекса обитают на поверхности кожи
(Notoedres cati), либо в ее толще (Sarcoptes scabiei var.canis).
1.2.Особенности биологии развития и питания клещей рода
Demodex canis
Ларионов (1991), изучив функционально–морфологические особенности
ротового аппарата, как составной части биологически координированной системы органов пищеварения клеща, и гистосрезов кожи хозяина, установил,
что ротовой аппарат взрослых демодекозных клещей – режуще-сосущего типа. С помощью гистосома имаго способы прокалывать оболочки эпителиальных клеток внутренней стенки очага поражения и высасывать их содержи-
13
мое, а с помощью хелицер подрезать оболочки клеток, содержимое которых,
попадая в демодекозный очаг, служит пищей личинкам и нимфам.
Автор считает, что активным добыванием пищи для себя и своего
потомства занимаются взрослые клещи, так как ротовой аппарат преимагинальных стадий недоразвит и не способен к разрушению клеток животного.
При этом личинки и нимфы, пребывающие в активном состоянии, питаются
тканевой жидкостью клеток, разрушенных взрослыми клещами.
Выполненные в последнее время исследования (37) позволили выявить
закономерную зависимость места локализации демодекозных клещей от
строения сальных желез кожи хозяина, а также размеров тела клещей от места локализации в коже хозяина, что, в свою очередь, позволяет, зная, размеры тела паразита, судить о строении сальных желез хозяина и наоборот.
Пораженная демодекозом кожа собак, является экологически благоприятной для репродукции и роста демодекозных клещей. Анализ литературных
данных о цикле развития клещей D. canis свидетельствует о том, что в процессе онтогенеза клещи проходят следующие фазы: яйца, личинки, протонимфы, дейтонимфы и имаго. Эмбриональное развитие внутри яйца продолжается от 2 до 4 суток. Постэмбриональное развитие характеризуется тем,
что особи преимагинальных стадий проходят два состояния развития: активное и пассивное. Пребывая в активном состоянии, личинка, протонимфа и
дейтонимфа внешне активны. Они усиленно питаются, растут и развиваются.
По достижении наибольших для активного состояния размеров напитавшаяся
личинка, прото- в дейтонимфа переходят в пассивное состояние. У них начинается перестройка организма, которая слагается из двух взаимообусловленных процессов - гистолиза и гистогенеза. Сущность гистолиза заключается в
распаде внутренних органов клеща, а гистогенеза - в создании тканей и органов особи новой стадии развития в полости тела предшественника. Гистолиз
захватывает и мышечную систему. Поэтому во время перестройки организма
личинка и обе нимфы становятся совершенно неподвижными и не нуждают-
14
ся в питании (16, 37, 50).
В соскобах кожи можно обнаружить четыре стадии D. сanis. Из веретенообразного яйца вылупляется меленькая с тремя парами конечностей личинка, которая превращается в нимфу с 4 парами конечностей, и затем в имаго. Клещей на всех стадиях развития можно обнаружить в лимфатических
узлах, стенке кишечника, печени, почек, мочевом пузыре, легких, щитовидной железе, крови, моче и фекалиях. Однако, вне кожи клещи обычно дегенерируют и погибают, оставляя дренаж своей миграции по крови и лимфе
(114). Yamane и Sako (1995) обнаружили, что 76% исследованных собак с генерализованным демодекозом имели клещей в поверхностных и внутренних
лимфатических узлах, но их количество было мало по сравнению с их численностью в коже, а процентное соотношение взрослых, нимф, личинок яиц
одинаковым (16, 108, 114).
Demodex canis является комменсалом, то есть демодексные клещи обычные резиденты кожи собаки и становятся патогенными лишь при определенных условиях, когда быстрое распространение клеща вызывает появление клинических признаков заболевания. Трансмиссия происходит от кормящих самок к новорождённым путём прямого контакта в течение первых 2 3 дней неонатальной жизни. Клещи могут быть замечены в фолликулах щенков через 16 часов после рождения. Прежде всего, клещей обнаруживают на
морде щенков, что говорит о важности прямого контакта и кормления грудью. Когда щенки рождаются при помощи кесарева сечения и выкармливаются отдельно от инфицированной матери, они не содержат клещей. Этот
факт говорит о том, что внутриутробного заражения не происходит. Не замечены клещи и у мертворожденных щенков (16, 25, 37, 108).
1.3. Распространение и характеристика эпизоотического процесса при
демодекозе собак на территории России
Некоторые авторы считают, что заражение возможно только через промежуточных хозяев (115). Другие утверждают, что клещи передаются кон-
15
тактным путем (61, 113, 106).
С.В. Ларионов (1989, 1994), Спирин (1996), Гинель (1996), М.В. Шустрова (1996), Бэне (1997) и А.И. Лесников (1998) утверждали, что источником
инвазии демодекоза являются больные и собаки-паразитоносители.
Вопросы эпизоотологии демодекоза у разных видов животных привлекали внимание ряда исследователей (36, 37, 38, 39, 53, 61).
О широком распространении демодекоза собак свидетельствуют данные
ветеринарной отчетности городских ветеринарных служб. С.В.Ларионов
(1996) при обследовании 658 собак с поражением кожи у 226 (34,5 %) обнаружил демодекоз.
М.В.Шустрова (1995) в г. Санкт-Петербурге при обследовании 1115 собак, у 725 диагностировала демодекоз.
Лесников А.И. (1999) при обследовании 719 собак г. Воронежа у 207
(28,8%) диагностировал демодекоз.
Белху Тесфайе Негуссие (1999) при обследовании 370 собак с поражениями кожи у 205 диагностировал демодекоз, что составило, что составило
55,4%.
Храпай Н.Н. (2000) в условиях влажного и жаркого климата Черноморского побережья обнаружила демодекоз у 329 (46,8%) животных из 703 обследованных.
Коротаева О.А. (2005) в г. Тюмени при обследовании 1226 собак демодекоз был диагностирован у 505 животных (41,2%).
При работе и изучении специальной литературы перед нами встал вопрос, на чем основано утверждение многих авторов, что D. canis является
нормальным обитателем кожи собак.
Предпосылкой развития демодекоза у здоровых собак может быть внедрение в лечении антилимфоцитарных сывороток, иммунодепрессивных препаратов, либо кортикоидов (гормонов коры надпочечников).
16
Распределение по возрасту: Демодекоз является акарозом, редко встречающимся у собак моложе 3 месяцев и старше 3 лет.
По работам Соколовского В.А. (1952) следует, что чаще собаки заболевают в возрасте 6-9 месяцев – это составляет наибольший процент – 33,5%, с
3-6 месяцев – 29,0% и с 9-12 месячного возраста заболевает - 12,5% собак, с
1,5 до 2 лет – 7,2%, с отмечаемой тенденцией к снижению уровня заболевания к 3-4 годам до 1%. Еще реже отмечалось количество больных в возрасте
4-7 лет, что составляет 0,3%.
В.С. Ершов (1959) отмечал, что демодекоз наблюдается у молодых собак
двухлетнего возраста.
С.В.Ларионов (1991) отмечает, что из 226 собак, пораженных демодекозом, лишь 44 (19,5%) были старше 2-х лет.
По данным М.В.Шустровой (1995) в условиях г. Санкт-Петербурга болеют собаки от 3-недельного возраста и старше, наиболее часто поражаются
животные в возрасте 2-3 лет. Максимальный процент зараженности отмечается в возрасте 2-3 лет – 55% или 135 собак, в 174 случаях (25%) демодекоз
регистрировался у животных в возрасте от 4 до 6 лет, в возрасте от 3 недель
до 1 года – 135 случаев (20%).
Василевич Ф.И. и Розовенко М.В. (1994) считают, что наиболее восприимчивы к демодекозу собаки в возрасте до 2-х лет. Из 579 исследованных
ими собак, только у 106 (18,9%) возраст был более 2 лет.
Ф.И Василевич (1997, 1994) отмечает, что из 165 собак, зараженных демодекозом, максимальный процент заболеваемости отмечается у животных в
возрасте от 6 месяцев до 1 года – 42,3% или 260 собак, в 191 случаев (31%)
демодекоз регистрировался в возрасте от 2 до 6 месяцев. В возрасте 1-3-х лет
– 93 случая (15,1%), старше 3 лет – 61 случай (9,9%) (32, 34). Автор наблюдал демодекоз в 2,4% случаях у 1-2-х месячных щенков. С другими собаками
в этом возрасте практически отсутствуют контакты с другими животными, и
не трудно предположить, что заражение произошло от больных демодекозом
17
матерей. По данным автора, это объясняется тем, что животные подвержены
в возрасте 1-2-х месяцев всевозможным стрессовым факторам (вакцинация,
купирование ушей, смена зубов и др.) и в результате ослабевают защитные
силы организма.
Ф. Бэне (1997) отмечает заболевание у собак с 3 месячного возраста до 3
лет с более частым проявлением клинической картины болезни до года.
Ромашова В., Лесникова А. (1997) в 94% случаев выявили заболевание
демодекозом у собак в возрасте до 2 лет и только у 5 собак старше этого возраста.
Василевич Ф.И. (1998) тоже доказывает этот факт и отмечает схожую
возрастную динамику соответствующую: в возрасте до 2-х месяцев – 2,6%, 26 месяцев – 31,1%, с 6 месяцев до 1 года – 42,3%, в 1-3 года 15,1%, старше 3х лет-8,9%.
Белху Тесфайе Негуссие (2000) наибольшее количество больных собак
выявлял в молодом возрасте, так, с 7 до 12 месяцев количество их составило
35,4%, с 1 – 6 месяцев – 18,7%, с 13 – 18 месяцев – 18,1% с последующим
убыванием в 19 – 24 месяца – 12,9%, 2 – 3 года – 6,3%, 3 – 4 года – 3,2%.
Число больных собак в возрасте старше 5 лет было минимально и составило
1,7%. Максимальный процент заболеваемости у животных приходится на
возраст с 6 месяцев до 1 года, а после 2-х лет демодекозом заболевало 7,6%
(43).
Храпай Н.Н. (2001) указывает на большую частоту случаев заболевания
в возрасте от 1 до 3-х лет (3,6%), с 2 до 6 месяцев – 25,5% и с 6 месяцев до 1
года – 18,2 %. При этом отмечается сохранение достаточно высокого уровня
заболевания в возрасте собак с 3 до 6 лет (14,3%) и только после 6 летнего
возраста автор отмечает резкое снижение до 5,8%.
По данным Авдиенко В.А. (2006) наиболее часто заболевание регистрируется у животных в возрасте от 6 месяцев до 2,5 лет. Увеличивается количество зараженных демодекозом собак в возрасте 7-9 лет.
18
У взрослых собак развитию заболевания способствуют ослабление иммунитета, эндокринные заболевания, химиотерапия, aутoиммунные заболевания, а также некие физиологические конфигурации - эструс (течка), беременность, либо лактация.
Распределение по полу: Отмечается тот факт, что демодекозом суки заражаются реже, чем кобели.
По данным Ф.И. Василевича и М.В. Розовенко (1994), А.А. Лисициной,
Ф.И. Василевича (1996) из обследованных ими зараженных демодекозом собак 61,9% составляли кобели и 38,1% составляли суки. Преобладание зараженных кобелей подтверждается работой Ф.И. Василевича (1998), когда из
615 собак на их долю приходилось 54,3% из общего количества обследованных животных.
По исследованиям F.R. Kountz (1955) среди 507 животных больных демодекозом 260 самок и 247 самцов.
По данным С.В.Ларионова (1991) из 226 больных демодекозом собак
114 (50,4%) были самками.
Храпай Н.Н. (2001) отмечает большее количество больных животных
среди самок – 55%, а среди самцов – 45%.
Ю.С. Балашов (1982) связывает это с большой подвижностью самцов, а,
следовательно, и большое количество контактов, с различной устойчивостью
самцов и самок в связи с различиями в их гормональной активности.
Распределение по типу шерсти: Чаще заболевание встречается у собак
короткошерстных пород (5, 17, 36, 42, 74, 99, 102).
По данным С.В.Ларионова (1991) большую предрасположенность к демодекозу имеют короткошерстные породы собак (61,9%), автор объясняет
это тем, что сальные железы у них развиты лучше.
Чаще всего демодекозом заражаются бобтейлы, длинношерстные колли,
афганская борзая, немецкая овчарка, кокер-спаниель, доберман-пинчер, далматинский дог, датский дог, английский бульдог, бостонтерьер, такса,
19
немецкий жесткошерстный пойнтерьер, западно-шотландский белый терьер
и скотч-терьер (108, 111, 114).
W.H.Miller (1995) указывает, что наиболее часто демодекозом поражаются доберманы, таксы, английские бульдоги, стафордширские и бостонские
терьеры, ротвейлеры, терьеры, пинчеры и др.
Так, по мнению Лисициной А.А. и Василевича Ф.И. (1996), наиболее
предрасположены к заболеванию овчарки – 16,4%, английские кокерспаниели – 10,5%, боксеры, ротвейлеры, французские бульдоги, американские стаффордширские терьеры и питбули.
Шустрова М.В. (1996) отмечает, что заболевание чаще регистрируется у
ротвейлеров, пинчеров, боксеров, такс, бультерьеров, питбультерьеров, бладхаундов, мастиффов, догов, немецких овчарок.
Машкай И.А., Майборода Е.А. (1995); Белху Тесфайе Негуссие (2000);
Храпай Н.Н. (2001) получали сходные результаты.
Ф.И.Василевич (1994, 1997) в своей работе указывает, что большинство
больных демодекозом собак были чистопородными (90,6%) и лишь в
37случаях (6,01%) смешанными и беспородными. Это можно объяснить тем,
что беспородных собак реже доставляют в клиники.
Сезонная динамика: Заболевание носит сезонный характер. Наибольшая интенсивность инвазии бывает в октябре-ноябре месяцах и в мартеиюне. Интенсивность миграции клещей из одного волосяного фолликула кожи в другой, не покидая хозяина, начинается во время сезонной линьки животных (36, 91).
Ларионов С.В. (1991) устанавливает данное заболевание у собак в зависимости от сезона года, следующим образом: зимой – 40,3%, весной – 38,5%,
летом – 11%, осенью – 10,2%. Автор считает, что недостаточность инсоляции
в зимний период, снижение тонуса кожи к началу весны обусловливает активацию клеща и в результате этого увеличение частоты клинического проявления демодекоза.
20
В период с 1983- 1993 гг. в Москве и Московской области Василевич
Ф.И., Розовенко М.В. (1994) обследовали 1565 собак, из них у 615 – обнаружили демодекоз (39,5%). Сезонная динамика: зимой – 271 (47,1%), весной –
210 (38,2%) с последующим убыванием частоты проявления клинических
признаков в летний период – 56 (8,7%) и осенний – 42 (6,1%) собак. Данные
сведения о сохранении тенденции к распространению патологического процесса в зимне-весенний период были подтверждены позже, в частности, зимой – в 41,2% случаев, весной – 37,4%, летом – 10,5% и осенью – 10,9% (Василевич Ф.И., 1998).
По данным М.В. Шустровой в г. Санкт-Петербурге наибольший пик экстенсивности инфестации отмечался в марте (70,8%) и сентябре (60%). В летний период с июня по август количество больных снижалось до 33,3%. По
мнению автора это связано с неблагоприятными в это время года условиями
для паразитизма.
Белху Тесфайе Негуссие (2000) говорит о двух выраженных сезонных
подъемах в условиях крупного города – первый в марте – июне и второй в
сентябре – ноябре, а распределение по сезонам года заболевания чаще осенью – 34,1% и весной – 31,8%, затем летом – 18% и зимой – 16,1%.
По данным Храпай Н.Н. (2001) наблюдалась сезонная динамика в летнеосенний период, так летом количество больных собак составило 36,1%, осенью – 27,3%, а зимой показатель по заболеваемости снижался до 13,7%, с последующим подъемом в весенний период до 20,9%.
По данным Авдиенко В.А. (2005) процент заболеваемости дерматитами
составил летом, осенью, весной и зимой соответственно 43,1%; 29,3%; 20,7%
и 6,9%.
Анализируя полученные результаты, мы отмечаем, что пик инвазии по
разным авторам при демодекозе приходится на зимне-весенний период и связан со снижением иммунного статуса и благоприятными условиями развития
для клещей.
21
1.4.Морфологические и биохимические аспекты патогенеза
при демодекозе собак
Патогенез демодекоза у собак не полностью ясен, особенно при хронической и генерализованой форме болезни (13, 16, 46).
Нападая на хозяина, взрослые клещи проникают с поверхности кожи в
волосяные фолликулы, где и размножаются. В волосе различают две части корень, который спрятан в волосяной фолликул, и стержень. Волосяной фолликул представляет собой полость, стенки которой состоят из внутреннего и
наружного эпителиальных (корневых) влагалищ и соединительнотканной
сумки. Внизу корень волоса имеет утолщение, называемое луковицей волоса.
Это место, собственно, и является местом роста волоса. Снизу в волосяную
луковицу вдается богатый кровеносными сосудами волосяной сосочек, питающий волос. Несколько выше луковицы расположены сальные железы, которые у собак относятся к трубчато-альвеолярным железам. Выводные протоки этих желез открываются в верхней части волосяного фолликула. Сальные железы продуцируют кожное сало, которое придает коже мягкость и
эластичность (16, 17, 37, 108).
Существует несколько вариантов проникновения клеща в фолликул.
Наиболее легким является вариант, когда волоса в фолликуле нет. Это бывает при линьке, нарушении роста волос и т.д. В этом случае клещ свободно
заползает в фолликул и спускается вглубь его. Несколько труднее клешу
проникать в фолликул, где имеется волос, но из-за атонии кожи (снижение
кожного тонуса), наружное корневое влагалище отслоено от волоса. Клещ
проникает в просвет этого отслоения и продвигается вглубь фолликула (17,
37).
В отличие от многих других видов клеща Demodex, вид Demodex canis у
собак может иногда проникать и через фолликул с неповрежденным волосом.
В этом случае клещ, располагаясь спиной к волосу, внедряет головную часть
своего тела в воронку волосяного фолликула. Используя гипостом (заострен-
22
ное непарное образование ротового аппарата, служащее для прокалывания
мембраны клеток), клещ разрушает клетки росткового слоя эпидермиса, высасывая их содержимое. Помогая себе лапками и разрушая клетки, паразит
проникает вглубь фолликула. По мере углубления, клещ переходит на кожный тип дыхания и начинает включать в действие крючковидные хелицеры
(образования, действующие наподобие челюстей), которые вырезают целые
пласты клеток многослойного эпителия (16, 17, 37, 83,109).
Так или иначе, паразит проникает в волосяной фолликул и начинает
углубляться в него. По пути своего продвижения он питается, выгрызая целые борозды (до 60 - 70 мкм) в эпителии внутреннего и наружного корневого
влагалища. Продвигаясь до выводных протоков сальных желез, клещ обычно
проникает в эти железы. Реже он продолжает движение, опускаясь на дно волосяного фолликула, где в первую очередь выгрызает клетки волосяного сосочка. В результате этого новый волос в этом фолликуле уже не растет (16,
17, 37, 83).
Если в волосяном канале пораженного клещом фолликула старый волос
еще не погиб, то клещ усиленно способствует его выпадению. При питании
срезая целые пласты эпителия корневых влагалищ, паразит начинает уничтожать и ещё не ороговевшие клетки коркового вещества корня волоса. При
этом корень постепенно истончается настолько, что от него практически ничего не остается. В результате волос выпадает (16, 17, 37, 109).
Питаясь в сальной железе или на дне волосяного фолликула, клещ
Demodex "распахивает" многочисленные борозды в их эпителиальном слое.
Причем в этот же фолликул проникают и другие особи возбудителя. Размножаясь в фолликуле, они формируют колонию клещей, где присутствуют
разнополые особи всех стадий биологического цикла (личинки, нимфы и
имаго). Размалывая своими хелицерами пласты эпителиальных клеток, и
разрушая их, взрослые особи не только питаются сами, но и позволяют питаться остатками их содержимого личинкам и нимфам, которые, имея недо-
23
развитый ротовой аппарат, не могут сами разрушать клетки. В результате
неполовозрелые формы паразита как бы находятся в питательном субстрате
из разрушенных взрослым клещом клеток. А активное добывание пищи дело только взрослых особей. Таким образом, начинает формироваться демодекозный очаг (17, 37, 83).
Не последнюю роль здесь играет наличие гноеродной микрофлоры и,
прежде всего, стафилококков, которых в огромном количестве обнаруживают в пораженных местах. С помощью электронной микроскопии было показано, что клещ из очагов поражения буквально весь покрыт этими микроорганизмами (16, 17, 37).
Как правило, разрушенные клетки организма хозяина заменяются новыми эпителиоцитами и обычно борозды зарастают. Однако, если уничтожена
вся эпителиальная выстилка демодекозного очага, вплоть до базальной мембраны, то организм хозяина отвечает на это следующим образом. Расположение базальной мембраны сдвигается вглубь подлежащей соединительной
ткани, а эпителиальная выстилка восстанавливается. Такое смещение базальной мембраны позволяет клещам отвоевывать себе жизненное пространство,
увеличивая, таким образом, размеры демодекозного очага и вместилище для
особей своей колонии. Этот процесс может повторяться неоднократно. Чем
больше вместилище (завоеванное жизненное пространство), тем больше образуется питательного субстрата за счет эпителиальных тканей хозяина (16,
17, 37, 83).
Сумки волосяного фолликула гипертрофируется, превращаясь в соединительно-тканную оболочку демодекозного очага, а наружное корневое влагалище трансформируется в его эпителиальную выстилку. Разрушение эпителиального слоя и гипертрофия размеров сальной железы приводят её к потере способности вырабатывать свой секрет - кожное сало. Таким образом,
клещ Demodex, проникая в фолликул или сальную железу, разрушает эпителиальный слой, который служит ему (а также и его потомству) питательным
24
субстратом. Вследствие его деятельности на месте фолликула формируется
демодекозный очаг, содержащий колонию клещей (16, 17, 37, 109).
Наряду с этим в процессе гистогенеза поврежденной эпителиальной
ткани включаются и клетки наружного слоя кожи. Эпидермис, находящийся
непосредственно над очагом поражения, гипертрофируется. В результате базальная мембрана смещается вглубь соединительной ткани, а эпителиальная
выстилка демодекозного очага в местах повреждения восстанавливается, пополняя запасы пищи для паразитов. Смещение базальной мембраны, а вместе
с ней и соединительной оболочки вглубь тканей дермиса позволяет клещам
отвоевывать пространство, увеличивая тем самым вместилище для особей
всей колонии. Необходимо подчеркнуть, что при разрушении клещами эпителиальной стенки демодекозного очага, а также подлежащих базальной
мембраны и соединительнотканной оболочки на уровне входных отверстий
сальных желез происходит полное инкапсулирование клещей, приводящее, в
конечном счете, к гибели (37, 83).
О глубоких деструктивных изменениях в коже, хрониосепсисе организма животных свидетельствуют увеличение содержания глобулиновых фракций на фоне уменьшения альбуминов, а также увеличение глюкозы, мочевины, креатина и холестерина в крови подопытных животных по сравнению с
контролем (16, 17). Установили также, что при демодекозе нарушается обмен
меди, цинка и железа на фоне увеличения соответствующим этим элементам
металлопротеидов (трансферина, церулоплазмина, щелочной фосфатазы и
др.). Степень выраженности биохимических показателей зависит от интенсивности инвазии и обусловлена деструктивными и пролиферативными процессами, происходящими в коже вследствие паразитирования в ней демодекозных клещей. Эти показатели можно использовать для прогноза, а также в
качестве контроля за применяемыми методами лечения.
Многочисленные литературные и экспериментальные данные свидетельствуют, что длительно и тяжело протекающие дерматиты сопровожда-
25
ются нарушением функции печени (16, 17, 37), которые можно выявить с помощью биохимических исследований. Проведение исследований при лечении животных, больных демодекозом, имеет очень важное значение при
назначении препаратов, оказывающих гепатопротективное действие. Биохимические показатели позволяют выяснить, является ли патология печени
предрасполагающим фактором при демодекозе (57).
Ф.И.Василевич (1996) отмечает, что уровень лейкоцитов при локализованных поражениях кожи достоверно не изменялся, однако при ранжировании лишь у 4-х собак из 15 находился в пределах нормы. У других наблюдали лейкоцитоз (до 19,2х109/л). У 92% животных с генерализованным демодекозом регистрировали высокое среднее значение этого показателя по
группе. В лейкоцитарной формуле отмечали эозинофилию, лимфопению,
моноцитоз. У животных с генерализованным демодекозом отмечали снижение содержание гемоглобина, эритропению и повышение СОЭ (16, 17, 37).
Биохимические исследования позволили выявить у 66,8% собак, пораженных демодекозом, изменение сывороточно-биохимических показателей
печеночных тестов, характеризующих нарушение в гепето-биллиарной системе. У 48,3% отмечались признаки цитолиза, выражающиеся повышением
печеночно-специфических ферментов (аминотрансфераз, альдолазы, лактатдегидрогеназы), гипербилирубинемией. У 25% собак регистрировали
признаки
холестаза
(увеличение
активности
гамма-
глутамилтранспептидазы, холестерина, билирубина, желчных кислот) (16).
В 21,3% были выявлены признаки мезенхимально-воспалительного
синдрома (гиперпротеинемия, диспротеинемия со снижением альбуминов и
выраженным увеличением гаммаглобулинов, иногда в сочетании с βфракцией). Снижение количества альбуминов, холинэстеразы, холестерина
и мочевины, используемых как индикаторы гепатоцеллюлярной недостаточности, отмечали лишь при генерализованной пиодермии (16, 37).
Содержание общего белка увеличивалось в зависимости от степени тя-
26
жести и длительности болезни. Так, у собак с генерализованной чешуйчатой
формой оно было достоверно выше, чем у контрольных в 1,23 раза, а у животных с пиодемодекозом на 24%. Уменьшение относительного содержания
альбуминов было характерно для хронической генерализованной формы
демодекоза, причем у собак при пиодемодекозе оно было интенсивнее, чем
при сквамозной форме (16, 17, 37, 93, 94).
Достоверное увеличение α1-глобулинов у всех больных собак свидетельствовало о наличии у них воспаления. Содержание α2-глобулинов динамично увеличивалось в зависимости от тяжести болезни. Достоверное повышение β-глобулиновой фракции также регистрировали у животных при
обеих формах демодекоза. Увеличение уровня β-глобулинов коррелировало
с тяжестью и длительностью патологического процесса. Содержание гамма
глобулинов у собак при генерализованной сквамозной форме достоверно
выше на 42%, а при пиодемодекозе в 2 раза, чем у здоровых (13, 16, 21, 26,
41, 42, 43, 94, 108).
Изучая гематологические показатели больных демодекозом собак,
Храпай Н.Н. (2001) отмечает стойкую эозинофилию, как проявление аллергизации организма.
1.5. Клинические признаки и диагностика демодекоза собак
Сквамозная форма демодекоза характеризуется образованием алопеций
с шелушением кожи вокруг глаз, носа, наружной поверхности ушных раковин, как правило, это характерно для острого течения процесса (10, 14, 38, 41,
75, 83, 90, 112).
С.В. Ларионов (1991) описал папулезную форму демодекоза как редко
встречающуюся форму демодекоза.
Клиническая картина при демодекозе может быть разнообразной, так
как в патологический процесс иногда вовлекаются патогенные и условнопатогенные микроорганизмы, культуры стафилококка и стрептококка, а при
генерализованной форме в ассоциации с протеем. Таким образом, необходи-
27
мо проводить комплексные паразитарно-бактериологические обследования
животных с определением антибиотико-резистентности имеющейся микрофлоры (102, 108, 114).
Демодекоз собак проходит следующие стадии: локализованный демодекоз, генерализованный демодекоз, генерализованный пиогенный демодекоз,
хронический пиогенный демодекоз (5).
Залогом успешного лечения собак, больных демодекозом, является
своевременная и точная диагностика заболевания. По мнению ведущих специалистов-паразитологов, диагноз на демодекоз ставится комплексно и подтверждается лабораторными исследованиями соскобов с пораженных участков кожи (59). Причем, чем тяжелее протекает инвазия, тем глубже необходимо делать соскобы. К сожалению, не все ветеринарные специалисты владеют этим простым, доказательным и давно известным методом. Постановка
диагноза от правильно выполненного соскоба кожи. Пораженную кожу нужно крепко сжать, чтобы из волосяных фолликулов выдавить клещей, а кожные чешуйки должны быть глубокими и обширными. При взятии соскобов
кожи стараться избегать участков геморрагии (16, 37, 87, 109).
По мнению некоторых специалистов, обнаружение яиц демодексов в
крови является случайным и ни в коей мере не может являться подтверждением диагноза или каким-либо показателем тяжести течения заболевания, а
так называемые незрелые формы яиц демодексов научной общественности
до сих пор неизвестны (83, 85, 92).
В соскобах кожи здоровых собак могут быть обнаружены отдельные
взрослые клещи. Так как это бывает редко, нахождение единичных клещей
не является основанием для постановки диагноза. С различных участков кожи делают несколько соскобов для подтверждения или исключения диагноза
на демодекоз. Микроскопия соскоба кожи является легкой лабораторной
процедурой, однако, подтверждая диагноз нужно быть очень внимательным.
Для этого соскобы делают острым скальпелем, до появления крови, получен-
28
ное содержимое переносят на предметное стекло в каплю 10% едкого натра и
затем микроскопируют (52, 89, 111).
Наблюдаемые Demodex canis должны быть многочисленны. Необходимо
обнаружить яйца и неполовозрелые особи, чтобы отличить здоровое носительство от клинического демодекоза, характеризуемого размножением клещей. Иногда клещи обнаруживаются с помощью биопсии и гистологического
анализа. Последний метод не имеет значения для диагностики (за исключением некоторых пород собак, таких как шарпей), но позволяет изучить иммуновоспалительную реакцию (16, 91, 109).
В соскобе кожи зараженных животных можно легко обнаружить клещей, демодекоз нельзя спутать с другими заболеваниями. Дифференцировать
демодекоз от генерализованной пиодермии, контактного дерматита, пузырчатки, красной волчанки и лицевого дерматомиозита, а также от дерматофитии, поверхностной абразии, фолликулита или фурункулеза необходимо с
помощью исследования соскоба кожи или биопсии (16, 34, 95, 109).
1.6. Методы терапии и профилактики демодекоза собак
В настоящее время морфология и биология клещей Demodex canis изучены относительно хорошо, а для лечения этой инвазии предложен ряд акарицидов (1, 2, 14, 27, 37, 47, 49, 60, 67, 68, 70, 77, 84, 85, 105, 109, 112, 115).
Демодекоз относится к числу трудно поддающихся лечению болезней
собак. Разные авторы предлагают свои методы и средства лечения: оперативный, газо-камерный, термический, облучение ультрафиолетовыми лучами, гамма-лучами и др. (56, 84, 85, 86, 109, 112, 115).
Были получены эффективные результаты при внутривенном введении
трипансина в комбинации с препаратом серы (11). Ф.И. Василевич (1993)
применял при лечении собак с чешуйчатой формой 1% раствор трипансина,
который готовили на 0,4%-ном горячем (80 – 90 ºС) растворе поваренной
соли. Вводили его внутривенно, в дозе 1 мл/кг массы тела, 4-х кратно с интервалом 7 дней. Из 10 собак выздоровели 5.
29
В другой серии опытов Ф.И. Василевич проводил комплексное лечение
собак препаратом ивомек и газовой серой. Собаки, у которых была генерализованная форма демодекоза, ежедневно в течение 30 дней получали
внутрь серу в дозе 40 мг/кг. Четырехкратно с интервалом 7 дней подкожно
вводили ивомек из расчета 1,5 мл на 50 кг массы. Наружно наносили на пораженные участки серно-дегтярный линимент, одни раз в четыре дня, в течение месяца.
М.В. Шустрова (1996) опробовала препараты из группы пиретроидов –
сумицидин, децис, креохин, применялся комплексный препарат с акарицидным, фунгицидным и бактерицидным действием – акаробор на основе песцового жира. Предложен способ лечения собак, включающий комплексное
применение препаратов – марасасд (5% масляный раствор АСД-3), трихопол, нистатин и предусматривающий диетотерапию и физиотерапию.
В настоящее различными фирмами – производителями ветеринарных
препаратов выпускается большое количество акарицидных средств. Это и
принципиально новые соединения, и различные модификации уже известных препаратов. Многие специалисты указывают на сложность терапии демодекоза и необходимость применения комплексного подхода в лечении
данного заболевания (12, 17, 39, 83).
Для достижения максимального эффективного лечения необходимо
совмещать этиотропную и иммунокорректирующую терапию в связи с влиянием многофакторного патогенеза и индивидуальных особенностей организма больного животного, а также устранять неблагоприятные для организма факторы, такие как однообразное и скудное кормление, неудовлетворительное содержание, так как установлено, что чем лучше данные условия
содержания, тем процесс распространения колоний клеща замедляется (80).
Установлена высокая эффективность комплексного лечения собак с
применением специфических и симптоматических средств, антибиотиков,
витамина В12, антигистаминов и физиотерапевтической процедуры. Для ле-
30
чения демодекоза собак применялся иммунопаразитан в дозе 0,1 мл на 5 кг
массы тела, четырехкратно внутримышечно 1 раз в неделю.
Группа фенилпиразолов – это соединения, являющиеся антагогистами
рецепторов, в которых медиатором нервного импульса является гаммааминомасляная кислота (ГАМК). Они угнетают и блокируют и блокируют
ГАМК хлорионные каналы мембран невных клеток членистоногих. Результатом этого процесса является сильное перевозбуждение нервной системы и
гибель клещей и насекомых (88, 93).
Фенилпиразолы выявлены при изучении биологических свойств синтетических веществ в одной из химических лабораторий в Великобритании.
В ветеринарии представлены одним веществом – фипронил (5-амино-1(2,6-дихлор-4-трифторметилфенил) - 4трифторметилсульфминил - 3 цианпиразола).
Фипронил, как активно действующее вещество, используется в инсектицидных средствах, которые используются в сельском хозяйстве и дезинфекции. Широко используется в ветеринарии (против блох, клещей), благодаря
своему системному действию (88, 93, 101).
Комбинация фипронил-(S)-метопрен обеспечивала стойкий и выраженный эффект в отношении блох и клещей в течение 1 месяца, который достоверно превышал эффект комбинации имидаклоприд/перметрин и эффект монотерапии имидаклопридом.
Хорошо изучена токсичность фипронила для объектов окружающей
среды (88, 93, 101).
По данным Костиной М.Н. (2003) и согласно данным литературы и материалам, проведенным в институте Дезинфектологии параметры острой
токсичности фипронила следующие:
Острая пероральная токсичность:
ЛД50 крысы-самцы – 92 мг/кг;
крысы-самки – 103 мг/кг;
мыши-самцы – 98 мг/кг;
мыши-самки – 91 мг/кг;
31
Острая кожная токсичность – ЛД50
крысы > 2000 мг/кг;
кролики – самцы – 445 мг/кг;
кролики – самки – 354 мг/кг;
Острая ингаляционная токсичность – CL50
ЛД50 0,682 мг/л (крысы, экспозиция 4 часа) (682 мг/м3).
Профилактика демодекоза, учитывая длительность и трудность лечения этого заболевания, является важной составной частью в оздоровлении
животных. Различные аспекты этой проблемы освещались в работах многих
ученых (7, 49, 51, 55, 69, 84).
Основные принципы профилактики заболевания выходят из знания
особенностей популяции клеща D. сanis (подавляющая часть инвазионного
начала находится в гостальной популяции).
Принципы профилактики:
1)
Предотвращение распространения этой инвазии в гостальной
популяции у собак, имеющих владельцев;
2)
Регулирование численности безнадзорных животных;
3)
Недопущение попадания возбудителя демодекоза из естествен-
ных биоценозов в синантропные условия.
Анализ литературных данных свидетельствует, что демодекоз собак
причиняет не только экономический ущерб собаководству, но и имеет социальное значение – приносит много хлопот владельцам собак и является проблемой городов.
В последние годы основным направлением в разработке комплексной
терапии при демодекозе собак, является получение новых комбинированных
лекарственных препаратов с широким спектром действия.
32
2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы работы
Исследовательская работа проводилась на кафедре паразитологии и инвазионных болезней животных при ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина», в ООО «Научно-внедренческий центр Агроветзащита» и ветеринарной
клинике «ВетОк» в период с ноября 2007 г по апрель 2010 г.
За весь период нами было обследовано 1050 собак различных по полу,
возрасту и породам с поражением кожно-волосяного покрова, проведено 8
опытов на 96 мышах, 12 крысах, 5 морских свинках, 5 кроликах, 36 собаках
по изучению фармакотоксикологических свойств препарата Амит форте.
Изучена эффективность препарата Амит форте на 373 собаках разных пород,
пола и возраста.
Клиническое обследование собак на наличие демодекоза проводили путем осмотра и пальпации кожно-волосяного покрова животного в определенной последовательности, начиная с кожи головы, шеи, передних конечностей, спины, грудной клетки, живота и задних конечностей. При клиническом осмотре обращали внимание на взъерошенность, блеск волосяного покрова, на наличие алопеций, а при пальпации на шелушение, гиперемию,
эластичность кожи, утолщение, на бугорки и корочки. Если во время обследования обнаруживали клинические признаки демодекоза, диагноз подтверждали микроскопическим методом.
При взятии материала для исследования использовали метод глубоких
(до появления крови) соскобов кожи. Кожу сдавливали с боков пальцами,
чтобы стимулировать эвакуацию клещей из волосяных фолликулов. Содержимое соскобов наносили на предметное стекло. Затем легкими постукиваниями острия иглы или скальпеля его разрушали, капали несколько капель
теплой дистиллированной воды и исследовали. Исследования проводили под
малым увеличением микроскопа при затемненном поле зрения.
33
Сезонную и возрастную динамику демодекоза собак определяли помесячно ретроспективным анализом статистических данных за 3 года (20072010) и клиническим обследованием. Обращали внимание на количество и
возраст больных собак, степень проявления клинических признаков, изменение общего состояния животных, упитанность, поведение, качество шерсти.
В основу лечения демодекоза входил препарат Амит форте, разработанный ООО «Научно-внедренческий центр Агроветзащита». Амит форте содержит в качестве действующих веществ - фипронил - 0,1% и димедрол - 0,5%.
Амит форте наносили тонким слоем на предварительно очищенные от
струпьев и корок пораженные места, из расчета 0,5 мл/кг массы животного,
равномерно распределяя по пораженному участку от периферии к центру с
захватом пограничной здоровой кожи до 1 см. Обработку проводили 2-5 раз с
интервалом 5 дней до клинического выздоровления животного, которое подтверждали двумя отрицательными результатами акарологических исследований. Для предотвращения слизывания препарата животным надевали
намордник, шейный воротник или смыкали челюсти петлей из тесьмы, которые снимали через 15-20 минут после нанесения препарата.
При изучении эффективности препарата Амит форте определяли общее
состояние животных после нанесения препарата, изучали гематологические и
биохимические показатели.
Изучение фармакологических свойств проводили согласно «Методических рекомендаций по экспериментальному (доклиническому) и клиническому изучению новых фармакологических веществ» (2005)
Наилучшим
методом
изучения
является
метод
пробит-анализа
Литчфилда и Уилкоксона в модификации З.Рота, вошедший в набор методов
количественной оценки фармакологического и токсикологического эффекта
с определением ЛД0, ЛД16, ЛД50, ЛД84 и ЛД100.
Основным показателем острой токсичности является статистически точная величина, вызывающая гибель 50% подопытных животных (ЛД50) – ве-
34
личина, которая является критерием, позволяющим отнести вещество к определенному классу опасности.
Изучение острой токсичности препарата проводили на 36 белых беспородных мышах массой 18-20 г. Препарат в чистом виде насильно вводили с
помощью металлического зонда в желудок.
Все манипуляции выполнили в условиях исключающих инфицирование
лабораторных животных. Наблюдение за экспериментальными животными
после однократного введения проводили в течение 14 дней.
В процессе опытов учитывали внешний вид и поведение животных, состояние шерстного покровов и видимых слизистых оболочек, потребление
корма и питье воды, подвижность, ритм и частоту дыхания, отмечали время
возникновения интоксикации, ее тяжесть, обратимость, срок гибели животного, а также патологоанатомические изменения в органах и тканях.
Кумулятивные свойства препарата изучали на 40 белых мышах-самках
живой массой 19-20 г. по методу Лима с соавторами (Lim et all, 1975).
Оценку кумулятивных свойств проводили на основании вычисленного
коэффициента кумуляции (отношения ЛД50, установленной в подостром
опыте, к ЛД50, установленной в остром опыте). Через каждые 4 дня эту дозу
увеличивали в 1,5 раза. Коэффициент кумуляции вычисляли по соотношению
летальных доз подострого и острого опытов.
Изучение проводили с учетом общего представления о том, что если в
подостром опыте коэффициент кумуляции меньше 1 (Ккум < 1), это свидетельствует о наличии кумулятивных свойств, а больше 1 (Ккум > 1) – о наличии слабовыраженных кумулятивных свойств и развитии резистентности к
изучаемому препарату.
При изучении местно-раздражающего и кожно-резорбтивного действия
учитывали физиологическое состояние животных, состояние кожи (отек,
утолщение кожной складки, расчесы, болезненность). Изучение проводили
путем погружения хвостов белых мышей в нативный препарат при экспозиции 2 часа.
Оценку местно-раздражающего действия препарата в опытах на крысах
35
проводили при аппликации его на кожу. Препарат в форме раствора по 0,5
мл/кг массы животного наносили на выстриженный участок кожи (2 х 2 см),
после каждого нанесения препарата животных на 4 часа помещали в специальную клетку для избежания слизывания и потерь нанесенного препарата, а
затем препарат смывали водой с мылом и в дальнейшем животных держали в
обычных клетках. За опытными и контрольными животными вели наблюдение в течение 30 дней, фиксируя поведенческие реакции, внешний вид и состояние кожного покрова, отмечали время и степень токсикоза.
Изучение кожно-резорбтивного действия препарата проводили путем 7дневных аппликаций на выстриженные участки спины крыс в количестве 0,5
мл/кг массы животного при экспозиции 4 часа, что составило по ДВ 3,5 мл/кг
массы животного при 7-кратной аппликации. Для обеспечения полного всасывания препарата и предотвращения возможности его слизывания крыс помещали в клетки.
В качестве интегральных показателей оценки кожно-резорбтивного действия препарата были использованы: изменение массы тела, ректальной температуры, гематологического состава периферической крови, функционального состояния печени, весовых коэффициентов паренхиматозных органов.
В целях выявления местного действия препарата на слизистые оболочки
вносили Амит форте в конъюнктивальный мешок глаза кролика по 1 капле.
Оценку раздражающего действия проводили по характеру конъюнктивита
(кератита), отмечая появление и выраженность гиперемии, отечность, инъекцию сосудов склеры и роговицы, ширину зрачка, состояние век.
Сенсибилизирующее действие изучали на морских свинках массой 250 350 г при многократном накожном нанесении препарата в концентрации, не
вызывающей при разовом воздействии реакции нормальной кожи. Препарат
наносили на один и тот же участок кожи до появления, выраженного контактного дерматита и по истечении инкубационного периода после последней аппликации, на свежевыстриженный участок кожи противоположной ча-
36
сти спины наносили препарат в разрешающей дозе. Учет аллергической реакции и её оценку проводили через 24 часа по характеру реакции кожи (эритема, инфильтрация, изъязвления).
Влияние препарата на физиологическое состояние собак при однократном и многократном нанесении изучали клинически здоровых животных
разных пород и возрастов. В процессе эксперимента проводили комплексные
клинические исследования согласно общепринятым методикам. При нанесении препарата в пятикратной дозе обработку проводили в 2 этапа с интервалом 15 мин. Клинические наблюдения проводили за сутки до нанесения препарата, затем через 7 и 14 дней после его однократного применения. Клиническое обследование животных включало измерение температуры тела, подсчета количества сердечных сокращений и дыхательных движений, визуальную оценку общего состояния и определение гематологических и биохимических показателей.
Материалом для гематологических и биохимических исследований служила сыворотка крови и цельная кровь. Кровь брали при помощи вакуумной
системы Venosafe путем пунктирования латеральной подкожной вены голени
или бедра в утренние часы, до кормления. От каждого животного получали
по 5 мл нативной крови и 6 мл стабилизированной гепарином в соотношении
1:10 (0,1-0,2 мл раствора на 1 мл крови). Образцы сыворотки крови исследовали в день получения, т.к. кровь пригодна для подсчета форменных элементов 5-6 часов с момента взятия. Мазки для определения лейкограммы готовили не позднее 6-8 часов с момента отбора, поскольку в пробах происходят
изменения, искажающие результаты и мешающие их правильной оценке.
Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывали в камере Горяева,
а также с помощью электронных автоматических или аппаратов отечественного производства типа СФЭК-60, которые дают более точный результат.
Гемоглобин определяли гемометром Сали, лейкограммы - путем подсчета
200 лейкоцитов, окрашенных по Романовскому-Гимза. Скорость оседания
37
эритроцитов (СОЭ) определяли по Т.Г. Панченкову через 1 час и выражали в
миллиметрах.
Сыворотку получали общепринятым методом. Биохимические исследования крови, а именно определение АсАт, АлАт проводили по Райтману и
Френселю, щелочную фосфатазу, холинэстеразу, общий белок, ГГТ определяли на автоматическом анализаторе «Пикколо Экспресс» (PICCOLO
Xpress).
При изучении эффективности препарата Амит форте определяли общее
состояние животных после нанесения препарата, изучали гематологические и
биохимические показатели.
Весь материал был статистически обработан по методу Стьюдента
(1980) с вычислением средних арифметических и средних квадратичных
ошибок (M±m). Вероятность различий осуществляли при Р < 0,05.
38
3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Эпизоотология демодекоза собак в современных
условиях г. Москвы
3.1.1. Половая, породная, возрастная и сезонная динамика демодекоза собак
В Москве популяция породистых собак составляет около 1 млн., данные
же по количеству обитающих в столице бродячих собак отсутствуют. Многие
из них, как домашние, так и беспризорные, заражены возбудителями гельминтозов, протозоозов и арахноэнтомозов и способствуют рассеиванию инвазионного начала во внешней среде (48, 76).
Изучение распространения демодекоза среди собак проводили в г.
Москве по двум направлениям: обследование собак поступающих в ветеринарную клинику и анализ данных ветеринарной отчётности. В результате обследования животных в период с 2007 по 2010 год и при изучении отчётных
и статистических данных, взятых в клиниках г. Москвы разных округов с
2003 по 2009 год установили, что больные демодекозом собаки встречаются
во всех районах г. Москвы (таблица 1).
39
Таблица 1
Распространение демодекоза по административным округам г. Москвы
Месяц
Январь
Февраль
Март
Апрель
Май
Июнь
Июль
Август
Сентябрь
Октябрь
Ноябрь
Декабрь
Итого
%
Восточный
2003-2009
Западный
2003-2009
Северный
2003-2009
18
34
40
43
18
19
20
29
55
65
32
32
405/610
66,3
109
54
69
55
39
87
14
30
49
50
43
132
731/857
85,2
14
40
17
67
11
34
9
19
40
22
97
93
463/698
66,3
СевероЦентральный Южный
восточный
2003-2009
2003-2009
2003-2009
33
25
90
53
33
49
34
25
60
97
70
76
50
45
39
59
20
80
17
12
39
22
25
33
41
30
16
80
48
71
65
91
89
39
49
85
590/912
473/753
727/913
64,6
62,8
79,6
Юговосточный
2003-2009
29
40
55
83
49
48
17
22
43
84
65
31
566/817
69,2
Югозападный
2003-2009
13
54
61
77
54
21
55
21
31
63
70
61
581/801
72,5
40
Среди обследованных животных с кожными заболеваниями наибольшее
распространение демодекоза было в Западном округе (85,2%), Южном
(79,6%), Юго-Восточном (69,2%) и Юго-Западном округах (72,5%).
Всего за этот период нами было обследовано 1050 собак с поражением
кожи. Из них у 390 диагностировали демодекоз, что составило 37,1 %.
Диагноз на демодекоз ставили на основании эпизоотологических данных, анализа клинических признаков болезни и результатов микроскопического исследования глубоких соскобов кожи с пораженных мест.
В результате обследования было установлено, что к демодекозу более
восприимчивы самки. Среди больных собак было 65% самок (254 собаки),
35% самцов (136 собаки) (таблица 2, рисунок 1).
Таблица 2
Распределение больных демодекозом собак по полу
Пол
животного
Всего исследовано
животных
Количество поражённых собак
%
Самки
640
254
65
Самцы
410
136
35
Итого
1050
390
37,1
Распределение демодекоза по полу
Самцы
35%
Самки
65%
Рисунок 1.
41
Это является одной из причин большого распространения этой болезни
в городе, поскольку именно самки передают вертикальным путём возбудителя демодекоза щенкам с первых дней их жизни.
Из таблицы №3 и рисунка 2 видно, что чаще демодекозом были заражены короткошерстные породы собак 55% (215 собак), а на долю длинношерстных пород приходится 45% (175 собаки).
Таблица 3
Распределение больных демодекозом собак по типам шерсти
Всего
исследовано
животных
Количество поражённых собак
%
Короткошерстные
497
215
55
Длинношерстные
553
175
45
Итого
1050
390
Тип шерсти
Распределение демодекоза по типам шерсти
Длинношерстные
45%
Короткошерстные
55%
Рисунок 2.
Учитывая мнение С. В. Ларионова (1994), а также проведенные им гистологические исследования кожи, это можно объяснить лучшим развитием
42
у них сальных желез. Волосяные луковицы короткошерстных собак более
благоприятны для жизнедеятельности клещей (5).
В результате изучения восприимчивости животных к демодекозу в зависимости от возраста мы подтвердили, что заболевание у собак регистрируется уже в 3-х недельном возрасте (14).
Наибольшее количество больных животных было зарегистрировано в
возрасте от 7 месяцев до 12 месяцев (36,3%). В возрасте 13-18 месяцев процент зараженных составил 22,3%. У животных 2-3-летнего возраста - 19,8%,
старше 5 лет - 13,1% и у собак старше 8 лет - 8,5% (рисунок 3).
Рисунок 3. Распределение демодекоза в зависимости от возраста
При обследовании животных было установлено, что демодекозом поражаются собаки более 30 пород.
Наиболее часто заболевание регистрировали у восточно-европейских
овчарок - 14,8%, немецких овчарок - 15,1%, ротвейлеров - 14,4%, французских бульдогов - 13,5%, такс - 9,5%, английских кокер-спаниелей - 7,4%,
боксеров - 6,1%, беспородных и примесей - 10,5%.
43
Менее подвержены заражению были доги (0,7%), американские кокер–
спаниели - 4,6%, доберманы - 3,0%, стафордширские терьеры - 5,1%, английские бульдоги - 1,3%, колли - 2,3% (таблица 4) .
Таблица 4
Распределение больных демодекозом собак по породам
Породы
Выявлено больных
Голов
%
Восточно-европейская овчарка
58
14,8
Немецкая овчарка
59
15,1
Бультерьер
5
1,3
Дог
3
0,7
Доберман
12
3,0
Ротвейлер
37
14,4
Такса
17
9,5
Стафордширский терьер
20
5,1
Боксер
24
6,1
Английский бульдог
5
1,3
Французский бульдог
53
13,5
Колли
9
2,3
Английский кокер-спаниель
29
7,4
Американский кокер-спаниель
18
4,6
Беспородные и помеси
41
10,5
Демодекоз регистрируется в течение всего года, но, тем не менее,
наблюдаются некоторые сезонные колебания в зараженности. Наибольший
пик зараженности мы отмечали осенью, процент зараженности составил 51% (199 собак). В весенний период количество больных снижалось до 31%
(121 собака). Зимой было зарегистрировано 10% (37 собак), а летом 8% (33
собаки) (таблица 5, рисунок 4).
44
Таблица 5
Распространение демодекоза в г. Москве
Месяц
Кол-во 2007
Кол-во 2008
Кол-во 2009
Всего
Январь
3
2
5
10
Февраль
4
3
2
9
Март
16
21
24
61
Апрель
18
10
19
47
Май
5
4
4
13
Июнь
3
2
4
9
Июль
2
3
2
7
Август
2
9
6
17
Сентябрь
19
21
25
65
Октябрь
27
19
18
64
Ноябрь
26
15
29
70
Декабрь
5
6
7
18
130
115
145
390
Итого
Рисунок 4. Распределение демодекоза по сезонам года
45
Усиление зараженности в весенний и осенний периоды, может быть
связано с сезонной линькой, снижением уровня резистентности организма
животных, а также благоприятными в это время года условиями для развития клещей.
К факторам, способствующим распространению заболевания мы отнесли следующие: резкое увеличение поголовья собак в городе и местах их
выгула, отсутствие проведения ветеринарно-санитарных мероприятий на
территориях скопления животных, неудовлетворительное кормление, плохое содержание и бесконтрольное лечение.
3.2. Определение острой и хронической токсичности препарата
Амит форте
Работу по комплексной терапии при демодекозе собак мы начали с изучения нового отечественного препарата Амит форте. Ввиду того, что препарат не был изучен, мы перед проведением опыта определили острую токсичность, кумулятивные свойства, местно-раздражающие и кожно-резорбтивное
действие, местное действие на слизистые оболочки глаз, сенсибилизирующие
свойства и изучили влияние препарата Амит форте на физиологический статус собак.
3.2.1. Изучение острой токсичности препарата Амит форте при введении
в желудок
Использование физиологических, фармакологических, биохимических,
патоморфологических и других методов исследования в опытах на животных
позволяет оценить токсикологические свойства препарата и с определенной
долей вероятности прогнозировать степень безопасности его применения в
клинике.
До проведения первых исследований на животных безопасность препарата на этапе клинических испытаний оценивается по результатам изучения
токсичности при однократном и длительном применении препарата экспери-
46
ментальным животным. Чем полнее и тщательнее будут проведены токсикологические исследования на лабораторных животных, тем меньше риск развития нежелательных эффектов у собак.
Оценка токсичности препаратов строится таким образом, чтобы выявить
органы или системы, наиболее чувствительные к данному препарату, установить дозовую зависимость выявленных эффектов и степень их обратимости,
определить соотношение пользы, ожидаемой от применения препарата на
практике, и риска возможных нежелательных реакций. При положительном
соотношении этих показателей необходимо сформулировать противопоказания и предостережения к применению данного фармакологического средства
в качестве лекарства и наметить мероприятия по устранению возможных нежелательных реакций.
Все экзогенные вещества, поступающие в организм, в том числе лекарственные препараты, обычно включаются в метаболические процессы обезвреживания, которые обеспечиваются механизмами адаптации. Вещество
оказывает токсическое действие в том случае, если его количество, поступающее в организм, не может быть обезврежено. Следовательно, наиболее чувствительные органы или системы организма могут быть выявлены как при
однократном (острая токсичность), так и при многократном применении препарата (подострая или хроническая токсичность).
Таким образом, для оценки безопасности препарата очень важным и необходимым является изучение острой и хронической токсичности.
По результатам острого опыта определены параметры смертельного эффекта (ЛД16, ЛД50 и ЛД84) и среднее время гибели животных (ЕТ50), которое
является быстрым и довольно объективным тестом оценки способности препарата кумулировать в организме.
Животных перед экспериментом предварительно выдерживали в течение 15-ти суток на карантине и 5-ти часов на голодной диете. Под опытом
находилось 36 белых беспородных мышах. Контрольным животным вводили
воду.
47
Препарат вводили мышам в следующих дозах:
- 1-й группе животных в дозе – 0,1 мл (5,0 мл/кг);
- 2-ой группе животных в дозе – 0,2 мл (10,0 мл/кг);
- 3-ей группе животных в дозе – 0,3 мл (15,0 мл/кг);
- 4-ой группе животных в дозе – 0,4 мл (20,0 мл/кг);
- 5-ой группе животных в дозе – 0,5 мл (25,0 мл/кг);
- 6-ой группе животных в дозе – 0,6 мл (30,0 мл/кг).
Рисунок 5. Определение токсикологических свойств препарата Амит
форте
48
Таблица 6
Рабочая таблица результатов опыта по острой токсичности препарата
Амит форте
Дозы
мл/мышь
Наблюдавшийся эффект
% эффекта
(наблюд.)
% эффекта
(«ожидаем».)
Разность
между
наблюд. и
«ожидаем»
% эффекта
Слагаемые
для Х2
1
2
3
4
5
6
0,1
0/6
0
0,3
0,3
0,05
0,2
1/6
16,7
20,0
3,3
0,12
0,3
2/6
33,3
36,0
2,7
0,01
0,4
3/6
50
52,0
2,0
0,06
0,5
5/6
83,3
69,2
14,1
0,22
0,6
6/6
100
84,6
15,4
0,17
ЛД0 препарата при введении в желудок белым мышам составила 5,0
мл/кг по лекарственной форме; ЛД16 составила 11,0 мл/кг; ЛД50 - 20,0 мл/кг;
ЛД84 - 26,0 мл/кг; ЛД100 – 30,0 мл/кг.
Вычисление доверительных границ ЛД50.
20 : 1,5 = 13,3 мл/кг (нижняя доверительная граница).
20 х 1,5 = 30,0 мл/кг (верхняя доверительная граница).
49
Таблица 7
Результаты изучения острой токсичности препарата Амит форте
№№
гр.
Доза по лекарственной форме
мл/мышь мл/кг
Количество мышей
всего
выжило
Время
гибели,
мин.
% гибели
Клиническая картина
-
Отклонений от показателей физиологической нормы не отметили.
пало
Белые мыши
1
0,1
5,0
6
6
0
-
2
0,2
10,0
6
5
1
12ч
16,7
У всех мышей вялость, учащенное дыхание, мыши пали в течение 12ч.
3
0,3
15,0
6
4
2
15
33,3
У всех мышей вялость, учащенное дыхание.
4
0,4
20,0
6
3
3
10
50,0
У 3 мышей более сильное угнетение и падеж через 10 мин.
5
0,5
25,0
6
1
5
5
66,7
У всех мышей угнетение. Через 5-7 минут
5 мышей пало.
6
0,6
30,0
6
0
6
5
100
У всех мышей угнетение. Через 5 минут
все мыши пали.
50
Клинику острого отравления отмечали у животных, получавших смертельные дозы препарата, характеризовалась она угнетением, вялостью животных, наблюдалось нарушение координации движения, учащенное дыхание, у некоторых носовое истечение. Затем наступало боковое положение и
гибель от остановки дыхания.
При патологоанатомическом вскрытии этих у животных установили
умеренную гиперемию слизистой желудка и незначительное полнокровие
печени и почек. При действии препарата в меньших дозах макроанатомических изменений печени, почек, сердца и головного мозга нами выявлено не
было.
Таким образом, среднесмертельная доза препарата для белых мышей
при алиментарном введении составляет 20 мл/кг, что позволяет отнести этот
препарат к 4-му классу опасности (ГОСТ 12.01.007-76).
3.2.2. Изучение кумулятивных свойств препарата Амит форте
Одним из важнейших этапов токсикологической оценки является выявления кумулятивных свойств препарата, так как процессы кумуляции в организме составляют одну из основ потенциальной опасности хронического
отравления.
Первоначальная доза препарата составила 1/10 от ЛД50, установленной в
остром опыте – 20,0 мл/кг массы животного, или 0,04 мл/мышь.
При введении препарата в суммарной дозе, у мышей появились клинические признаки отравления, характеризующиеся кратковременным возбуждением, которое постепенно сменялось угнетением и атаксией. У животных
наблюдали мышечную дрожь, затем они сбились в круг, отказывались от
корма, дыхание затруднялось и становилось поверхностным и редким. Постепенно мыши впадали в коматозное состояние.
Смерть животных отмечали с 9-х суток при введении препарата в суммарной дозе 18 мл/кг (таблица 8).
51
Таблица 8
Кумулятивные свойства препарата Амит форте
Дни введения
Ежедневно
вводимая доза, мл/кг
Суммарная доза
препарата, мл/кг
Было/пало,
голов
1-4
2
8
30/0
0
5-8
3
12
30/0
0
9-12
4,5
18
30/2
6,6
13-16
6,75
27
30/8
26,6
17-20
10,13
40,52
30/11
36,6
21-24
15,20
60,80
30/15
50
25-28
22,80
91,20
30/23
76,6
29-32
34,20
136,80
30/30
100
%
гибели
Суммарная доза (ЛД50 многократная), вызвавшая 50% гибель мышей составила 60,80 мл/кг. ЛД50 при однократном введении составила 20 мл/кг.
Разделив ЛД50 при многократном введении и ЛД50 при однократном. Коэффициент кумуляции составил 3,04.
По классификации веществ по кумулятивным свойствам препарат относится к группе веществ со слабо выраженной кумуляцией.
3.2.3. Изучение кожно-резорбтивного и местно-раздражающего
действия препарата Амит форте
3.2.3.1. Местно-раздражающее и кожно-резорбтивное действие
препарата в опытах на мышах
В течение всего опытного периода внешних признаков токсикоза и гибели мышей нами отмечено не было. Подопытные животные по своему поведению и внешнем виду не отличались от контрольных.
52
3.2.3.2.Местно-раздражающее действие препарата в опытах на крысах
Проведенные нами опыты показали, что однократное и десятикратное
нанесение препарата на кожу крысам, в дозах 0,5 и 5 мл/кг массы животного
не приводит к гибели. Воздействие препарата при однократном нанесении на
кожу сопровождалось признаками раздражения, при повторных аппликациях
препарата в дозе 5 мл/кг у крыс отмечалась реакция кожи в виде гиперемии.
Эритемы, инфильтрации, изъязвление и других кожных признаков аллергии
установлено не было (таблица 9).
Таблица 9
Характеристика местно-раздражающего действия препарата
Амит форте на кожу крыс
Плотность
нанесения,
мл/см2
Наблюдаемый
Средний балл выраженности
эффект
эритемы
отека
Группа
1
Группа
2
Группа
1
Группа
2
Группа
1
Группа
2
0,5
0/6
0/6
0
0
0
0
5
0/6
0/6
0
0
0
0
3.2.3.3. Кожно-резорбтивное действие препарата в опытах на крысах
В течение всего опытного периода внешних признаков токсикоза и гибели крыс не отмечали. Подопытные животные по своему поведению, внешнему виду не отличались от контрольных. Различий в динамике прироста
массы, ректальной температуры и морфологического состава крови у опытных и контрольных животных нами также были не выявлены (таблицы 10,
11).
53
Таблица 10
Влияние препарата на прирост массы тела и ректальную
температуру у крыс
Масса тела, г
Группа
Ректальная температура С°
до опыта ч/ 3 дня ч/ 7 дней до опыта ч/ 3 дня ч/ 7 дней
Контрольная
192
194
197
37,1
37,3
37,1
Опытная
190
192
195
37,2
37,2
37,0
Как следует из таблицы, прирост массы тела и ректальная температура у
животных опытной и контрольной группы на всем протяжении опыта достоверно не отличались от тех же показателей контрольных животных.
Таблица11
Влияние препарата на гематологические показатели крыс
Лейкоциты,
х109/л
Эритроциты,
х1012/л
Гемоглобин,
г%
Опыт
Контроль
Опыт
Контроль
Опыт
Контроль
М
12,5
12,0
6,2
6,1
14,8
15,2
m
1,02
1,03
0,50
0,35
0,22
0,40
Р
>0,05
>0,05
>0,05
Из таблицы видно, что клинические показатели крови крыс не выходят
за пределы нормы. Число эритроцитов, лейкоцитов и уровень гемоглобина в
крови животных опытной группы достоверно не отличается от контроля
(Р>0,05).
Изучение влияния препарата на функциональное состояние печени крыс
проводили по ряду показателей. Обезвреживающую функцию печени оценивали по способности органа синтезировать гиппуровую кислоту (таблица 12).
54
О белковообразовательной функции органа судили по содержанию общего белка в сыворотке крови. Содержание общего белка сыворотки крови у
животных опытной и контрольной групп (таблица 13) достоверно не отличается друг от друга, что свидетельствует о том, что препарат не влияет на белковообразовательную функцию печени при его накожном нанесении в указанных дозах.
Таблица 12
Содержание гиппуровой кислоты в моче крыс (мл)
Сроки
исследования
Группы животных
контроль
112±12,4
104,6±9,2
2 недели
1 месяц
Доза 0,5 мл/кг
108,4±7,2
102,3±9,4
Доза 5 мл/кг
110,2±1,4
100,0±12,1
Таблица 13
Содержание общего белка в сыворотке крови крыс
№ п/п
Показатели рефрактометра, г%
Опыт
Контроль
7,67
7,74
7,58
8,23
8,22
8,19
7,51
7,99
7,56
7,37
7,35
7,64
7,18
8,15
8,26
7,62
8,72
8,34
7,66
7,59
7,77
7,88
0,42
0,19
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
М
m
t
Р
0,52
>0,05
Полученные результаты сведены в таблицу 14. Они свидетельствуют о
том, что препарат в условиях данного эксперимента не угнетает активность
холинэстеразы сыворотки крови животных.
55
Таблица 14
Влияние препарата на активность холинэстеразы сыворотки
крови крыс (мкг/мин)
№ п/п
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
М
m
t
P
Опыт
882
837
968
792
850
757
794
856
702
837
827
29,8
Контроль
710
769
952
727
850
719
724
846
714
794
780
21,4
0,039
>0,05
Результаты определения активности щелочной фосфатазы отражены в
таблице 15. Полученные данные показывают незначительное увеличение активности фермента у животных опытной группы. Однако установленная разница статистически недостоверна (Р > 0,05) и не является гигиенически значимой.
Таблица 15
Влияние препарата на активность щелочной фосфатазы
сыворотки крови крыс (мкмоль /л)
№ п/п
1
1
2
3
4
5
6
7
Опыт
2
4,92
4,60
4,18
4,55
4,09
4,20
4,30
Контроль
3
5,07
4,58
3,94
3,88
4,26
4,30
4,77
56
1
8
9
10
М
m
t
P
2
5,48
4,70
4,69
4,57
0,67
3
4,98
4,90
4,72
4,52
0,84
2,2
>0,05
Подводя итог исследованию функционального состояния печени белых
крыс, можно сделать вывод, что препарат не оказывает отрицательного воздействия на обезвреживающую и белковообразовательную функции печени.
Сводные результаты исследований отражены в таблице 16.
Таблица 16
Показатели функционального состояния печени белых крыс после
7-кратного накожного нанесения препарата в дозе 0,5 мл/животное
Показатели
Количество общего белка в
сыворотке крови, г%
Активность холинэстеразы,
мкг/мин
Активность щелочной фосфатазы, мкмоль/л
Опытная (М±m)
Контроль (М±m)
7,64 ± 0,10
7,32 ± 0,15
817 ± 22,4
794 ± 21,2
4,52 ± 0,12
4,49 ± 0,12
После 7 - дневного эксперимента по определению способности препарата проникать через кожные покровы, подопытных крыс подвергли эвтаназии
в целях учета весовых коэффициентов внутренних органов, как одного из
показателей возможного токсического воздействия на организм. Результаты
исследований показали (таблица 17), что у животных, подвергавшихся воздействию препарата, отмечается незначительное увеличение весовых коэффициентов печени, что является следствием ответной реакции организма на
воздействие препарата и позволяет за короткое время вывести из организма
химическое соединение и его метаболиты.
57
Таблица 17
Влияние препарата на весовые коэффициенты
внутренних органов белых крыс
Сердце
Легкие
Печень
Селезенка
Почки
Надпочечн.
Опыт Конт Опыт Конт Опыт Конт Опыт Конт Опыт Конт Опыт Конт
М 0,39 0,35 0,82 0,81 4,0
3,6
0,36
0,32
m 0,01 0,02 0,08 0,05 0,2
0,1
0,05
0,03 0,02
Р
>0,05
>0,05
>0,05
>0,05
0,7
>0,05
0,6
0,03
0,03
0,03 0,003 0,002
>0,05
Весовые коэффициенты других внутренних органов достоверно не отличались от контроля.
Таким образом, полученные результаты изучения кожно-резорбтивного
действия свидетельствуют, что препарат не обладает способностью проникать в организм через неповрежденную кожу в количествах, вызывающих
отравление животных, а также изменения функционального состояния жизненно важных органов и систем организма при его ежедневном накожном
нанесении в течение 7 дней в суммарной дозе 3,5 мл/кг массы (по действующему веществу).
3.2.3.4. Местное действие препарата на слизистые оболочки в опыте
на кроликах
В результате воздействия препарата были отмечены слезотечение, умеренно выраженная гиперемия. Указанные явления исчезали через 6-10 часов
(таблица 18).
58
Таблица 18
Результаты опыта по изучению раздражающего действия
Амит форте на конъюнктиву глаз
Время
исследования
Кролик № 1
Кролик № 2
Оценка в
баллах
Раздражающий
эффект
Оценка в
баллах
Раздражающий
эффект
0
0
0
2
3
2
0
0
отсутствует
отсутствует
отсутствует
слабый
слабый
отсутствует
отсутствует
отсутствует
0
0
0
2
2
2
0
0
отсутствует
отсутствует
отсутствует
слабый
слабый
отсутствует
отсутствует
отсутствует
Исходное (до
введения)
Через 30 минут
Через 1 час
Через 2 часа
Через 3 часа
Через 4 часа
Через 5 часов
Через 6 часов
Таким образом, местно-раздражающее действие препарата слабо выражено и носит кратковременный характер.
3.2.4. Изучение сенсибилизирующего действия препарата
Амит форте
Учитывая, что препараты на основе фипронила предназначены для
накожного применения и, следовательно, наиболее адекватного метода выявления аллергенных свойств нами были использованы накожные аппликации.
При воспроизведении аллергических реакций были предусмотрены следующие этапы эксперимента:
 предварительная подготовка животного путем повторных контактов их
кожи с препаратом;
 применение химического вещества с определенной концентрацией;
 соблюдение скрытого периода между сенсибилизацией и разрешающей
аппликацией препарата.
59
В эксперименте использовали 0,2% р-р фипронила в дозе 2,0 мл/кг, т.е.
1/10 от LD50, который как было установлено, не оказывает местнораздражающего действия.
Препарат наносили на предварительно выстриженные участки кожи
(1,5х2 см) от задней части спины к голове на 4 часа, затем удаляли. Всего
было проведено 15 аппликаций в течение 21 дня.
Через 14 дней на выстриженный участок кожи с противоположной стороны спины наносили разрешающую дозу препарата в концентрации применимой в ходе сенсибилизации и в трех разведениях: 1:10, 1:50, 1:100. Спустя
12 и 24 часа был проведен учет реакции кожи.
Таблица 19
Гематологические показатели морских свинок при изучении
сенсибилизирующего действия препарата
Группа животных
Гемоглобин г%
Опытная
Контрольная
14,60±1,10
14,43±0,80
Эритроциты
1012/л
5,60±0,02
5,58±0,05
Лейкоциты 109/л
9,1±0,31
8,9±0,20
Таблица 20
Лейкограмма крови морских свинок при изучении сенсибилизирующего
действия препарата
Клетки %
Нейтрофилы
Базофилы
Эозинофилы
Лимфоциты
Моноциты
Опытная группа
28,19±0,70
3,60±0,01
65,2±0,80
3,01±0,02
Контрольная группа
28,94±0,67
3,20±0,03
64,80±0,76
3,06±0,09
У подопытных и контрольных морских свинок содержание эозинофилов
соответственно составила – 3,6% и 3,2% (Р>0,05).
Таким образом, было установлено, что фипронил не обладает сенсибилизирующими свойствами. Пятнадцатикратные аппликации при комплекс-
60
ной сенсибилизации дали отрицательный результат, что позволяет сделать
вывод о том, что фипронил не вызывает развития аллергического дерматита.
3.3.Влияния препарата Амит форте на организм животных
в терапевтической, двукратноувеличенной и
пятикратноувеличенной дозах
Важнейшими параметрами, позволяющими контролировать действие
лекарственных средств на организм животных, являются гематологические и
биохимические показатели крови.
Объектом данного исследования были клинически здоровые собаки. В
опыте участвовало 36 собак породы восточно-европейская овчарка, в возрасте от 8 месяцев до 2 лет.
Из этих животных были сформированы следующие группы по 9 голов в
каждой:
1 группа – контрольная (клинически здоровые собаки);
2 группа опытная - препаратом Амит форте обрабатывали в терапевтической дозе (0,5 мл/кг массы животного);
3 группа опытная - препаратом Амит форте обрабатывали в двухкратноувеличенной дозе (1 мл/кг массы животного);
4 группа опытная - препаратом Амит форте обрабатывали в пятикратноувеличенной дозе (2,5 мл/кг массы животного).
Препарат наносили на выстриженную поверхность здоровой кожи в области спины.
Четырнадцатидневное нанесение препарата Амит форте в двухкратной
терапевтической дозе и в пятикратной терапевтической дозе не вызывало видимых клинических изменений в организме собак. Животные были активны,
охотно поедали корм.
Температура тела варьировала от 37,8 до 38,2°С (при физиологической
норме 37,5 - 39,0°С). Частота пульса находилась в пределах колебаний от 75
до 80 ударов в минуту (норма 70-80 ударов в минуту). Количество дыхатель-
61
ных движений было от 12 до 30 (норма 10-30). Общее состояние животных
опытных групп не отличалось от состояния контрольных собак.
Гематологические исследования крови собак опытных групп не выявили
каких-либо нарушений в организме животных.
Основные клинические показатели крови собак (таблица 21) обеих
групп на 7 сутки опыта, а также через сутки после последнего введения Амит
форте находились в пределах физиологической нормы и достоверно не отличались (Р > 0,05) от показателей крови, взятой у собак до введения препарата.
Лейкоцитарная формула животных после четырнадцатидневного нанесения препарата достоверно (Р>0,05) не отличалась от лейкоцитарной формулы крови, взятой у собак до введения препарата.
Биохимические показатели крови собак опытных групп в конце опыта
были в пределах физиологических значений (таблица 22). Следует отметить
увеличение активности фермента ГГТ и мочевины на 7 сутки опыта. Это говорит, что печеночные и почечные ферменты реагируют на нанесение препарата.
Все происходящие изменения находились в пределах физиологической
нормы, не носили дозозависимый характер и через сутки после отмены препарата достоверно (Р > 0,05) не отличались от фоновых показателей.
62
Таблица 21
Сводная таблица гематологических показателей крови собак
Группа
До начала опыта
На 7 сутки
На 14 сутки
2-х кратная
терапев-ая
5-ти кратная
терапев-ая
2-х кратная
терапев-ая
5-ти кратная
терапев-ая
2-х кратная
терапев-ая
5-ти кратная
терапев-ая
2
3
4
5
6
7
7,6±0,76
6,8±0,33
7,0±1,33
6,8±0,38
7,4±1,67
7,3±0,63
184,7±28,18
164,0±8,04
167,7±34,48
161,7±13,09
176,2±40,67
175,0±10,95
13,4±0,75
12,0±1,65
12,6±1,77
13,1±2,19
12,3±1,27
12,4±1,01
280,5±88,42
241,0±37,48
217,2±56,29
162,2±36,21
277,0±62,69
222,2±32,43
MCV (средний
объём эритроцита, мк3)
68,5±4,79
66,5±1,29
70,0±5,41
70,2±1,70
67,0±4,69
67,2±3,30
МСНС (ср. конц.
гемоглобина
в
эритр, мг/г)
35,4±0,64
35,8±0,87
35,1±0,89
33,4±0,82
36,5±1,02
35,3±0,82
Показатели
1
Эритроциты
(106/мкл)
Гемоглобин (г/л)
Лейкоциты
(103/мкл)
Тромбоциты
(103/мкл)
63
1
2
3
4
5
6
7
МСН (средн. содерж. Гемоглобина в эритр,
мг/г)
24,2±1,31
23,8±0,90
23,8±0,73
23,5±1,14
23,7±0,75
23,7±0,95
-
-
-
-
-
-
3,5±0,02
2±0,01
4±0,01
3,7±0,02
2,5±0,01
3,3±0,02
-
-
-
2±0,01
-
-
Палочкоядерные
нейтрофилы(%)
4,5±0,02
6,7±0,03
7±0,02
6,5±0,03
9,2±0,03
12,3±0,04
Сегментоядерные
нейтрофилы(%)
65,5±3,32
66,0±3,56
63,5±2,89
57,2±2,14
64,2±3,34
58,0±3,01
Лимфоциты(%)
22,5±0,89
20,7±0,47
22,0±0,87
22,7±0,88
11,6±0,05
19,7±0,39
Моноциты(%)
5,5±0,12
5,5±1,12
7,75±0,43
7,5±0,39
5,5±1,12
6,25±0,29
Базофилы (%)
Эозинофилы(%)
Юные(%)
64
Таблица 22
Сводная таблица биохимических показателей крови собак
Показатели
Норма
( по
Филиппову)
2-х кратная
терапев-ая
5-ти кратная
терапев-ая
2-х кратная
терапев-ая
5-ти
кратная
терапев-ая
2-х кратная
терапевтическа
5-ти кратная
терапев-ая
Альбумин
(г/л)
26-39
35,9±4,61
36,2±3,11
37,2±2,44
37,1±4,62
38,4±3,64
35,8±2,74
ГГТ (МЕ/л)
1-10
8,5±2,53
9,2±1,75
9,05±2,76
10,2±2,49
9,4±2,69
8,5±1,49
Мочевина
(моль/л)
4,3-8,9
6,1±2,03
7,3±2,14
7,1±2,94
9,8±2,09
7,1±2,43
9,9±1,72
Креатинин
(мкмоль/л)
55-106
72,7±15,4
80,7±15,5
63,2±9,63
86,0±17,1
82,5±11,3
74,7±11,5
Глюкоза
(ммоль/л)
1,4-6,5
1,7±0,76
3,1±0,24
1,8±0,98
2,2±1,07
2,1±1,37
2,4±1,39
ЩФ (МЕ/л)
10-150
87,5±22,4
74,2±25,2
96,7±28,8
97,7±31,5
95,5±16,9
107,5±14,6
АлАт (МЕ/л)
10-55
53,3±5,9
51,5±12,9
52,5±5,0
52,5±4,6
51,2±3,3
55,8±5,3
АсАт (МЕ/л)
10-55
53,0±4,8
56,0±11,8
53,0±12,2
56,5±9,3
56,0±10,4
52,7±13,9
группа
До начала опыта
На 7сутки
На 14 сутки
65
Таким образом, результаты изучения влияния препарата Амит форте на
организм животных, показали, что его длительное применение в дозах, превышающих терапевтическую в 2 раза, не оказывает токсического действия на
организм животных, а в пятикратноувеличенной дозе вызывает увеличение
активности гамма-глутамилтранферазы (ГГТ) и мочевины, которые лишь к
14 суткам уменьшаются.
3.4.Изучение эффективности препарата Амит форте в комплексной
терапии при демодекозе собак
Сложность химиотерапии заключается в затруднительной доставке действующего вещества к месту локализации клещей (в колонии) для полного их
уничтожения. Практически все акарицидные препараты системного действия
(ивермектины и некоторые пиретроиды и др.) убивают имаго, но преимагинальные стадии, которые находятся в пассивном состоянии, не погибают, так
как они не питаются. С наступлением благоприятных условий (прекращение
обработок) личинки и нимфы переходят в активное состояние, при этом дейтонимфа линяет на имаго, которые размножаются и численность клещей
быстро восстанавливается (36, 37).
В течение 2008 - 2010 года на собаках разного пола, возраста и пород,
больных демодекозом, с целью разработки комплексной терапии и регламентации применения препарата, мы испытали несколько схем лечения собак,
изучили гематологические и биохимические изменения крови при разных
формах заболевания.
В комплексную терапию демодекоза входили следующие препараты:
акарицидный препарат Амит форте.
Установлено, что при демодекозе в результате интоксикации макроорганизма продуктами жизнедеятельности клеща, распада собственных тканей и
выраженного иммунного воспаления поражается печень. Для поддержания
функции органа в качестве гепатопротектора применяли Эссенциале форте.
66
В механизмах возникновения, развития и течения заболевания важное
место занимают отклонения в функционировании иммунной системы, являющейся важнейшим звеном нейроиммуноэндокринной регуляции в организме животных. При демодекозе собак обнаруживаются супрессивные сдвиги в
функционировании Т- и В-клеточных звеньев системы иммунитета. Именно
поэтому, в качестве иммуномодулятора использовали Форвет. Форвет в качестве активной субстанции в 1 мл содержит Панавир® - 0,00004 г. Панавир®
представляет собой комплекс, включающий в свой состав моносахара, а также уроновые кислоты. Применение Форвета повышает устойчивость животных к возбудителям инфекционных заболеваний вирусной и бактериальной
этиологии, неблагоприятным факторам внешней среды, активизирует обменные процессы и клеточный иммунитет, повышает неспецифическую резистентность организма животных.
Витаминно-минеральная добавка Радостин С – для нормализации обмена веществ, профилактики и лечения недостаточности витаминов, макро- и
микроэлементов у собак, улучшения состояния кожи и шерстного покрова;
Для определения уровня инвазии клещом Demodex брались глубокие соскобы кожи с пяти участков тела каждого животного. Участки кожи, с которых брался первый соскоб, были зарегистрированы. Каждый последующий
соскоб брался именно с этих участков и/или новых появляющихся пораженных мест. Соскобы кожи выполнялись лезвием до появления сочащейся из
капилляров крови. Кожные соскобы помещались на индивидуальные предметные стекла. Образцы исследовались под микроскопом на наличие живых
или мертвых клещей, а также яиц.
В серии наших опытов были сформированы опытные группы собак,
больных чешуйчатой, пустулезной и смешанной формами демодекоза.
Первой группе животных наносили препарат Амит форте тонким слоем
на предварительно очищенные от струпьев и корок пораженные места, из
расчета 0,5 мл/кг массы животного, равномерно распределяя по пораженному
67
участку от периферии к центру с захватом пограничной здоровой кожи до 1
см. Препарат применяли 2-5 раз с интервалом 5 дней, в зависимости от степени поражения.
Собакам второй группе применяли два препарата: Амит форте наносили
по предыдущей схеме лечения, гепатопротектор Эссенциале форте применяли в дозе 1 капсула на животное 2-3 раза в день перорально, в течение 30-35
дней.
Собакам третьей группы в комплекс лечения был добавлен иммуномодулятор Форвет в дозе 1 мл на 10 кг массы животного в течение 7-10 дней
ежедневно (в зависимости от тяжести течения заболевания), подкожно.
Четвертой опытной группе собак в схему лечения была добавлена витаминно-минеральная добавка Радостин С согласно инструкции по применению (таблица 23).
Таблица 23
Схемы комплексной терапии при демодекозе собак
Форма
демодекоза
Чешуйчатая
Пустулезная
Смешанная
Чешуйчатая
Пустулезная
Смешанная
Кол-во под- Контрольная
Опытные группы
вергшихся
группа,
лечению, (го(голов)
1
2
3
4
лов)
192
10
48
43
47
54
96
10
23
24
24
25
85
10
20
20
21
24
Терапевтический эффект, %
188
97,9 95,3 97,9 100
58
30,4 37,9 79,1
92
29
15
25
42,8
50
В сравнительных опытах по лечению собак, больных демодекозом, использовали 22 собаки разных возрастов, пород и массы с различными формами и тяжестью течения болезни, подтвержденной путем микроскопических исследования соскобов кожи (таблица 24). 15 опытных собак были поражены чешуйчатой формой демодекоза, 5 – пустулезной формой демодекоза
68
и 2 – смешанная формой демодекоза. Подопытным животным была применена ранее известная схема лечения, включающая применение акарицидного
средства Дектомакс в дозе 300 мкг/кг (1 мл/33 кг) подкожно 1 раз с интервалом 7 дней, гепатопротектора Карсил внутрь, иммуномодулятора Риботан
внутримышечно, по 1,0 мл 3 раза в день с интервалом 5 дней и витаминного
комплекса Аминовит внутримышечно. Лечение испытуемой схемой оказалось малоэффективным. Экстенсэффективность (ЭЭ) составила соответственно 80%, 60% и 0%.
Таблица 24
Применение сравнительной схемы лечения (контрольная группа)
Форма
демодекоза
Чешуйчатая
Пустулезная
Смешанная
Количество
животных
15
5
2
Количество животных вылечившихся
12
3
0
%
80,0
60,0
0
Одним из лабораторных методов, свидетельствующих о происходящих
изменениях в организме животного, является исследование крови. Оно обуславливается чрезвычайно разнообразными функциями крови в организме, а
также высокой чувствительностью органов кроветворения к различным физиологическим и патологическим воздействиям. Эти процессы проявляются
сдвигом в физико-химическом и гематологическом составе крови, т.к. при
демодекозе происходят глубокие нарушения в организме животных. Поражение кожно-волосяного покрова в случаях поражения клещом сопровождается изменением состава крови больных животных. В клинической практике
большое диагностическое значение имеет исследование гематологического
состава крови, включающее подсчет форменных элементов – эритроцитов,
лейкоцитов, тромбоцитов и выведение лейкограммы. Целый ряд авторов
установили снижение уровня гемоглобина, лейкоцитоз, выраженную базофилию, нейтропению и лимфоцитоз при демодекозе (5, 16, 105).
69
Попадая в кровь, токсины и продуты жизнедеятельности клещей и их
личиночных стадий вызывают патологические изменения в количественном
и качественном составе крови. У зараженных демодекозом собак мы отмечали глубокие нарушения в организме животных. Однако характер выраженности указанных биохимических изменений зависит от формы течения болезни.
Результаты этих исследований изложены в таблице 26.
Биохимические исследования позволяют установить не только степень
поражения органов и систем, но и выбрать правильный подход к лечению, а
также проследить эффективность выбранного лечения, чтобы наиболее полно восстановить утраченные функции.
Эффективность определяли по сокращению числа клещей у животных в
каждой лечебной группе относительно их количества до начала лечения.
Успешность лечения в каждой группе определялась процентом животных,
показатели которых были отрицательны как по живым клещам, так и по яйцам клещей. Мы учитывали индивидуальные особенности, гематологические, биохимические показатели и результаты соскобов кожи. Приведенные
схемы лечения являются базовыми, но для каждого пациента мы корректировали диету и назначали средства для устранения вторичной патологии.
70
Таблица 25
Гематологические показатели крови собак при различных формах демодекоза (М±m)
Показатель
Контроль
Форма демодекоза
Чешуйчатая
Пустулезная
Гемоглобин, (г/л)
Эритроциты, (×1012/л)
Лейкоциты, (×109/л)
СОЭ, (мм/ч)
Нейтрофилы палочкоядерные (%)
Нейтрофилы сегментоядерные (%)
149,0±0,54
6,5±1,09
6,8±0,39
2,67±0,22
1,33±0,11
146,0±0,507
5,76±1,09
6,9±0,43
3,33±0,33
1,4±0,2*
144,0±0,90
5,0±0,89*
8,03±0,44
4,1±0,90*
1,6±0,1*
140,55±0,95*
4,13±0,85*
10,71±0,153*
5,29±0,56*
2,0±0,5*
57,98±1,99
62,84±1,11
63,90±1,16*
65,47±1,445*
Эозинофилы (%)
0,33±0,011
1,0±0,033*
1,53±0,089*
1,60±0,091*
Лимфоциты (%)
38,76±1,202
28,3±1,12*
27,83±0,703*
25,87±0,112*
Моноциты (%)
7,01±0,54
7,3±0,67
6,04±0,43*
5,4±0,40*
Смешанная
Примечание: * - статистическая достоверность различий по отношению к контрольной группе Р<0,05
71
Таблица 26
Биохимические показатели крови собак при различных формах демодекоза (М±m)
Контрольные
28,0±5,74
29,33±8,04
2,88±0,77
0,04±0,009
6,55±1,99
31,67±2,189
5,3±0,38
3,4±0,91
54,0±1,19
Чешуйчатая
58,4±13,56*
40,1±6,87*
3,9±1,99*
0,09±0,004*
7,22±1,50*
43,12±2,32*
5,9±0,375
7,05±1,19
91,5±9,43*
Форма демодекоза
Пустулезная
64,33±12,09*
45,55±10,37*
4,9±0,95*
0,12±0,012*
9,20±2,34*
59,9±2,41*
6,23±0,401*
8,89±1,40*
94,43±4,19*
ГГТ, (ЕД/л)
Альбумины, (г/л)
Кальций, (ммоль/л)
16,75±1,561
31,88±1,09
2,64±0,15
18,46±2,29*
44,78±2,23
2,60±0,73*
23,0±2,33*
50,22±1,71*
2,56±0,72*
27,0±2,82*
50,09±2,67*
2,42±0,16*
Фосфор, (ммоль/л)
Глобулины (%): α1
α2
β
γ
0,47±0,030
2,28±0,33
12,76±0,63
18,99±0,92
11,22±0,74
1,39±0,106*
3,72±0,55*
14,02±0,67*
22,45±0,78
13,09±3,41*
1,38±0,108*
4,14±0,98*
20,03±1,03*
24,1±1,6*
15,41±2,54*
1,42±0,301*
4,90±0,49*
20,89±0,12*
24,12±0,51*
15,9±3,12*
Показатель
АлАт, (ЕД/л)
АсАт, (ЕД/л)
Холестерин, (ммоль/л)
Креатинин, (ммоль/л)
Билирубин общий, (мкмоль/л)
Щелочная фосфатаза, (Ед/л)
Мочевина, (ммоль/л)
Глюкоза, (ммоль/л)
Общий белок, (г/л)
Смешанная
79,14±15,34*
47,12±7,99*
5,76±1,76*
0,17±0,012*
9,89±1,79*
95,33±5,926*
8,03±0,329*
9,01±1,22*
97,1±9,21*
Примечание:* - статистическая достоверность различий по отношению к контрольной группе при Р<0,05
72
Олигохромемия и эритроцитопения свидетельствуют об уменьшении
поступления кислорода в ткани и органы собак с демодекозной инвазией, что
говорит о гипоксии (таблица 25).
Подсчет общего количества лейкоцитов, имеет важное диагностическое
значение, но не является достаточным, поскольку не дает представление о
соотношении между отдельными видами лейкоцитов и их качественных изменениях при патологических состояниях. Для этого выводят лейкограммы.
Анализ лейкограммы крови собак, больных демодекозом, показал достоверное увеличение числа сегментоядерных нейтрофилов, эозинофилов. При
оценке моноцитов и лимфоцитов отмечается понижение их уровня.
По данным П.Р. Пульняшенко (1999) моноциты являются предшественниками тканевых макрофагов, поскольку они выполняют важную роль не
только в непосредственной утилизации чужеродных агентов для организма,
но и являются одним из факторов сложной цепи иммунобиологических реакций.
Наличие иммуносупрессивного действия на организм животного со стороны демодексов и недостаточности Т-системы иммунитета является следствием моноцитопении и лимфоцитопении, в результате чего требуется более
тщательное исследование функции органов, отвечающих за иммунитет.
Моноцитопению и лимфоцитопению у зараженных демодекозом собак
можно расценивать как угнетение иммунных защитных сил, а присутствие в
крови палочкоядерных нейтрофилов (молодых форм) говорит о напряженности компенсаторных механизмов.
Таблица 26 свидетельствует, что значение аспартатаминотрансферазы
(АсАт) и аланинаминотрансферазы (АсАт) увеличено по сравнению с контролем, что свидетельствует о выраженных воспалительных процессах в печени.
Значительное увеличение альбуминовой фракции, по-видимому, связано
с ответной реакцией организма на паразитирование клещей.
73
Ярко выражена разница щелочной фосфатазы. Повышение активности
данного фермента связано с иммунным воспалением в печени и формированием паразитарных гранулем в ответ на демодекозную инвазию.
Увеличение содержания гамма-глутамилтранферазы (ГГТ) свидетельствует о некротических изменениях в печеночных клетках.
Показатели углеводного обмена ниже у здоровых животных, что говорит о снижении антиокислительной защиты организма и активации окислительных повреждений тканей и дополнительное ограничение секреции инсулина поджелудочной железы.
Уровень холестерина определяется метаболизмом жиров, который зависит от наследственности, функции печени и почек, то есть степень гиперхолестеринемии зависит от тяжести и длительности данного заболевания и может рассматриваться как адаптивная реакция организма.
Увеличение количества креатинина может расцениваться как признак
развития почечной недостаточности.
Гипербилирубинемия при демодекозной инвазии обусловлена повреждением желчесекретирующих систем гепатоцитов (недостаток глюкуроновой кислоты).
3.4.1.Эффективность комплексной терапии при чешуйчатой
форме демодекоза
Чешуйчатую форму демодекоза мы наблюдали в 51,4% случаях. Наблюдения за больными животными показали, что чешуйчатая (сквамозная) форма заболевания протекает следующим образом: сначала на поверхности кожи, чаще всего в области надбровных дуг, носа, губ, щек, передних конечностей, иногда на всей поверхности тела животного появляются округлые безволосые участки диаметром от 0,8 до 3,7 см. Количество очагов поражения
не превышало 4 - 5 и не сопровождалось микробной инфекцией ("сухой" демодекоз) и зудом. В отдельных случаях наблюдали возникновение и расширение очагов монетовидной депиляции диаметром около 5 см, реже диффуз-
74
ных, сопровождающихся жировой себореей и появлением чешуек. Часто
встречались струпья темно-красного цвета мягкой консистенции в виде
крошковидных масс. Зуд при такой форме практически отсутствовал.
Рисунок 6.Чешуйчатая форма демодекоза
Количество гемоглобина в крови у животных контрольных и опытных
групп было практически одинаковым 149,0±0,54 г/л и 146,0±0,507 г/л соответственно.
Количество лейкоцитов у зараженных собак увеличилось на 1,5%, а количество эритроцитов достоверно уменьшилось до 5,76±1,09 (×1012/л) против
6,5±1,09 (×1012/л) в контроле.
Анализ лейкограммы у собак показал достоверное увеличение числа
сегментоядерных нейтрофилов на 8,4% по сравнению с контролем. Количество эозинофилов было увеличено в 3 раза, при оценке моноцитов отмечали
понижение их уровня в крови на 4,1% по сравнению с контрольной группой,
а лимфоцитов на 73% соответственно против контроля.
При биохимическом исследовании крови обнаружили повышение уровня активности аланинаминотрансферазы (АлАт) в 2 раза (58,4±13,56 ЕД/л) и
75
аспартатаминотрансферазы (АсАт) в 1,3 раза (40,1±6,87 ЕД/л) по сравнению
с контрольными животными. Коэффициент Ритиса составил 0,7, что указывает на паренхиматозное поражение печени.
Исследования показали, что демодекоз сопровождается динамическим
повышением содержания общего белка в сыворотке крови в зависимости от
тяжести кожных поражений, преимущественно за счет глобулиновых фракций. Уровень общего белка составил 91,5±2,13 против 54,0±1,19 г/л в контроле или на 37,5 г/л был выше у зараженных животных.
Глобулинов суммарно – 53,28±5,41 против 45,25±2,62 г/л в контроле, из
них β – глобулины составляли 22,45±0,78 г/л, а γ – глобулины 13,09±3,41 г/л
по отношению к содержанию этих фракций в контроле.
Активность
щелочной
фосфатазы
было
выше
в
1,7
раза
(43,12±2,32ЕД/л), чем у собак в контрольной группе.
Количество гаммаглутамилтрансферазы (ГГТ) у зараженных собак достоверно увеличилось на 10,2% (18,46±2,29 ЕД/л) против контроля. Содержание холестерина увеличилось на 35,4% (3,9±1,99 ммоль/л), билирубина на
10,2% (7,22±1,50 мкмоль/л). Концентрация мочевины превышала контрольные показатели на 11,3% (5,9±0,375 ммоль/л), количество креатинина было
увеличено в 2,2 раза (0,09±0,04 ммоль/л). Количество кальция было снижено
на 1,6% и фосфора на 2,8%.
7
6
5
До лечения
4
30 дней опыта
3
60 дней опыта
2
1
0
1 схема
2 схема
3 схема
4 схема
Рисунок 7. Динамика эритроцитов при разных схемах лечения
76
160
140
120
100
До лечения
80
30 дней опыта
60
60 дней опыта
40
20
0
1 схема
2 схема
3 схема
4 схема
Рисунок 8. Динамика гемоглобина при разных схемах лечения
Рисунок 9. Динамика АлАт при разных схемах лечения
Аланинаминотрансфераза (АлАт) у больных демодекозом собак составила 58,4±13,56 ЕД/л. Рисунок 9 показывает, что применение первой схемы
лечения способствует незначительному снижению исследуемого показателя.
Более динамичное снижение уровня АлАт отмечено после применения четвертой схемы. До лечения показатель находился на отметке 57,1±11,12 ЕД/л,
но уже на 14 день опыта составил 45,2±9,06 ЕД/л и на 30 день - 28,4±6,26
ЕД/л.
77
Рисунок 10.Динамика АсАт при разных схемах лечения
Активность аспартатаминотрансферазы (АсАт) у собак, зараженных чешуйчатой формой демодекоза, была довольной высокой и составляла
40,1±6,87 ЕД/л, что превышало физиологическую норму в 1,3 раза. После
нанесения препарата Амит форте уровень АсАт стал медленно понижаться.
На 60 день опыта активность АсАт составила 27,21±9,51 ЕД/л. Из рисунка 10
видно, что после применения четвертой схемы лечения снижение и нормализация уровня активности фермента шла более интенсивно. На 60 день опыта
уровень АсАт снизился до отметки 26,87±9,53 ЕД/л. По отношению к фоновому уровню активность фермента снизилась в 1,5 раза.
Рисунок 11. Динамика щелочной фосфатазы при разных схемах лечения
78
Щелочная фосфатаза (ЩФ) у собак зараженных чешуйчатой формой
демодекоза, составила 43,12±2,32 ЕД/л и была выше физиологической нормы
в 1,7 раза. Из рисунка 11 видно, что при применении четвертой схемы лечения отмечается четкая тенденция к нормализации активности уровня ЩФ.
Через 25 дней уровень активности составил 40,1±2,39 ЕД/л, а на 30 день
39,3±2,14 ЕД/л.
Рисунок 12. Динамика общего белка при разных схемах лечения
Уровень общего белка при чешуйчатой форме демодекоза составил
91,5±9,43 г/л. Из рисунка 12 видно, что эффективными оказались третья и
четвертая схемы лечения. Но после применения препарата Амит форте в
комплексе
с
гепатопротектором,
иммунододулятором
и
витаминно-
минеральной добавкой уровень общего белка понизился до 53,3±7,43 г/л, т.е.
ниже фонового показателя на 38,2 г/л.
При длительном течении заболевания кожа приобретала синеватосерую окраску и шелушилась.
При чешуйчатой форме демодекоза все изучаемые схемы с применением
акарицидного препарата Амит форте оказались эффективными. Экстенсэффективность (ЭЭ) составила соответственно 97,9%, 95,3%, 97,9% и 100%
(таблица 27).
79
Таблица 27
Эффективность комплексной терапии
Форма
демодекоза
Кол-во
животных
Опытные группы
Кон-
1
2
3
4
троль
Чешуйчатая
ЭЭ, %
192
48
43
47
54
15
15
97,9
95,3
97,9
100
80
Таким образом, при чешуйчатой (сквамозной) форме демодекоза лечебная эффективность препарата Амит форте составила 97,9% после двукратного нанесения, а при множественных участках поражения - после трехкратного применения препарата с 5-дневным интервалом.
Интервал между обработками был обоснован проведенными опытами по
изучению фармакокинетики препарата Амит форте, в результате которых
было показано, что препарат проникает в подкожную клетчатку и сохраняется в акарицидной концентрации не менее 5 дней.
Экстенсэффективность (ЭЭ) после третьей схемы лечения - 97,9% (у 2
собак был рецидив спустя 6 месяцев, а у 3 – через 10 и 11 месяцев после курса лечения).
Проявление клинических признаков демодекоза заметно снизилось после применения 4-ой схемы. После однократного нанесения препарата состояние пораженных участков улучшалось: уменьшилось воспаление, шелушение, отечность, однако, без повторного применения препарата, выздоровление не наступало. 100% лечебная эффективность была достигнута после
применения препарата Амит форте в комплексе с гепатопротектором Эссенциале форте, иммуномодулятором Форвет и витаминно-минеральной добавкой Радостин С.
80
3.4.2. Пустулезная форма демодекоза
Рисунок 13. Пустулезная форма демодекоза
Рисунок 14 . Пустулезная форма демодекоза
81
Пустулезную форму демодекоза регистрировали в 25,7% случаев. Эта
форма за время нашего наблюдения развивалась, как из чешуйчатой формы,
так и самостоятельно. При такой форме демодекоза кожа была опухшей, покрасневшей, на ней образовывались маленькие твердые узелки, которые возникали рядом с волосяными фолликулами и имели сине-красный оттенок.
Содержимое узелков было богато отечной жидкостью. Эпидермис в этом месте, как правило, некротизируется, колония передвигается к эпидермису и
вскрывается. После отделения содержимого и клещей остаются язвы, которые затем рубцуются и эпителизируются.
Рисунок 15. Пустулезная форма демодекоза
При пустулезной форме в крови собак количество эритроцитов достоверно уменьшилось до 5,0±0,89 (×1012/л) против 6,5±1,09 (×1012/л) в контроле, лейкоцитов увеличилось на 18%.
Число сегментоядерных нейтрофилов было увеличено на 10,2%, количество эозинофилов в 4,6 раза по сравнению с контролем.
При оценке моноцитов отмечали понижение их уровня в крови на 13,9%
82
по сравнению с контрольной группой, а лимфоцитов на 71,7% соответственно против контроля.
В крови было обнаружено повышение уровня активности АлАт в 2,2 раза (64,33±12,09 ЕД/л) и АсАт в 1,5 раза (45,55±10,37 ЕД/л) против незараженных животных. Коэффициент Ритиса составил 0,7.
Уровень общего белка у больных собак был на 40,4±0,19 г/л выше, чем в
контроле на 18,0±1,6 г/л, глобулинов суммарно – 63,68±1,3 против
45,25±6,15г/л в контроле, из них β – глобулины составляли 24,1±1,6 г/л, а γ –
глобулины 15,41±2,54 г/л по отношению к содержанию этих фракций.
Щелочная фосфатаза была выше в 1,9 раза по сравнению контрольной,
количество ГГТ у собак было достоверно увеличенным на 37,3% (23,0±2,33
ЕД/л) против 16,75±1,56 ЕД/л в контроле.
Содержание холестерина увеличилось до на 2,02±0,7 ммоль/л.
Концентрация мочевины превышала контрольные показатели 5,3±0,38
ммоль/л на 17,5% (6,23±0,401 ммоль/л), креатинина в 3 раза (0,12±0,012
ммоль/л).
Количество кальция и фосфора в сыворотке крови показал снижение
кальция на 3,1% (2,56±0,72ммоль/л) против 2,64±0,15 ммоль/л в контроле; а
фосфора на 6,4% (1,38±0,108 ммоль/л) против 0,47±0,030 ммоль/л в контроле.
Прежде всего, акцентировали внимание на обеспечение больных собак
полноценным рационом. Акарицидный препарат Амит форте наносили
накожно 5 раз с интервалом 5 дней. С первых дней лечения собакам в течение 2 месяцев 2 раза в день давали по 1 капсуле Эссенциале форте. Форвет
подкожно вводили в дозе 1 мл на 10 кг массы тела в течение 10 дней. Радостин С задавали согласно инструкции по применению.
Активность трансаминаз в сыворотке крови собак после лечения 4-й
схемой снижалась, но не превышала границ физиологической нормы.
83
Содержание общего белка и щелочной фосфатазы и ГГТ находились на
верхней границе нормы после применения 4-й схемы лечения.
При применении 3-й схемы лечения наблюдалось снижении концентрации β-глобулинов, а при 4-й схеме лечения концентрация β-глобулинов в сыворотке крови снижалась и приближалась к показателю здоровых животных.
Рисунок 16. Пустулезная форма демодекоза
7
6
5
До лечения
4
30 дней опыта
3
60 дней опыта
2
1
0
1 схема
2 схема
3 схема
4 схема
Рисунок 17. Динамика эритроцитов при разных схемах лечения
84
До лечения количество эритроцитов у животных, зараженных пустулезной формой демодекоза, составляло 4,42±0,10х1012/л (рисунок 17). Добавление гепатеропротектора, иммуномодулятора и витаминно-минеральной добавки к основному препарату несколько улучшило показатели эритроцитов,
и в дальнейшем наблюдалось их медленное повышение. На 60 день опыта
уровень эритроцитов достиг отметки 6,2±0,13х1012/л.
Рисунок 18. Динамика АлАт при разных схемах лечения
Аланинаминотрансфераза (АлАт) у собак, зараженных пустулезной
формой демодекозом, составила 64,33±12,09 ЕД/л. Рисунок 18 показывает,
что применение первой схемы лечения способствует незначительному снижению исследуемого показателя. После применения четвертой схемы лечения показатель остановился на отметке 38,12±10,11 ЕД/л.
Рисунок 19. Динамика АсАт при разных схемах лечения
85
Активность аспартатаминотрансферазы (АсАт) у собак, зараженных пустулезной формой демодекоза, была высокой и составляла 45,55±10,37ЕД/л,
что превышало физиологическую норму в 1,5 раза. После нанесения препарата Амит форте уровень АсАт стал медленно понижаться. На 60 день опыта
активность АсАт составила 27,21±9,51 ЕД/л. Рисунка 19 показывает, что после применения четвертой схемы лечения на 30 день опыта уровень активности фермента достиг отметки 28,23±9,23 ЕД/л, но на 60 день исследований
показатель активности фермента был на верхней границе нормы (30,45±7,32
ЕД/л). По отношению к фоновому уровню активность фермента снизилась в
1,5 раза.
Рисунок 20. Динамика щелочной фосфатазы при разных схемах
Щелочная фосфатаза (ЩФ) у собак при пустулезной форме демодекоза
составила 43,12±2,32 ЕД/л и была выше физиологической нормы в 1,7 раза.
Из рисунка 20 видно, что при применении четвертой схемы лечения отмечается четкая тенденция к нормализации активности уровня ЩФ. Через 25 дней
уровень активности составил 40,1±2,39 ЕД/л, а на 30 день 33,1±2,14ЕД/л.
86
Рисунок 21. Пустулезная форма демодекоза (после применения 4
схемы лечения)
Рисунок 22. После курса лечения
87
100
80
60
До лечения
30 день опыта
40
60 деньопыта
20
0
1 схема
2 схема
3 схема
4 схема
Рисунок 23. Динамика общего белка при разных схемах лечения
Уровень общего белка при пустулезной форме демодекоза составил
97,1±9,21 г/л. Из рисунка 23 видно, что наиболее эффективной оказалась четвертая схема лечения, включающая препарат Амит форте в комплексе с гепатопротектором, иммунододулятором и витаминно-минеральной добавкой.
Уровень общего белка понизился до 59,3±5,12 г/л, т.е. ниже фонового показателя на 37,8 г/л.
При пустулезной форме демодекоза эффективность препарат Амит форте после 6-кратного применения составила 30,4%.
Экстенсэффективность (ЭЭ) схемы 1, схемы 2 и схемы 3 составила соответственно 30,4%, 37,5%, 79,1% (таблица 28). Клиническое выздоровление
наступило у 4 животных из 19. Тем не менее, через 8 и 12 месяцев после курса лечения у этих животных мы регистрировали рецидивы болезни.
Таблица 28
Эффективность комплексной терапии
Форма
демодекоза
Количество
животных
Опытные группы
1
2
3
Кон4
троль
Пустулезная
96
23
24
24
25
5
ЭЭ, %
60,4
30,4
37,5
79,1
92
60
Таким образом, в наших опытах при пустулезной форме демодекоза собак наилучшей оказалась 4 схема лечения, включающая акарицидный препа-
88
рат Амит форте, иммуномодулятор Форвет, гепатопротектор Эссенциале
форте и витаминно-минеральную добавку Радостин С.
3.4.3. Эффективность комплексной терапии при смешанной
форме демодекоза
Смешанная форма демодекоза нами была отмечена в 22,7% случаях.
Развивалась она в 3-18-месячном возрасте; обычно в результате неправильно
проводимого или при полном отсутствии лечения.
При смешанной форме поражались все участки кожи (голова, конечности, туловище). На всех участках тела больных собак развивался пиодермит и
бактериальный фолликулит с присутствием многочисленных беловатых
гнойничков. Общее состояние у собак было угнетенным, они были истощены, малоподвижны, аппетит плохой.
Количество эритроцитов достоверно уменьшилось до 4,13±0,85 (×1012/л)
против 6,5±1,09 (×1012/л) в контроле, лейкоцитов увеличилось на 57,5%
(10,71±0,153 (×109/л)) против 6,8±0,39 (×109/л). Количество гемоглобина в
крови составило 140,0±0,95 г/л и 149,0±0,54 г/л соответственно. Анализ лейкограммы у собак показал достоверное увеличение числа сегментоядерных
нейтрофилов на 12,9%, количество эозинофилов было увеличено в 4,8 раза.
При оценке моноцитов отмечали понижение их уровня на 77%, а лимфоцитов
- на 66,7% против контроля.
В крови обнаружили повышение уровня активности АлАт в 2,8 раза и
АсАт в 1,6 раза. Коэффициент Ритиса составил 0,6.
Уровень общего белка составил 97,1±9,21 против 54,0±1,19 г/л в контроле или на 79,8% выше.
Глобулинов суммарно – 65,81±1,3 против 45,25±6,15 г/л в контроле, из
них β – глобулины составляли 24,12±1,51 г/л, а γ – глобулины 15,9±3,12 г/л
по отношению к содержанию этих фракций в контроле и составляющим
18,99±0,92 г/л и 11,22±0,74 г/л соответственно. Щелочная фосфатаза была
выше в 3 раза (95,33±5,926 ЕД/л), по сравнению с показателями в контроль-
89
ной группе.
Количество ГГТ достоверно увеличилось на 61,1% (27,0±2,82 ЕД/л) против 16,75±1,56 ЕД/л в контроле.
Содержание холестерина увеличилось на 28,8% (5,76±1,76 ммоль/л)
против 2,88±0,77 ммоль/л в контроле. Количество билирубина было выше на
51%.
Концентрация мочевины превышает контрольные показатели 2,7
ммоль/л, креатинина превышает показатели клинически здоровых животных
в 4,25 раза.
Анализ количества кальция и фосфора в сыворотке крови показал снижение количества кальция на 8,4% (2,42±0,16 ммоль/л) против 2,64±0,15
ммоль/л в контроле; показатель фосфора был выше на 7,1% (1,42±0,301
ммоль/л) против 0,47±0,030 ммоль/л в контроле.
Прежде всего, акцентировали внимание на обеспечение больных собак
полноценным рационом. Акарицидный препарат Амит форте наносили
накожно 5 раз с интервалом 5 дней. С первых дней лечения собакам в течение 2 месяцев 2 раза в день давали по 1 капсуле Эссенциале форте. Форвет
подкожно вводили в дозе 1 мл на 10 кг массы тела в течение 10 дней. Радостин С задавали согласно инструкции по применению. Начиная с 10 дня у
собак, которым применяли 4 схему лечения, наблюдали повышение уровня
гемоглобина и эритроцитов, которое изменялось до конца эксперимента по
отношению к контрольным животным (эритроцитов в 1,5 раза, гемоглобина в
1,2 раза).
При пустулезной форме демодекоза акарицидный препарат Амит форте
наносили накожно семь раз с интервалом 5 дней. С первых дней лечения собакам в течение 30 дней 3 раза в день давали по 1 капсуле Эссенциале форте.
Форвет вводили подкожно в дозе 1 мл на 10 кг массы тела в течение 10 дней.
Радостин С согласно инструкции по применению.
90
7
6
5
4
До лечения
3
30 день опыта
60 день опыта
2
1
0
1 схема
2 схема
3 схема
4 схема
Рисунок 24. Динамика эритроцитов при разных схемах лечения
Рисунок 24 показывает, что применение четырех схем лечения не повлияло на количество эритроцитов собак, зараженных смешанной формой
демодекоза. Этот показатель составил 4,44±0,19х1012/л. Последующие исследования крови выявили незначительное повышение эритроцитов и на 60 день
опыта исследуемый показатель остановился на отметке 4,51±0,50х1012/л.
Рисунок 25. Динамика гемоглобина при разных схемах лечения
Уровень гемоглобина у животных со смешанной формой демодекоза
был довольно низким на протяжении всего опыта и в среднем составил
140±0,89 г/л. Подопытные животные находились в состоянии гемоглобине-
91
мии. Из рисунка 25 видно, что четвертая схема лечения несколько повлияла
на исследуемый показатель. Он повысился со 140,55±0,95 г/л до
144,34±0,32г/л через 60 дней опыта после применения препарата Амит форте
в комплексной терапии.
До лечения
79,14
50,5
30 дней опыта
79,12
1 схема
79
45,9 43,1
45,7
60 дней опыта
2 схема
77,9
45,9
39,5
3 схема
41,8
37,1
4 схема
Рисунок 26. Динамика АлАт при разных схемах лечения
Аланинаминотрансфераза (АлАт) у собак, зараженных смешанной формой демодекозом, составила 79,14±15,34 ЕД/л. Рисунок 26 показывает, что
применение комплексной терапии способствует снижению исследуемого показателя. После применения четвертой схемы лечения показатель остановился на отметке 37,10±8,09 ЕД/л.
60
50
40
До лечения
30
30 дней опыта
20
60 дней опыта
10
0
1 схема
2 схема
3 схема
4 схема
Рисунок 27. Динамика АсАт при разных схемах лечения
92
Активность аспартатаминотрансферазы (АсАт) у собак, зараженных
смешанной формой демодекоза, была высокой и составляла 47,12±7,99 ЕД/л,
что превышало физиологическую норму в 1,6 раза. После нанесения препарата Амит форте уровень АсАт стал медленно понижаться. На 60 день опыта
активность АсАт составила 33,56±9,33 ЕД/л. Рисунка 27 показывает, что после применения четвертой схемы лечения на 30 день опыта уровень активности фермента достиг отметки 38,14±6,21 ЕД/л, но на 60 день исследований
показатель активности фермента был на верхней границе нормы (34,15±5,31
ЕД/л). По отношению к фоновому уровню активность фермента снизилась в
1,4 раза.
Рисунок 28. Динамика общего белка при разных схемах лечении
Уровень общего белка при чешуйчатой форме демодекоза составил
97,1±9,21 г/л. Из рисунка 28 видно, что эффективной оказалась четвертая
схема лечения. После применения препарата Амит форте в комплексе с гепатопротектором, иммунододулятором и витаминно-минеральной добавкой
уровень общего белка понизился до 74,1±5,49 г/л, т.е. ниже фонового показателя на 23 г/л.
93
Рисунок 29. Динамика щелочной фосфатазы при разных схемах лечения
Щелочная фосфатаза (ЩФ) у собак при смешанной форме демодекоза
составила 95,33±5,926 ЕД/л и была выше физиологической нормы в 3 раза.
Из рисунка 29 видно, что при применении четвертой схемы лечения отмечается тенденция к снижению активности ЩФ. Через 30 дней уровень активности составил 39,9±2,21 ЕД/л, а на 60 день 37,4±1,16 ЕД/л.
При смешанной форме демодекоза эффективность препарата Амит форте составила 15%.
При комплексном лечении акарицидный препарат Амит форте наносили
накожно 7 раз с интервалом 5 дней. С первых дней лечения собакам в течение 30 дней 3 раза в день давали по 1 капсуле Эссенциале форте. Форвет вводили подкожно в дозе 1 мл на 10 кг массы тела в течение 10 дней. Радостин С
задавали в дозе 6 таблеток на животное перорально в течение 14 дней.
Клиническое выздоровление неполное и периодически с интервалом 2
месяца регистрировалось ухудшение состояния собак, участвующих в эксперименте. Проводили в течение года поддерживающую терапию. Полного выздоровления не наблюдали. При наблюдении в течение 3 месяцев рецидивы
болезни отмечены были у 67% собак.
94
Экстенсэффективность (ЭЭ) составила соответственно 15%, 25%, 42,8%,
50% (таблица 29). Клиническое выздоровление наступило у 17 животных из
61. У остальных 12 собак после первого курса лечения общее состояние, гематологические и биохимические показатели незначительно улучшались.
Таблица 29
Эффективность комплексной терапии
Форма
демодекоза
Кол-во
животных
Смешанная
ЭЭ, %
85
31,4
Опытные группы
Кон-
1
2
3
4
троль
20
15,0
20
25,0
21
42,8
24
50,0
2
0
Эффективным оказался 4 метод лечения, включающий акарицидный
препарат Амит форте, гепатопротектор Эссенциале форте, иммуномодулятор
Форвет и витаминно-минеральную добавку Радостин С.
Проведенные биохимические исследования позволили выявить изменения со стороны печени при демодекозе. Эти исследования являются необходимыми при разработке лечебных мероприятий при демодекозе, так как основная масса широко используемых препаратов в настоящее время являются
гепатотоксическими веществами.
3.5. Определение экономической эффективности разработанного
метода комплексной терапии
В разработанную комплексную терапию входили следующие препараты:
Амит форте.
Стоимость одного флакона (20 мл) составила 60 руб. На одну собаку
необходимо затратить: 25 мл - суточная доза, курс лечения 2-5 раза с интервалом 5 дней, т.е. на весь курс - 50 мл.
Стоимость такого лечения составит: (50 мл х 60 руб.): 20 мл = 150 руб.
95
Эссенциале форте.
Стоимость 1 пачки - 438 руб. В пачке содержится 30 капсул препарата.
На одну собаку необходимо затратить: 70 капсул - на весь курс лечения, т.е.
(70 кап. х 438 руб. ) : 30 кап. = 1022 руб.
Форвет.
Стоимость одного флакона (20 мл) составила 31 руб. На одну собаку
необходимо затратить: 50 мл - суточная доза, курс лечения 7-10 дней, т.е. на
весь курс- 350 мл.
Стоимость такого лечения составит: (350 мл х 31 руб.): 20 мл = 542,5руб.
Радостин С.
Стоимость 1 коробки – 55 руб. В 1 коробке содержится 90 таблеток препарата. На одну собаку необходимо затратить: 84 таблеток - на весь курс лечения, т.е. (84 таб. х 55 руб.) : 90 таб. = 51,3 руб.
Общая сумма затрат составила:
150 руб. + 1022 руб. + 542,5 + 51,3 = 1765,8 руб.
Затраты на базовый метод лечения:
Детомакс.
Стоимость одного флакона (50 мл) составила 480 руб. На одну собаку
необходимо затратить: 1,5 мл - суточная доза, курс лечения 3 раза с интервалом 7 дней, т.е. на весь курс - 10,5 мл.
Стоимость такого лечения составит:
(10,5 мл х 480 руб.) : 50 мл = 1008 руб.
Карсил.
Стоимость 1 пачки - 129 руб. В 1 пачке содержится 80 драже. На одну
собаку необходимо затратить: 80 драже - на весь курс лечения, т.е. (80 кап. х
129 руб. ) : 80 кап. = 129 руб.
Риботан.
Стоимость одного флакона (20 мл) составила 31 руб. На одну собаку
необходимо затратить: 3 мл - суточная доза, курс лечения 3 раза с интерва-
96
лом 5 дней, т.е. на весь курс - 9 мл.
Стоимость такого лечения составит: (9 мл х 31 руб.) : 20 мл = 14 руб.
Аминовит.
Стоимость одного флакона (100 мл) составила 490 руб. На одну собаку
необходимо затратить: 1 мл - суточная доза, курс лечения 15 дней, т.е. на
весь курс- 15 мл.
Стоимость такого лечения составит:
(15 мл х 490 руб.) : 100 мл = 73,5 руб.
Общая сумма затрат составила:
1008 руб. + 129 руб. + 14 + 73,5 = 1224,5 руб.
Экономическая эффективность разработанного метода лечения демодекоза собак составила 1765,8 руб., базового - 1224,5 руб., однако следует
учесть, что разработанный метод не требует никаких дополнительных материальных затрат, эффективность от такого лечения значительно выше.
Как показали результаты исследований, применение экспериментальной
схемы, позволило сократить сроки лечения на (1-2 недели) животных, снизить летальность и усыпление больных собак и в целом увеличить его эффективность.
97
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
Союз собаки с человеком возник давно, продолжается сегодня и будет
существовать до тех пор, пока на земле существует человечество. Повальное
увлечение собаководством в городах приводит к скоплению большого количества собак на ограниченной территории, а также совместный выгул собак
приводит к широкому распространению инфекционных и инвазионных заболеваний.
Одним из таких заболеваний является демодекоз собак. Возбудитель демодекоза вместе с племенными животными проникает в различные регионы
страны, ранее благополучные по этому заболеванию.
Демодекоз – широко распространенное заболевание животных и человека, вызываемое железничными клещами из рода Demodex. Возбудитель демодекоза собак – клещ Demodex canis (Leydig, 1859). Являясь эндопаразитом,
он локализуется в волосяных фолликулах и сальных железах кожи, вызывая
патологические процессы в ней (16, 17, 83).
Демодекоз собак наряду с экономическим ущербом, причиняемым служебному собаководству, имеет социальное значение, так как причиняет много огорчений их владельцам.
Поскольку демодекоз имеет многофакторную этиологию и наследственную предрасположенность в сочетании с внешними причинами, способствующими его возникновению, меры профилактики этого заболевания остаются
весьма ограниченными. Таким образом, данные свидетельствует об актуальности проблемы изучении эпизоотологии заболевания, разработки мер профилактики и изыскания средств борьбы с этой инвазией (104).
Исследовательская работа, проведенная на базе ветеринарной клиники
«ВетОк» г. Москвы, показала, что демодекоз относится к числу распростра-
98
ненных заболеваний кожи у собак. Всего нами было обследовано 1050 собак
с поражением кожи. Из них у 390 диагностировали демодекоз, что составило
37,1 %.
Наши данные совпадают с данными Шустровой М.В. (1996), которая
при обследовании в Санкт-Петербурге 1115 собак установила демодекоз у
725 голов (65%).
Ларионов С.В. (1991) и Василевич Ф.И. (1998) установили демодекоз
соответственно у 34,5% и 38,3% обследованных собак.
Храпай Н.Н. (2001) в условиях Черноморского побережья обнаружила
демодекоз у 329 (46,8%) животных из 703 обследованных.
Коротаева О.А. (2005) из обследованных 1226 собак демодекоз был выявлен у 505 (41,2%).
В результате обследования было установлено, что к демодекозу более
восприимчивы самки. Так среди больных собак было 65% (254 самки), самцов 35% (136 собаки). Это является одной из причин большого распространения этой болезни в городе, поскольку именно самки передают вертикальным путём возбудителя демодекоза щенкам с первых дней их жизни.
Влияние беременности и лактации на иммунную систему доказано
многочисленными авторами. Именно в этот период зарегистрировано снижение способности животных к эффективному иммунному ответу при паразитарных заболеваниях (100).
По результатам наших исследований мы пришли к заключению, что
демодекоз чаще встречается у короткошерстных пород собак 55% (215 собак), что согласуется с данными Василевича Ф.И. (1998), Негуссие Б.Т.
(2000), Храпай Н.Н. (2001), Коротаева О.А. (2005).
99
Ларионов С.В. (1991) установил несколько больший процент зараженности демодекозом собак короткошерстных пород (53,7%), по его мнению,
это связано с тем, что сальные железы у них развиты лучше.
В результате изучения восприимчивости животных к демодекозу в зависимости от возраста мы подтвердили, что заболевание у собак регистрируется уже в 3-х недельном возрасте (14).
Наибольшее количество больных животных было зарегистрировано в
возрасте от 7 месяцев до 12 месяцев (36,3%). В возрасте 13-18 месяцев процент зараженных составил 22,3%. У животных 2-3-летнего возраста 19,8%, старше 5 лет - 13,1% и у собак старше 8 лет - 8,5%.
Таким образом, наибольший процент зараженности составил у собак от
7 месяцев до 5 лет, так как молодые собаки более восприимчивы к инфекциям и инвазиям, они подвергаются вакцинациям, изменениям климатических условий и т.д. Это связано с иммунной компетенцией организма, особенно с Т-клеточной ее функцией. Это ослабляет защитные силы организма
и изменяет возрастное физиологическое состояние животных (5, 8, 19, 83).
При исследовании животные имели среднюю упитанность. Наши данные совпадают с данными Коротаевой О.А. (2005), так как по результатам
её исследований 12 (2,4%) собак были с признаками ожирения.
По данным Телятниковой Н.В. (1996) чаще всего инвазия встречалась у
ослабленных, истощенных, недавно перенесших инфекционные болезни, а
также на фоне гельминтов, эндокринных и алиментарных болезней.
Сезонная динамика по результатам наших исследований выглядит следующим образом: осенью, процент зараженности составил - 51,0%, в весенний период с марта по май количество больных снижалось до 31,0%, зи-
100
мой было зарегистрировано 10%, а летом 8%.
Негуссие Б.Т. (1999) исследуя зараженных демодекозом собак в условиях г. Москвы пришел к выводам, что собаки заражаются в осенневесенний период и пиками инфестации, приходящимся на апрель и октябрь.
Лесников А.И. (1999) в Центральном Черноземье России наблюдал, что
наибольшее число больных животных наблюдается в осенне-зимний период и летом.
Василевич Ф.И. и Ларионов С.В. (2001) исследуя сезонную динамику в
условиях Москвы и Московской области, отмечают широкое распространение болезни в зимне-весенний период, связывая это с понижением тонуса
кожи из-за недостаточности инсоляции, что обусловливает активизацию
клещей.
С ними согласуются и данные Шустровой М.В. по г. СанктПетербургу.
Роменский В.И. (2001) в условиях г. Иваново выяснил, что наивысшая
ЭИ собак, зараженных демодекозом наблюдается в декабре, январе, феврале
и марте, умеренная - в апреле, мае и июне, наименьшая в июле – ноябре.
Храпай Н.Н. (2001) отмечает распространение в летне-осенний период
и, объясняя это тем, в условиях жаркого и влажного климата наблюдается
интенсивная адаптивная линька, и повышение влажности в прикожном слое
воздуха также способствует активизации клещей.
Коротаева О.А. (2005) отметила что, в условиях г. Тюмени наибольший
пик инвазии приходится на май и август. Мы объясняем это тем, что увеличение поражения демодексами в весенний и осенний периоды может быть
связано с сезонной линькой, снижением уровня резистентности организма
101
животных, а так же благоприятными в это время года условиями для развития клещей.
Изучение распространение демодекоза среди пород собак показало, что
заболевание
зарегистрировано у восточно-европейских овчарок (14,8%),
немецких овчарок (15,1%), ротвейлеров (14,4%), французских бульдогов
(13,5%), такс (9,5%), английских кокер-спаниелей (7,4%), боксеров (6,1%),
беспородных и примесей (10,5%).
Предрасположенность восточно-европейских овчарок, немецких овчарок, ротвейлеров, французских бульдогов, такс, английских кокерспаниелей, боксеров, беспородных и примесей объясняется состоянием иммунодефицита (14, 74, 83).
Клинические признаки проявлялись во время течки, беременности,
рождения щенков, во время весенней и осенней линек. Наши данные совпали с данными Гавриловой В.Г., Лисициной А.А. (1996), предполагающих,
что пусковым механизмом для клинического проявления оказываются всевозможные стрессовые ситуации (купирование ушей и хвостов, вакцинация,
перевозки, переохлаждение).
Анализируя собственный материал изучения болезни, мы выделили следующие формы: чешуйчатая, пустулезная и смешанная. По степени поражения кожи: локализованное и генерализованное. Наиболее часто нам встречалась чешуйчатая форма заболевания 51,4%.
Чешуйчатая (сквамозная) форма заболевания протекает следующим образом: сначала на поверхности кожи, чаще всего в области надбровных дуг,
носа, губ, щек, передних конечностей, иногда на всей поверхности тела животного появляются округлые безволосые участки. Количество очагов пора-
102
жения не превышало 4 - 5 и не сопровождалось микробной инфекцией («сухой» демодекоз) и зудом. В отдельных случаях наблюдали возникновение и
расширение очагов монетовидной депиляции, реже диффузных, сопровождающихся жировой себореей и появлением чешуек. Часто встречались струпья темно-красного цвета мягкой консистенции в виде крошковидных масс.
Зуд при такой форме практически отсутствует.
Пустулезная форма демодекоза отмечена у 25,7% обследованных собак.
Пустулезная форма демодекоза за время нашего наблюдения развивалась, как
из чешуйчатой формы, так и самостоятельно. При такой форме демодекоза
кожа опухшая, покрасневшая, на ней образуются маленькие твердые узелки,
которые возникают рядом с волосяными фолликулами и имеют сине-красный
оттенок. Содержимое узелков богато отечной жидкостью. Эпидермис в этом
месте некротизируется, колония передвигается к эпидермису и вскрывается.
После отделения содержимого и клещей остаются язвы, которые затем рубцуются и эпителизируются.
Смешанная форма демодекоза была зарегистрирована в 22,7% случаях.
Эта форма демодекоза начинается в 3-18-месячном возрасте; обычно развивается в результате неправильно проводимого или при полном отсутствии
лечения.
При смешанной форме поражаются все участки кожи (голова, конечности, туловище). На всех участках тела больных собак развивается пиодермит
и бактериальный фолликулит с присутствием многочисленных беловатых
гнойничков. Общее состояние у собак угнетенное, они истощены, аппетит
плохой.
Демодекоз собак протекает чаще как хроническое заболевание. Хрони-
103
ческие дерматиты вызывают вторичную системную и органную патологию,
вовлекая в патологический процесс, прежде всего печень и почки. В этом
случае выявление гематологических и биохимических нарушений отдельных
систем органов и тканей макроорганизма позволяет полнее представлять картину изменений в обмене веществ, что важно не только для понимания патогенеза, но и для разработки специфических методов терапии (5, 33).
В нашей работе были определены сывороточно-биохимические параметры, характеризующие состояние печени клинически здоровых собак разных пород и в возрасте до 3 лет.
При различных повреждениях печени нарушаются ее ферментативные
системы и при проведении исследований сыворотки крови нами была отмечена гиперферментемия и гипербилирубинемия.
Увеличение аминотрансфераз статистически достоверно у собак с чешуйчатой, пустулезной и смешанной формами демодекоза. И в данном случае служат показателями, которые отражают нарушение целостности и повреждение митохондреальных мембран гепатоцитов. Фактором является интоксикация печени или организма продуктами жизнедеятельности клещей и
развития в ней воспалительных процессов.
Увеличение гамма-глутамилтрансферазы (ГГТ) у собак с чешуйчатой,
пустулезной и смешанной формами демодекоза по сравнению с контрольными показателями. Увеличение активности ГГТ следует рассматривать, как
прогностический признак, свидетельствующий о некротических изменениях
в клетках печени.
Активность щелочной фосфатазы у собак с чешуйчатой, пустулезной и
смешанной формами демодекоза была также статистически достоверно уве-
104
личена. Щелочная фосфатаза является чувствительным тестом для выявления
и определения гранулематозных образований в печени.
Увеличение связано, по-видимому, с иммунным воспалением печени и
образованием гранулем в ответ на заболевание. Как следствие создается препятствие желчеотделению и синтезу ферментов.
Количество общего билирубина и сыворотке крови зараженных собак
чешуйчатой, пустулезной и смешанной формами демодекоза был статистически достоверно увеличено. Гипербилирубинемия, скорее всего, обусловлена
повреждением желчесекретирующих систем гепатоцитов.
Уровень концентрации холестерина и креатинина при чешуйчатой, пустулезной и смешанной формах демодекоза были статистически достоверно
увеличены.
По данным Подымовой С.Д. (1984) гиперхолестеринемия связана с усилением синтеза в тканях и рассматривается как адаптивная реакция всего организма, направленная на обеспечение репарации поврежденных клеток и
тканей.
У собак, пораженных смешанной формой демодекоза, концентрация мочевины достоверно превышала контрольные показатели, что указывает на
нарушение функции почек и снижение ее синтеза и выведения. Как правило,
повышение мочевины способствует повышению креатинина и это говорит о
развитии почечной недостаточности и нарушении клубочковой фильтрации.
Основные обменные процессы с углеводами происходят в печени. В гепатоцитах синтезируется глюкоза и создается ее депо в виде гликогена. При
хронических заболеваниях печени уменьшается ее способность превращать
глюкозу в гликоген, отложение сахара задерживается и наблюдается гиперг-
105
ликемия. В результате этого увеличение уровня глюкозы в сыворотке крови
собак при демодекозе указывает на повреждение функции использования
глюкозы печенью, то есть о печеночной недостаточности (66, 72, 78, 79, 102,
107).
Печень также осуществляет синтез белковых молекул. Она существенно
влияет на протеиновый состав, поставляя ей весь альбумин и 85% глобулинов. По результатам определения общего белка и его фракций в сыворотке
крови оценивают образовательную функцию печени (66, 72, 78, 79, 101). При
хронических заболеваниях печени общее содержание глобулинов повышается за счет фракций и глобулинов.
Мы установили статистически достоверное уменьшение кальция у собак, пораженных демодекозной инвазией. Гипокальцемия указывает на
нарушение функции печени и почек. При таком состоянии нарушается регуляция физиологического процесса и нормального обеспечения крови эритроцитами и гемоглобином.
В наших опытах концентрация фосфора в крови была повышена, что
объясняется острой почечной недостаточностью и понижение выведения
фосфатов с мочой или их перемещение из внутриклеточного пространства.
Л.Ю. Карпенко и В.В. Тиханин (1998) сообщают, что паразитирование
клещей на животных, сопровождаются морфологического состава крови, при
этом не уточняют характер этих изменений. Большинство авторов отмечают
лишь увеличение количества лейкоцитов и лимфоцитов.
На угнетение бластогенеза лимфоцитов у собак при генерализованной
форме у собак указывают В.Гаврилин, А.А. Лисицина, (1996); Коротаева
О.А. (2005), Ф.И. Василевич, А.А. Лисицина (1997) отмечали лейкоцитоз при
106
генерализованной форме демодекоза и относительную лимфоцитопению при
локализованном и генерализованном демодекозе.
Наши результаты согласуются с данными указанных авторов и свидетельствуют о том, что в крови больных животных происходят существенные
сдвиги в морфологической картине под воздействием D. canis.
Повышение эозинофилов совпадают с данными Коротаевой О.А. (2005).
Эозинофилию можно рассматривать как фактор, предрасполагающий к аллергическим реакциям, где аллергенами служат продукты жизнедеятельности клещей и распада тканей.
Основной мерой борьбы с демодекозом собак остается применение химических препаратов. В борьбе с арахнозами были испытаны различные методы и средства, от алкоголя, керосина и прижигания пораженных участков
кожи, до применения синтетических акарицидов на основе соединений различных химических групп – хлорорганических, фосфорорганических, карбаматов, пиретроидов, ивермектинов. Одним из высокоэффективных препаратов согласно литературным данным, является фипронил (88).
Широко используемые при производстве инсектоакарицидных средств
фенилпиразолы (фипронил и другие) - это соединения, являющиеся антагонистами рецепторов, в которых медиатором нервного импульса является
гамма - аминомасляная кислота (ГАМК). Они угнетают и блокируют контролируемые ГАМК хлорионные каналы мембран нервных клеток членистоногих (93). Фипронил, кроме кишечной, обладает очень высокой контактной
активностью: насекомые погибают от паралича через 7-8 часов после поступления этого соединения в их организм от перевозбуждения нервной системы. Сильное контактное действие и высокая кишечная активность позво-
107
ляет использовать фипронил в составе инсектицидных средств в различных
препаративных формах, а также в комбинации с другими ДВ. Достаточно 3
капель по 0,03 г (0,09 г) на 1х2 м. для 100% гибели тараканов.
Таким образом, высокая активность, широкий спектр действия и его
умеренная токсичность для теплокровных животных, дают основания для
использования в качество действующего вещества фипронил, в составе акарицидного препарата Амит форте, предназначенного для лечения саркоптоидозов собак и кошек и демодекоза собак.
Анализ литературных данных и собственных исследований дает основание считать, что демодекоз системное заболевание всего организма плотоядных.
Клинические испытания на больных демодекозом собаках показали,
что препарат Амит форте обладает выраженной терапевтической эффективностью при чешуйчатой, пустулезной и смешанной формах инвазии.
Кратность обработок и длительность лечения зависят от формы инвазии и степени поражения кожно-волосяного покрова. В тех случаях, когда в
патологический процесс вовлечены небольшие участки тела, как правило,
достаточно 2 обработок животного с интервалом 5 дней; при множественном поражении кожно-волосяного покрова кратность обработок необходимо увеличить до пяти - семи раз, но и тогда не всегда удается добиться
100% эффективности.
Это объясняется тем, что, локализуясь глубоко в коже, клещи становятся, особенно в инкапсулированных колониях, почти неуязвимыми, так
как капсула, окружающая колонию клещей, является мощным барьером для
акарицидов контактного действия.
108
После гибели имаго, у неполовозрелых форм D. canis возникает дефицит пищи, и, испытывая ее недостаток, преимагинальные стадии клещей
приостанавливают свое развитие и переходят в пассивное состояние. Как
только наступают благоприятные для них условия (прекращение лечения
больного животного) личинки и нимфы переходят в активное состояние,
начинают питаться, размножаться, что ведет к восстановлению численности
колонии. Это является важным биологическим приспособлением D. canis,
не только объясняющим трудность терапии, но и теоретически аргументирующим разработку способов и средств борьбы с ней.
По этой причине, мы предложили и апробировали на практике четыре
схемы лечения. Как показывают исследования многих авторов, клиническое
проявление демодекоза, кроме прямого воздействия клещей на организм
собак, обусловлено иммунодефицитом животного.
Эта особенность усиливает патологию сопровождающуюся падением
клеточного и гуморального иммунитета, изменением качественного и количественного состава белков, гемолизом, эритропенией, лейкоцитозом, лимфопенией и моноцитозом (7, 16, 17, 43, 82).
Кроме того, снижается витаминный баланс организма, в частности витамина А, как одного из определяющих показателей естественной резистентности (105). Учитывая это, в комплекс терапевтических средств мы
включили иммуномодулятор, гепатопротектор и витаминно-минеральный
комплекс, что позволило предотвратить рецидивы заболевания.
Группам животных применяли 4 метода лечения: 1 группа – препарат
Амит форте; 2 группа – Амит форте и гепатопротектор Эссенциале форте; 3
группа – Амит форте, Эссенциале форте и иммуномодулятор Форвет; 4
109
группа – Амит форте, Эссенциале форте, Форвет и витаминно-минеральная
добавка Радостин С.
В результате проведенных исследований нами было установлено, что 4
схема наиболее эффективна, гематологические и биохимические показатели
крови восстановились к 21 дню эксперимента при локализованной форме демодекоза.
Таким образом, мы рекомендуем для лечения собак, больных демодекозом применять 4 схему лечения, т.е. при ее использовании уже на 20-25 дней
от начала лечения уменьшались септические явления, начиналось отделение
корочек, кожа приобретала розовый цвет, к 30-35 дню исчезали подкожные
отеки, неприятный запах, складчатость, в местах алопеции появлялись пушковые волосы, к 45 дню кожа на пораженных участках была чистая, гладкая,
наблюдался активный рост волосяного покрова.
110
5. ВЫВОДЫ
1. Анализ эпизоотической ситуации по демодекозу собак в г. Москве показывает, что зараженность животных составляет 37,1%.
Наибольший пик зараженности отмечается осенью и составляет - 51%, в
весенний период количество больных снижается до 31 %, зимой - до 10%, летом – до 8 %.
Наибольшее количество больных животных зарегистрировано в возрасте
от 7 до 12 месяцев - 36,3%. Процент зараженных от 13 до 18 месяцев ниже на
14%. Животные 2 - 3-летнего возраста регистрируются в 19,8% случаях,
старше 5 лет - 3,1% и собаки старше 8 лет - 8,5%.
2. Заболеваемость демодекозом короткошерстных пород собак составила 55%, длинношерстных - 45%. Среди заболевших самки поражаются на
30% (65%) чаще, чем самцы (35%).
Заболевание чаще зарегистрировано у восточно-европейских овчарок 14,8%, немецких овчарок - 15,1% и ротвейлеров -14,4%.
3. Препарат Амит форте не обладает острой и хронической токсичностью и относится к малоопасным веществам (4 класс опасности), согласно
ГОСТ 12.1.007-76. При введении в желудок белым мышам ЛД50 составила
20000 мг/кг массы тела животного.
4. При чешуйчатой форме демодекоза активность аспартатаминотрансферазы (АсАт) увеличилась в 1,3 раза по сравнению с контрольными животными, аланинаминотрансферазы (АлАт) в 2 раза, щелочной фосфатазы в 1,7
раз, гамма-глутамилтрансферазы (ГГТ) на 10,2%, холестерин – на 35,4%, билирубин общий – на 10,2%, мочевина – на 11,3%, креатинин – в 2,2 раза, белок общий – на 69,4%.
5. При пустулезной форме демодекоза активность аспартатаминотрансферазы (АсАт) была выше контрольных значения в 1,5 раза, аланинаминотрансферазы (АлАт) в 2,2 раза, щелочной фосфатаза в 1,9 раз, гаммаглутамилтрансферазы (ГГТ) на 37,3%, холестерин – на 70,1%, билирубин
111
общий – на 40,4%, мочевина – на 51,5%, креатинин – в 4,25 раза, белок общий – на 74,9%.
6. При смешанной форме демодекоза активность аспартатаминотрансферазы (АсАт) увеличилась в 1,6 раза, аланинаминотрансферазы (АлАт) в 2,8
раза, щелочной фосфатазы в 3 раза, гамма-глутамилтрансферазы (ГГТ) на
61,6%, холестерин – на 88,2%, билирубин общий – на 51,0%, мочевина – на
2,7 ммоль/л, креатинин – в 2 раза, белок общий – на 79,8%.
7. Эффективность препарата Амит форте в комплексе с гепатопротектором
Эссенциале
форте,
иммуномодулятором
Форвет
и
витаминно-
минеральной добавкой Радостин С при лечении собак с чешуйчатой формой
демодекоза составила 100%. При пустулезной форме – 92% и при смешанной
форме – 50%.
8. Экономическая эффективность разработанного метода лечения демодекоза собак составила 1765,8 руб., базового - 1224,5 руб. Однако, применение экспериментальной схемы позволило сократить сроки лечения (на 1-2
недели) животных, снизить летальность и усыпление больных собак и в целом увеличить его эффективность.
112
6.ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
Материалы по доклиническим и клиническим исследованиям препарата
Амит форте вошли в Инструкцию по его применению, утвержденную заместителем руководителя Россельхознадзора от 30 августа 2008 г., регистрационный номер ПВР-2-5.8/02197.
Исследования по эпизоотическому процессу при демодекозе и терапии
заболевания используются в лекционном курсе кафедры паразитологии и инвазионных болезней животных ФГОУ ВПО «Московская государственная
академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина».
113
7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ
1. Учитывая широкое распространение демодекоза собак в современных
условиях, для борьбы с инвазией следует рекомендовать специалистам государственной ветеринарной службы и практикующим ветеринарным врачам
осуществлять постоянный эпизоотический контроль за распространением
демодекоза
собак
с
целью
своевременного
проведения
лечебно-
профилактических мероприятий и снижения заболеваемости; проводить обследование животных перед вязкой, допуск к воспроизводству только здоровых собак, организация племенной работы с целью исключения из разведения собак с наследственной склонностью к демодекозу.
2. Рекомендуем использовать ветеринарным специалистам выявленные
изменения гематологических и биохимических показателей крови собак при
демодекозе в клинической практике для комплексной диагностики и оценки
степени тяжести патологического процесса, контроля и своевременной корректировки терапии животных.
3. Для лечения животных, больных демодекозом, рекомендуем применять препарат Амит форте расчета 0,5 мл/кг массы животного, 2-5 раз с интервалом 5 дней, в зависимости от степени поражения в комплексе с Эссенциале форте в дозе 1 капсула 2-3 раза в день перорально, иммуномодулятором Форвет в дозе 1 мл на 10 кг массы тела в течение 7-10 дней ежедневно (в
зависимости от тяжести течения заболевания), подкожно и витаминноминеральной добавкой Радостин С согласно инструкции по применению.
114
8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Авдиенко В.А. Лечение собак при дерматитах различной этиологии /
В.А. Авдиенко // Сб. науч. тр. Всероссийского института гельминтологии имени К.И. Скрябина. – М.: ВИГИС. - 2005. - Т. 41. – С. 13 - 15.
2. Авдиенко В.А. Принципы и методы лечения демодекоза собак, осложненного стафилоккокозом / В.А. Авдиенко // Сб. науч. тр. Всероссийского института гельминтологии имени К.И. Скрябина. – М.: ВИГИС. 2006. - Т. 42. – С. 15 - 18.
3. Альберт А. Избирательная токсичность. Физико-химические основы
терапии / А.Альберт. - М.: «Медицина». – 1989. - Т. 1. - 432 с.
4. Амирханов Л.Х. Химия и технология синтетических перитроидов и их
применение в с/х. / Л.Х. Амирханов, Б.А. Шапиро, А.В. Поскряков //
Докл. Всесоюзного совещания ВДНХ СССР, М.: «Медицина». - 1984. С. 29 - 30.
5. Белху Т.Н.: Некоторые экстенсивные показатели эпизоотического процесса при демодекозе собак в условиях Москвы / Б.Т. Негуссие, Е. Лукашова, И.А. Молчанов, И.А. Тимофеева, В.В.Макарова // Материалы
научной сессии Россельхозакадемии. Состояние, проблемы и перспективы развития ветеринарной науки (к 100-летнему юбилею Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. – М.: ВИЭВ. – 1999. - 304 с.
6. Бензиор Е. Руководство по демодекозу у собак / Е. Бензиор, Д.Н. Карлотти // Ветеринар. - 2000. - № 3. - С. 32 – 36.
7. Бэне Ф. Демодекоз / Ф. Бэне // Ветеринар. - 1997. - № 1. - С. 10 - 14.
115
8. Бирюков А.А. Санитарно-токсикологическая оценка амитраза как средства борьбы с демодекозом собак: автореф. дисс. канд. вет. наук:
16.00.06. защищена 15.06.98: утв. 11.12.98 / Бирюков Андрей Александрович-М., 1998. - 20 с.
9. Бурова В.И. Эпизоотологический надзор и контроль при демодекозе
животных в условиях мегаполиса: автореф. дисс. канд. вет. наук:
16.00.03. защищена 14.05.99: утв. 28.11.99 / Бурова Валентина Ивановна - Н.-Новгород, 1999. – 22 с.
10. Василевич Ф.И. Демодекозы жвачных животных / Ф.И.Василевич //
Лекция. М., 1988. - 17 с.
11. Василевич Ф.И. // Тез. докл. междунар. науч. конф. – Днепропетровск.: ДНИИ. - 1988. – С. 48 - 52.
12. Василевич Ф.И. Химиотерапия демодекоза у собак / Ф.И. Василевич //
Актуальные вопросы инфекционных и инвазионных болезней животных, М., 1993. - С. 36 - 37.
13. Василевич Ф.И. Сравнительная оценка методов лечения собак при
демодекозе / Ф.И. Василевич // Ветеринария. – 1993. - № 9. - С. 55 - 56.
14. Василевич Ф.И. Эпизоотические процессы и лечение при демодекозе
собак / Ф.И. Василевич, М.В Розовенко // Ветеринария. - 1994. - № 6. С. 36.
15. Василевич Ф.И. Гистоморфология кожи и внутренних органов при
демодекозе собак / Ф.И. Василевич, А.А. Лисицина, В.А. Голубева //
Новое в диагностике, лечении и профилактике болезней животных: сб.
науч. тр. – М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ. - 1996. – С. 193 - 196.
116
16. Василевич Ф.И Демодекоз собак: учеб. Пособие «Российская академия менеджмента и агробизнеса», / Ф.И.Василевич, А.К. Кириллов М.:
Российская академия менеджмента агробизнеса. - 1997. - 49 с.
17. Василевич Ф.И. Системно-действующие акарициды при демодекозе
собак / Ф.И. Василевич // Тезисы VI международной конференции ветеринарной медицины по проблемам мелких домашних животных. –
М., 1998. - С. 31.
18. Василевич Ф.И. Демодекоз крупного рогатого скота и собак (эпизоотология, патогенез, меры борьбы): автореф.дис.докт.вет.наук: М.,
1998. - 426 с.
19. Василевич Ф.И. Демодикоз животных / Ф.И. Василевич, С.В. Ларионов // Ветеринарния. - 2001. - С. 234 - 235.
20. Вашиканидзе В.И. Актуальные вопросы применения пистицидов в
различных климатогеографических зонах / В.И. Вашиканидзе. - Ереван.: ЕЗВИ. – 1976. - 240 с.
21. Верховский О.А. Количественная характеристика иммуноглобулинов
сыворотки крови собак норме и при патологии / О.А.Верховский, А.А.
Лисицина, М.В. Федоров // Сельскохозяйственная биология. - 1996. - №
4. - С. 103 - 107.
22. Волков А.Н. Токсичность гамма-изомера ГХЦГ для теплокровных
животных: Гигиена, токсикология и клиника новых инсектофунгицидов / А.Н. Волков. - М.: «Медицина». - 1959. - 217 с.
23. Избирательная токсичность как критерий отбора перспективных для
медицинской дезинфекции инсектицидов: «Медицинская паразитоло-
117
гия и паразитарные болезни» / С.Е. Глейберман, В.Н. Дремова [и др.]. М.: «Медицина». – 1983. - 189 с.
24. Головнина О.В. Арахно-энтомозы мелких домашних животных и меры борьбы с ними / О.В. Головнина // Ветеринарная патология. – 2007.
- № 3 (22). – С. 46 - 47.
25. Говырин В.А. К вопросу о демодекозе собак. / В.А. Говырин // Сб.
науч. тр. Ленинградского института усовершенствования врачей. – С.Пб.: ЛенГИУВ. - 1995. - № 10. - С. 27 - 31.
26. Гордиенко Л.Н. // Матер. междунар. конг. по проб. мелких домашних
животных. – М., 2000. – 86 - 87 с.
27. Енгашев С.В. Опыт успешного лечения саркоптоидозов и демодекоза
собак и кошек / С.В. Енгашев // Иммунологические, технологические,
экономические факторы повышения производства продукции сельского хозяйства: Сб. науч. трудов. – Москва, Уфа.: БГАУ. - 2002. – С. 89.
28. Енгашев С.В. Новые лекарственные формы ветеринарных препаратов
при паразитарных болезнях / С.В. Енгашев, С.В. Ларионов // Саратов,
2002. - 322 с.
29. Коротаева О.А. Изучение некоторых показателей крови здоровых животных / О.А. Коротаева, Л.Н. Скосырских // Молодые ученые в решении проблем АПК. – Тюмень.: ВНИИВЭИА. - 2003. – С. 54 - 56.
30. Коротаева О.А. Анализ заболеваемости собак в городе Тюмени / О.А.
Коротаева, Л.Н. Скосырских // Проблемы энтомологии и арахнологии.
– Тюмень.: ВНИИВЭИА. - 2003. – № 4. – С. 214 - 216.
118
31. Коротаева О.А. Диагностика заболеваний кожи / О.А. Коротаева, Л.Н.
Скосырских // Сб. науч. тр. Молодых ученых. – Тюмень.: ВНИИВЭИА
- 2004. – С. 74 - 76.
32. Коротаева О.А. Эпизоотологическая ситуация по паразитарным заболеваниям мелких домашних животных в г. Тюмени / О.А. Коротаева,
Л.Н. Скосырских // АПК в 21 веке: действительность и перспективы. –
Тюмень.: ВНИИВЭИА. - 2004. – С. 241 - 243.
33. Костина М.Н. Основные направления совершенствования дезинсекционных мероприятий на современном этапе / М.Н. Костина // Дезифекционное дело. - 2003. - № 1. - С. 50 - 59.
34. Коротаева О.А. Демодекоз собак в г. Тюмени (эпизоотология, биохимия, иммунология, терапия): автореф. дисс. канд. биол.наук: 03.00.19:
защищена 08.12.05: утв. 12.06.06 / Коротаева Ольга Александровна.Тюмень, 2005. - С. 21.
35. Ларионов С.В. Демодекоз крупного рогатого скота и меры борьбы с
ним / С.В. Ларионов // Актуальные проблемы ветеринарной и зоотехнической науки в интенсификации животноводства. – 1990. – С. 151 152.
36. Ларионов С.В. Демодекоз животных / С.В. Ларионов // Ветеринария. 1990. - № 8. - С. 41-44.
37. Ларионов С.В. // Морфобиологические особенности клещей рода
Demodex, профилактика и меры борьбы при демодекозе животных
(крупный рогатый скот, собак). Автореф. дисс. док. вет. наук, М., 1991.
– 460 с.
119
38. Ларионов С.В. Профилактика и лечение при демодекозе животных /
С.В. Ларионов // Актуальные проблемы биотехнологии и ветеринарной
медицины. – Саратов.: СГАУ им. Вавилова. - 1993. – С. 67-71.
39. Лесников А.И. Лечение демодекоза собак / А.И. Лесников // Научн.
аспекты проф. и терапии болезней сельскохозяйственных животных:
Матер. науч. конф., посвящ. 70-летию факультета ветеринарной медицины ВГАУ им К.Д. Глинки. – Воронеж.: ВГАУ им К.Д. Глинки. 1996. – Т. 1. – С. 206 – 207.
40. Лесников А.И. О распространении демодекоза у собак города Воронежа / А.И. Лесников // Обеспечение стабилизации АПК в условиях
рыночных форм хозяйствования: Тезисы докл. XLVII студ. научн.
конф. – Воронеж.: ВГАУ им К.Д. Глинки. - 1997. – С. 64 - 66.
41. Лисицина А.А. Биохимические исследования печени при демодекозе /
А.А. Лисицина, А.Г. Малахов, Ф.И. Василевич, М.В. Розовенко // Ветеринария. – 1997. - № 4. – С. 44 - 45.
42. Лисицина А.А. Лечение собак, больных демодекозом, с помощью иммуномодуляторов / А.А. Лисицина, Ф.И. Василевич // Ученые записки
Витебской Государственной Ветеринарной Академии. – Витебск.: УО
ВГАВМ. - 1998. - Т. 34. - С. 153 - 154.
43. Лисицина А.А. Клинико-эпизоотологическая характеристика демодекоза собак / Лисицина А.А., Ф.И. Василевич // Новое в диагностике,
лечении и профилактике болезней животных: сб. науч. тр – М.: ФГОУ
ВПО МГАВМиБ. - 1996. – С. 196 - 199.
44. Лисицина, А.А. Биохимические и иммунологические показатели сыворотки крови собак при демодекозе: автореф. дисс. канд. биол.наук:
120
03.00.04, 03.00.19: защищена 20.02.98: утв. 10.06.02 / Лисицина Алла
Анатольевна. - М., 1997. - 15 с.
45. Материалы к токсикологической оценке некоторых инсектицидных
препаратов в аэрозольных упаковках: Теория и практика дезинфекции /
М.М. Мальцев, Н.А. Котова [и др.]. - М.: НИИПТИД МЗ РФ. - 1983,
117 с.
46. Медведев К.С. Болезни кожи собак и кошек / К.С. Медведев. – Киев.:
«ВИМА». - 1999. – 460 с.
47. Мурашева Н.В. К вопросу о медикаментозном лечении демодекоза
собак / Н.В. Мурашева // Сб. науч. тр.Алма-Атинс.зоовет.ин-та. - Алма-Ата.: АЗВИ. - 1953. - № 7. – С. 121-123.
48. Негуссие Б.Т. Демодекоз собак в условиях Москвы / Б.Т. Негуссие //
Ветеринарная газета. – 1998. - № 23-24 (приложение). – С. 14.
49. Негуссие Б.Т. Изучение лечебных препаратов при демодекозе собак /
Б.Т.Негуссие // Материалы Международной научно-производственной
конференции, посвященной 100-летию со дня рождения членакорреспондента ВАСХНИЛ В.Т. Котова. – Воронеж.: ВАСХНИЛ. 1999. – С. 259-261.
50. Негуссие Б.Т. Биология клеша Demodex canis / Б.Т. Негуссие // Ветеринарная газета. – 1999. - № 13. – С. 7.
51. Негуссие Б.Т. Демодекоз в условиях современного мегаполиса (распространение, течение, терапия): дис.канд.биол.наук: 03.00.19: защищена 14.02.00: утв. 26.06.00 / Белху Тесфайе Негуссие. - М., 2000. –
19с.
121
52. Патерсон Сью. Кожные болезни собак / Патерсон Сью // М.: «Аквариум». - 2000. – 383 с.
53. Пашкин П.И. О некоторых источниках заражения животных демодекозом / П.И. Пашкин // Сб.науч.тр. - С.-Пб.: Ленингр.вет.ин-т. - 1978. Т. 52. - С. 107-111.
54. Пашкин П.И. Осложненное течение отодектоза плотоядных/ П.И.
Пашкин, М.В. Шустрова // II Всесоюзн. съезд паразитологов: Тез. докл.
– Киев.: АН УССР. - 1991. - С.54.
55. Петров Ю.Ф. Основы направления профилактики паразитарных и ассоциированных болезней животных в хозяйствах Ивановской области
т. Иваново/ Ю.Ф. Петров, А.Ю. Гудкова, И.Б. Сорокина, Е.Г. Рудковская, Е.Ф. Мужжавлев, В.И. Ашеулов, С.В. Егоров, В.И. Роменский //
Материалы межвузовского научно-практической конференции «Актуальные проблемы науки в агропромышленном комплексе». – Кострома.: КГСХА. - 2001. – С. 81.
56. Позябин В.С. Клинико-биохимические показатели и эффективность
газовой серы при демодекозе крупного рогатого скота / В.С. Позябин,
Ф.И. Василевич, С.В. Ларионов // Сб. науч. трудов. Вопросы ветеринарной биологии. - Сб. науч. тр. – М.: МВА. - 1992. – С. 100.
57. Покровский А.А. Биохимические методы исследований в клинике /
А.А. Покровский . - М.: «Медицина». - 1969. – 651 с.
58. Поляков Д.К. Демодекоз крупного рогатого скота: Арахнозы и протозойные болезни с.-х. животных / Д.К. Поляков. - М.: «Медицина». 1997. - 145 с.
122
59. Поляков Д.К. О дифференциации живых клещей от мертвых при помощи люминесцентной микроскопии/ Д.К. Поляков // Минск.: НТИ
ВНИИВСЭ. - 1958. - № 3. - С. 3 - 4.
60. Потемкин В.И. Демодекоз собак и способы борьбы с ним / В.И. Потемкин, Н.И. Иванова // Сб. науч. тр. – М.: МВА. - 1973. - Т. 65. - С.
184-185.
61. Потемкин В.И. Сравнительные методы лечения средних и тяжелых
форм демодекоза собак / В.И. Потемкин // Всесоюзная конференция по
проблемам вет. дерматологии, арахнологии и энтомологии. – М.:
ВАСХН В.И.Ленина. - 1954. - С. 134-137.
62. Ромашов В. Демодекоз у собак Воронежа / В. Ромашов, А.И. Лесников // Охота и охотничье хозяйство. - 1977. - № 9. - С. 25.
63. Роменский В.И. Эпизоотологические особенности демодекоза собак
мегаполиса г. Иваново/В.И. Роменский // Материалы межвузовского
научно-практической конференции «Актуальные проблемы науки в агропромышленном комплексе». – Кострома.: КГСХА. - 2001. – С. 99100.
64. Россина О.А. Демодекоз собак / О.А. Россини // Материалы 54-й
научной конференции молодых ученых и студентов, С.-Пб.: ФГОУ
ВПО СПбГАВМ. - 2000. – С. 76-77.
65. Слуцкий Л.И. Биохимия нормальной и патологически измененной соединительной ткани /Л.И.Слуцкий. – М.: «Медицина». - 1969. - 375 с.
66. Сошенко Л.П. Неспецифическая резистентность и гематологические
показатели собак при демодекозе / Л.П. Сошенко, М.А. Медведева,
И.А. Молчанов// Научно практическая конференция «Животные в Городе». - М.: ИПЭЭ РАН. - 2002. – С. 78-83.
123
67. Справочник пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации. – М.: Минсельхоз России. –
2004. – С. 86.
68. Соколовский В.А. Железница /демодекоз/ собак и основные методы ее
лечения/ В.А. Соколовский // Сб. тр. Харьковск. вет. ин-та. – Харьков:
ХЗВИ. - 1954. - Т. 22. - С. 310-315.
69. Тимофеев Б.А. Профилактика лекарственных осложнений у с/х животных. / Б.А. Тимофеев. - М.: «Медицина». - 1989, 124 с.
70. Тионов Г.В. О лечении собак при железнице / Г.В. Тионов // Ветеринария. - 1956. - № 12. - С. 34-35.
71. Турусов В.С. Вопросы онкологии / В.С. Турусов. - М.: «Медицина». –
1975. - 21, 127 с.
72. Уша Б.В. Ветеринарная гепатология / Б.В. Уша. - М.: «Колос». - 1979.
– 263 с.
73. Фролов Б.А. Распространение, клиническая картина и диагностика
демодекоза коз / Б.А. Фролов, С.В. Ларионов // Санитарнотоксикологическая оценка ветеринарных препаратов и вопросы микологии и санитарии кормов: М.: ВНИИВС. - 1984. - С. 78-83.
74. Храпай Н.Н. Сравнительная эффективность влияния системнодействующих акарицидов на функциональное состояние печени и почек собак / Н.Н. Храпай // 9 Московск. междунар. вет. конгресс. – М.:
2001. - С. 199 - 200.
75. Храпай Н.Н. Демодекоз собак в условиях Черноморского побережья
Краснодарского края (эпизоотология, патогенез, меры борьбы): автореф. дис. канд. вет. наук: 03.00.19, 16.00.02: защищена 06.06.01 / Храпай Н.Н. – М., 2001. – 22 с.
124
76. Цветкова Н.П. Изучение патоморфологии гельминтозов / Н.П. Цветкова // Ветеринария. - 1970. - № 2. - С. 25-28.
77. Червяков Д.К. Лекарственные средства в ветеринарии.-2-е изд. / Д.К.
Червяков - М.: «Колос». – 1977. – 189 с.
78. Чечеткина А.В. Биохимия животных / А.В. Чечеткина. - М.: «Высшая
школа». - 1982. - 511 с.
79. Шамрай Е.Ф. Клиническая биохимия / Е.Ф. Шамрай. - М.: «Медицина». - 1970. – С. 26-28.
80. Шустрова М.В. Некоторые вопросы эпизоотологии демодекоза крупного рогатого скота / М.В.Шустрова // Актуальные.проб. мед. и вет. паразитологии: Тез. докл. международн. науч. конф. – Витебск.: УО
ВГАВМ. - 1993. - С. 177.
81. Шустрова М.В. Лечение плотоядных животных, больных демодекозом // П.И. Пашкин, В.П. Новиков // Актуал. проб. вет. медицины. Ульяновск.: УГСХА. – 1994. - С. 30-32.
82. Шустрова М.В. Демодекоз собак в условиях города / М.В. Шустрова //
Ветеринария. – 1995. - № 4. - С. 30-32.
83. Шустрова М.В. Чесоточные болезни и демодекозы животных разных
видов (эпизоотология, этиология, патогенез, разработка системы мероприятий по профилактике и ликвидации этих заболеваний в условиях
северо-западного региона). Автореф. докт. дис. вет.наук: 03.00.19: защищена 11.09.96: утв. 26.05.07 С.-Пб., 1996. - 351 с.
84. Шустрова М.В. Сочетанное проявление демодекоза и отодектоза собак и их лечение / М.В. Шустрова, П.П. Пашкин // Проблемы паразитологии и охраны здоровья диких животных: Тез. докл. междунар. Симпозиума. - Астрахань.: Вима. - 1996. - С. 59.
125
85. Шустрова М.В. Демодекоз собак / М.В. Шустрова // Вопросы зоотехнии и ветеринарной медицины / Калининградский государственный
технологический университет. – Калининград.: КГТУ. - 2008. – С. 116118.
86. Щербаков Г.Г. Патогенез, диагностика и комплексная терапия демодекоза собак / Г.Г. Щербаков, С.В. Старченков // Материалы второй
Международной научно-практической конференцию: Ветеринарные и
зооинженерные проблемы в животноводстве и научно-методическое
обеспечение учебного процесса. - Минск, 1997. - С. 215 - 216.
87. B.B.Baker. Obsezvations of the epidemiol. Diagnosis and treatment of demodecosis in dogs / B.B.Baker. // Vet.Rec., 1970. - Vol. 86. - Р. 90-91
88. Buchey D.F., Chalmers A.E., Gant D.B. et al. Fipronil as a new broad spectrum insecticide wicy acts on the Gaba regulated chloride channel // Proc.
XX Int. Congr. of Entomology. Firenze, Italy. -1996. -Р. 19.
89. Campbell W.C., Fisher, M.H., Stapley, E.O., Albers-Schonberg, G. and Jacob, C.A. / Ivermectin: a potent new antiparasitic agent // . Science, 221:
1983. - Р. 823-828.
90. Cannon. Amitras in treatment of canine demodecosis/ Cannon // Med.Vet.
Pract., 1983. - Vol.64. - № 11. - Р. 849-900.
91. Carlotti, D.N. Therapy of generalized demodicosis with milbemycin. Proceeding 1st European Congress CNVSPA-FECAVA., 1994. - Р. 147-149.
92. Corbett R., Banks K., Hinrichs D. et Bell T. / Cellular immune responsiveness in dogs demodectic mange // Transplantation Proceed., 1975. - Vol. 7. P. 557-559.
93. Dryden M., Magid-Denenberg Т., Bunch S. Control of fleas on naturally
infested dog and cats and in private residences with topical spot applications
of fipronil or imidacloprid // Veterinary Parasitology. - 2000. - Vol. 93:1. Р. 69-75.
126
94. Duclos, D.D., Jeffers, J.G. and Shanley, K.J. //J. of the Amer. Vet. Med.
Assoc. – 1994. – Vol. 204. – P. 616-619.
95. Folz S.D. Demodecosis (Demodex canis) / S.D. Folz // Complendium on
Continung education for the Practising Vetrinarium, 1983.-T. VII.-F.2. - Р.
321-342.
96. Folz S.D., Kakuk T.L., Henke C.L. Clinical evaluation of amitraz for
treatment of canine / S.D. Folz, T.L. Kakuk, C.L. Henke // Mod.Veter.Pract.,
1984. - Vol.65. - № 8. - P. 597-600.
97. Godberg, L.M., Derksen, F.J., Williams, J.F. and Mahmoud, B. Ivermectin
toxicosis in a neonatal foal / L.M. Godberg, F.J. Derksen , J.F. Williams and
Mahmoud, B // Australian Veterinary Journal, 1995. – Р. 191-192.
98. Guaguere, E. La demodecie du chien adulte. A propos de 22 cas. / E. Guaguere // Pratique Medicate et Chirurgicale Animal Compagnie, 1991
99. Guaguere, E. La demodecie canine: strategic therapeutique. / E. Guaguere
// Pratique Medicate et Chirurgicale Animal Compagnie, 1995.
100. Healey, M.C. and Gaafar, S.M. Immunodeficiency in canine demodectis
mange. II. Skin reactions to phytohemagglutinin and concavanalin A. / M.C.
Healey, and S.M. Gaafar // Veterinary Parasitology, 1997.
101. Kaakeh W., Reid B.L., Bennett G.W. Toxicity of fipronil to German and
American cockroaches // Enntomologia Experimentalis et Applicata. - 1997.
- 84. - Р. 229-237.
102. Kraiss A. Demodex canis und die Demodikose Pro Vetrinario, Persrpektiven der Tiermedizin, 1986.- Vol. 3. - Р.9-12.
103. Mullar G.H. Canine demodicosis/ G.H. Mullar // Small animal dermatology.-Philadelphia. - 1983. - Vol.3. - Р. 331-351.
104. Koutz F.R. Demodex folliculorum studies. Treatment methods/ F.R. Koutz
// Narth. Am. Vet. - 1955. - Vol. 36. - Р.129-136.
127
105. Krawies G.R., Gaatar S.M. Studies on the immunology of canine demodicosis / G.R. Krawies, S.M. Gaatar // J.Am.Anim.Hosp.Assoc. 1975. Vol.16. – Р. 669-676.
106. Kwochka, K.W. Mites and related disease. Veterinary Clinics of North
America / K.W. Kwochka // Small Animal Practice. - № 17. - Р. 1263-1284.
107. Pawlowski К. Ivomec on the treatment of demodecosis in dogs / K. Pawlowski // Med.Vet., 1987. - Vol.43. - № 7. - Р. 417-418.
108. Pedro J. Ginel DVM. Canine demodecosis. University of Cordova Spain.
WALTHAM FOCUS VOL. № 6. - 1996.
109. Scott,D.W., Miller,W.H. and Griffin,C.E. Muller &, Kirk´s Smoll Animal
Dermatology 5-th Edition, USA, Philadelphia, 1995. - Р. 417-432.
110. Scott,D.W., Miller,W.H. and Griffin,C.E., Muller &, Kirk´s Smoll Animal
Dermatology 5-th Edition, USA, Philadelphia, 1995. – Р. 417-432.
111. Scott,D.W. Expriences with the use of amitraz and ivermectin for the
treatment of generalized demodicosis in dogs. / D.W. Scott, and D.K. Walton // Journal of the American Animal Hospital Association, 1985, 21. – Р.
535-541.
112. Scott, D.W. Studies on the therapeutic and immunologic aspects of generalized demodectis mange in the dog / Scott, D.W., Farrow, B.R.H. and
Schultz, R.D. // Journal of the American Animal Hospital Association, 1974.
113. W. Sischo Regional distribution of ten common skin diseases in dogs / W.
Sischo et al. // J.Am.Vet.Med.Assoc., 1989.- Vol. 195. - № 6. - Р.121-125.
114. N.R.Vagola Epidemiological investigation of localized demodecosis in
dogs: a possibility of spontaneous recovery/ N.R.Vagola et al. // Livestock
Adviser, 1972. - Vol. 17, № 8. - Р. 28-35.
115. W.Wunderwald Demodicosis in cattle and dog / W.Wunderwald // Vet.,
Mexico, 1988, № 8 (2). - Р. 42-45.
128
ПРИЛОЖЕНИЕ