Федотова Мария Вадимовна - Астраханский государственный

На правах рукописи
ФЕДОТОВА
Мария Вадимовна
ВЛИЯНИЕ ЕСТЕСТВЕННЫХ РЕГУЛЯТОРОВ МЕТАБОЛИЗМА НА
МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ СУСТАВОВ У
КРЫС В НОРМЕ И ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ АРТРИТЕ
03.00.13 – физиология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
2008
Работа выполнена в ФГУ «Саратовский НИИ травматологии и ортопедии
Минздравсоцразвития
Научный руководитель:
доктор медицинских наук
Митрофанов Владимир Александрович
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук,
профессор
Киричук Вячеслав Федорович
доктор биологических наук,
доцент
Фельдман Бронислав Владимирович
Ведущая организация:
Самарский государственный медицинский университет РОСЗДРАВА
Защита состоится « 26 » декабря 2008 г.
в 13 часов на заседании диссертационного совета ДМ 212.009.01 при
Астраханском государственном университете по адресу: 414000, г.
Астрахань, пл. Шаумяна, 1
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Астраханского
государственного университета по адресу: 414000, г. Астрахань, пл.
Шаумяна, 1
Автореферат разослан « » ____________ 2008 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
доктор биологических наук
Нестеров Юрий Викторович
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Важную роль в функционировании организма играет опорно-двигательная система, одной из структурный единиц
которой является сустав.
Нормальное функционирование суставов обеспечивается многими составляющими, например, образованием процессами синтеза и деградации
хряща, которые находятся в равновесии в здоровом организме.
Изменения в суставах с их разрушением происходят интенсивно при
старении организма, а также воздействии самых разнообразных повреждающих факторов. Поражения суставов у людей относятся к самой распространенной категории заболеваний (Статун А.Н., 2005; Черкашина М.О. и соавт.,
2006; Зборовский А.Б. и соавт., 2007; Каратеев Д.Е., Олюнин Ю.А., 2008). .
Как правило, это тяжелые хронические процессы, в том числе ревматические,
облигатным проявлением которых является развитие аутоиммунного синовита, плохо поддающегося коррекции (Завадовский Б.В. и соавт., 2005; Зборовский А.Б. и соавт., 2005; Сучков С.В. и соавт., 2005; Прокопьева Н.Л. и соавт., 2008; Westwood O.M.R. et al., 2006). В связи с этим актуальной проблемой является поиск регуляторных механизмов, усиливающих восстановительные и подавляющие деструктивные процессы в суставах.
Вследствие того, что «традиционные» базисные противовоспалительные препараты во многих случаях не способны достаточно эффективно контролировать прогрессирование деструкции суставных тканей, необходимо
использовать новые подходы к репаративной регенерации суставов, восстановлению их функциональной активности (Сигидин Я.А., Лукина Г.В., 2000;
Сажин В.П., Беликова О.Д., Федотова Т.И., 2004; Сорока Н.Ф., Кевра В.М.,
2005; Kraag G.R., 1989).
Одна из точек зрения на развитие повреждения суставов заключается в
том, что происходит уменьшение синтеза и увеличение катаболизма в суставных тканях. Для сохранения гомеостатического равновесия в таких случаях можно использовать системные полиэнзимные комплексы, относящиеся
к классу биорегуляторов (Зборовский А.Б., Стожаров М.Ю., Мозговая Е.Э.,
2003; Лила А.М., Стернин Ю.М., Мазуров В.И., 2003; Гусейнов Н.И., Гусейнова Н.Н., 2005).
По данным литературы известно, что полиэнзимы оказывают противовоспалительное, противоотёчное, иммуномодулирующее, аналгезирующее
действия, фибринолитический и тромболитический эффекты, улучшают реологические свойства крови (Ноуза К., 1994; Штаудер Г., 1996; Насонова В.А.,
Гавалов С.М., 1999; Зборовский А.Б. и соавт., 2003).Они способны также
стимулировать процесс ликвидации иммунных комплексов и ингибировать
активность компонентов комплемента (Мазуров В.И., Лила А.М., Стернин
Ю.М., 1995; Насонова В.А., Гавалов С.М., 1999; Зборовский А.Б., Стожаров
М.Ю., Мозговая М.М., 2003; Inderst R., 1992, Репина М.А., 2002, Сизякина
Л.П.,2006). Однако вопрос о том, обладают ли полиэнзимы саногенетическими эффектами остается открытым. Нет четкой информации о том, могут ли
энзимы в ранние сроки прервать прогрессирование физиологического воспаления и, тем более, привести к регрессу наступивших органических изменений, восстановлению нормальной структуры и функции органа. Исследования в этом направлении остаются актуальными.
Второй компонент регуляторного влияния на суставы — применение
хондропротекторов. К известным хондропротекторам относятся глюкозамина
сульфат - естественное низкомолекулярное вещество, участвующее в биосинтезе протеогликанов суставного хряща. Обоснование введения его извне
для защиты хряща от разрушения весьма актуально (Павлов В.П., 1990; Копьева Т.П., Веникова М.С., 1992; Шелепина Т.А., 1996). В экспериментах доказано, что глюкозамин вступает в реакции биосинтеза ГАГ, стимулирует
образование полноценных протеогликанов (ПГ), а также подавляет образование супероксидных радикалов и ферментов, разрушающих коллаген (Липец
А.И. и соавт., 1996; Кудрявцев И.В. и соавт., 1998; Неверов В.А., Кишко
А.И., Климов А.В., 1999; Барсукова Н.А., Пышнограева Л.В., Пешехонова
Л.К., 2003; Dodge G.R. et al., 1999; Piperno M. et al., 2000). В литературе отсутствует информация о сравнительной эффективности полиэнзимов и хондропротекторов на восстановление морфофункциональных характеристик
суставов.
Третий компонент регуляторных воздействий – это антигипоксанты.
Их эффект связан с тканевой гипоксией, которая вносит весомый вклад в
процессы деградации ПГ суставного хряща (СХ). Имеются экспериментальные и клинические данные о высокой эффективности антигипоксанта оксибутирата натрия (натриевая соль гамма-оксимасляной кислоты) при остеоартрозе (Красивина И.Г., Козлов Г.С., Носков С.М., 1996; Красивина И.Г.,
1996,2001), травматическом повреждении суставов (Митрофанов В.А., Жадёнов И.И., Овчинникова Н.М., 1996; Митрофанов В.А., Овчинникова Н.М.,
1997).
На сегодняшний день нет четкого представления и доказательной базы
данных о возможном потенцирующем действии антигипоксантов на восстановление функциональной активности суставов при их локальном применении.
В силу изложенного, актуальным представляется проведение экспериментальных исследований, направленных на изучение эффектов естественных регуляторов метаболизма на морфо-функциональные характеристики
суставов, коррекцию регенеративных процессов при экспериментальном моделировании повреждения суставов, среди которых наиболее тяжелые дисфункции связаны с процессами развития аутоиммунного воспаления. Такие
модели позволяют получать информацию, важную и для медицины, где поиск безопасных регуляторных воздействий, может быть полезным для коррекции процессов при аутоиммунных артритах (АА).
Наиболее близкой к АА человека является экспериментальная модель
адъювантного артрита (АдА) (Спасов А.А. и соавт., 2005; Hua J. et al., 2005),
поэтому для выяснения закономерностей функциональной и структурной организации суставов и поиска главных точек приложения естественных регу-
ляторов метаболических процессов использование данной экспериментальной модели является оптимальным.
Сравнительного исследования эффективности применения перечисленных препаратов при АА ни в клинических, ни в экспериментальных условиях
проведено не было, хотя очевидно, что изучение таких подходов даст новое,
более целостное представление о процессе развития нарушений в суставных
тканях и динамике их восстановления. Это имеет важное значение для разработки более эффективных методов профилактики и лечения заболеваний
опорно-двигательного аппарата.
В связи с вышеизложенным представляется перспективным комплексное изучение состояния суставных тканей при экспериментальном АдА в
условиях сочетанного воздействия полиэнзимного препарата «Вобэнзим»,
хондропротектора «Дона», антигипоксанта «Оксибутират натрия».
Цель исследования: представить морфофункциональные характеристики суставов крыс и оценить влияние естественных регуляторов метаболизма
на динамику изменений в организме животных при экспериментальном моделировании аутоиммунного артрита.
Задачи исследования:
1.Изучить влияние полиферментного препарата «Вобэнзим» на физиолого-иммунологические характеристики, включающие изменения в суставах
крыс, общелабораторные, биохимические, интегральные иммунологические
и гистоморфометрические показатели при экспериментальном моделировании АдА.
2.Определить действие хондропротектора «Дона» (глюкозамина сульфат) на процессы восстановления и регенерации суставов на экспериментальной модели АдА на основании общелабораторных, биохимических, иммунологических и гистоморфометрических параметров.
3.Исследовать физиолого-иммунологический статус крыс под действием
антигипоксанта «Оксибутират натрия» на основании методов комплексной
оценки изменения в суставах крыс с АдА, их функциональных возможностей
и основных лабораторных, биохимических, иммунологических и гистоморфометрических маркеров.
4.Определить действие сочетанного применения «Вобэнзима» и «Доны»
на изменения в суставах крыс при их использовании в качестве регуляторных
средств в условиях развития экспериментального АдА с помощью принятых
в исследовании критериев (общелабораторных, биохимических, иммунологических и гистоморфометрических) .
5.Провести сравнительный анализ влияния веществ, модифицирующих
биологический ответ (комбинированного применения вобэнзима, доны и оксибутирата натрия), на восстановление функции суставов, лабораторные,
биохимические, иммунологические и гистоморфометрические параметры у
крыс с АдА.
Научная новизна:
Впервые изучено влияние естественных регуляторов метаболизма (энзимов, гликозаминогликанов, антигипоксантов) на регенерацию суставных
тканей, физиолого-иммунологические и морфологические показатели крыс с
воспроизведенным экспериментальным АдА.
Впервые определено влияние сочетанного применения полиферментного препарата «Вобэнзим», хондропротектора «Дона» и антигипоксанта
«Оксибутират натрия» в различных комбинациях на морфо-функциональные
характеристики суставов у крыс.
Получены новые экспериментальные данные о влиянии этих препаратов
на метаболические процессы, в частности, на состояние процессов перекисного окисления липидов [ПОЛ] (по уровню малонового диальдегида [МДА] в
крови) и содержание ГАГ в соединительной ткани коленных суставов и крови животных.
Выявлено влияние предложенной комбинации препаратов на состояние
морфологических структур синовиальной оболочки (СО) и СХ суставов экспериментальных животных.
Впервые при АдА изучена возможность снижения степени выраженности воспалительной деструкции тканей сустава с помощью комплексного
применения полиферментного препарата, хондропротектора и антигипоксанта.
Научно-практическая значимость работы:
Экспериментальное моделирование АдА у крыс является адекватным
методом, который может быть использован для оценки эффективности препаратов системного и местного действия на морфо-функциональные характеристики суставов.
В эксперименте на крысах разработан способ снижения степени выраженности воспалительной деструкции суставных тканей при АА при сочетанном применении полиферментного препарата «Вобэнзим», хондропротектора «Дона» и антигипоксанта «Оксибутират натрия». Получен патент RU на
изобретение № 2169560 «Способ лечения аутоиммунного артрита» (по заявке
№ 20000114852 от 13.06.2000, опубл. 27.06.01, Бюл. № 18), превосходящий
результаты других исследователей, отличающийся более выраженной способностью тормозить процесс воспалительной деструкции тканей сустава и
позволяющий оптимизировать процесс регенерации суставных структур.
Получены доказательства того, что в суставах при воспалении развиваются процессы деструкции, обусловленные разными механизмами развития,
и поэтому недостаточно чувствительными к отдельным препаратам даже системного действия, в связи с чем для нормализации и восстановления функциональных возможностей суставов целесообразно применение комбинаций
препаратов, точкой приложения которых являются разные мишени.
Положения, выносимые на защиту:
1. В результате раздельного применения полиферментного препарата
«Вобэнзим», хондропротектора «Дона» и антигипоксанта «Оксибутират
натрия» у крыс с АдА происходит нормализация уровня ГАГ в сыворотке
крови.
2. Сочетанное использование вобэнзима и доны приводит к нормализации СОЭ, количества лейкоцитов в цельной крови и уровня ГАГ в сыворотке крови.
3. Комбинация вобэнзима и доны, вводимых энтерально, оксибутирата натрия внутрисуставно вызывает нормализацию накожной температуры,
СОЭ, количества лейкоцитов в крови, содержания МДА в крови и уровня
ГАГ в сыворотке крови.
4. Несмотря на положительный эффект от использования вышеуказанных средств как по отдельности, так и в описанных выше комбинациях,
уменьшение уровня аутоиммунного воспаления, у экспериментальных животных с АдА длительно сохраняются морфологические признаки тканевого
воспаления: уменьшение количества фибробластов в СО, появление большого количества гистиоцитов, лимфоцитов и плазмоцитов, усиление функциональной активности воспалительно-клеточных элементов, повреждение микроскопических структур СО и СХ.
Апробация работы
Результаты исследования доложены на 61 научной конференции молодых ученых и студентов СГМУ (Саратов, 2000), III съезде ревматологов
России (Рязань, 2001), Межрегиональной конференции молодых учёных
«Новые технологии в диагностике и лечении травм и заболеваний опорнодвигательной системы», посвящённой 100-летию Я.Н.Родина (Саратов,
2003), VI съезде аллергологов и иммунологов СНГ (Москва, 2006), Научнопрактической конференции молодых учёных, посвящённой 80-летию профессора Н.П. Решетникова "Травматология и ортопедия XXI века" (Саратов,
2007), заседании Саратовского областного научно-практического общества
травматологов-ортопедов (Саратов, 2000, 2007, 2008), II съезде травматологов-ортопедов Уральского федерального округа (Курган, 2008).
Работа выполнена в рамках основного плана НИР ФГУ Саратовский
НИИ травматологии и ортопедии Федерального агентства по оказанию высокотехнологичной медицинской помощи
Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 148 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, обсуждения
результатов, выводов и списка литературы, включающего 221 отечественный
и 71 зарубежный источник. Работа иллюстрирована 33 рисунками и 14 таблицей.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материал и методы исследований
Объектом исследования были 130 белых лабораторных крыс со средней массой 200,010,0 г. На первом этапе исследования основные морфофункциональные характеристики суставов, гистологические параметры были
изучены у 20 здоровых животных, которые составили серию контроля .
Для оценки влияния естественных регуляторов метаболизма на морфофункциональные параметры в условиях аутоиммунного воспаления у 110
крыс воспроизведен АдА с однократным введением полного адъюванта
Фрейнда (Чернух А.М., 1979).
В работе использовались следующие методы:
1. Общелабораторные методы включали в себя оценку общего состояния животных (потребность в еде, состояние шерсти, подвижность) и местные проявления артрита (объём движений в суставах, их болезненность при
пальпации, окружность коленных суставов, накожная температура в подколенной области). Осуществлялся также общий анализ крови (Лиманский и
др., 1984) - определение СОЭ по методу Панченкова, подсчет количества
лейкоцитов, количества эритроцитов в счетной камере Горяева.
2. Биохимические методы исследования включали:
а) определение состояния процессов ПОЛ по уровню МДА, общепринятого маркёра ПОЛ (Коробейникова Э.Н., 1989);
б) определение состояния метаболизма ПГ, характеризующего степень
деструкции соединительной ткани (по содержанию ГАГ в сыворотке крови
(Карякина Е.В., Косягин Д.В., 1982).
3. Для оценки степени выраженности иммунопатологических процессов изучали содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК)
(Гриневич Ю.А., Алферов А.И., 1984).
4. Морфологические исследования включали оценку состояния макропрепарата и микроструктуры тканей коленного сустава (СО и СХ).
Гистологические препараты изучали следующими методами:
а) морфологический - окраска тканей сустава гематоксилином-эозином
и пикрофуксином по Ван Гизону для изучения их структуры в целом (Меркулов Г.А., 1961);
б) гистохимический - окраска толуидиновым голубым для выявления
ГАГ, как основного структурного компонента суставного хряща и пиронином по Браше для выявления рибонуклеотидов (показателя функциональной
активности клеток);
в) морфометрический - количественная и качественная характеристика
клеточных элементов (гистиоцитов, лимфоцитов, плазмоцитов и фибробластов) и морфологических проявлений патологических изменений суставных
тканей - СО и СХ.
Морфологические признаки имеющихся изменений количественно
определяли с помощью морфометрического анализа по 5 основным признакам поражения синовиальной оболочки: пролиферация синовиоцитов, отложение фибрина, воспалительная клеточная инфильтрация, пролиферация
фибробластов, очаговый фиброз и 5 признакам поражения суставного хряща:
убыль ГАГ, узурация поверхностного слоя, дистрофия хондроцитов, потеря
хондроцитов, разволокнение матрикса.
Степень выраженности ПП тканей оценивалась с помощью окулярной
измерительной сетки (Автандилов Г.Г., 1984) как по клеточному составу СО
(соотношение фибробластов, гистиоцитов, лимфоцитов и плазмоцитов в
%%), так и в баллах. Функциональная активность воспалительно-клеточных
элементов определялась по пиронинофилии лимфоцитов и плазмоцитов
(Шехтер А.Б., Крель А.А., Расщупкина З.П., 1985).
Для обоснования эффективности применения естественных регуляторов
метаболизма у крыс с экспериментальным АдА изучали различные по своим
механизмам действия субстанции - полиферментный препарат, хондропротектор и антигипоксант.
С этой целью, кроме 1-ой серии из 20 интактных крыс, составившей
серию контроля и после обследования выведенной из эксперимента, сформированы следующие группы: 2-я серия - 20 животных с индуцированным
адъювантным артритом, не получавших никаких препаратов (1-я серия сравнения); 3-я - 20-ти животным с воспроизведённым артритом (2-я серия сравнения, плацебо-контроль) ежедневно в течение 16 дней, в равных количествах, вводили внутрижелудочно плацебо в виде взвеси талька в воде; 4-я 20-ти животным осуществлялось ежедневное (16 дней) внутрижелудочное
введение вобэнзима ( 42,85 мг/кг массы тела); 5-я - 10 животных, которым
ежедневно, так же 16 дней внутрижелудочно вводилась дона (21,4 мг/кг); 6-я
- 10-ти животным внутрисуставно вводился оксибутират натрия 2 раза в неделю (5,7 мг/кг); 7-я - 20 животных получали ежедневно, внутрижелудочно,
вобэнзим и дону (42,85 мг/кг и 21,4 мг/кг соответственно); 8-я - 10-ти животным проводилось внутрижелудочное введение вобэнзима и доны, с одновременным введением 2 раза в неделю внутрисуставно оксибутирата натрия
(42,85мг/кг, 21,4 мг/кг и 5,7 мг/кг соответственно).
В работе были использованы следующие субстанции:
1. Полиферментное средство «Вобэнзим (WOBENZYM)» фирмы
MUCOS Pharma GmbH  Co. (Германия), представляющее собой смесь протеолитических энзимов: панкреатина, трипсина, липазы, амилазы, химотрипсина, бромелаина, папаина, а также рутина.
2. Хондропротектор «Дона (DONA)» фирмы Rottapharm (Италия), содержит глюкозамина сульфат.
3. Антигипоксант «Оксибутират натрия» (Россия), натриевая соль гамма оксимасляной кислоты.
4.Тальк (силикат магния) - индифферентный наполнитель для приготовления паст и таблеток был использован в качестве плацебо.
Количество вводимых препаратов рассчитывалось на основании дозировок, рекомендованных в инструкциях по их применению.
Введение препаратов начинали на третьи сутки после моделирования
артрита, когда появлялись его выраженные клинические признаки. Животных выводили из опыта после обследования методом декапитации под эфирным наркозом сразу после окончания введения препаратов. Кровь для иссле-
дования бралась из тела после декапитации. Коленные суставы забирались
целиком для гисто-морфометрического исследования.
Все полученные данные обрабатывали общепринятыми методами статистического анализа. Первичная статистическая обработка проводилась методами вариационной статистики с вычислением средней арифметической
(М), ее ошибки (m) , коэффициента достоверности (t), показателя вероятности (Р). Все расчеты проводились с применением пакета статистических программ STATISTICA 6.0.
Результаты исследований и обсуждение
Основные биологические показатели и морфо-функциональные параметры суставов здоровых животных
Здоровые крысы в начале эксперимента характеризовались обычным
для данного вида поведением, животные были активны, проявляли любопытство, ели с аппетитом. Шерсть была гладкая, блестящая, чистая. Отсутствовали выделения из глаз и ушей. Движения в коленных суставах были свободные и безболезненные.
Окружность правого коленного сустава составляла 4,150,03 мм,
накожная температура в подколенной ямке - 34,060,04С.
Гематологические показатели соответствовали норме. СОЭ составляла
3,000,02 мм/ч, в крови количество лейкоцитов - 12,600,04109/л, количество эритроцитов - 6,500,131012/л.
Уровень МДА в крови, характеризующий процессы ПОЛ у здоровых
крыс, составлял 2,860,11 мкмоль/л. Количество ГАГ в сыворотке крови, отражающее состояние метаболизма ПГ, составляло 1,390,04 г10-2/л по уроновым кислотам и 3,580,05 г10-2/л по гексозам.
Содержание ЦИК в сыворотке крови соответствовало нормальной реактивности иммунной системы и составляло 8,251,18 усл.ед.
Клеточный состав СО здоровых крыс характеризовался значительным
преобладанием фибробластов с единичными лимфоцитами, гистиоцитами и
плазмоцитами. ПП СО и СХ у здоровых животных отсутствовали (сумма
баллов ПП равна 0).
По окончании срока наблюдения (16 дней) у животных контрольной
серии (1-я серия, здоровые крысы) не было выявлено изменений во внешнем
виде и поведении. У них сохранялась, высокая двигательная активность,
гладкая и блестящая шерсть, чистые глаза и уши. Подвижность в обоих коленных суставах, объём активных и пассивных движений оставалась такой
же, как в начале эксперимента, болезненность при пальпации коленных суставов отсутствовала.
Окружность сустава оставалась неизменной. Также не обнаружено каких-либо изменений накожной температуры в области правого коленного сустава.
СОЭ оставалось на нормальных цифрах, отсутствовали изменения в
количестве лейкоцитов и эритроцитов.
Биохимические показатели (уровень МДА и ГАГ) оставались такими
же, как и в начале эксперимента.
Неизменным оставалось количество ЦИК в сыворотке крови.
Изменение биологических и морфо-функциональных характеристик у
крыс при воспроизведении АдА
У всех 110 иммунизированных животных после введения под подошвенный апоневроз правой стопы полного адъюванта Фрейнда развивался
артрит. Формирование АдА подтверждалось общеклиническими методами
исследования. На 2-3-и сутки после иммунизации крысы становились вялыми, агрессивными, малоподвижными, шерсть становилась тусклой, взъерошенной. При движении они избегали наступать на больную конечность. У
всех иммунизированных животных отмечалось снижение аппетита. На 2-3-и
сутки после иммунизации развивались выраженные отёки мягких тканей
стопы и припухлость в области поражённых суставов - межфаланговых,
плюснефаланговых, голеностопного и коленного. Отмечалось значительное
снижение объёма активных и пассивных движений в опытных коленных суставах и выраженная болезненность при их ощупывании (животное проявляло агрессивность и отдёргивало лапу). Максимальное увеличение окружности правых коленных суставов наблюдалось на 2-3 день после введения адъюванта и оставалось неизменным до конца эксперимента, составляя в среднем 3 мм. В табл.1-4 представлены основные изучаемые параметры у крыс с
воспроизведенным АдА по сравнению со здоровыми животными.
Табл.1
Местные признаки состояния коленных суставов у здоровых крыс
и при АдА (Mm)
Серии
1-я
n=20
2-я (АдА)
n=20
3-я
(АдА+плацебо)
n=20
Окружность сустава в мм
4,150,03
Температура в С
34,060,04
6,800,027
Р1-20,001
6,900,06
Р1-30,001
Р2-30,5
36,960,04
Р1-20,001
36,900,03
Р1-30,001
Р2-30,2
Табл.2
Гематологические показатели у здоровых крыс и при АдА (Mm)
Серии
СОЭ в мм/ч
3,000,02
Кол-во лейкоцитов,
109/л
12,600,04
Кол-во эритроцитов,
1012/л
6,500,13
1-я
n=20
2-я (АдА)
n=20
3-я (АдА+
плацебо)
n=20
6,200,12
Р1-20,001
6,100,12
Р1-30,001
Р2-30,5
13,420,02
Р1-20,05
13,280,06
Р1-30,05
Р2-30,5
4,460,07
Р1-20,001
4,660,06
Р1-30,001
Р2-30,2
Табл.3
Биохимические характеристики крови у здоровых крыс и при АдА
(Mm)
Серии
МДА в мкмоль/л
1-я
n=20
2-я (АдА)
n=20
3-я (АдА+ плацебо)
n=20
ГАГ в г10-2/л
Уроновые кислоты
Гексозы
2,860,11
1,390,04
3,580,05
5,930,21
Р1-20,001
6,570,42
Р1-30,001
Р2-30,2
4,250,25
Р1-20,001
4,230,23
Р1-30,001
Р2-30,5
5,930,22
Р1-20,001
6,040,30
Р1-30,001
Р2-30,5
Табл.4
Содержание ЦИК в сыворотке крови у здоровых крыс и при АдА
(Mm в у.е)
Серии
ЦИК
1-я
n=20
2-я (АдА)
n=20
3-я (АдА+плацебо)
n=20
8,251,18
28,912,73
Р1-20,001
31,504,70
Р1-30,001
Р2-30,5
Как видно из представленных таблиц, гематологические, биохимические и иммунологические показатели крови соответствовали наличию у животных 2-й и 3-й серий выраженного воспалительного процесса. Отсутствие
статистически достоверной разницы во всех изученных лабораторных показателях у животных 2-й и 3-й серий позволило объединить эти серии в одну
(2+3-я), с которой в дальнейшем и сравнивались изменения, вызванные введением различных препаратов и их комбинаций в опытных сериях.
В суставных тканях животных с АдА выявлялись признаки поражения,
характерные для их воспалительной деструкции.
Макроскопически установлено, что у всех животных 2-й серии в поражённых суставах имелось утолщение СО, поверхность которой была разрыхлённой и неровной с единичными точечными кровоизлияниями. У
большинства животных на СХ, гладком и блестящем на значительном
протяжении, имелись очаги с тусклой шероховатой поверхностью, которые
выявлялись, в основном, по краям суставных поверхностей.
Микроскопически во всех случаях в СО определялась очаговая пролиферация синовиоцитов, располагавшихся палисадообразно в 2-4 ряда. У 16
крыс имелись участки поверхностного некроза с наложением фибрина.
Наиболее постоянными и выраженными ПП была диффузная лимфоидно-гистиоцитарная и плазмоцитарная инфильтрация субинтимального слоя
СО.
У крыс с АдА, не получавших никаких воздействий, отмечалась очаговая пролиферация клеточных элементов воспалительного характера, напоми-
нающая лимфоидные фолликулы. Такие изменения были выявлены у половины обследуемых животных (10 из 20). Об аутоиммунном характере возникшего воспалительного процесса свидетельствовала пиронинофилия цитоплазмы (показатель накопления рибонуклеотидов) большого количества
(68,340,76%) лимфоцитов и плазматических клеток, что являлось показателем их включения в процесс антителообразования и напряжённости иммунитета.
Микроструктура СХ на значительном протяжении была сохранена.
Однако окраска толуидиновым голубым выявила потерю ГАГ поверхностной
и частично основной зонами, что являлось признаком начавшегося процесса
дезорганизации хрящевого матрикса. Наряду с этим имелись участки с разрыхлённым и частично утраченным поверхностным слоем. В целом, данные
гистоморфометрии подтверждают, что воспроизведённый нами путём введения полного адъюванта Фрейнда артрит у крыс имел признаки иммунного
воспалительного процесса, сопровождающегося деструкцией СО и СХ.
В табл. 5 представлены суммарные характеристики морфологических
признаков поражения суставных тканей крыс при моделировании АА.
Табл.5
Характеристика суммы морфологических ПП суставных тканей крыс
(Mm в баллах)
Серии
СО
СХ
2-я (АдА)
n=20
3-я (АдА+плацебо)
n=20
13,091,45
9,540,62
12,860,94
Р2-30,5
8,960,89
Р2-30,5
Оценка регуляторного действия энзимов у животных с АдА
При использовании полиферментного препарата «Вобэнзим» энтерально вводимого экспериментальным животным (крысы с АдА 4-й серии)
наблюдалось статистически значимое отчётливое, уменьшение окружности
опытных суставов (6,600,09) по сравнению с не лечёнными животными
(6,900,02; Р(2+3)-40,05) однако, этот показатель не достигал нормы
(4,150,03; Р1-40,001). Накожная температура в области сустава не изменялась по сравнению с животными, не подвергавшимися фармакологическому
воздействию (37,000,04 и 36,930,01 соответственно; Р(2+3)-40,1).
У животных данной серии наблюдалось снижение СОЭ (4,500,12) по
сравнению с животными, на получавшими препаратов (6,150,12; Р(2+3)40,01), а также количества лейкоцитов (13,150,01 и 13,350,09 соответственно; Р(2+3)-40,05). Содержание эритроцитов в крови (5,620,09) повышалось по сравнению с животными без вмешательств или, получавших плацебо
(2+3-й серии) (4,560,06; Р2-40,001), однако ни один из гематологических
показателей не достигал уровня здоровых животных (3,00,02; 12,600,04;
6,500,13 соответственно; Р1-40,001).
У крыс, получавших Вобэнзим, установлено снижение в крови уровня
МДА (2,860,11) в сравнении с животными без воздействия и с плацебовоздействием (2+3-й серии) (6,250,18; Р(2+3)-40,001), но не до нормы
(2,860,11; Р1-40,01).
Содержание ГАГ в сыворотке крови, определяемое по уроновым кислотам (1,760,04) также было достоверно ниже, чем в сравнительных 2+3-й
серии (4,240,24; Р1-40,001), но выше, чем у здоровых животных (в 1-й серии) (1,390,04; Р1-40,001). Нормализация наблюдалась лишь уровня ГАГ по
гексозам (3,440,11; Р1-40,5).
Показатель ЦИК на фоне Вобэнзима был статистически достоверно
ниже в сравнении с 2+3-й серией (15,803,01 и 30,203,70; Р(2+3)-40,01). Однако он продолжал оставаться в 2 раза более высоким, чем в контрольной
группе здоровых животных (8,251,18; Р1-40,001).
При изучении клеточного состава СО выявлено увеличение количества
фибробластов (26,651,13; Р(2+3)-40,001) с одновременным снижением количества гистиоцитов (25,560,34), лимфоцитов (32,780,75) и плазмоцитов
(15,010,82) по сравнению с животными, не получавшими лечения (Р(2+3)40,001; Р(2+3)-40,001; Р(2+3)-40,01 соответственно). Функциональная активность лимфоцитов и плазмоцитов, характеризующая выраженность воспаления в СО (32,860,95%) снизилась по сравнению с животными 2+3-й серии
(68,340,76%) в 2 раза (Р(2+3)-40,001). При этом сумма баллов ПП СО
(8,070,25) была значительно меньше, чем у животных 2+3-й серии
(12,961,20; Р(2+3)-40,02). Сумма баллов ПП СХ (8,350,20) также достоверно
снижалась по сравнению с показателями 2+3-й серии (9,250,76; Р(2+3)-40,02).
Оценка регуляторного эффекта глюкозамина сульфатау животных
с АдА
Изменения у крыс, получавших хондропротектор дону, т.е. глюкозамина сульфат внутрь (5-я серия), были следующими. По окончании лечения
уменьшение окружности сустава не отличалось от данного показателя у
крыс, получавших Вобэнзим (4-я серия) (6,600,09 и 6,460,08 соответственно; Р4-50,2). Накожная температура снижалась статистически значимо, как
по сравнению с животными не получавшими препаратов (35,870,18 и
36,930,01 соответственно; Р(2+3)-50,001), так и по сравнению с животными
4-й серии, (Р4-50,001). Однако данный показатель оставался статистически
достоверно выше, чем у здоровых животных 1-й серии (Р1-50,001).
Гематологические показатели у крыс, получавших Дону (5-я серия),
были несколько лучше, чем в группе с Вобэнзимом (4 серия). Снижение СОЭ
(3,700,30) и увеличение количества эритроцитов (5,010,03) в крови по
сравнению с 4-й серией было статистически достоверным (Р4-50,02 и
Р4-50,001 соответственно). Количество лейкоцитов (13,170,13) по сравнению с 4-й серией несколько уменьшалось, но это уменьшение не было статистически достоверным (Р4-50,5). Следует отметить, что ни один из гематоло-
гических показателей у крыс, получавших Дону, к окончанию эксперимента
не нормализовался (Р1-50,001).
Уровень МДА в крови крыс под влиянием Доны (3,68 0,02) снизился в
1,6 раза по сравнению с животными без воздействия и с плацебовоздействием (2+3-й серии) (Р(2+3)-50,001). Однако нормализации содержания МДА не произошло (Р1-50,001). Между животными, получавшими Вобэнзим и Дону (4-я и 5-я серии), отмечена небольшая, но статистически значимая разница в снижении содержания МДА (3,370,13 и 3,68 0,02 соответственно; Р4-50,02).
Содержание ГАГ в сыворотке крови животных при использовании Доны (5-я серия) достоверно снижалось по сравнению с 2+3-й серией, приближаясь к здоровым по уроновым кислотам (1,790,07; Р(2+3)-50,001; Р1-50,001)
и достигая уровня контрольной серии (здоровые животные) по гексозам
(3,480,15; Р1-50,5). Не выявлено статистически достоверной разницы в содержании ГАГ сыворотки крови между крысами 4-й и 5-й серий (Р4-50,05
как по уроновым кислотам, так и по гексозам).
У подопытных крыс, получавших Дону, содержание ЦИК в сыворотке
крови имело лишь мало существенную тенденцию к снижению по сравнению
с 2+3-й серией, однако статистически достоверной разницы между показателями не выявлено (23,701,84; Р(2+3)-50,1).
В изменении клеточного состава СО выявлены такие же закономерности, что и у животных, получавших Вобэнзим, – увеличение количества
фибробластов, снижение количества гистиоцитов, лимфоцитов и плазмоцитов (Р(2+3)-50,001; Р(2+3)-50,001; Р(2+3)-50,001; Р(2+3)-50,01 соответственно).
При этом статистически достоверной разницы между 4-й и 5-й сериями не
выявлено (Р4-50,5). Функциональная активность воспалительно-клеточных
элементов снизилась в 2,1 раза (30,950,75%; Р(2+3)-50,001). Сумма баллов
ПП СО (7,560,18) и СХ (8,020,27) в 4-й и 5-й сериях также статистически
достоверно не различалась (Р4-50,5).
Оценка эффектов антигипоксанта у животных с АдА
У крыс, получавших антигипоксант - оксибутират натрия внутрисуставно (6 серия), наблюдалось более выраженное по сравнению с животными
4-й и 5-й серий уменьшение окружности суставов (5,550,12; Р4-60,001; Р560,001). Аналогично изменялся показатель «Накожная температура» в сравнении 4-й и 6-й серий (35,900,08; Р4-60,001). Однако при сравнении 5-й и 6й серий различий в накожной температуре не выявлено (Р5-60,5). Ни один из
этих показателей не достигал нормальных величин (Р1-60,001).
У крыс на фоне применения оксибутирата натрия (6 серия) отмечалось
наименее выраженное снижение СОЭ среди всех серий животных, получавших лечение (4,710,54), однако разница в показателях между сериями не
была статистически достоверной (Р4-60,5; Р5-60,1). Количество лейкоцитов
(13,130,03), также, снижалось по сравнению с 4-й и 5-й сериями статистически не достоверно (Р4-60,2; Р5-60,5). Количество эритроцитов (5,100,05)
было больше, чем в 4-й и 5-й сериях, но разница между 5-й и 6-й сериями не
была статистически достоверной (Р4-60,001; Р5-60,05).
Содержание в крови МДА у крыс 6-й серии (3,780,37) было в 1,6 раза
ниже, чем у животных, не подвергавшихся никакому фармакологическому
воздействию (Р(2+3)-60,001), однако в 1,3 раза выше нормы (Р1-60,05). Достоверных различий между показателями МДА 4-й, 5-й и 6-й серий не установлено (Р4-60,2; Р5-60,5).
Содержание ГАГ в сыворотке крови животных 6-й серии достоверно
снижалось по сравнению с 2+3-й серией, приближаясь к норме по уроновым
кислотам (2,200,14; Р(2+3)-60,001; Р1-60,001) и достигая нормы по гексозам
(3,940,27; Р1-60,2). При этом уровень ГАГ в 6-й серии был несколько выше,
чем в 4-й и 5-й сериях, но разница между сериями не была статистически достоверна (Р0,5 для всех серий).
Уровень ЦИК у крыс 6-й серии был наиболее высоким из всех животных экспериментальных серий (26,0710,20; Р(2+3)-60,5).
В микроскопическом составе СО происходили те же изменения, что и у
крыс 4-й и 5-й серий. Разница между сериями в процентном соотношении
фибробластов (26,151,62), гистиоцитов (25,780,67), лимфоцитов
(31,030,66) и плазмоцитов (15,040,32) не была статистически достоверной
(Р0,5 по всем показателям для всех серий). Функциональная активность
воспалительно-клеточных элементов снизилась в 2 раза (34,851,05%;. Р(2+3)6<0,001) Сумма балов ПП СО (7,240,24) и СХ (7,690,17) у животных 6-й
серии достоверно не отличалась от аналогичных показателей в 4-й и 5-й сериях (Р0,5).
Оценка сочетанного действия энзимов и глюкозамина у животных
с АдА
У крыс, получавших одновременно вобэнзим и дону внутрь (7 серия),
окружность сустава уменьшилась по сравнению с животными 2+3-й серии, в
среднем на 1,5 мм (5,120,09; Р(2+3)-70,001), наблюдалось снижение накожной температуры на 2,5 градуса (34,500,12; Р(2+3)-70,001). Уменьшение локальных признаков воспаления было статистически достоверно более выраженным, чем у животных, получавших только один из используемых препаратов (4-я-6-я серии). Однако нормализации ни окружности суставов, ни
накожной температуры достигнуто не было (Р1-70,001).
В показателях крови у крыс, получавших комбинированную терапию
двумя препаратами (7 серия) наблюдалась выраженная положительная динамика. У них произошла нормализация СОЭ (2,600,18) и количества лейкоцитов (12,810,15; Р1-70,1 по обоим тестам), количество эритроцитов
(5,200,02) оставалось несколько ниже нормы (Р1-70,001).
При биохимическом исследовании крови у этих животных по сравнению с крысами 2+3-й серии было выявлено снижение уровня МДА в 1,8 раза
(3,300,10; Р(2+3)-70,001). При этом по сравнению с животными, получавшими один из препаратов (4-я-6-я серии) снижение уровня МДА в 7-й серии
было более выраженным (Р4-70,5; Р5-70,01 Р6-70,001). Это можно расценить
как результат отчётливого улучшения метаболических процессов, в частности ПОЛ.
Торможение процесса воспалительной деструкции соединительнотканных структур суставов у животных 7-й серии подтверждалось снижением содержания ГАГ в сыворотке крови. При этом уровень ГАГ нормализовался,
как по уроновым кислотам, так и по гексозам (1,700,24;Р1-70,1 и 3,610,07;
Р1-70,5 соответственно).
У крыс 7-й серии наблюдалась тенденция к снижению содержания
ЦИК в сыворотке крови, однако, по окончании введения двух препаратов,
данный показатель оставался в среднем в 3-3,5 раза выше нормы (23,012,72;
Р1-7<0,001).
Изменения клеточного состава СО крыс 7-й серии, так же как и у животных 4-й-6-й серий отражали снижение степени выраженности воспалительного процесса. Количество фибробластов (27,450,94) увеличивалось достоверно более отчётливо, чем у животных, лечённых одним из препаратов,
снижение уровня лимфоцитов (31,961,15) и гистиоцитов (24,891,25), также, было более выраженным, однако, эти изменения не были статистически
достоверными (Р4-70,5 во всех случаях). Функциональная активность воспалительно-клеточных элементов снизилась по сравнению с 2+3-й серией в
2,49 раза (12,360,85%; Р(2+3)-70,001).
Сумма баллов ПП СО у животных , получавших комбинацию двух
препаратов , снизилась по сравнению с 2+3-й серией в 2,1 раза (6,190,21;
Р(2+3)-7<0,001), ПП СХ – в 1,5 раза (6,280,19; Р(2+3)-70,001). Уменьшение
суммы баллов ПП СО и СХ по сравнению с животными, получавшими один
препарат было статистически достоверным (Р0,001 для обоих показателей
во всех сериях).
Оценка сочетанного применения вобэнзима, доны внутрь и оксибутирата натрия внутрисуставно при АдА
Комбинированное введение регуляторных препаратов оказывало
наиболее выраженное влияние на местные признаки воспаления у подопытных животных (8-я серия) .
У животных данной серии наблюдалось исчезновение отёка мелких суставов правой задней лапы и значительное уменьшение отёка в области правого коленного сустава. Окружность коленного сустава у них оставалась всего на 0,29 мм больше, чем у здоровых животных (4,440,05; Р1-80,01),
накожная же температура нормализовалась (34,100,05; Р1-80,5).
Из гематологических показателей у животных, получавших все 3 препарата, отмечена значительная положительная динамика СОЭ, а также числа
лейкоцитов и эритроцитов.
Количество лейкоцитов (11,900,51) и СОЭ (2,700,32) соответствовали уровню здоровых животных (Р1-80,2 по обоим тестам), а количество
эритроцитов (5,950,09) оставалось несколько пониженным, однако оно было
близким к норме (Р1-80,01).
Содержание МДА в сыворотке крови крыс 8-й серии по окончании
курса лечения нормализовалось полностью (3,300,10; Р1-80,5), что позволило сделать вывод о нормализации обменных процессов и, в частности ПОЛ.
Изучение показателей содержания ГАГ в сыворотке крови экспериментальных животных после сочетанного воздействия всех трёх препаратов
установило нормализацию данного параметра, как по уроновым кислотам так
и по гексозам (1,530,07; Р1-80,05 и 3,310,47; Р1-80,5 соответственно).
Уровень ЦИК в сыворотке крови у животных 8-й серии снизился в 1,8
раза по сравнению с животными, не получавшими фармакологического воздействия (16,604,5; Р(2+3)-80,01; Р1-80,001). Данный показатель оставался в
2 раза выше нормы, однако, это наиболее значительная положительная динамика в сравнении со всеми опытными сериями. Высокий уровень содержания
ЦИК в крови у животных 8-й и предыдущих серий можно объяснить замедленной ответной реакцией иммунологических процессов по сравнению с общими признаками воспаления, гематологическими и биохимическими показателями.
Клеточный состав СО у животных 8-й серии (43,580,97% фибробластов, 23,640,26% гистиоцитов, 22,530,74% лимфоцитов, 10,250,68% плазмоцитов) был наиболее близким к норме, хотя нормализации данного показателя достигнуто не было. Это может быть объяснено более медленными
структурными изменениями по сравнению с общеклиническими, гематологическими и биохимическими показателями.
Функциональная активность воспалительно-клеточных элементов снизилась в среднем в 9,8 раза (6,340,56%; Р(2+3)-80,001).
Сумма баллов ПП СО и СХ в 8-й серии также была наименьшей
(4,620,49 и 4,260,50; Р(2+3)-80,001).
Подводя итог определения влияния каждого из изучаемых препаратов
и их комбинаций на регуляцию воспалительно-деструктивных процессов у
лабораторных крыс с АдА, мы сочли целесообразным для большей информативности свести воедино все полученные результаты (рис.1)
Из данной таблицы видно, что воздействие вобэнзимом, доной и оксибутиратом натрия (каждый препарат в отдельности) способно нормализовать
уровень ГАГ в сыворотке крови.
Сочетанное применение вобэнзима и доны, кроме того, нормализовало
величину таких показателей выраженности воспаления в организме животных как СОЭ и количество лейкоцитов.
Совместное же применение вобэнзима, доны и оксибутирата натрия
оказало максимально выраженный противовоспалительный эффект, нормализуя, кроме вышеуказанных, тестов, такой местный показатель воспаления в
суставе, как «Накожная температура», гематологические показатели СОЭ и
«Количество лейкоцитов», нормализовало выраженность нарушения метаболических процессов, в частности ПОЛ (по МДА), сравняло с нормой выраженность воспалительной деструкции тканей суставов (ГАГ по уроновым
кислотам и по гексозам), значительно, в 1,8 раза, снизило напряжённость
иммунологических процессов (по ЦИК).
Препараты
Воб.
Дона
ОБН
4-я
серия
5-я
серия
6-я
серия
Воб.м + Воб.зим +
Дона
Дона+ОБН
7-я
8-я
серия
серия
1.
1.1
Показатели
Местные:
а)окружность
сустава
1.2
б)накожная
температура
↓○ ↓○ ↓○ ↓○
2.
2.1
2.1.1
Лабораторные:
Гематол.
а)СОЭ
↓○ ↓○ ↓○
2.1.2
б)эритроциты
2.1.3
в)лейкоциты
2.2
2.2.1
Биохимические:
МДА
2.2.2
ГАГ:
2.2.2.1 по уроновым
кислотам
2.2.2.2 по гексозам
2.3
2.3.1
Иммунологический
ЦИК
↓○ ↓○ ↓○ ↓○ ↓○
□
↑○ ↑○ ↑○ ↑○
↓○ ↓○ ↓○ □
↓○ ↓○ ↓○ ↓○
↓○ ↓○ ↓○ □
□ □ □ □
↓○ ↓○ ↓○ ↓○
□
□
↑○
□
□
□
□
↓○
Рис. 1 Возможность нормализации местных и лабораторных показателей при разных видах регуляторных вмешательств при АдА у крыс (условные обозначения:
□ – нормализация показателя в сравнении с 2+3-й серией;
↓○ – стат. достоверное снижение показателя в сравнении с 2+3-й серией;
↑○ – стат. достоверное повышение показателя в сравнении с 2+3-й серией)
Нами также отмечена общая положительная тенденция действия всех
препаратов в отдельности и их комбинаций на морфологические признаки
воспалительного повреждения тканей опытных суставов.
Эта тенденция заключалась в том, что каждый препарат в отдельности,
статистически значимо, с высокой степенью достоверности, снижал все изученные нами морфологические показатели, но не мог их нормализовать. (рис.
2, 3).
200
%%
159,55
150
100
58,72
55,63
63,49
55,75
50
0 0 0 0
0
-10,18
-10,24
-17,07
-5,55
-10,93 -16,74
-9,41
-15,03 -16,9
-50
А
Ад
32+
е
ац
пл
ь
ол
тр
он
к
бо
б
Во
А+
Ад
зи
ен
м
до
А+
Ад
5
на
ти
бу
си
ок
+
А
Ад
6-
т
ра
б
во
А+
д
А
7-
-12,54
-16,97
-12,48 -13,26
-38,3
на
до
м+
и
з
ен
е
об
+в
А
Ад
8-
ат
ир
плазмоциты
лимфоциты
гистиоциты
фибробласты
нз
+о
на
до
+
им
ут
иб
кс
-43,37
Рис. 2. Особенности влияния различных препаратов и их комбинаций
на морфологические характеристики клеточного состава СО опытных
коленных суставов крыс в сравнении с крысами 2+3-й серии в %%
%%
0
0
0
-10
-9,73
-20
-13,3
-16,86
-30
-32,11
-40
-33,83
-50
-41,76
-44,22
-52,31
-60
-53,95
-64,04
-70
ль
ро
нт
Ад
32+
А
-ко
бо
це
а
пл
А
4-
н
бе
во
+
дА
м
зи
на
до
А+
д
А
5-
А+
Ад
6-
с
ок
у
иб
т
ра
ти
н
бе
во
+
дА
-А
7
на
до
м+
зи
н
бе
во
+
дА
-А
н
до
м+
зи
ок
а+
с
т
ра
ти
у
иб
8
Рис. 3. Особенности влияния различных препаратов и их комбинаций
на сумму баллов признаков поражения тканей коленных суставов крыс в %%
(левые столбики – СО, правые-СХ)
Максимальное снижение выраженности всех морфологических показателей воспалительного повреждения тканей опытного сустава у крыс с АдА
произошло при совместном использовании всех трёх применённых препаратов – полифермента, хондропротектора и антигипоксанта.
Таким образом, вследствие совместного применения полиферментного
препарата (вобэнзим), хондропротектора (дона) и антигипоксанта (оксибутират натрия) у лабораторных крыс с АдА получен максимально выраженный
эффект. Он характеризовался полным восстановлением внешнего вида животных, их двигательной активности, функции суставов и накожной температуры опытного сустава. При этом нормализовались картина крови, (СОЭ,
лейкоциты), ПОЛ (МДА), воспалительно-деструктивные процессы в организме (ГАГ), резко, в 1,8 раза снизилась напряжённость аутоиммунных реакций (ЦИК).
Нельзя не отметить, что параллельно снижению выраженности общих
признаков воспаления, происходило разнонаправленное изменение количества фибробластов (увеличение) и функциональной активности клеток воспаления: лимфоцитов и плазмоцитов (снижение).
Учитывая различную функциональную направленность действия этих
двух групп клеток, можно считать, что по мере снижения активности клеток
воспаления, под влиянием различных препаратов и их комбинаций, снижалось повреждение СО, а одномоментное увеличение числа фибробластов,
продуцирующих различные фибриллярные элементы, приводило к активации
процессов поствоспалительного фиброзирования СО, как одного из механизмов саногенеза при АА.
ВЫВОДЫ
1. Полиферментный препарат Вобэнзим при внутрижелудочном введении крысам с адъювантным артритом оказывает регуляторное противовоспалительное действие, которое проявляется уменьшением окружности воспаленного сустава, снижением показателей СОЭ, уменьшением лейкоцитоза ,
снижением уровня МДА , ГАГ и ЦИК и снижением суммы баллов , характеризующих морфометрические признаки тканевого воспаления. Однако полной нормализации показателей не происходит.
2. Хондропротектор Дона при адъювантном артрите оказывает противовоспалительный эффект, подобно Вобэнзиму. Однако по сравнению с Вобэнзимом он действует более активно на гематологические показатели, в
меньшей степени влияет на уровень ЦИК. Полный нормализующий эффект
достигается лишь в отношении ГАГ , определяемых по гексозам.
3.Внутрисуставное введение антигипоксанта «Оксибутират натрия»
крысам с адъювантным артритом статистически достоверно влияет на такие
местные и общие показатели воспаления как накожная температура сустава,
окружность сустава, но не оказывает существенного воздействия на гематологические маркеры (СОЭ, количество лейкоцитов в крови), и как и преды-
дущие два воздействия не приводит к полной нормализации показателей, за
исключением уровня гликозаминогликанов в сыворотке крови.
4. Характер изменения общелабораторных, биохимических, интегрального иммунологического и гисто-морфометрических критериев при АдА у
крыс на фоне сочетанного применения вобэнзима и доны связан со статистически достоверным уменьшение окружности сустава и увеличением количества эритроцитов в крови. Достигается нормализация показателей
накожной температуры сустава, СОЭ, количества лейкоцитов в крови и
уровня гликозаминогликанов в сыворотке крови.
5. Сочетанное внутрижелудочное введение полиэнзимного препрата
«Вобэнзим» и хондропротектора «Дона» с внутрисуставным введением антигипоксанта «Оксибутират натрия» оказывает максимально выраженный противовоспалительный эффект по сравнению с введением отдельно взятых
препаратов: статистически достоверно уменьшается окружность сустава и
ЦИК, происходит полная нормализация таких маркеров как накожная температура сустава, скорость оседания эритроцитов, количество лейкоцитов в
крови, показатели перекисного окисления липидов (по малоновому диальдегиду) и гликозаминогликанов в сыворотке крови. Морфологические признаки
поражения синовиальной оболочки и суставного хряща наиболее выражено
поддавались коррекции при использовании всех 3 субстанций одновременно.
Получено статистически достоверное изменение клеточного состава синовиальной оболочки: увеличение количества фибробластов, уменьшение количества гистиоцитов, лимфоцитов и плазмоцитов с уменьшением функциональной активности клеток воспаления.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Федотова, М.В. Экспериментальное обоснование целесообразности
сочетанного использования вобэнзима и доны при аутоиммунном артрите /
М.В.Федотова, В.А.Митрофанов, Н.М.Овчинникова // Научно-практическая
ревматология. – 2000. - № 4. – С. 81.
2. Федотова, М.В. Экспериментальная оценка противовоспалительной
активности препарата вобэнзим при аутоиммунном артрите / М.В.Федотова //
Материалы 61 науч. конф. молодых учёных и студентов. – Саратов, 2000. –
С. 51.
3. Противовоспалительное и хондропротективное действие Вобэнзима
и Дона при аутоиммунном артрите / В.А.Митрофанов, Я.А.Кац,
Н.М.Овчинникова, М.В.Федотова // Человек и лекарство: тез. докл. VIII Рос.
нац. конгр. – М., 2001. – С. 284.
4. Оригинальная технология хондропротекции покровного хряща при
экспериментальном
аутоиммунном
артрите
/
В.А.Митрофанов,
Н.М.Овчинникова, М.В.Федотова, Б.Я.Позднякова // Новые технологии в медицине: тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф. – Саратов, 2001. – С. 184-185.
5. Оригинальная технология хондропротекции при аутоиммунном артрите (экспериментальное исследование) / И.И.Жадёнов, В.А.Митрофанов,
Н.М.Овчинникова и др. // VII съезд травматологов-ортопедов России: тез.
докл.: в 2 т. - Новосибирск, 2002. – Т. 1. - С. 417.
6. Новая технология хондропротекции при аутоиммунном артрите
(экспериментальное исследование) / И.И.Жадёнов, В.А.Митрофанов,
Н.М.Овчинникова [и др.] // Новые технологии в травматологии и ортопедии:
тез. докл. Рос. науч.-практ. конф. - Якутск, 2002. - С.67.
7. Федотова, М.В. Экспериментальное обоснование возможности профилактики воспалительной деструкции суставных тканей при аутоиммунных
артритах / М.В.Федотова, Е.В.Гладкова // Новые технологии в диагностике и
лечении травм и заболеваний опорно-двигательной системы: материалы
межрег. конф. молодых учёных, посв. 100-летию Я.Н.Родина. – Саратов,
2003. - С. 144-148.
8. Влияние препаратов ферментного, антигипоксического и хондропротективного действия на воспалительную деструкцию суставных тканей при
аутоиммунном
артрите
/
В.А.Митрофанов,
Н.М.Овчинникова,
Б.Я.Позднякова [и др.] // Актуальные вопросы травматологии, ортопедии и
вертебрологии: сб. науч. тр., посв. 60-летию СарНИИТО. – Саратов, 2005. С. 62-63.
9. Способ профилактики воспалительной деструкции суставных тканей
при адъювантном артрите / В.А.Митрофанов, Н.М.Овчинникова,
Б.Я.Позднякова, М.В.Федотова // Аллергология и иммунология. – 2006. - Т.7,
№ 3. - С. 270.
10. Федотова, М.В. Медикаментозная профилактика воспалительной
деструкции суставных тканей при аутоиммунном артрите / М.В.Федотова,
В.А.Митрофанов, Н.М.Овчинникова // Молодые ученые: новые идеи и открытия: материалы Всерос. науч-практ. конф., посв. 85-летию со дня рожд.
акад. Г.А.Илизарова и 35-летию Рос. науч. центра «Восстановительная травматология и ортопедия». - Курган, 2006. - С. 169-171.
11. Федотова, М.В. Способ лечения воспалительной деструкции суставных тканей при адъювантном артрите / М.В.Федотова, В.А.Митрофанов,
Н.М.Овчинникова // Травматология и ортопедия XXI века: сб. тез. докл. VIII
съезда травматологов-ортопедов России: в 2 т. – Самара: ОФОРТ, 2006. –
Т. I. – С. 639-640.
12. Федотова, М.В. Способ лечения воспалительной деструкции суставных тканей при адъювантном артрите / М.В.Федотова // Молодежь и
наука: итоги и перспективы: материалы межрег. науч.-практ. конф. студентов
и молодых учёных с междунар. участ. – Саратов, 2006. – С. 289.
13. Федотова, М.В. Профилактика воспалительной деструкции суставных тканей в эксперименте / М.В.Федотова, В.А.Митрофанов // Травматология и ортопедия XXI века: материалы науч.-практ. конф. молодых учёных,
посв. 80-летию проф. Н.П.Решетникова. – Саратов, 2007. - С. 84-86.
14. Федотова, М.В. Оптимальная технология для морфологической
оценки выраженности воспалительной деструкции синовиальной оболочки и
покровного хряща при адъювантном артрите / М.В.Федотова,
В.А.Митрофанов // Травматология и ортопедия XXI века: материалы науч.практ. конф. молодых учёных, посв. 80-летию проф. Н.П.Решетникова. – Саратов, 2007. - С. 86-88.
15. Федотова, М.В. Профилактика воспалительной деструкции суставных тканей при экспериментальном артрите / М.В.Федотова,
В.А.Митрофанов, Н.М.Овчинникова // Актуальные проблемы современной
ревматологии: сб. науч. работ. – Волгоград, 2007. - С. 115-116.
16. Профилактика воспалительной деструкции суставных тканей при
аутоиммунном артрите /М.В.Федотова, В.А.Митрофанов, Н.М.Овчинникова,
Б.Я.Позднякова// Материалы юбил. Рос. науч. конф. с междунар. участ., посв.
175-летию со дня рожд. С.П.Боткина. – СПб., 2007. – С. 162-163.
17. Функционально-морфологический ответ экспериментальных животных на введение полиферментного, хондропротективного и антигипоксического препаратов / М.В.Федотова, В.А.Митрофанов, Н.М.Овчинникова,
Б.Я.Позднякова // Актуальные вопросы экспериментальной биологии и медицины: материалы II съезда травматологов-ортопедов Уральского Федерального округа. – Курган, 2008. - С. 309-310.
18. Федотова, М.В. Регуляторные эффекты полиферментного, хондропротективного и антигипоксического препаратов при адъювантном артрите в
эксперименте / М.В.Федотова // Вестник Саратовского госагроуниверситета
им. Н.И.Вавилова. – 2008. - № 8. – С. 52-57.
Изобретение:
1. Пат. 2169560 Российская Федерация, МПК А61К31/045,
А61К317008, А61К31/70, А61Р9/02. Способ лечения аутоиммунного артрита
/ Федотова М.В.; Заявитель и патентообладатель ФГУ «СарНИИТО Росмедтехнологий». - № 0000114852; заявл. 13.06.2000; опубл. 27.06.01, Бюл. № 18.
Научное издание
Федотова Мария Вадимовна
Влияние некоторых естественных регуляторов метаболизма на морфофункциональных характеристики суставов у крыс в норме и экспериментальном артрите: Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.13 – физиология. – Астрахань: АГУ, 2008. – 24 с.
Подписано в печать
2008 г.
Формат 60x84 1/16. Объем - 1,0 п.л.
Тираж 100 экз. Заказ №
___________________________________________________
Издательство