Тема занятия: Красители. Классификация. Приготовление. ... Тинкториальные свойства клеточных структур. Оценка ...

Тема занятия: Красители. Классификация. Приготовление. Артефакты.
Тинкториальные свойства клеточных структур. Оценка качества цитологического
препарата. Стандартная световая микроскопия фиксированных, окрашенных
мазков. Распространенные методы окраски цитологических препаратов. Экспресс –
методы окраски цитологических препаратов. Цитохимические методы исследование,
цель, назначение. Цитохимические реакции.
Цель: Изучить использование различных видов окраски для выявления клеточных
структур клетки.
Перечень знаний и практических навыков:
1. Знать классификацию красителей.
2. Иметь представление о технике приготовления красителей.
3. Знать распространенные методы окраски цитологических препаратов.
4. Владеть навыками микроскопии фиксированных, окрашенных мазков.
5. Уметь оценивать качество цитологического препарата.
6. Знать основные цитохимические методы исследований.
Красители,
используемые
в
цитологической
классифицировать по следующим критериям:
диагностики,
можно
I. По происхождению:
1. Естественные – к которым относятся краски растительного и животного
происхождения.
2. Искусственные (полученные при помощи химического синтеза).
Краской растительного происхождения является гематоксилин, который
добывается из кампешевого дерева, растущего в Америке и в Армении.
К краскам животного происхождения относится кармин, который добывается из
насекомых кошенили, живущих на кактусовых деревьях в Мексике, Армении и др.
В настоящее время большинство красок готовят синтетически.
II. По химическому составу:
1. Кислые – кислоты и кислые соли (эозин, кислый фуксин).
2. Основные – основные соли (гематоксилин, азур 2, кармин).
3. Нейтральные – смесь двух красителей: основного (азур 2) и кислого (эозин).
В качестве примера можно привести наиболее употребительный краситель
гематоксилин, который окрашивает ядра клеток в фиолетовый цвет, и кислый краситель –
эозин, окрашивающий цитоплазму в розово-желтый цвет. Избирательное сродство
структур к определенным красителям обусловлено их химическим составом и
физическими свойствами. Структуры, хорошо окрашивающиеся кислыми красителями,
называются оксифильными, а окрашивающиеся основными – базофильными.
Например, цитоплазма клеток чаще всего окрашивается оксифильно, а ядра клеток –
окрашиваются базофильно. Структуры, воспринимающие как кислые, так и основные
красители, являются нейтрофильными (гетерофильными).
4. Индифферентные красители (судан III, судан IV).
5. Флюорохромы. Группа красителей, способных флюоресцировать при той или
иной длине волны возбуждающего света. Несмотря на то, что мы выделили эти красители
в самостоятельную группу, большинство из них следовало бы отнести к
цитоплазматическим или, реже, к ядерным красителям. Так, например, флюоресцеин,
поглощая свет с длиной волны 420-490 нм, излучает свет с длиной волны 520-540 нм. При
этом объекты, окрашенные флюоресцеином в люминесцентном микроскопе, светятся
зеленым светом.
III. По способности окрашивать определенные цитологические структуры (по
тинкториальным свойствам):
1. Ядерные (окрашивание ядра). Представляют собой едва ли не самую
многочисленную группу красителей вообще. Основная цель обработки данными
веществами состоит в том, чтобы выявить материал, близкий к ДНК или РНК. По
механизму окрашивания ядерные красители делят на две группы, принципиально
отличающиеся друг от друга. Это основные красители и протравные красители.
Применение основных красителей (все они являются «катионными») основано на
образовании соединений типа солей в присутствии ДНК или РНК. К ним относятся:
- Азокрасители (янус зеленый В, бисмарк коричневый).
- Сафранины (сафранин Т, сафранин А, сафранин О, феносафранин).
- Оксазиновые красители (бриллиантовый крезиловый синий, крезиловыйпрочный
фиолетовый).
-Тиазины (тионин;азуры С, А, В; метиленовый синий; толуидиновый синий).
- Трифенилметановые (парарозанилин, кристаллический фиолетовый, метиловый
фиолетовый, метиловый зеленый, альциановый синий).
В основу методик применения протравных красителей легла способность ряда
соединений образовывать ярко окрашенные лаки с ионами металлов – лития, железа,
хрома. В эту группу входят гематоксилин, кармин (карминовая кислота), ализаринцианин,
ализарин, бразиллин, галлоцианин и т.д.
В зависимости от того, ион какого металла входит в состав протравного реагента,
конечный цвет окраски может меняться от красного до зеленоваточерного.
2. Цитоплазматические (окрашивающие цитоплазмы). Эта группа красителей
представлена большей частью сульфоновыми и карбоновыми кислотами, которые в
тканях прочно связываются с белками и в результате окрашивают большинство
внеядерных структур. К ним относятся: эозин, пикрофуксин, аурамин О, эритрозин, конго
красный и т.д.
Цитоплазматические красители в сочетании с фосфорновольфрамовой кислотой,
фосфорномолибденовой кислотой могут окрашивать специфические структуры клеток и
тканей, например, коллаген. В большинстве методик цитоплазматические красители
используются для контраста после окраски ядерными красителями. Несколько реже
прибегают к такому свойству цитоплазматических красителей, как способность
окрашивать живые клетки без нарушения функций последних (так называемые витальные
красители); в таких методиках применяют очень большие разведения красителей – от
1:1000 до 1:20000.
3. Специальные, окрашивающие избирательно определенных структур клеток – судан
III (окрашивает жир в оранжевый цвет), осмиевая кислота (импрегнируемый ею жир
окрашиватся в черный цвет).
Метахромазия – свойство клеток и тканей окрашиваться в цветовой тон,
отличающийся от цвета самого красителя, а также свойство изменённых клеток и тканей
окрашиваться в иной цвет по сравнению с нормальными клетками и тканями.
Обусловлена полимеризацией молекул красителя под влиянием свободных
отрицательных зарядов клеток или ткани. Отмечается при патологии соединительной
ткани, опухолевом росте, некробиотических изменениях и в ряде других случаев.
Световая микроскопия
Микроскопирование – основной метод изучения клеток. Современные микроскопы
представляют собой разнообразные сложные оптические системы, обладающие высокой
разрешающей способностью и позволяющие изучать очень тонкие детали строения
клеток. Размер самой маленькой структуры, которую можно видеть в микроскопе,
определяется наименьшим разрешаемым расстоянием (d0). В основном оно зависит от
длины световой волны λ, и эта зависимость приближенно выражается формулой d0 = λ / 2.
Таким образом, чем меньше длина световой волны, тем меньше разрешаемое расстояние и
тем меньшие по размерам структуры можно видеть в препарате (т.е. выше «разрешение»
микроскопа). Понятие «увеличение микроскопа» относится к его оптической системе и
выражается в произведении увеличений объектива и окуляра. Однако «разрешение»
микроскопа зависит от характеристик объектива и не зависит от окуляра.
Для изучения цитологических препаратов чаще применяют обычные световые
микроскопы различных марок, когда в качестве источника освещения используют
естественный или искусственный свет. Минимальная длина волны видимой части спектра
света соответствует примерно 0,4 мкм (фиолетовый спектр). Следовательно, для обычного
светового микроскопа разрешаемое расстояние равно приблизительно 0,2 мкм, а общее
увеличение (произведение увеличения объектива на увеличение окуляра) достигает 2000
раз.
Устройство светового микроскопа:
В микроскоп входят 3 системы: - оптическая,
- осветительная,
- механическая.
1. Оптическая система включает объектив и окуляр.
а) Объектив (1) – это система линз, вставляемая в тубус (2) снизу и
непосредственно направляемая на объект (отсюда - и название).
Обычные увеличения объектива:
х8, х20, х40 (сухие объективы), х90 (иммерсионный объектив).
При использовании последнего объектива его следует погрузить в каплю кедрового
(иммерсионного) масла, нанесённую на покровное стекло препарата.
б) Окуляр (3) вставляется в тубус сверху. Применяются окуляры с увеличением:
х7, х10, х15.
в) Результирующее увеличение микроскопа – произведение увеличений объектива
и окуляра, например: (х20) • (х10) = 200 раз.
г) Таким образом, функция оптической системы – формирование увеличенного
изображения препарата на сетчатке глаза наблюдателя.
2. Осветительная система – источник света, зеркало, конденсор и диафрагма.
а) Источник света (4) может быть встроен в микроскоп, а может находиться и вне
микроскопа (пример – обычная настольная лампа).
б) Зеркало (5) собирает лучи от источника и направляет их на препарат снизу.
Одна поверхность зеркала – плоская, вторая – вогнутая; последняя используется
при искусственном освещении.
в) Конденсор (6) состоит из линз, которые фокусируют лучи света на препарате.
Поднимая и опуская конденсор (с помощью винта), можно настраивать фокусировку
лучей.
г) Диафрагма (7) вмонтирована в конденсор; это система непрозрачных пластинок
с отверстием посередине. Она ограничивает световой поток, падающий на препарат. При
использовании объективов с большим увеличением отверстие диафрагмы следует
уменьшить - для ослабления сферической аберрации.
3. Механическая система – тубус (2), штатив (8), колонка (9) и предметный столик
(10).
а) С колонкой связаны макро- и микрометрический винты.
Они поднимают и опускают тубус для фокусировки изображения объекта на
сетчатке глаза наблюдателя.
В итоге, световые лучи проходят следующий путь:
источник света (4) зеркало (5) конденсор (6) диафрагма (7) препарат
объектив (1) тубус (2) окуляр (3).
Т.е. микроскопия ведётся в проходящем свете, для чего препарат должен быть
достаточно тонким. Заметим также, что микроскоп даёт перевёрнутое изображение
объекта.
Для получения правильной информации необходимо последовательное
микроскопическое изучение всего цитологического мазка. Обзор цитологической картины
проводят под малым увеличением (х10), детализацию выбранных объектов – под
увеличением (х20, х40); далее микроскопическое изучение мазка выполняется под
иммерсионным объективом (х90, х100). Вначале проводят систематическое изучение
полей зрения по краю мазка. Затем мазок исследуют методом «систематического
перекрестного двухразового шага», который позволяет практически без пропуска изучить
каждый миллиметр площади препарата.
Подсобными методами является фазово-контрастная и люминесцентная
микроскопия с использованием флюорохрома, которая применяется преимущественно
при массовых профилактических осмотрах женщин. Люминесцентный метод позволяет
видеть клетки и различать их по цвету свечения, возникшего под влиянием флюорохрома,
фазово-контрастный – рассмотреть особенность клеток, не прибегая к фиксации и окраске
(в нативном состоянии) даже с иммерсионной системой. Оба метода не требуют много
времени на подготовку препарата, однако и не сокращают срока его исследования и не
всегда дают возможность уточнить диагноз. Метод нативного препарата при световом
микроскопе в цитологическом исследовании играет
используется в общем клинико-лабораторном анализе.
ориентировочную
роль
и
Оценка качества окрашенного цитологического препарата.
Качественное окрашивание позволяет правильно идентифицировать клеточные
элементы мазка и оценить их особенности при микроскопии.
Хороший качественно окрашенный мазок должен:
- равномерно окрашиваться;
- не содержать артефакты (рыхлые скопления краски) и сморщенные клетки;
- иметь в достаточном количестве равномерно распределенные клетки (все участки
мазка должны хорошо просматриваться и не содержать "толстые участки", содержащие
непросматриваемые (плохо просматриваемые) скопления или комплексы клеток);
- окрашивать элективно структуры цитоплазмы, ядра, ядерного хроматина,
ядрышек.
В основе окрашивания клеток лежат физико-химические процессы (диффузия,
адсорбция, абсорбция, растворимость и др.), происходящие как в красителе, так и в
микроструктурах.
При применении любой методики окрашивание мазка важно точно соблюдать
последовательность процедур приготовления растворов и временные промежутки в
течение процесса окрашивания.
Существующие в продаже партии красителя имеют различную интенсивность
окраски. Это обязывает опытным путём установить оптимальные концентрации
(разведение) и время окрашивания для каждого флакона красителя, который
устанавливает при окрашивании серии препаратов растворами с различной концентрацией
красителя, меняя длительность его воздействия. При приготовлении растворов
необходимо учитывать рН воды: она должна быть нейтральной (рН 6,8–7,2) что
обеспечивается использованием буферных растворов.
Рекомендуемые методы окрашивания цитологических мазков: азур-эозиновый, по
Романовскому-Гимзе, Лейшману, Маю-Грюнвальду, Паппенгейму; гематоксилинэозиновый, метод Папаниколау.
Самым распространённом методом окраски является окраска гематоксилинэозином. Сочетает в себе основной и кислый красители, поэтому позволяет выявить почти
все клетки и многие неклеточные структуры (ядра приобретают сине-фиолетовый цвет,
цитоплазма – желтовато-розовый цвет). Гематоксилин сам по себе не является красящим
веществом. Для того чтобы приготовить краску, гематоксилин подвергают окислению (по
методу Эрлиха, Майеру, Караци – калийными квасцами), в результате чего он
превращается в красящее вещество – гематеин (сине-фиолетовый краситель). При этом на
окисление гематоксилина требуется от 10 дней до 2–3 недель. Этот процесс ускоряют с
помощью солей алюминия, хрома, железа и др.
• Квасцовый гематоксилин Майера приготовляют следующим образом: в литре
дистиллированной воды растворяют 1 г гематоксилина, 0,2 г йодновато-кислого натрия
(KaJ03) и 50 г калийных квасцов. Затем добавляют 50 г хлоралгидрата и 1 г
кристаллической лимонной кислоты. Раствор годен для немедленного употребления и
долгое время хорошо сохраняется. Препарат красят в течение 5–10 минут, после чего 10
минут промывают в проточной воде.
• Квасцовый гематоксилин по Эрлиху. Для приготовления красителя 2 г
гематоксилина растворяют в 100 см3 96-градусного спирта и добавляют 100 см3 воды, 100
см3 химически чистого глицерина, 3 г калийных квасцов и 10 см3 уксусной кислоты.
Краситель должен «созревать» примерно 14 дней. Раствор сохраняет свою
красящую силу долгое время. Если вместо гематоксилина взять 0,25–0,5 г гематина, то
краситель пригоден к употреблению тотчас же после изготовления. Окрашивание
производят так же, как и гематоксилином Майера. Ядра окрашиваются в темно-синий
цвет.
• Квасцовый гематоксилин по Караци. Гематоксилина – 0,5 г, калийных квасцов – 25г,
нодноватокислого калия КГО3 – 0,01 г, глицерина – 100 см3, дистиллированной воды – 400
см3.
Преимуществом гематоксилиз-эозиновых красителей является выраженное
окрашивание ядер с атипией, в связи с чем этот метод хорошо использовать для
исследования мазков при скрининге.
Окраска азур-эозиновыми красителями.
Метод окрашивания по Романовскому (азур-эозиновой смесью) в разных
лабораториях используется в разных модификациях – по Паппенгейму (Май-ГрюнвельдуГимзе), Лейшману, Романовскому-Гимзе и т.д. Преимущество метода является четкое
прокрашивание ядер, вследствие чего хорошо просматриваются структуры хроматина, а
также бактериальная флора и простейшие.
Окраска по Романовскому-Гимзе. Краситель состоит из щелочной части (азур II –
ярко-синий цвет), и кислой части (эозин – розово-красный цвет).
В настоящее время используется готовый краситель Романовского-Гимзе, из
которого перед началом работы готовят рабочий раствор из расчета 1 капля краски на 1
мл дистиллированной воды.
Высохший фиксированный мазок помещается в кювету с рабочим раствором
краски на 25–40 минут (конкретное время устанавливается опытным путем для каждой
партии красителя). Бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма
клеток – в голубой, ядра – в красный. При окрашивании простейших их цитоплазма
приобретает голубой цвет, а ядра – красно-фиолетовый. Результаты окрашивания мазков
крови:
 Ядра клеток – красно-фиолетовые.
 Эозинофильные гранулы – красновато-коричневые.
 Базофильные гранулы – синие.
 Нейтрофильные гранулы – фиолетовые.
 Цитоплазма лимфоцитов – голубая.
 Эритроциты – бледно-красные.
 Тромбоциты – наружная часть синяя (более светлая); внутренняя – фиолетовая
(более темная).
Окраска по Маю-Грюнвальду. Данный метод очень удобен для визуализации
гранулоцитов. Для окрашивания применяется готовый раствор эозин-метиленового синего
по Маю-Грюнвальду. Мазок без предварительной фиксации заливают красителем, через 5
минут промывают и высушивают.
 Лимфоциты – ядра: сине-фиолетовые; цитоплазма: голубая.
 Моноциты – ядра: сине-фиолетовые; цитоплазма: серо-голубая.
 Гранулоциты – ядра: сине-фиолетовые; гранулы: красные, фиолетовые, темносиние (зависит от типа).
 Тромбоциты – наружная часть голубая; внутренняя – фиолетовая.
 Эритроциты – розовые.
Окраска по Паппенгейму. Представляет собой комбинацию двух предыдущих
методов. Сухие нефиксированные мазки помещаются в кювету с раствором МаяГрюнвальда на 3–5 минут. После этого контейнер с мазками ополаскивается
дистиллированной водой, после чего мазки помещаются в кювету с разведенным
раствором Романовского-Гимзы на 20–30 минут. После этого мазки промываются
проточной водой и высушиваются.
 Ядра клеток – красно-фиолетовые.
 Цитоплазма лимфоидных клеток – светло-синяя.
 Лимфоидная азурная грануляция – ярко-синяя.
 Миелоидная азурная грануляция – фиолетовая.
 Нейтрофильные гранулы – светло-фиолетовые.
 Эозинофильные гранулы – красные, красно-коричневые.
 Базофильные гранулы – темно-фиолетовые, черные.
 Эритроциты – розовые (полихроматофильные эритроциты - синеватые).
 Тельца Жолли – красновато-фиолетовые.
 Тельца Ауэра – ярко-красные.
Методика окраски по Лейшману. Высушенные на воздухе препараты заливают
краской Лейшмана на 3 мин., при этом препарат одновременно фиксируется. После этого
промывают водопроводной водой и заливают азур-эозиновой смесью (40 мл 0, 1% азура II
и 30 мл 0,1% эозина К) на 15–20 мин. Затем промывают водопроводной водой,
высушивают на воздухе и микроскопируют. Используется для выявления малярийных
плазмодиев.
Экспресс – методы окраски цитологических препаратов.
Окраски по Алексееву. Ответ дается уже через 5–10 минут. Метод Алексеева
предусматривает ускоренную обработку цитологических препаратов азурэозиновыми
смесями по принципу Романовского с целью получения привычной цитологической
картины. Методика приготовления препаратов.
Обработка препаратов может производиться двумя способами:
1. Предметные стекла с высохшими на воздухе препаратами в количестве 3–5
штук, укладывают на полочку для окраски отпечатками или мазками кверху. Глазной
пипеткой на каждый препарат наносят раствор краски Романовского-Гимзы в количестве
5–8 капель. Краска должна покрыть весь мазок или отпечаток. В таком состоянии
препарат оставляют на 60 секунд, в течение которых он фиксируется метанолом,
входящим в состав краски, и частично окрашиваются его элементы. Затем к краске на
предметных стеклах добавляют 10–16 капель нейтральной дистиллированной воды,
нагретой до 50–60° и покачиванием смешивают краску с водой. Препарат оставляют на l–
2 минуты. Затем струей нейтральной дистиллированной воды из колбы-промывалки, не
сливая, омывают краску с препарата. Остаток воды сливают и препарат просушивают
фильтровальной бумагой. Окрашенный препарат просматривают под микроскопом
сначала с малым увеличением, а при нахождении подозрительных мест переходят на
иммерсионный объектив. Остальные мазки оставляют залитыми краской на 3–5 минут на
тот случай, если первый препарат окажется бледно окрашенным. Первым обычно
красится самый тонкий из препаратов, так как он быстрее пропитывается и сушится.
Окраска по этому методу тканевых и опухолевых клеток и лейкоцитов почти не
отличается от окраски их в препаратах, обрабатываемых обычными цитологическими
методами. При этом четко выделяется структура ядер, хорошо видны нуклеолы,
зернистость и включения протоплазмы. Эритроциты частично гемолизируются, что
облегчает исследование.
2. Приготовляют 0,4% раствор сухой краски Лейшмана в метаноле (метиловый
спирт). Для ускорения растворения краски ее можно в закрытом флаконе поместить в
водяную баню при 60° на 1 час, помешивая. При охлаждении краску следует
профильтровать. Раствор стоек. Препараты укладывают на полочку для окраски,
покрывают нетолстым слоем раствора краски Лейшмана (12–15 капель на каждый
препарат) и оставляют их на 20–30 секунд. Затем, не сливая краски Лейшмана со стекла,
добавляют к ней раствор краски Романовского-Гимзы на нейтральной дистиллированной
воде (1,6 капли на 1 мл воды), нагретый до 50–60°, в количестве, способном удержаться на
стекле. Первый препарат смывают через 2–3 минуты, остальные – докрашивают. Препарат
высушивают фильтровальной бумагой и исследуют под микроскопом. Микроскопическая
картина при этом способе окраски более яркая, чем при первом. Эритроциты
сохраняются. Особенно четко выступают темные нуклеолы на нежно окрашенных ядрах.
Дистиллированная вода для разведения краски и смывания ее с препаратов должна иметь
рН 6,8–7,0.
Окраски по Папаниколау.
Метод окрашивания по Папаниколау является
наилучшим для гинекологических мазков, так как этот метод полихромный, он позволяет
оценить степень созревания цитоплазмы (от сине-зеленого цвета в незрелых клетках до
розового в клетках со зрелой цитоплазмой и оранжевого в клетках с ороговением),
благодаря влажной фиксации хорошо сохраняются ядра, клеточная мембрана и структура
хроматина. Ответ дается через 15–20 минут.
Необходимые реактивы:
1. Смесь Никифорова.
2. Спирт 95, 90, 80, 70 и 50°.
3. Гематоксилин Гарриса.
4. 0,25%-ный раствор соляной кислоты.
5. Краска оранжевая Г.
6. Краска (ЕА-36).
7. Абсолютный спирт.
8. Ксилол.
9. Канадский бальзам.
Приготовление гематоксилина Гарриса:
1 г гематоксилина растворяют в 10 мл абсолютного спирта, 20 г калийных квацов
растворяют при нагревании в 200 мл дистиллированной воды. Через 24 ч оба раствора
соединяют и прибавляют 0,5 г красной или желтой окиси ртути. Раствор нагревают до
кипения, остужают и через 24 ч фильтруют.
Приготовление раствора краски оранжевая Г:
К 100 мл 0,5%-ного спиртового раствора оранжевой краски Г добавляют 0,015 г
фосфорно-вольфрамовой кислоты.
Приготовление составной краски (ЕА-36):
45 мл 0,5%-ного спиртового раствора светлой зеленой, 10 мл 0,5%-ного спиртового
раствора бисмаркбраун, 45 мл 0,5%-ного спиртового раствора эозина желтоватого (водо- и
спирторастворимого), 0,2 г фосфорновольфрамовой кислоты, капля насыщенного водного
раствора углекислого лития.
Ход окраски:
Мазки после фиксации проводят последовательно через сосуды, содержащие 80, 70
и 50° спирты и дистиллированную воду. Затем 6 мин гематоксилином Гарриса, осторожно
споласкивают дистиллированной водой и погружают (6 раз) в 0,25%-ный раствор соляной
кислоты. Далее на 6 минут кладут в сосуд с проточной водопроводной водой и обмывают
дистиллированной водой. Затем проводят через 50, 70, 80 и 95° спирты. Обезвоженные
таким образом препараты окрашивают в течение 1,5 мин краской оранжевой Г,
споласкивают в двух сменах 95° спирта и красят в течение 1,5 мин составной краской
(ЕА-36). Мазки отмывают от избытка краски в трех сменах 95° спирта. Далее препараты
просветляют проведением через абсолютный спирт, через смесь абсолютного спирта и
ксилола в равных объемах и, наконец, через ксилол, после чего заключают в канадский
бальзам.
К полихромным методам окраски так же относят метод Шорра (или его
модификацию М. Г. Арсеньевой (1963) и др.), позволяющий дифференцировать клетки
на эозинофильные (красные) и базофильные (синие), и монохромные методы (окраска
гематоксилином и эозином или гематоксилином и фуксином). Фиксация препарата
производилась в метиловом спирте (15 минут). Окрашивание препаратов производилось
гематоксилином-эозином. Фиксированные мазки окрашивались водным раствором
гематоксилина до получения бледно-фиолетового окрашивания (7–10 минут). После
промывания проточной водой мазки вновь окрашивались 1%-ным водным раствором
эозина в течение 0,5 мин, промывались проточной водой и высушивались. При
полихромном методе поверхностные клетки окрашиваются в красный или синезеленый цвет, промежуточные и парабазальные – в сине-зеленый, базальные – в темносиний.
Цитохимические методы основаны на специфической химической цветной
реакции между химическим реактивом и определённым компонентом клетки для
определения в клетках различных веществ (под действием специально подобранных
реактивов происходит окрашивание тех или иных веществ в цитоплазме, а по степени и
характеру окраски судят о количестве или активности исследуемых веществ).
При цитохимическом исследовании чаще пользуются полуколичественной оценкой
результатов, используя принцип Астальди, основанный на выявлении различной степени
интенсивности специфической окраски (средний цитохимический коэффициент - СЦК).
В зависимости от нее исследуемые элементы делят на 4 группы: с отрицательной
реакцией (–), слабоположительной (+), положительной (++) и резко положительной (+++).
Для количественного выражения результатов подсчитывают 100 клеток определенного
вида, дифференцируя их по указанному принципу, затем число клеток с одинаковой
интенсивностью окраски умножают на соответствующее данной группе число плюсов,
сумма этих произведений составляет условные единицы. Например, при исследовании
активности щелочной фосфатазы в нейтрофилах из 100 просмотренных клеток в 60
клетках активность фермента не выявлена (–), в 35 – специфическая окраска была слабой
(+) и в 5 – более интенсивной (++). Результат определения активности щелочной
фосфатазы
в
нейтрофилах
в
таком
случае
составит
(60х0)+(35х1)+(5х2)/100=0+35+10/100=0,45 ед.
ШИК-реакция или PAS-реакция (для выявления гликогена).
Реактив – Шифф-периодная кислота (выделенные буквы и составляют
аббревиатуру ШИК – шифф-йодная кислота). Под влиянием периодата калия гликоген
окисляется с образованием альдегидных соединений, легко реагирующих с реактивом
Шиффа (фуксин-сернистая кислота). В местах локализации гликогена выявляется
вишнево-фиолетовое окрашивание, по интенсивности которого можно судить о
количестве гликогена в клетках.
Кроме гликогена, положительную реакцию могут давать такие ШИКположительные вещества, как кислые и нейтральные мукополисахариды, мукопротеины,
гликопротеины и др. Гликоген легко дифференцировать от других веществ пробой со
слюной или диастазой.
В мазках периферической крови гликоген содержится в цитоплазме нейтрофилов (в
виде обильной мелкой зернистости), цитоплазме лимфоцитов (в виде небольшого
количества крупных зерен) и тромбоцитах (в виде одиночных крупных зерен). В пунктате
костного мозга гликоген выявляется в нейтрофилах разной степени зрелости, лимфоцитах
и мегакариоцитах.
Обнаружение гликогена методом Мак-Мануса.
Метод
Мак-Мануса
выявляет
вещества
углеводной
природы
(гликозаминогликанов, гликопротеидов, гликогена и др.) в цитологических препаратах.
Метод основывается на образовании диальдегидов, которые определяют с помощью
реактива Шиффа под воздействием окислителя (йодной кислотой). В клетках гликоген
обнаруживается в виде вишнево-красных гранул.
Методы выявление ферментов:
1. Оксидазы – ферменты, катализирующие окислительные процессы молекулярным
кислородом. Среди них особое значение имеет миелопероксидаза (МП).
Миелопероксидаза – является лизосомальным ферментом, катализирующим в
присутствии перекиси водорода окисление различных субстратов. Она локализуется
преимущественно в специфических азурофильных гранулах в цитоплазме гранулоцитов и
является маркером клеток миелоидного ряда. Миелопероксидаза выявляется в клетках
гранулоцитарного ряда, начиная с миелобласта. Активность фермента повышается по
мере созревания клеток. Однако, по мере дифференцировки их в зрелые клетки,
активность фермента снижается. В клетках миелопероксидаза участвует в реакциях
разрушения токсичной перекиси водорода. В цитохимических реакциях активность
фермента определяется по окислению хромогенов (бензидина, о-дианизидина и других)
по методу Грэхема-Кнолля или его модификаций. Реакция используется главным образом
с целью диагностики острых лейкозов.
2. Фосфатазы входят в состав гидролаз. Эти ферменты широко распространены в
клетках человека и животных. Они участвуют в обменных процессах с жирами,
полисахаридами и нуклеопротеидами. К ним относятся такие ферменты как кислая
фосфатаза и щелочная фосфатазы.
Кислая фосфатаза (КФ) – катализирует освобождение фосфата из спиртовых или
фенольных моноэфиров при кислой рН среды. Кислые фосфатазы локализованы в
лизосомах и цитохимически выявляются благодаря образованию окрашенных участков
красного цвета в местах гидролиза субстрата. В качестве субстрата могут быть
использованы нафтол-AS-фосфат, а-нафтилфосфат натрия, нафтол-А8-О-фосфат и др.
Кислая фосфатаза присутствует в большинстве клеток крови и костного мозга. В
гранулоцитах, моноцитах, эозинофилах и базофилах она выявляется, начиная с незрелых
клеток этих рядов, где ее активность наиболее высокая.
Щелочная фосфатаза (ЩФ) – это фермент, который способен освобождать фосфат,
катализируя отщепление фосфатных групп из фосфомоноэфиров в щелочной среде и
принимает участие в обмене липидов и нуклеиновых кислот. Содержится исключительно
в зрелых нейтрофилах. В периферической крови активность щелочной фосфатазы
значительно выше, чем в клетках костного мозга. Фермент выявляется в виде желтокоричневых гранул в цитоплазме.
3.Неспецифические эстеразы (НЭ) также относятся к гидролазам. Эти ферменты
способны гидролизовать простые эфиры N-свободных спиртов жирных кислот. Это
весьма неоднородная группа энзимов, названия которых обусловлены субстратом,
который они гидролизуют. Получено более 9 изоферментов НЭ. Фракции 1, 2, 7, 8, 9
выявляются при использовании нафтол-АБ-О-хлорацетата и представляют активность
хлорацетатэстеразы, которая присутствует в гранулоцитах. Фракции 3, 4, 5, 6
взаимодействуют с эфирами α-нафтилацетата и представляют собою НЭ, выявляемые в
моноцитах, плазматических клетках и тромбоцитах. Наибольший интерес для гематологов
представляют
хлорацетатэстераза,
α-нафтилацетатэстераза,
кислая
αнафтилацетатэстераза.
Неспецифические
эстеразы
являются
лизосомальными
ферментами.
α-Нафтилацетатэстераза (αНАЭ) обнаруживается во всех миелоидных клетках, но
наибольшая ее активность определяется в моноцитах. В клетках эритроидного ряда в
норме она не определяется.
Кислая нафтилацетатэстераза – это фермент, локализующийся в лизосомальных
гранулах. Его активность выявляется в реакции с α-нафтилацетатом в кислой среде при рН
5,8. Она характерна для Т-хелперов. Кроме того, она выявляется в клетках моноцитарного
ряда.
Хлорацетатэстеразу (ХАЭ) называют гранулоцитарной. Как и миелопероксидаза, она
является маркером нейтрофилов. Активность фермента выявляется в виде гранул синего
цвета.
Сдвоенную реакцию на ХАЭ и αНАЭ проводят последовательно на одном мазке.
Это позволяет разделить клетки гранулоцитарной и моноцитарной линий, что имеет
значение при диагностике миеломоноцитарного лейкоза.
Реакция Браше. Метод служит для выявления РНК. Используется реактив из смеси
двух красителей: метилового зелёного и пиронина. Пиронин специфически окрашивает
РНК в красный цвет. Поэтому на препарате ядрышки (в составе ядра) и рибосомбогатые
участки цитоплазмы имеют красный цвет. Другие структуры ядра (помимо ядрышек) –
зелёные.
Реакция Фёльгена. Основной реактив – фуксинсернистая кислота (реактив
Шиффа). ДНК-содержащие структуры окрашиваются в пурпурно-красный цвет.
Цитохимическое исследование липидов. Липиды локализуются в цитоплазме
клеток главным образом в мембранах органелл и обнаруживаются преимущественно в
нейтрофильных гранулоцитах. Играют важную роль в проницаемости мембран.
Цитохимическое исследование липидов основано на применении красящих веществ,
растворяющихся в жирах (судан III, судан IV, черный судан и др.). Для выявления
нейтрального жира пользуются суданом III, окрашивающим жир в оранжевый цвет.
Липоиды выявляются лучше суданом черным (черное окрашивание).
Выявление слизи в цитоплазме клеток методом окраски муцикармином.
1. Цитологический препарат фиксируют в метаноле 3 мин.
2. Опускают в эфир на несколько секунд, затем в 50° этиловый спирт.
3. Заливают мазки 1% спиртовым раствором муцикармина на 10 мин, затем в 96°
этиловый спирт.
4. Промывают в дистиллированной воде.
5. Докрашивают гематоксилином Эрлиха – 5 мин.
6. Смывают краситель водопроводной водой.
7. Высушивают.
В результате положительной реакции в цитоплазме клеток слизь окрашивается в
малиновый цвет.
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
1. Красители. Классификация красителей.
2. Тинкториальные свойства клеточных структур. Метахромазия.
3. Группа основных или ядерных красителей, понятие «базофилии».
4. Кислые красители – цитоплазматические, понятие «ацидофилии».
5. Нейтральные красители. Индифферентные красители.
6. Приготовление красителей.
7. Оценка качества цитологического препарата. Артефакты.
8. Стандартная световая микроскопия фиксированных, окрашенных мазков.
Разрешающая способность светового микроскопа.
9. Распространенные методы окраски цитологических препаратов.
10. Окраска гематоксилин-эозиновыми красителями. Виды гематоксилиновых
красителей.
11. Окраска азур-эозиновыми красителями.
12. Техника окраски по Романовскому-Гимзе.
13. Метод Паппенгейма.
14. Окраска по Лейшману.
15. Экспресс – методы окраски цитологических препаратов: окраски по Алексееву.
16. Полихромная окраска по Папаниколау.
17. Полихромный метод окраски по Шорру.
18. Цитохимические методы исследование, цель, назначение, материалы..
19. ШИК-реакция.
20. Методы выявление ферментов, оценки их активности.
21. Методы выявления ДНК по Фельгену.
22. Метод выявления РНК по Браше.
23. Обнаружение гликогена по методу Мак Мануса.
24. Метод обнаружения липидов.
25. Выявление слизи в цитоплазме клеток.
Тема занятия: Женская половая система: сведения из общей анатомии,
строение шейки матки, гормональная регуляция менструального цикла, условия
получения полноценного материала, приготовление, фиксация мазков. Жидкостная
цитология. Окрашивание мазков. Молочная железа: получение материала для
цитологического исследования, маркировка, доставка, обработка материала в
цитологической лаборатории; цитологические особенности клеточных элементов
молочной железы. Дыхательная система: цитологические особенности основных
клеточных элементов мокроты и материала бронхоскопии. Пищеварительная
система: цитологические особенности основных клеточных элементов материала,
полученного при гастроскопии.
Цель: Знать цитологические особенности клеток при патологии женской половой
системы, дыхательной системы и заболеваний желудочно-кишечного тракта.
Перечень знаний и практических навыков:
1. Знать строение женской половой системы, гормональную регуляцию
менструального цикла, условия получения полноценного материала, приготовление,
фиксация и окрашивание мазков.
2. Иметь представление о клеточных элементах молочных желез, получение
материала для цитологического исследования, маркировке, доставке, обработке материала
в цитологической лаборатории.
3. Уметь оценивать цитологическую картину клеточных элементов мокроты и
материала бронхоскопии.
4. Знать цитологические особенности основных клеточных элементов материала,
полученного при гастроскопии.
ЖЕНСКАЯ ПОЛОВАЯ СИСТЕМА
Сведения из общей анатомии
Женская половая система состоит из двух яичников, в которых образуются
женские половые клетки (яйцеклетки) и синтезируются гормоны, двух яйцеводов
(маточных или фаллопиевых труб), матки, наружных половых органов и двух молочных
желез.
Яичники – несколько уплощенные овальные тела длиной 2,5–5,0 см, шириной 1,5–
3,0 см, толщиной 0,6–1,5 см. Яичник состоит из коркового и мозгового слоев, покрыт
цилиндрическим или кубическим эпителием. Соединительнотканная основа органа
(строма) состоит из веретенообразных клеток и волокон. В корковом веществе содержится
много соединительнотканных клеток, в мозговом – артерии и венозные сплетения. В
эпителиальных пузырьках (фолликулах) коркового вещества расположены яйцеклетки.
Фаллопиевы трубы соединяют яичники с маткой. Это полые образования длиной
примерно 12 см. Каждая труба проходит через стенку матки, выходит из нее, постепенно
расширяется и заканчивается «бахромками» вблизи яичника. Стенка маточной трубы
состоит из трех слоев: слизистой оболочки, мышечного слоя и серозной оболочки. В
слизистой оболочке расположены реснитчатые и секреторные клетки.
Наружные половые органы состоят из лонного возвышения, больших и малых
половых губ и клитора. У девственниц вход во влагалище частично закрыт девственной
плевой.
Матка – полый мышечный орган, в котором происходит развитие зародыша и
вынашивание плода. Расположена матка в малом тазу позади мочевого пузыря и впереди
прямой кишки. Орган грушевидной формы, уплощенный в передне-заднем направлении. От
верхнебоковых краев матки отходят широкие маточные связки, в которых располагаются
маточные (фаллопиевы) трубы и яичники. Анатомически в матке различают дно, тело и
шейку.
Матка состоит из гладкомышечной ткани, изнутри выстлана слизистой оболочкой
и так же, как яичники, маточные трубы и связки, снаружи покрыта серозной оболочкой
(брюшиной). Полость матки треугольной формы. В верхних углах расположены два
отверстия, открывающиеся в маточные трубы, в нижнем углу – перешеек (сужение),
ведущий в полость канала шейки матки.
Шейка матки – относительно узкий нижний сегмент матки. У девочек и девушек
она имеет коническую форму, у взрослой женщины – цилиндрическую. Нижняя часть
шейки вдается в полость влагалища, поэтому ее называют влагалищной частью (portio
vaginalis cervicis) или эктоцервиксом. Влагалищная часть шейки матки округлой формы,
поверхность ее гладкая.
В шейке матки имеются два отверстия: внутренний зев – отверстие в верхнем
отделе, расположенное на границе тела и шейки матки, и наружный зев – отверстие в
нижнем отделе, расположенное в центре эктоцервикса и открывающееся во влагалище.
Цервикальный канал или эндоцервикс (канал шейки матки – canalis cervicis
uteri) узкий, расширен в средней части. Через цервикальный канал полость матки и
влагалище сообщаются между собой.
Влагалище (лат. – «vagina», греч. – «colpos») – уплощенная мышечно-эластическая
трубка, расположенная в малом тазу; верхней частью охватывает шейку матки, а нижней
открывается в половую щель. У влагалища различают переднюю стенку (в верхней трети
прилежит ко дну мочевого пузыря) и верхнюю стенку, нижняя часть которой прилежит к
передней
стенке
прямой
кишки.
Стенки
верхней
части
влагалища,
охватывая эктоцервикс, образуют вокруг него узкую щель – свод влагалища.
Строение шейки матки
Шейка матки состоит преимущественно из плотной коллагеновой ткани, строма
слизистой оболочки содержит много эластических волокон.
Слизистая
оболочка
эндоцервикса представлена
цилиндрическим
(призматическим) слизепродуцирующим эпителием, содержащим реснитчатые клетки.
Железы эндоцервикса трубчатые, ветвящиеся; их строение на всем протяжении одинаково:
цилиндрический эпителий поверхности слизистой оболочки цервикального канала
врастает в строму, образуя железы.
Железы содержат секрет в виде густой стекловидной слизи, имеющей щелочную
реакцию. Щелочная реакция способствует сохранению жизнеспособности сперматозоидов,
их продвижению в полость матки. Секреция слизи в фазу овуляции увеличивается, секрет
заполняет цервикальный канал, образуя так называемую пробку Кристеллера, которая
благодаря бактерицидным свойствам и механически препятствует проникновению
микроорганизмов в цервикальный канал и полость матки. Если железы закупориваются, а
слизь продолжает накапливаться, образуются наботовые кисты, способные выпячиваться на
поверхность шейки.
Слизистая оболочка эктоцервикса и влагалища выстлана многослойным
плоским неороговевающим эпителием. В норме в репродуктивном возрасте эпителий
состоит
из
множества
рядов,
условно
разделенных на
базальный,
промежуточный и поверхностный слои. Только нижний (базальный) слой клеток связан с
базальной мембраной, клетки в нем располагаются в один ряд. Базальные клетки
способны делиться, и из них развиваются все остальные типы клеток многослойного
плоского эпителия. Слой молодых клеток, расположенный над базальным, состоящий из
нескольких рядов (нижняя часть промежуточного слоя), называют парабазальным. По
мере созревания размер клеток увеличивается, а размер ядер уменьшается.
Эпителий влагалища в наибольшей степени подвержен гормональным
воздействиям, поэтому на изучении клеточного состава этого эпителия основана
гормональная цитологическая диагностика.
В связи с тем, что по мере дифференцировки и созревания клеток размер
цитоплазмы увеличивается, а размер ядра уменьшается:
• клетки с крупным ядром и необильной цитоплазмой в цитологических препаратах
сохраняют округлую форму;
• клетки с мелким ядром и обильной цитоплазмой принимают неправильно
округлую или полигональную форму; цитоплазма располагается свободно, ложится
складками, контуры ее становятся неровными;
• накопление гликогена в клетках поверхностного слоя изменяет характер
окрашивания цитоплазмы (при окрашивании по Папаниколау – в розовые тона, при
окрашивании по методу Романовского – в светло-голубые, почти бесцветные, тона).
Зона стыка
Область шейки матки, в которой цилиндрический эпителий эндоцервикса
соединяется
с
плоским
эпителием
влагалищной
части,
называют зоной
стыка или естественной зоной стыка. У девочек естественная зона стыка расположена в
цервикальном канале, у женщины репродуктивного возраста – на уровне наружного зева.
Зона стыка под действием гормональных и других факторов может переместиться на
влагалищную часть шейки матки. В постменопаузе зона стыка может опять сместиться в
цервикальный канал. Появление цилиндрического эпителия на влагалищной части шейки
называют эктопией.
Зона трансформации (превращения)
Под действием содержимого влагалища участок эктопии подвергается
физиологическим изменениям, метаплазии в плоский эпителий. Участок, покрытый
незрелым
метаплазированным
эпителием,
носит
название зоны
трансформации или зоны превращения. У женщин репродуктивного возраста зона
стыка, как правило, представлена участками естественной зоны стыка и участками зоны
трансформации (метаплазированным эпителием). Зона трансформации может
располагаться на влагалищной части шейки матки, а может полностью или частично
«уходить» в цервикальный канал. У женщин в постменопаузе зоны стыка и
трансформации чаще всего располагаются в цервикальном канале. Зона трансформации
наиболее «опасна» с точки зрения возможности патологических изменений, в том числе
рака.
Гормональная регуляция менструального цикла
Менструальный цикл – период с 1-го дня менструации до 1-го дня следующей
менструации. Самую первую менструацию называют менархе, а прекращение
менструаций - менопаузой. Средняя продолжительность менструального цикла – 28 дней,
однако только 10– 15% циклов имеют такую длительность. Возможны колебания
продолжительности цикла в диапазоне от 18 до 40 дней. Наибольшие изменения с
максимальными интервалами между менструациями обычно наблюдают в первые годы
после менархе и перед менопаузой, когда повышается частота ановуляторных (без
овуляции) циклов.
Во время менструального цикла репродуктивные органы претерпевают ряд
изменений, которые делают возможным развитие яйцеклетки, ее оплодотворение и
прикрепление оплодотворенной яйцеклетки в матке. Наиболее выраженные изменения
происходят в слизистой оболочке тела матки (эндометрии). От гормонального состояния
женщины и фазы менструального цикла зависит строение многослойного плоского
эпителия влагалища и шейки матки.
В менструальном цикле различают четыре фазы:
• менструальную;
• пролиферативную (эстрогенную, фолликулиновую);
• овуляторную;
• секреторную (прогестиновую, лютеиновую).
Эти фазы связаны с созреванием яйцеклетки, которое регулируется
гонадотропными гормонами гипоталамо-гипофизарной системы. Для осуществления
нормальной репродуктивной функции необходимо сложное взаимодействие эндокринных
желез и «органов-мишеней».
Менструальная фаза (фаза десквамации, отторжения эндометрия) наступает,
когда оплодотворения яйцеклетки не происходит. В эту фазу поверхностный
(функциональный) слой слизистой оболочки матки отторгается и вместе с кровью
выделяется из половых путей (менструация). Менструальная фаза длится до 3–5 дней.
В фазу пролиферации происходит созревание фолликула с яйцеклеткой и
регенерация слизистой оболочки матки. Под влиянием эстрогенов, продуцируемых
клетками созревающего фолликула, железы и строма функционального слоя эндометрия
восстанавливаются. Эстрогены также стимулируют полное созревание многослойного
плоского неороговевающего эпителия шейки матки. Эта фаза длится с 5-го дня от начала
менструации по 14–15-й день.
Овуляция. Примерно в середине менструального цикла (14–15-й день) под
действием высокой концентрации эстрогенов резко увеличивается выработка гипофизом
лютеинизирующего гормона (ЛГ). Под влиянием ЛГ и фолликулостимулирующего
гармона (ФСГ) происходит овуляция – разрыв фолликула и выход яйцеклетки из яичника.
Секреторная фаза – наиболее стабильная часть цикла. В отсутствие беременности
она длится в среднем 14 дней и завершается с началом менструации. После овуляции ЛГ
вызывает развитие желтого тела в пустом (лопнувшем) фолликуле. Желтое тело
вырабатывает свой собственный гормон – прогестерон.
Если в течение 2 недель оплодотворения яйцеклетки не произошло, желтое тело
претерпевает обратное развитие, превращаясь в белое тело. Прогестерон перестает
вырабатываться, слизистая оболочка матки отслаивается во время менструации, и цикл
повторяется.
Прогестерон тормозит созревание многослойного плоского эпителия шейки матки,
и, если его вырабатывается много, клетки созревают только до промежуточного слоя. В
норме такое состояние эпителия характерно для периодов беременности и кормления
грудью. В постменопаузе, в связи со снижением выработки половых гормонов, созревание
эпителия значительно нарушено, он атрофируется.
Получение материала для цитологического исследования
Женщину необходимо проинформировать о значении и необходимости регулярных
цитологических исследований. Для эффективной цитологической диагностики большое
значение имеет получение полноценного материала, так как несоблюдение условий забора
материала и неправильное приготовление препарата могут привести к ошибочному
цитологическому диагнозу.
Условия получения полноценного материала
Рак шейки матки чаще всего развивается в зоне трансформации, ему предшествуют
внутриэпителиальные поражения (дисплазии). В связи с тем, что дисплазия может
располагаться на небольших, ограниченных участках, очень важно, чтобы материал был
получен со всей поверхности шейки, особенно из зоны трансформации. Число
патологически измененных клеток в цитологическом препарате может варьировать, и если
их мало, то увеличивается вероятность, что патологические изменения могут быть
пропущены при скрининге. Цитологическое исследование мазков позволяет обнаружить
внутриэпителиальные поражения на ранних стадиях. Благодаря лечению предопухолевых
состояний и ранних форм рака в странах, где хорошо отработаны программы массового
скрининга, значительно снижается заболеваемость и смертность от рака шейки матки. Для
того чтобы цитологическое исследование оказалось эффективным, необходимо соблюдать
все условия, предшествующие получению материала: правильное взятие, фиксация,
окрашивание мазков, тщательный просмотр всего клеточного состава препарата и
правильная его интерпретация.
• У женщин репродуктивного возраста мазки необходимо брать не реже раза в год.
• Желательно брать мазки не ранее чем на 5-й день менструального цикла и не
позднее чем за 5 дней до предполагаемого начала менструации.
• Нельзя получать мазки в течение 24 ч после полового акта, спринцевания,
введения во влагалище медикаментов, свечей, кремов, в том числе кремов для выполнения
ультразвукового исследования.
• В направлении в лабораторию необходимо указать:
- фамилию, имя, отчество, возраст;
- данные о менструальном цикле (например, дату начала цикла, день цикла,
постменопауза, беременность);
- гинекологические клинические данные (выделения или кровотечение из половых
путей, гормональная терапия и др.);
- предполагаемый диагноз;
- дату получения материала;
- тип мазка (из эктоили эндоцервикса, эндометрия).
Инструменты для взятия материала из шейки матки
С диагностической целью материал получают раздельно из экто-и эндоцервикса с
помощью шпателя (из влагалищной части шейки матки) и специальной щетки (типа
«Cytobrush») – из цервикального канала. При проведении профилактических осмотров
(скрининга рака шейки матки) используют различные модификации шпателя Эйра,
поролоновые кубики и другие приспособления. Для получения материала одновременно
из влагалищной части шейки матки, зоны стыка (или трансформации) и цервикального
канала лучше использовать специальные щетки типа «Cervex-Brush», «CYTOPREP»,
«Papette» и др.
Перед получением материала шейку матки обнажают «в зеркалах», но никаких
манипуляций не производят: шейку ничем не смазывают, слизь не удаляют. Щетку вводят
в наружный зев шейки матки, осторожно направляя центральную часть щетки по оси
цервикального канала. Затем щетку-наконечник поворачивают на 360° (желательно до 3–4
раз по часовой стрелке), чтобы взять достаточное количество клеток из эктоцервикса и из
зоны трансформации. Вводить инструмент следует очень бережно, чтобы не повредить
шейку матки. Затем щетку выводят и материал распределяют на стекле (приготовление
традиционного препарата). Переносить образец на предметное стекло нужно быстро, без
подсушивания и потери прилипших к инструменту слизи и клеток. В случае
приготовления тонкослойного препарата с помощью метода жидкостной цитологии (см.
ниже), головку щетки отсоединяют от ручки и помещают в контейнер со
стабилизирующим раствором.
Важно, чтобы в мазок попал материал из зоны трансформации, так как около 90%
неопластических состояний исходят из зоны стыка плоского и цилиндрического эпителия
и зоны трансформации, и только 10% – из цилиндрического эпителия цервикального
канала.
Приготовление, фиксация мазков, жидкостная цитология, окрашивание
мазков
Материал необходимо распределить тонким слоем, важно, чтобы весь он оказался
на стекле. При получении материала раздельно из экто- и эндоцервикса его распределяют
вдоль или поперек одной из половинок стекла.
Фиксация мазков
Если мазки предполагают окрашивать по методу Папаниколау, их необходимо
зафиксировать влажными, сразу после получения (влажная фиксация). Фиксацию
проводят специальными аэрозолями или фиксатором в капельной форме (фиксатор
наносят на влажную поверхность мазка). Можно зафиксировать мазки, поместив их после
получения в кювету с 96° этиловым спиртом на 10–20 мин. Затем мазки высушивают на
воздухе.
Если мазки предполагают окрасить методом Романовского (модификации
Лейшмана, Май-Грюнвальд-Гимзы, Паппенгейма), после получения их высушивают на
воздухе (сухая фиксация).
Если предполагается окрашивание гематоксилином и эозином, можно использовать
как сухую, так и влажную фиксацию мазков.
Жидкостная цитология
В настоящее время все чаще применяют метод жидкостной цитологии. Главное
отличие данного метода от традиционного в том, что материал не наносят сразу на стекло,
а помещают во флакон со стабилизирующим раствором. Стабилизирующий раствор
обеспечивает сохранение морфологических, имммуноцитохимических и генетических
свойств клеток. В лаборатории готовят монослойные препараты, предварительно
стандартизировав образец по клеточности и с помощью цитоцентрифуги типа центрифуги
«Cytospin», «Rotofix» и др. Можно сначала сделать мазки стандартным способом, а
оставшийся на щетке (шпателе) материал поместить в стабилизирующий раствор и
обработать описанным выше методом.
Окрашивание мазков
У каждого из методов окрашивания есть свои преимущества и недостатки.
Метод окрашивания по Папаниколау лучше всего подходит для гинекологических
мазков, так как позволяет оценить степень зрелости цитоплазмы (от сине-зеленого цвета в
незрелых клетках до розового в клетках со зрелой цитоплазмой и оранжевого в клетках с
ороговением). Благодаря влажной фиксации хорошо сохраняются ядра, клеточная
мембрана и структура хроматина.
Окрашивание по методу Романовского (азур-эозиновой смесью) используют в
разных модификациях: по Паппенгейму (Май-Грюнвальд-Гимзе), Лейшману,
Романовскому-Гимзе и др. Преимущество метода в четком прокрашивании ядерной
субстанции, вследствие чего хорошо просматривается структура хроматина, а также
бактериальной флоры и простейших. Поскольку существует множество модификаций, в
тексте атласа при описании особенностей окрашивания клеток методом Романовского
названы все методы, в которых применяют азур-эозиновую смесь.
Преимущество метода «гематоксилин-эозином» – в выраженном окрашивании
атипичных ядер, поэтому его активно используют при скрининге.
Цитологические особенности эпителиальных клеток шейки матки
При взятии материала с поверхности слизистой оболочки шейки матки и
цервикального канала в препарат для цитологического исследования попадают клетки с
влагалищной части шейки матки (многослойный плоский неороговевающий эпителий),
зоны стыка или трансформации (цилиндрический и при наличии плоскоклеточной
метаплазии – метаплазированный эпителий) и собственно клетки цервикального канала
(цилиндрический эпителий).
Клетки плоского эпителия
Мазки для цитологического исследования получают с поверхности слизистой
оболочки, поэтому их клеточный состав представлен слущенными клетками. Чем лучше
выражена способность эпителия к созреванию, тем более зрелые клетки попадают в мазок.
При атрофических изменениях на поверхности эпителиального пласта располагаются
менее зрелые клетки.
Условно клетки многослойного плоского неороговевающего эпителия принято
подразделять на четыре типа: поверхностные, промежуточные, парабазальные, базальные.
Поверхностные клетки
Характерные признаки:
• размер клеток – крупный, диаметр около 50 мкм;
• форма клеток – плоская, полигональная;
• размер ядер – мелкий, максимальный диаметр 5-6 мкм;
• форма ядер – овальная или округлая;
• ядра темные, плотные (пикнотичные);
• структура хроматина не просматривается.
Наиболее зрелые поверхностные клетки располагаются преимущественно
разрозненно, цитоплазма с нечетко выраженными складками, при окрашивании по
Папаниколау – розовая или желтовато-розовая (эозинофильная), нежная, прозрачная; в
части клеток определяются липидные гранулы и гранулы гликогена.
Менее зрелые клетки могут располагаться пластами, нагромождаясь друг на друга.
Цитоплазма нежная, прозрачная, со складками и четкими неровными контурами.
Промежуточные клетки
В зависимости от степени созревания промежуточные клетки могут иметь разные
размеры и форму, но для всех промежуточных клеток характерно:
• клетка крупная, размером около 40–50 мкм;
• размер ободка цитоплазмы больше диаметра ядра;
• размер ядра больше 6 мкм;
• четкая мембрана ядра;
• хроматин
распределен
равномерно
(пузырьковидные
ядра).
Зрелые
промежуточные клетки (препикнотичные) отличаются от поверхностных размером и
структурой ядра. Ядра их пузырьковидные, овальные или округлые, диаметром более 6
мкм, с четкой структурой хроматина. Цитоплазма может быть эозинофильной,
цианофильной, с характерной складчатостью.
Менее зрелые промежуточные клетки округло-овальной формы, меньших
размеров; ядра имеют ту же структуру, что и в зрелых клетках; цитоплазма более плотная,
иногда ее края заворачиваются (навикулярные, ладьевидные клетки). Лактобациллы
способны вызывать лизис промежуточных клеток, на поверхностные клетки этот
пептический эффект распространяется редко.
Парабазальные клетки
Отличительные признаки парабазальных клеток:
• клетки мелкого размера, диаметром 20–30 мкм;
• форма округлая или овальная;
• ядро относительно крупное;
• диаметр ядра больше или равен ширине ободка цитоплазмы;
• хроматин нежно-зернистый, распределен равномерно;
• могут встречаться ядрышки.
Цитоплазма при окрашивании по Папаниколау обычно цианофильная, при
окрашивании по методу Романовского – базофильная или светлая. Клетки не подвержены
бактериальному цитолизу, однако в них могут развиться аутолитические процессы. Это
приводит к дегенеративным изменениям, и в препаратах появляются клетки с
пикнотичными ядрами или «голые» ядра разрушенных клеток.
Базальные клетки
В норме базальные клетки расположены на базальной мембране в один ряд и
практически не попадают в цитологические мазки, так как покрыты несколькими слоями
парабазальных клеток и не слущиваются. Клетки могут появиться в мазках в случае
гиперплазии базального эпителия (в частности, в постменопаузе).
Клетки цилиндрического эпителия
Клетки цилиндрического эпителия в норме располагаются небольшими группами в
виде сотоподобных структур, полосок.
Характерные признаки:
• форма клетки вытянутая (зауженная к базальному полюсу и расширенная к
апикальному);
• ядро расположено эксцентрически (ближе к базальному полюсу);
• округло-овальная форма ядра;
• хроматин зернистый;
• цитоплазма часто вакуолизирована, с признаками секреции.
Могут встречаться бокаловидные клетки, цитоплазма в которых растянута слизью,
иногда в клетках обнаруживают гранулы секрета. Реже находят мерцательные клетки, их
апикальный (противоположный ядру) край имеет уплощение, где расположены реснички.
Резервные клетки в норме, как правило, не видны, а определяются только при
резервноклеточной гиперплазии и при плоскоклеточной метаплазии.
Клетки метаплазированного эпителия
В норме метаплазированные клетки в цитологических препаратах если и
встречаются, то в небольшом количестве. Резервные клетки, незрелые и зрелые
метаплазированные клетки практически неотличимы от базальных и парабазальных.
Узнаваемы в препаратах так называемые клетки-паучки, характерные для созревающей
плоскоклеточной метаплазии.
МОЛОЧНАЯ ЖЕЛЕЗА
Молочная железа – модифицированная потовая железа. До полового созревания и
у мальчиков, и у девочек она одинакова и представлена протоками со смешанными
концевыми отделами, окруженными скудной соединительной тканью. У мальчиков и
мужчин она остается в таком состоянии и называется не молочной, а грудной железой. У
девочек во время полового созревания развивается в полноценную железу, имеющую
развитые эпителиальный компонент (паренхиму) и соединительнотканный (строму). В
норме молочная железа после полового созревания состоит из 15–20 радиально
расположенных сегментов (долей), формирующихся вокруг млечных (выводных)
протоков и сходящихся к соску. Каждая доля состоит из множества долек – структурных
единиц железы. Сосок выстлан многослойным плоским ороговевающим эпителием,
переход млечного протока в сосок – многослойным плоским неороговевающим
эпителием. Крупные млечные протоки представлены двумя рядами цилиндрического или
кубического эпителия. Терминальные протоки и ацинусы выстланы однорядным
цилиндрическим или кубическим эпителием. Молочную железу половозрелой
небеременной женщины называют покоящейся, в отличие от железы в состоянии
активного роста в период беременности. Объем и размер «покоящейся» молочной железы
в основном зависят от содержания в ней жировой ткани. Полного развития молочная
железа достигает во время беременности.
Получение материала для цитологического исследования
Для диагностического заключения по цитологическим препаратам важно
получение полноценного материала: он должен быть взят не из окружающих тканей, а из
очага поражения. Для установления характера поражения используют различные методы
получения материала.
1. Пункционный материал. Как правило, мазки из этого материала делает
специалист, выполняющий пункцию. Если при пункции получена жидкость, вся она
должна быть доставлена в лабораторию.
2. Биопсийный материал. Цитологические препараты можно делать из материала,
полученного при биопсии столбика ткани. Отпечатки выполняются путем аккуратного
перемещения биоптата иглой по стеклу; при этом нужно стараться не травмировать
биопсированный кусочек.
3. Операционный материал. Разрез уплотнения, опухоли или лимфатического узла
необходимо проводить сухим скальпелем, чтобы избежать разрушения клеток водой.
Операционный материал получают, прикладывая стекло к разрезу удаленной опухоли или
другого участка поражения. Если консистенция ткани плотная, что не позволяет сделать
отпечатки, производят соскоб с поверхности свежего разреза опухоли (путем легкого
соскабливания скальпелем или краем предметного стекла с последующим
приготовлением препарата).
4. Отделяемое из молочной железы. Для приготовления препарата капля
отделяемого из молочной железы наносится на стекло и готовится мазок. Если
отделяемого немного, для получения мазков необходимо сцеживающими движениями,
надавливая большим и указательным пальцами в области околососковой зоны, получить
капли выделений из соска.
5. Мазки – отпечатки с эрозированных поверхностей. К месту поражения
прикладывается предметное стекло, на котором остается некоторое количество клеточных
элементов и отделяемого. Материал можно брать также с помощью ватного тампона и
наносить на предметное стекло в виде отпечатков.
Маркировка, доставка и обработка материала в цитологической лаборатории
Цитологический материал доставляют в лабораторию в ближайшие сроки после его
получения. Особенно это относится к содержимому кист и любому кровянистому
материалу. Для доставки необходимо иметь специальные контейнеры для предметных
стекол, пробирки. Не допускается контакт нативного материала, в том числе
подсушенного предметного стекла, с бланком-направлением.
Полученный материал доставляют в лабораторию с бланком-направлением, в
котором должны быть представлены паспортные данные обследуемой пациентки,
диагноз, проведенное лечение, точно должны быть указаны локализация участка, откуда
был взят материал, и способ его получения.
Лаборант, который принимает материал, должен проверить маркировку
препаратов, пробирок и т.д., оформление направления, отметить характер и количество
биоматериала, число присланных мазков.
Приготовление препаратов
Правила приготовления препаратов едины вне зависимости от того, делается мазок
специалистом, получившим материал, или готовится в лаборатории.
Хороший
мазок
должен
быть
максимально
тонким
(максимально
приближающимся к однослойному), равномерной толщины (не волнообразным) на всем
протяжении. Материал распределяется по стеклу краем шлифованного стекла или ребром
иглы.
Мазок должен начинаться на 1 см от узкого края предметного стекла и
заканчиваться примерно в 1,5 см от другого края; мазок не должен достигать широкого
края стекла, между мазком и широким краем предметного стекла должно оставаться
расстояние не менее 0,3 см.
Жидкости, полученные при пункции, тут же центрифугируют, сливают верхний
слой центрифугата, а из осадка делают мазки с помощью специального шлифованного
стекла или пластинки (методика приготовления препаратов аналогична мазкам крови).
При этом получаются тонкие препараты со щеточкой по краю для цитологического
исследования.
Жидкостная цитология
- Лучшим способом обработки материала для цитологического исследования
является жидкостная цитология. Препараты, приготовленные на цитоцентрифуге,
однослойные, материал распределен равномерно на определенной поверхности.
- Препараты удобно просматривать, так как материал распределен равномерно.
- При необходимости проведения иммуноцитохимических исследований
экономятся дорогостоящие реактивы, результаты удобно интерпретировать.
Фиксация и окрашивание препаратов
Мазки можно окрашивать любым из красителей, используемых в цитологической
диагностике, однако наилучшие результаты получаются при использовании различных
модификаций метода Романовского (по Паппенгейму, Лейшману и др.). После
приготовления мазков предварительной их фиксации не требуется, они высушиваются на
воздухе.
Цитологические особенности основных клеточных элементов молочной
железы
При пункции различных образований молочной железы игла обычно проходит
через нормальные структуры молочной железы (дольки, протоки, соединительнотканные
прослойки). Поэтому в пунктатах часто встречаются элементы нормальной ткани
молочной железы [эпителиальные клетки протоков и ацинусов, «голые» биполярные ядра,
апокринные клетки (онкоциты), пенистые клетки, жировые клетки, фиброциты]. Кроме
того, в пунктате могут присутствовать эритроциты, лимфоциты, нейтрофильные и
эозинофильные гранулоциты, гистиоциты, гигантские многоядерные клетки. Фон
препарата может быть представлен аморфным материалом (секрет молочной железы,
некротические массы, слизь).
Клетки протоков и ацинусов, их характеристика:
• располагаются в виде небольших групп или в структурах:
- типа пчелиных сот, в виде трубочек, в виде ацинусов (клетки из концевых отделов
дольки);
- шаровидных (при доброкачественных состояниях встречаются редко, ядра на
поверхности шаровидной структуры распределены равномерно);
- неопределенной формы;
• границы клеток неровные, в группах из клеток могут не просматриваться;
• ядра округлые или овальные, 8–10 мкм в диаметре;
• ядерная мембрана ровная;
• ядрышки мелкие или не видны;
• хроматин плотный, распределен равномерно;
• цитоплазма скудная, тонким ободком окружает ядро.
При доброкачественных поражениях разрозненно лежащие эпителиальные клетки с
сохранившейся цитоплазмой практически не встречаются; отделившись от структур, они
обычно теряют цитоплазму и располагаются в виде овальных «голых» ядер. Такие ядра
имеют округлую или овальную формы, размер их несколько больше или меньше размера
ядер сохранившихся клеток в структурах.
Апокринные клетки, их характеристика:
• секретирующие клетки эпителия молочной железы;
• сравнительно крупные, диаметр 6–12 мкм;
• располагаются разрозненно или в виде папиллярных структур;
• форма клеток одинаковая, границы четкие;
• ядра обычно расположены центрально, реже – эксцентрически;
• базофильная цитоплазма, в которой много гранул.
Пенистые клетки (молозивные тельца), их характеристика:
• крупные размеры;
• форма округлая или неправильная;
• границы клеток чаще неровные, «кружевные»;
• ядро округлое, мелкое, мембрана ядра четкая;
• хроматин мелкозернистый;
• цитоплазма нежная, вакуолизированная, вакуоли имеют разные размеры;
• признаки фагоцитоза.
ДЫХАТЕЛЬНАЯ СИСТЕМА
Человек в течение жизни делает 700 млн дыхательных движений! Органы дыхания
представлены дыхательными путями: верхние дыхательные пути (носовая, ротовая
полости, глотка, гортань) и бронхиальное дерево – разветвляющаяся система гибких
трубок, которые подводят воздух к 500 млн альвеол, «маленьких пузырьков», диаметром
0,2 мм, где происходит газообмен с кровью.
Полость рта, ротоглотка, гортань выстланы многослойным плоским
неороговевающим эпителием; полость носа – цилиндрическим мерцательным эпителием.
Строение бронхолегочного дерева. Крупные бронхи выстланы многорядным
цилиндрическим мерцательным эпителием, по мере разветвления бронхов на более
мелкие слой эпителия становится тоньше. Бронхиолы выстланы однорядным эпителием.
Эпителий содержит мерцательные (с большим числом ресничек) и слизистые клетки.
Кроме того, в бронхиальном дереве есть железы, дополнительно продуцирующие слизь.
Благодаря биению ресничек и наличию слизи, эпителиальный «ковер» освобождается от
различных веществ, попадающих в дыхательные пути. Альвеолы покрыты однорядным
эпителием, в котором имеются клетки двух типов:
• пневмоциты первого типа (осуществляют газообмен);
• пневмоциты второго типа (продуцируют сурфактант – вещество, изменяющее
поверхностное натяжение жидкостей и позволяющее легкому находиться в
расправленном состоянии).
В слизистой оболочке бронхолегочной системы рассеяны также нейроэндокринные
клетки (клетки APUD-системы).
При некоторых хронических воспалительных процессах, у курильщиков, при
действии токсических веществ (профессиональные вредности) многорядный
мерцательный эпителий может подвергаться плоскоклеточной метаплазии и становиться
функционально несостоятельным – на месте «ковра из ресничек» образуются
«проплешины». Плоскоклеточная метаплазия может быть фоном для развития рака.
Получение и обработка материала для цитологического исследования
Материалом для цитологического исследования при заболеваниях дыхательной
системы может служить мокрота, материал, полученный при бронхоскопии - это
отпечатки с биоптатов, соскобы щеткой, бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ).
Мокрота – продукт патологического процесса (заболевания или повреждения) в
дыхательной системе, выделяемый при кашлевом толчке или отхаркивании. К этим
выделениям обычно примешаны секреты полости рта, глотки и носовая слизь.
До сбора мокроты необходимо тщательно вычистить зубы, прополоскать рот и
глотку водой. Свежевыделенную мокроту, полученную путем откашливания, собирают в
чистую сухую широкогорлую склянку, сразу же доставляют в лабораторию. В
лаборатории мокроту необходимо немедленно исследовать или хранить до приготовления
препаратов для микроскопического исследования в холодильнике.
Следует помнить, что через 6–8 ч при комнатной температуре клеточные элементы
мокроты разрушаются.
Перед микроскопическим исследованием мокроту тщательно осматривают:
• оценивают количество мокроты (количество зависит от заболевания и стадии
заболевания, возраста больного), значение имеет суточное количество и изменение его в
динамике;
• определяют цвет и прозрачность (зависят от характера: слизистая – прозрачна,
слизисто-гнойная – мутная, желтоватая или зеленоватая, красные оттенки – примесь
крови, черный/серый цвет – примесь угольной пыли);
• определяют характер (слизистая, гнойная, слизисто-гнойная и пр.);
• определяют запах (свежевыделенная слизистая мокрота запаха не имеет, при
распаде тканей – приобретает гнилостный запах);
• определяют слоистость (обнаруживается при выделении большого количества
мокроты, содержащей компоненты с разным удельным весом);
• исследуются препараты из нативной (свежей) мокроты и фиксированные и
окрашенные препараты.
Для приготовления информативных препаратов самым существенным моментом
является отбор соответствующих частиц, содержащихся в мокроте, который
осуществляется в чашке Петри.
• Приготовление нативного препарата: от отобранных клочков и комочков мокроты
отделяют небольшие фрагменты (с булавочную головку), помещают их на предметное
стекло и покрывают покровным таким образом, чтобы препарат был не толстый, а
материал не выступал за пределы покровного стекла.
• Для окрашенных препаратов: отобранные фрагменты тщательно перемешивают
до гомогенного состояния и равномерно распределяют по стеклу или раздавливают и
растягивают между двух предметных стекол до образования равномерных тонких мазков.
• Фиксация и окрашивание препаратов могут быть различными, в зависимости от
цели исследования – для бактериоскопии (по Цилю-Нильсену, по Граму) или для
цитологического исследования (окрашивание по Романовскому, Паппенгейму, Лейшману
или гематоксилин-эозином).
Препараты из материала бронхоскопии, кроме БАЛ, готовит медсестра или врач
эндоскопической диагностики после бронхоскопии.
БАЛ доставляют в лабораторию, где его центрифугируют и приготавливают из
осадка окрашенные препараты для подсчета форменных элементов.
Цитологические особенности основных клеточных элементов мокроты и
материала бронхоскопии
Клетки цилиндрического эпителия, их характеристика:
• Среднего размера.
• Вытянутой (цилиндрической) формы.
• Ядро расположено эксцентрически.
• Форма ядра округло-овальная.
• На стороне ядра цитоплазма клетки суживается.
• На противоположном ядру полюсе клетки – уплощение, на котором
располагаются реснички. В клетках из мокроты реснички часто отсутствуют.
• Цитоплазма светлая.
Альвеолярные макрофаги, их характеристика:
• Форма клеток округлая.
• Клетки разного размера.
• Цитоплазма обильная, голубоватая, розоватая или зеленоватая в зависимости от
включений.
• Могут быть гранулы и вакуоли в цитоплазме.
Клетки при плоскоклеточной метаплазии, их характеристика:
• Размер клеток может быть разным, чаще – средний.
• Форма клеток полигональная.
• Ядра округлые, расположены центрально.
• Цитоплазма светло-голубая, плотная, гомогенная.
ПИЩЕВАРИТЕЛЬНАЯ СИСТЕМА
Пищеварительная система – трубка, объединяющая ротовую полость, глотку,
пищевод, желудок, тонкий и толстый кишечник, прямую кишку. Вспомогательными
органами служат зубы, язык, слюнные железы, поджелудочная железа, печень, желчный
пузырь и червеобразный отросток слепой кишки (аппендикс). Желудок – расширенный
участок пищеварительной трубки, миксер, в котором пища перемешивается, перетирается,
обрабатывается соляной кислотой и пепсином. Внутренний слой стенки желудка имеет
многочисленные складки.
Слизистая оболочка полости рта и пищевода представлена многослойным плоским
неороговевающим эпителием. Желудок покрыт слизеобразующим однорядным эпителием
(покровно-ямочным) и содержит множество желез (кардиальные, главные или
фундальные, промежуточные, пилорические), выделяющих пищеварительные ферменты,
соляную кислоту и слизистый секрет.
Основную массу желез желудка составляют так называемые главные или
фундальные железы. Они представлены главными, обкладочными, добавочными и
нейроэндокринными клетками. Кроме того, в них имеются так называемые стволовые
клетки, благодаря которым происходит постоянное обновление клеток слизистой
оболочки.
Главные клетки – цилиндрические; продуцируют пепсиноген (предшественник
пепсина). Пепсиноген под действием ионов водорода соляной кислоты превращается в
пепсин, который расщепляет белки до аминокислот.
Обкладочные (париетальные) клетки – крупные клетки с внутриклеточными
выводными протоками. Они активно переносят из внутренней среды во внешнюю ионы
водорода, за которыми следуют ионы хлора.
Добавочные
или
слизистые
клетки
(мукоциты)
–
цилиндрические
(призматические), продуцируют слизь, сходны с покровно-ямочными клетками.
Нейроэндокринные клетки расположены в области дна железы, синтезируют
гастрин и секретин. Эти клетки можно дифференцировать в цитологических препаратах
только с помощью иммуно-цитохимических исследований или при опухолях (например,
при карциноиде), когда они в препаратах располагаются полями и имеют характерное
строение.
Получение и обработка материала для цитологического исследования
Материалом для цитологического исследования при заболеваниях желудка служит
материал, полученный при гастроскопии (отпечатки с биоптатов, соскобы щеткой). Мазки
делает медсестра или врач эндоскопической диагностики. Окрашивают препарат по
Романовскому или гематоксилин-эозином.
Цитологические особенности основных клеточных элементов в материале
гастроскопии
Клетки покровно-ямочного эпителия, их характеристика:
• Располагаются в пластах.
• Цитоплазма необильная.
• Ядра округло-овальные, среднего размера.
• Хроматин распределен равномерно.
Клетки эпителия желез Главные:
• Форма неправильная.
• Ядра округлые.
• В цитоплазме обильные базофильные гранулы (пепсиногена). Обкладочные:
• Округлой формы.
• Крупные, с обильной цитоплазмой.
• Ядра округлые, расположены центрально.
• Цитоплазма окрашивается в разные оттенки – от розового до серого.
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
1. Строение женской половой системы.
2. Гормональная регуляция менструального цикла
3. Условия получения полноценного материала, приготовление, фиксация мазков
из женских половых органов.
4. Жидкостная цитология в гинекологии.
5. Окрашивание гинекологических мазков.
6. Строение молочной железы.
7. Получение материала для цитологического исследования молочной железы.
8. Маркировка, доставка, обработка цитологического материала образований
молочных желез в цитологической лаборатории.
9. Цитологические особенности клеточных элементов молочной железы.
10. Получение и обработка материала для цитологического исследования при
заболеваниях дыхательной системы.
10. Дыхательная система: цитологические особенности основных клеточных
элементов мокроты и материала бронхоскопии.
11. Пищеварительная система: цитологические особенности основных клеточных
элементов материала, полученного при гастроскопии.