Ознакомиться с текстом автореферата

На правах рукописи
ЧМЫХОВА Анастасия Николаевна
СИСТЕМА АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ
И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЙ СТАТУС У ЖИВОТНЫХ
ПРИ РАСПРОСТРАНЕННОМ ПЕРИТОНИТЕ
03.01.04 – биохимия
06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизотология,
микология с микотоксикологией и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Курск – 2014
Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Курская государственная
сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова»
Научные руководители:
Доктор биологических наук
Артюшкова Елена Борисовна
Заслуженный ветеринарный врач РФ,
доктор биологических наук, профессор
Сеин Олег Борисович
Официальные оппоненты:
Фурман
Юрий
Васильевич,
доктор
биологических наук, профессор ФГБОУ ВПО
КИСО (филиал) РГСУ, заведующий кафедрой
истории, теории и технологии социальной
работы
Лебедева Марина Георгиевна, кандидат
ветеринарных наук, ОБУ «Станция по борьбе с
болезнями животных (СББЖ) Курского района»,
руководитель
Ведущая организация:
ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский
ветеринарный
институт
патологии,
фармакологии и терапии» РАСХН
Защита диссертации состоится «27» июня 2014 г. в 10 часов на заседании
диссертационного совета Д 220.040.03 при ФГБОУ ВПО «Курская
государственная
сельскохозяйственная
академия
имени
профессора
И.И. Иванова» (305021, г. Курск, ул. К. Маркса, 70. Тел. (4712) 53-13-30,
факс (4712) 58-50-49.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО
«Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора
И.И. Иванова» и на сайте www.kgsha.ru.
Автореферат разослан «___» __________ 2014 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
2
Рыжкова Галина Федоровна
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования. Согласно современным исследованиям
тяжелый распространенный перитонит сопровождается развитием системной
воспалительной реакции, а также активацией целого ряда факторов, влияющих
на характер течения и исход заболевания, важное значение среди которых
имеют активация процессов свободнорадикального окисления, нарушение
синтеза оксида азота, выброс значительного количества медиаторов
воспаления, повреждение сосудистого эндотелия, нарушения микроциркуляции
(Савельев В.С., Петухов В.А., 2012; Ермола Ю.А., Кубышкин А.В., 2012;
Ашрафов Р.А., Лычкова А.Э., 2012; Блинков Ю.Ю., 2012; Суковатых Б.С. и др.,
2011; Фролова О.Г, 2011). Возникающий дисбаланс усиливает деструктивные
процессы в паренхиматозных органах и, как следствие, приводит к
прогрессированию полиорганной недостаточности.
Выполненные на сегодняшний день клинические исследования не
позволяют сделать однозначные выводы о целесообразности применения в
комплексной терапии распространенного перитонита только лекарственных
средств с антиоксидантным действием. Последние десятилетия ведутся поиски
природных
веществ,
связывающих
активные
формы
кислорода.
Перспективным
представителем
данного
направления
является
дигидрокверцетин (3,5,7,3',4'-пента-гидроксифлаванон), антиоксидант из
лиственницы,
антиоксидантная
активность
которого
превосходит
антиоксидантный эффект кверцетина, рутина и бета-каротина (Потапович А.И.,
Костюк В.А., 2003; Кравченко Л.В. и др., 2005; Бабкин В.Н., 2011). Прямая
антирадикальная активность ДГК осуществляется преимущественно за счет
взаимодействия с липидными радикалами или супероксидными анионами. В
результате многоплановых исследований с использованием различных
модельных систем установлено, что ДГК ингибирует свободнорадикальное
окисление как водорастворимых (люминол), так и жирорастворимых
субстратов (липиды липосомальных и микросомальных мембран). При этом,
ДГК может действовать как ловушка активных форм кислорода, хелатор
металлов с переменной валентностью или обрывающий цепь агент
(Щукина О.Г. и др., 2008; Бабкин В.А., 2011; Deng W., Fang X., Wu J., 1997).
В настоящее время опубликованы работы, свидетельствующие о том, что
на всех стадиях перитонит протекает на фоне иммунодефицита, а в
терминальной стадии (полиорганной недостаточности) этот дефицит наиболее
выражен, возможность выведения из которого в значительной степени
определяет успех их лечения (Станулис А. И., Гришина Т.И. и др. 2002;
Сухоруков А.Л., 2005; Алешин Д.А., 2009). Учитывая это, одной из важных
задач экспериментальных исследований является изучение комбинированного
применения
дигидрокверцетина
и
отечественного
синтетического
®
®
иммуномодулятора
Галавита .
Галавит
является
5-амино-1,2,3,4тетрагидрофталазин-1,4-диона натриевой солью, которая известна в качестве
противовоспалительного и иммуномодулирующего препарата (Добрица В.П.,
Ботерашвили Н.М. и др., 2001; Донцов В.И., Подколзин А.А., 2001;
Коробкова Л.И., Вельшер Л.З. и др., 2004).
3
Таким образом, наиболее актуальным в настоящее время является
внедрение эффективных и патогенетически обоснованных методов
антиоксидантной терапии и иммунокоррекции при распространенном
перитоните. В этой связи определенный интерес может представлять изучение
возможности коррекции системной воспалительной реакции при перитоните
путем применения антиоксиданта из лиственницы – дигидрокверцетина и
иммуномодулятора Галавита® в качестве дополнения к стандартной терапии
при распространенном перитоните.
Цель исследования. Изучение антиоксидантного и иммунобиологического статуса у животных при распространенном перитоните на фоне
применения природного антиоксиданта дигидрокверцетина.
Задачи исследования.
1. Оценить изменение параметров оксидантно-антиоксидантного статуса,
уровня провоспалительных цитокинов и конечных стабильных метаболитов
оксида азота на фоне введения природного антиоксиданта дигидрокверцетина,
антиоксидантного препарата Мексикор®, иммуномодулятора Галавит® и
комбинаций дигидрокверцетина с Галавитом®, Мексикора® с Галавитом® при
моделировании распространенного перитонита.
2. Дать оценку иммунобиологического статуса при моделировании
распространенного перитонита у крыс на фоне применения природного
антиоксиданта дигидрокверцетина, антиоксидантного препарата Мексикор®,
иммуномодулятора Галавит® и комбинаций дигидрокверцетина с Галавитом®,
Мексикора® с Галавитом®.
3. Изучить эффективность применения природного антиоксиданта
дигидрокверцетина,
антиоксидантного
препарата
Мексикор®,
иммуномодулятора Галавит® и комбинаций дигидрокверцетина с Галавитом®,
Мексикора® с Галавитом® при микроциркуляторных нарушениях в стенке
тонкой кишки крыс, вызванных моделированием распространенного
перитонита.
4. Изучить органопротективную активность природного антиоксиданта
дигидрокверцетина,
антиоксидантного
препарата
Мексикор®,
иммуномодулятора Галавит® и комбинаций дигидрокверцетина с Галавитом®,
Мексикора® с Галавитом® по результатам морфологических исследований при
моделировании распространенного перитонита.
5. Оценить влияние природного антиоксиданта дигидрокверцетина,
антиоксидантного препарата Мексикор®, иммуномодулятора Галавит® и
комбинаций дигидрокверцетина с Галавитом®, Мексикора® с Галавитом® на
показатель общей летальности крыс при моделировании распространенного
перитонита.
Научная новизна. На основании комплексных исследований впервые
изучен антиоксидантный и иммунобиологический статус при моделировании
распространенного перитонита у крыс на фоне применения природного
антиоксиданта дигидрокверцетина, антиоксидантного препарата Мексикор®,
иммуномодулятора Галавит® и комбинаций дигидрокверцетина с Галавитом®,
Мексикора® с Галавитом®.
4
Впервые экспериментально обосновано применение природного
антиоксиданта дигидрокверцетина 7,7 мг/кг в качестве дополнения к
стандартной
терапии
распространенного
перитонита.
Монотерапия
дигидрокверцетином способствовала эффективному повышению уровня
регионарного кровотока в стенке тонкой кишки крыс, нормализации
биохимических маркеров свободнорадикального окисления, снижению
провоспалительных цитокинов, повышению антиоксидантной системы защиты
и иммунобиологического статуса, а также восстановлению NO-продуцирующей
функции эндотелия. В ходе проведенного исследования выявлена
органопротективная активность дигидрокверцетина 7,7 мг/кг в сторону
регресса гистоморфологических изменений изучаемых внутренних органов и
признаки стимуляции лимфоидной ткани в кишечнике и селезенке.
В работе впервые предложен эффективный способ комбинированного
лечения экспериментального распространенного перитонита с использованием
природного антиоксиданта дигидрокверцетина 7,7 мг/кг с иммуномодулятором
Галавит® 8,6 мг/кг и антиоксидантного препарата Мексикор® 60 мг/кг с
иммуномодулятором
Галавит®
8,6
мг/кг.
Изучение
оксидантноантиоксидантного,
иммунобиологического
и
цитокинового
статуса,
NО-продуцирующей функции эндотелия, а также уровня микроциркуляции в
стенке тонкой кишки и морфологических изменений внутренних органов крыс
обнаружили выраженный сопоставимый фармакологический эффект
исследуемых комбинаций. Применение комбинаций способствовало более
раннему восстановлению нарушенных биохимических показателей и
микроциркуляции до уровня интактных животных по сравнению с
монотерапией дигидрокверцетином 7,7 мг/кг.
Эффективность проводимой терапии была подтверждена результатом
оценки уровня общей летальности экспериментальных животных. Впервые
отмечено снижение общей летальности с 62% в группе с распространенным
перитонитом до 26% на фоне введения комбинации дигидрокверцетин 7,7 мг/кг
+ Галавит® 8,6 мг/кг; до 32 % на фоне введения дигидрокверцетина 7,7 мг/кг и
до 34% на фоне введения комбинации Мексикор® 60 мг/кг + Галавит®
8,6 мг/кг.
Теоретическая и практическая значимость. В работе обоснована
эффективность фармакологической коррекции распространенного перитонита
природным
антиоксидантом
дигидрокверцетином,
антиоксидантным
препаратом Мексикор®, а также комбинациями дигидрокверцетина с
иммуномодулятором Галавит® и препарата Мексикор® с иммуномодулятором
Галавит®. При этом преимущество дигидрокверцетина перед препаратом
Мексикор® выявлялось как при монотерапии, так и в комбинации с
иммуномодулятором Галавит®.
По результатам исследования нами получено, что наибольшему
снижению процента общей летальности крыс сопутствовала более эффективная
коррекция
оксидантно-антиоксидантного,
иммунобиологического
и
цитокинового
статуса,
NO-продуцирующей
функции
эндотелия,
восстановление микроциркуляторных нарушений в стенке тонкой кишки и
5
морфологических изменений, развившихся на фоне моделирования
распространенного перитонита.
С практической точки зрения результаты настоящего исследования
свидетельствуют о том, что из числа испытанных препаратов предпочтение
следует отдавать тем препаратам и комбинациям, которые оказали
существенное влияние на снижение общей летальности крыс в ходе
выполненного эксперимента.
Полученные данные позволяют рекомендовать целенаправленные
доклинические и клинические испытания природного антиоксиданта
дигидрокверцетина,
а
также
комбинаций
дигидрокверцетина
с
иммуномодулятором Галавит® и антиоксидантного препарата Мексикор® с
иммуномодулятором Галавит® в качестве дополнительной терапии к
общепринятым хирургическим и фармакологическим методам лечения
распространенного перитонита.
Внедрение
результатов
научных
исследований.
Материалы
диссертационного исследования, касающиеся обоснования эффективности
фармакологической
коррекции
природным
антиоксидантом
дигидрокверцетином
оксидантно-антиоксидантного
статуса,
уровня
провоспалительных цитокинов и NO-продуцирующей функции эндотелия
включены в состав документов, поданных на регистрацию в ФБУЗ ФЦГиЭ
Роспотребнадзора. Получено свидетельство о государственной регистрации на
биологически активную добавку к пище, содержащую 257,0±25,0 мг/мл
дигидрокверцетина в глицерине № RU.77.99.11.003.Е.003227.04.13 от
24.04.2013 г.
Результаты работы используются в лекционных курсах кафедры терапии
и акушерства ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная
академия имени профессора И.И. Иванова», в лекционных курсах кафедры
фармакологии,
клинической
фармакологии
и
при
выполнении
экспериментальных исследований в НИИ экологической медицины ГБОУ ВПО
КГМУ.
Положения, выносимые на защиту.
1. Дигидрокверцетин 7,7 мг/кг/сут, препараты Мексикор® 60 мг/кг/сут и
Галавит® 8,6 мг/кг/сут оказывают корригирующее действие на показатели
оксидантно-антиоксидантного статуса, провоспалительных цитокинов и NOпродуцирующую
функцию
эндотелия
на
фоне
моделирования
распространенного перитонита, наиболее выраженный протективный эффект
получен при комбинированном введении дигидрокверцетина с Галавитом® и
препарата Мексикор® с Галавитом®.
2. Применение комбинаций дигидрокверцетина 7,7 мг/кг + Галавит® 8,6
мг/кг и Мексикор® 60 мг/кг + Галавит® 8,6 мг/кг, а также монотерапия
препаратом Галавит® и монотерапия дигидрокверцетином оказывает
стимулирующее влияние на гуморальное звено иммунной системы крыс при
моделировании распространенного перитонита.
3. Дигидрокверцетин 7,7 мг/кг/сут, препараты Мексикор® 60 мг/кг/сут и
Галавит® 8,6 мг/кг/сут оказывают протективное действие на коррекцию
6
морфологических изменений, а также повышают уровень регионарного
кровотока в стенке тонкой кишки относительно контрольной группы животных
с моделированием распространенного перитонита, при этом, дигидрокверцетин
проявлял более выраженный эффект, сопоставимый с комбинированным
введением дигидрокверцетина с Галавитом® и препарата Мексикор® с
Галавитом®.
4. Оценка общей летальности экспериментальных животных при
моделировании распространенного перитонита представляет эффективность
фармакологического
действия
исследуемых
антиоксидантов
и
иммуномодулятора, а также их комбинаций в следующей последовательности:
ДГК+Галавит® > ДГК > Мексикор®+Галавит® > Мексикор® > Галавит®.
5. Дигидрокверцетин 7,7 мг/кг/сут проявляет более выраженную
эффективность при лечении распространенного перитонита по сравнению с
препаратом Мексикор® 60 мг/кг/сут при оценке оксидантно-антиоксидантного,
иммунобиологического и цитокинового статуса, NO-продуцирующей функции
эндотелия, микроциркуляции в стенке тонкой кишки крыс, морфологических
изменений и общей летальности экспериментальных животных.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы были
доложены на 3 научных конференциях:
– Международной научно-производственной конференции «Проблемы и
перспективы инновационного развития животноводства» (15-16 мая 2013 г.) –
Белгород, 2013;
– Международной научно-практической конференции «Научният потенциал на
света» (17-25 сентября 2013 г.) – София, 2013;
– Международной научно-практической конференции «Научное обеспечение
агропромышленного производства» (29-31 января 2014 г.) – Курск, 2014.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных
статей, в том числе 3 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора
литературы, описания материалов и методов исследования, результатов
экспериментальных исследований, обсуждения полученных результатов,
выводов и списка используемой литературы, включающего 215 источников, из
них 184 отечественных и 31 зарубежного автора. Диссертация изложена на
159 страницах машинописного текста, содержит 25 таблиц и 46 рисунков.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Исследование выполнено на половозрелых крысах-самцах линии
«Wistar», массой тела 200-250 г. Эксперимент проведен в соответствии с
Национальным стандартом Российской Федерации ГОСТ Р 53434-2009
«Принципы надлежащей лабораторной практики», Приказом Министерства
здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 23 августа
2010 г. № 708н «Об утверждении Правил лабораторной практики»,
«Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых
фармакологических веществ» под общей ред. чл.-корр. РАМН, профессора
Р.У. Хабриева (2005).
7
Нами была использована модель распространенного гнойного
перитонита (РГП) (Лазаренко В.А. и др., 2008) с синдромом
интраабдоминальной гипертензии (ИАГ) на крысах (рацпредложение №190410 от 11.01.10; рацпредложение №1877-09 от 28.04.09 ГОУ ВПО КГМУ
Минздравсоцразвития России), с помощью которой изучалась эффективность
применения природного антиоксиданта флавоноида дигидрокверцетина
(ДГК), антиоксидантного препарата Мексикор®, иммуномодулятора
Галавит®, а также комбинаций: ДГК+Галавит® и Мексикор®+Галавит®, в
коррекции нарушений оксидантно-антиоксидантного, иммунобиологического
и цитокинового статуса, NО-продуцирующей функции эндотелия, а также
уровня микроциркуляции в стенке тонкой кишки и морфологических
изменений внутренних органов у лабораторных животных.
В качестве средства для наркоза использовали хлоралгидрат, который
вводили внутрибрюшинно в дозе 300 мг/кг массы животного. Под наркозом с
соблюдением правил асептики и антисептики крысам выполнялась срединная
лапаротомия,
распространенный
перитонит
вызывался
путем
внутрибрюшного введения 10 % каловой взвеси крысы, которая вводилась в
разных направлениях в объеме 0,5 мл на 100 г массы животного (Лазаренко
В.А. и др., 2008). Далее создавалась дубликатура в 1 см апоневроза передней
брюшной стенки, которая фиксировалась П-образными швами с последующей
фиксацией узловыми швами. Животные всех исследуемых групп (контрольная
и опытные) получали внутримышечно антибактериальную терапию путем
введения цефотаксима в дозе 0,085 г на 1 кг массы тела, ежедневно в течение
5 дней. Через 48 часов от начала эксперимента в контрольной и исследуемых
группах выполнялась повторная операция – релапаротомия, санация брюшной
полости антисептическим раствором (0,02% раствор фурациллина),
устранение дубликатуры передней брюшной стенки путем закрытия
лапаротомной раны «край в край» (Фролова О.Г. дисс. … к-та мед. наук, 2011).
Обоснование доз исследуемых препаратов. Дозы исследуемых
препаратов в опытных группах рассчитывались исходя из средней
терапевтической дозы для человека с учетом коэффициента пересчета доз с
человека на животных согласно «Руководству по экспериментальному
(доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2005).
Согласно Требованиям безопасности и пищевой ценности пищевых
продуктов «Единых санитарно-эпидемиологических и гигиенических
требований к товарам, подлежащих санитарно-эпидемиологическому надзору
(контролю)» Таможенного союза, а также Техническому регламенту
Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011)
уровень
суточного
потребления
природного
антиоксиданта
дигидрокверцетина для взрослых составляет 25-100 мг. В настоящем
экспериментальном
исследовании
фармакологические
эффекты
дигидрокверцетина (3,5,7,3',4'-пента-гидроксифлаванон) (антиоксиданты из
лиственницы
«Дигидрокверцетин
(Таксифолин)»
СГР
№
RU.77.99.11.003.Е.018404.05.11) производства ООО «Таксифолия», Россия
изучались исходя из суточной дозы потребления 90 мг для человека массой
8
70 кг, которая в результате переноса доз на крысу составила 7,7 мг/кг/сут. Так
как растворимость дигидрокверцетина в воде и водосодержащих продуктах
недостаточна для осуществления точного дозирования препарата с целью
достижения необходимой биодоступности, то введение дигидрокверцетина
лабораторным животным осуществлялось внутрижелудочно в виде 20%
раствора на основе разрешенного к применению в пищевой промышленности
растворителе – глицерине (ТУ 9197-012-66975341-2010 "Сырье для
производства БАД к пище и пищевой промышленности "Флавомикс-G").
Эффективность антиоксидантного препарата Мексикор® (2-этил-6метил-3-оксипиридина сукцинат) ООО «ЭкоФармИнвест», производства
Государственный
завод
медицинских
препаратов
ФГУП,
Россия
исследовалась при внутримышечном введении лабораторным животным в
дозе 60 мг/кг/сут, исходя из максимальной суточной дозы 800 мг для человека
массой 70 кг. Доза вводимого препарата была рассчитана с учетом
коэффициента пересчета на площадь поверхности тела человека, равному
39,0, и коэффициента пересчета на площадь поверхности тела крысы массой
250 г, равному 7,0.
При изучении эффективности иммуномодулятора Галавит® (5-амино1,2,3,4-тетрагидрофталазин-1,4-диона
натриевая
соль)
производства
ЗАО «Центр современной медицины «МЕДИКОР», Россия препарат вводился
животным внутримышечно в дозе 8,6 мг/кг/сут, исходя из средней
терапевтической суточной дозы 100 мг для человека массой 70 кг. Доза
вводимого препарата была рассчитана с учетом коэффициента пересчета на
площадь поверхности тела человека, равному 39,0, и коэффициента пересчета
на площадь поверхности тела крысы массой 250 г, равному 7,0.
В случае комбинированного лечения препараты вводились в тех же
дозах, что и при монотерапии.
В хронических экспериментах при моделировании распространенного
перитонита исследуемые препараты вводились в соответствующих дозах один
раз в сутки в течение 10 дней. Принятая схема соответствует основной массе
экспериментальных исследований, выполненных на крысах, на данной модели
патологии (Фролова О.Г. дисс. … к-та мед. наук, 2011; Блинков Ю.Ю. дисс. …
д-ра мед. наук, 2012).
Измерение
микроциркуляторных
показателей.
Измерение
микроциркуляции в стенке тонкой кишки производилось с помощью
лазерного доплеровского флуометра (ЛДФ) фирмы «Biopac Systems, Inc.» МР100 с датчиком TSD–144 и программы Acqknowledge 3.8.1. Измерения
производились в 6 точках на расстоянии 1 см, 2 см, 3 см, 4 см, 5 см и 7 см от
илеоцекального угла в стенке тонкой кишки. Показатели микроциркуляции
имели вид ЛДФ-грамм и выражались в перфузионных единицах (перф. ед.).
Запись кривой уровня микроциркуляции проводили в течение 30 сек. в каждой
точке, затем из полученных значений выводили средние, которые вносили в
Протокол исследования.
Определение биохимических и иммунологических показателей.
Выраженность перекисного окисления липидов в крови животных оценивали
9
по содержанию малонового диальдегида (Бенисевич В.И., Идельсон Л.И.,
1973; Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И., 1983). Кроме того, определяли
активность каталазы (Королюк М.А. и др. 1988), супероксиддисмутазы
(Макаренко Е.В., 1988) и общую антиокислительную активность сыворотки
крови крыс (Клебанов Г.И. и др., 1988). Уровень метаболитов оксида азота
(суммарную концентрацию нитратов и нитритов, NOx) определяли
колориметрическим методом по развитию окраски в реакции диазотирования
нитритом сульфаниламида, входящим в состав реактива Грисса
(Метельская В.А., 2004).
Количественное содержание ИЛ-6, ФНО-α определяли с помощью ИФА
наборов для крыс «Rat TNF-α Platinum ELISA» и «Rat IL-6 Platinum ELISA»
фирмы «eBioscience», Австрия. Метод определения основан на «сэндвич»
варианте твердофазного иммуноферментного анализа с применением биотинконъюгированных поликлональных антител против крысиных ФНО-α и
биотин-конъюгированных моноклональных антител против крысиных ИЛ-6.
Концентрацию иммуноглобулинов IgG, IgM и IgA в сыворотке крови
определяли иммунотурбидиметрическим методом на автоматическом
анализаторе для биохимического и иммунотурбидиметрического анализа
Vitalit 1000 (Италия) в соответствии с программами, разработанными фирмойпроизводителем, с использованием наборов «Иммуноглобулин G-Витал»,
«Иммуноглобулин М-Витал» и «Иммуноглобулин А-Витал».
Морфологические исследования. При вскрытии животных обращали
внимание на общий вид внутренних органов, наличие и отсутствие жидкостей
в серозных полостях. Для морфологического подтверждения развития
моделируемой патологии и в комплексной оценке эффективности препаратов
проводили гистологическое исследование тонкого и толстого кишечника,
печени, почек, легкого и селезенки интактных, контрольных крыс и крыс,
получавших исследуемые препараты. С этой целью кусочки данных органов
фиксировали в растворе 10% нейтрального формалина и заливали в парафин
по общепринятым методикам (Меркулов Г.А., 1969). Парафиновые срезы
толщиной 8-10 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. Проводили
морфометрию.
Статистическая обработка результатов исследований. Достоверность
наблюдавшихся при действии исследованных препаратов изменений
параметров, как абсолютных, так и в процентах от исходного уровня,
определяли путем расчета средней арифметической (М), ошибки средней
арифметической (±m) и оценки достоверности различий сравниваемых
параметров между группами с использованием t-test для групп с разными
дисперсиями, достоверными считались различия сравниваемых параметров
при р<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. Изучение влияния дигидрокверцетина в сравнении с препаратом
Мексикор®, а также их комбинаций с иммуномодулятором Галавит® на
оксидантно-антиоксидантный, иммунобиологический статус, уровень
10
провоспалительных цитокинов и NO-продуцирующую функцию эндотелия
при моделировании распространенного перитонита у крыс.
Моделирование экспериментального распространенного перитонита
вызывает активацию процессов свободнорадикального окисления, угнетение
системы антиоксидантной защиты, повышение уровней провоспалительных
цитокинов, нарушение синтеза оксида азота.
Так, в сыворотке крови нелеченных животных отмечается достоверное
повышение концентрации малонового диальдегида. Сравнительное изучение
влияния исследуемых препаратов и их комбинаций выявило значительное
снижение концентрации МДА на фоне введения дигидрокверцетина, а также
комбинаций препаратов дигидрокверцетин+Галавит® и Мексикор® +
Галавит®, начиная со 2-х суток эксперимента, в сравнении с контрольной
группой без достижения уровня интактных животных. В то время как
наиболее выраженный эффект снижения продуктов перекисного окисления
липидов до уровня интактных животных, на примере МДА, получен на фоне
лечения комбинацией дигидрокверцетина с препаратом Галавит®, начиная с
5-х суток и до конца эксперимента (рис. 1-а).
Определение антиокислительного потенциала включало исследование
активности ферментов антиоксидантной защиты – супероксиддисмутазы,
каталазы и общей антиокислительной активности. Об угнетении
антиоксидантной системы защиты при моделировании распространенного
перитонита свидетельствовало снижение активности СОД, каталазы и ОАА
(рис. 1-б, 1-в, 1-г) относительно интактной группы животных. При введении
ДГК и препарата Мексикор® отмечалось с третьих суток эксперимента
достоверное повышение СОД относительно контрольной группы, а к 10-м
суткам имело место превышение значений интактной группы (рис. 1-б).
Использование комбинаций ДГК+Галавит® и Мексикор®+Галавит®
приводило к более раннему повышению уровня СОД, начиная со вторых суток
(рис. 1-б) и на всем протяжении эксперимента, относительно контрольной
группы и достоверному повышению показателя на 5-е, 7-е и 10-е сутки – от
интактных крыс.
На фоне введения ДГК, препарата Мексикор®, а также комбинаций
ДГК+Галавит® и Мексикор®+Галавит®, начиная с 3-х суток, активировалась
антиоксидантная система защиты, что подтверждалось статистически
достоверным повышением активности каталазы в сыворотке крови крыс от
уровня, определяемого не только в контрольной группе животных, но и
повышением относительно интактных крыс (рис. 1-в).
Изучение состояния ОАА выявило, что в условиях патологии
чрезмерная активация процессов свободнорадикального окисления приводит к
стойкому снижению показателя в 2 раза на протяжении всего эксперимента.
На фоне введения дигидрокверцетина и препарата Мексикор®, а также
комбинаций ДГК+ Галавит® и Мексикор®+Галавит® получено статистически
достоверное повышение показателя ОАА относительно контрольной группы,
начиная со 2-х суток эксперимента, а начиная с 5-х суток ОАА практически не
отличался от значений интактной группы. Следует отметить, что
использование комбинации ДГК+Галавит® приводит к более раннему
повышению значений ОАА к уровню интактных животных, начиная уже с 3-х
суток исследования (рис. 1-г).
11
Рис. 1-а Малоновый диальдегид
(МДА, мкмоль/л)
Рис. 1-б
Рис. 1-в Каталаза (мкат/л)
Рис. 1-г Общая антиокислительная
активность (ОАА, %)
Рис.1-д Интерлейкин-6 (ИЛ-6, пг/мл)
Рис. 1-е Фактор некроза опухоли-α
(ФНО-α, пг/мл)
Супероксиддисмутаза
(СОД, усл.ед/мл)
Рис. 1-ж Конечные стабильные метаболиты
NO (NOх, мкмоль/л)
Рис. 1. Влияние дигидрокверцетина 7,7 мг/кг, препарата Мексикор® 60 мг/кг,
Галавит® 8,6 мг/кг, а также комбинаций препаратов дигидрокверцетин
7,7 мг/кг+Галавит® 8,6 мг/кг и Мексикор® 60 мг/кг+Галавит® 8,6 мг/кг на
биохимические показатели сыворотки крови крыс при моделировании
распространенного перитонита.
Примечание: х – при р<0,05 в сравнении с интактной группой;
у – при р<0,05 в сравнении с контрольной группой
12
После моделирования перитонита на 3-и сутки исследования наблюдалось
повышение активности гуморального звена иммунитета, характеризующееся
достоверным увеличением концентрации иммуноглобулинов IgG и IgМ,
которые играют важную роль в процессах противоинфекционной защиты. При
этом концентрация иммуноглобулина IgА достоверно уменьшалась по
сравнению с интактной группой животных, что может свидетельствовать о
снижении местной защиты слизистых оболочек от инфекции. У крыс
контрольной группы на 5-е и 10-е сутки имело место снижение уровня всех
классов иммуноглобулинов: IgG, IgМ и IgА относительно интактных животных
(р<0,05), что подчеркивает степень тяжести развивающейся патологии (табл. 1).
Таблица 1
Влияние дигидрокверцетина, препарата Мексикор®, Галавит®, а также
комбинаций препаратов дигидрокверцетин +Галавит® и Мексикор®+Галавит®
на иммунологические показатели гуморального иммунитета крыс при
моделировании распространенного перитонита (М±m)
Сутки исследования
ИммунолоИсследуемые
3-и сутки
гические
группы
(до релапаро5-е сутки
10-е сутки
показатели
томии)
интактные
1,78±0,08у
1,82±0,06у
1,75±0,05у
контроль
2,18±0,08х
1,06±0,11х
1,05±0,15х
ДГК
1,60±0,07у
1,53±0,09ху
1,93±0,10у
IgG,
г/л
Мексикор®
2,09±0,06х
1,15±0,09х
0,94±0,12х
Галавит®
3,03±0,14ху
3,23±0,07ху
3,42±0,12ху
ДГК + Галавит®
3,31±0,14ху
3,58±0,10ху
3,87±0,13ху
Мексикор®+Галавит® 3,14±0,11ху
3,25±0,08ху
3,56±0,06ху
интактные
0,260±0,025у 0,244±0,013у 0,253±0,020у
контроль
0,462±0,046х 0,142±0,038х 0,124±0,033х
ДГК
0,309±0,036у 0,264±0,022у 0,289±0,041у
IgM,
Мексикор®
0,489±0,029х 0,123±0,044х 0,108±0,032х
г/л
Галавит®
0,607±0,040ху 0,557±0,039ху 0,526±0,045ху
ДГК + Галавит®
0,626±,041ху 0,563±0,035ху 0,572±0,029ху
Мексикор®+Галавит® 0,577±0,023ху 0,529±0,027ху 0,516±0,019ху
интактные
0,069±0,018у 0,071±0,022у 0,074±0,016у
контроль
0,029±0,005х 0,028±0,009х 0,031±0,012х
ДГК
0,061±0,028 0,066±0,014у 0,082±0,007у
IgA,
Мексикор®
0,036±0,007х 0,023±0,010х 0,042±0,012х
г/л
Галавит®
0,102±0,011у 0,134±0,007ху 0,140±0,006ху
ДГК + Галавит®
0,128±0,020ху 0,147±0,025ху 0,164±0,020ху
Мексикор®+Галавит® 0,094±0,013у 0,116±0,012у 0,135±0,008ху
Примечание: х – при р<0,05 в сравнении с интактной группой;
у – при р<0,05 в сравнении с контрольной группой.
На фоне применения дигидрокверцетина на 3-и сутки после моделирования
перитонита концентрация IgG и IgМ соответствовала значениям интактных
13
животных (р>0,05), однако, была достоверно ниже значений в контрольной
группе (р<0,05). На 5-е и 10-е сутки в контрольной группе уровень IgG одинаково
снижался в 1,7 раза, а IgМ – в 1,7 и 2 раза, соответственно, по сравнению с
показателями интактной группы. Введение дигидрокверцетина приводило к
восстановлению концентрации иммуноглобулинов IgG, IgМ и IgA на 5-е и 10-е
сутки исследования до нормальных значений интактных животных (табл. 1).
При изучении динамики изменений иммунологических показателей
получено, что введение препарата Мексикор® не вызывает заметных
изменений в показателях, характеризующих гуморальное звено иммунитета:
концентрации IgG, IgМ и IgA в сыворотке крови крыс не восстанавливались до
нормальных значений интактных животных на всех сроках исследования (табл. 1).
На фоне применения препарата Галавит® на 3-и сутки эксперимента
наблюдалось более выраженное иммуностимулирующее действие по
сравнению с контрольной группой, характеризующееся увеличением IgG и IgМ
(р<0,05). Напротив, концентрация IgA в контрольной группе на 3-и сутки
снижалась более чем в 2 раза, в то время как введение препарата Галавит®
способствовало достоверному повышению значений IgA относительно
контрольной группы до уровня интактных животных. Введение животным
иммуномодулятора Галавит® после моделирования перитонита приводило к
достоверному повышению концентрации IgG, IgМ и IgА не только
относительно контрольной группы, но и превышало уровень интактных крыс в
1,5 раза, в 2,3 раза и в 1,9 раза, соответственно, на 5-е сутки и в 1,9 раза, 2 раза
и в 1,9 раза, соответственно, на 10-е сутки исследования (р<0,05) (табл. 1).
На фоне применения комбинаций ДГК+Галавит® и Мексикор®+ Галавит®
на 3-и сутки наблюдалось более выраженное иммуностимулирующее действие по
сравнению с контрольной группой, характеризующееся увеличением IgG, IgМ и
IgA (р<0,05). Следует отметить, что введение комбинации ДГК+Галавит®
оказывало более заметное влияние на показатели иммунного ответа по сравнению
с монотерапией дигидрокверцетином, увеличивая на 3-и сутки концентрацию IgG,
IgМ и IgA в 2 раза. Введение комбинации Мексикор®+ Галавит® также
оказывало влияние на показатели гуморального иммунитета по сравнению с
монотерапией препаратом Мексикор®, увеличивая концентрацию IgG в 1,5 раза,
IgМ – в 1,2 раза, IgA – в 2,6 раза (табл. 1).
Введение комбинаций ДГК+Галавит® и Мексикор®+Галавит®
приводило к достоверному повышению концентрации IgG, IgМ и IgА не только
относительно контрольной группы, но и превышало уровень интактных крыс
на 5-е и 10-е сутки исследования (р<0,05). В то же время следует подчеркнуть,
что добавление к дигидрокверцетину иммуномодулятора Галавит®
способствовало повышению концентрации IgG, IgМ и IgА в 2,3 раза, в 2,1 раза
и в 2,2 раза на 5-е сутки, соответственно, по сравнению с монотерапией
дигидрокверцетином.
На
10-е
сутки
сохранялось
преимущество
комбинированного применения ДГК+Галавит®, что выражалось в повышении
IgG, IgМ и IgА в 2 раза по сравнению с монотерапией дигидрокверцетином
(табл. 1). Добавление к препарату Мексикор® иммуномодулятора Галавит®
способствовало повышению концентрации иммуноглобулинов IgG, IgМ и IgА в
2,8 раза, в 4,3 раза и в 5,0 раза на 5-е сутки, соответственно, по сравнению с
монотерапией препаратом Мексикор®. На 10-е сутки также сохранялось
преимущество комбинированного применения Мексикор®+Галавит®, что
выражалось в повышении IgG, IgМ и IgА в 3,8 раза, в 4,8 раза и в 3,2 раза,
соответственно, по сравнению с монотерапией препаратом Мексикор® (табл. 1).
14
При изучении влияния монотерапии препаратом Галавит® и препаратом
Мексикор® на уровень провоспалительных цитокинов нами было получено
снижение ИЛ-6 (начиная с 4-х и 5-х суток, соответственно) и ФНО-α (начиная с
3-х и 4-х суток, соответственно) относительно контрольной группы животных,
сопоставимое для исследуемых групп. При комбинированном применении
дигидрокверцетина и препарата Мексикор® с препаратом Галавит® отмечалось
более эффективное снижение цитокинов относительно контрольных животных,
начиная со 2-х суток исследования (рис. 1-д, 1-е) и, что особо важно,
достижение значений интактных животных в отношении ИЛ-6 и ФНО-α в
исследуемых комбинациях достигалось одновременно на 7-е и 10-е сутки. При
этом считаем примечательным наблюдаемый на фоне монотерапии
дигидрокверцетином эффект аналогичный комбинациям, выражающийся в
снижении ИЛ-6 в 6 раз, а ФНО-α – в 3,7 раза от уровня контрольной группы на
10-е сутки (рис. 1-д, 1-е).
Изучив динамику концентрации конечных стабильных метаболитов
оксида азота, в контрольной группе мы подтвердили нарушение NOпродуцирующей функции эндотелия, выражающееся в повышении
концентрации конечных стабильных метаболитов оксида азота NOx с 1-х по
10-е сутки эксперимента по сравнению с интактной группой животных.
Заслуживает внимания тот факт, что исследуемые препараты: ДГК, Мексикор®
и их комбинации в разной степени достоверно снижали концентрацию NOx
относительно контрольной группы уже с 1-х суток исследования (рис. 1-ж), что
может свидетельствовать об их эндотелиопротективных свойствах. При этом
наиболее выраженный эффект демонстрировали ДГК, комбинации препаратов
ДГК+Галавит® и Мексикор®+Галавит®, восстанавливая концентрацию NOx
до уровня интактной группы, начиная с 5-х по 10-е сутки исследования. В то
время как под действием монотерапии препаратом Мексикор® уровень
интактных крыс достигался лишь на 10-е сутки, а на фоне введения препарата
Галавит® целевые значения интактной группы в ходе эксперимента достигнуты
не были (рис. 1-ж).
Таким
образом,
комбинации
дигидрокверцетина+Галавит®
и
Мексикор®+Галавит® при моделировании распространенного перитонита в
эксперименте оказывают более выраженное корригирующее действие на
показатели
оксидантно-антиоксидантного
статуса,
провоспалительных
цитокинов и NO-продуцирующую функцию эндотелия по сравнению с
монотерапией, где наиболее сопоставимую положительную динамику на
показатели МДА, СОД, ИЛ-6, ФНО-α и NOx продемонстрировала монотерапия
дигидрокверцетином.
2. Изучение влияния дигидрокверцетина в сравнении с препаратом
Мексикор®, а также их комбинаций с иммуномодулятором Галавит® на
микроциркуляторные и морфологические изменения при моделировании
распространенного перитонита у крыс.
При исследовании микроциркуляции в стенке тонкой кишки крыс
выявлены
значительные
нарушения
кровотока,
сопровождающиеся
достоверным снижением показателей микроциркуляции на протяжении всего
исследования по сравнению с интактной группой животных (р<0,05). К 10-м
суткам не происходило полного восстановления микроциркуляции, значения
которой оставались достоверно ниже на 42,3 % относительно группы
интактных животных (рис. 2).
15
Рис. 2. Динамика микроциркуляции в стенке тонкой кишки крыс,
получавших дигидрокверцетин 7,7 мг/кг, Галавит® 8,6 мг/кг и комбинацию
дигидрокверцетин 7,7 мг/кг+Галавит® 8,6 мг/кг
при
экспериментальном
перитоните, в абсолютных значениях.
Примечание: X – при р<0,05 в сравнении с интактной группой;
Y
– при р<0,05 в сравнении с контрольной группой.
Рис. 3. Динамика микроциркуляции в стенке тонкой кишки крыс,
получавших Мексикор® (60 мг/кг), Галавит® (8,6 мг/кг) и комбинацию
Мексикор® (60 мг/кг)+Галавит® (8,6 мг/кг) при экспериментальном
перитоните, в абсолютных значениях.
Примечание: X – при р<0,05 в сравнении с интактной группой;
Y
– при р<0,05 в сравнении с контрольной группой.
16
Дигидрокверцетин в качестве монотерапии, комбинация препаратов
ДГК+Галавит® при моделировании распространенного перитонита у крыс
способствовали эффективному повышению уровня регионарного кровотока в
стенке тонкой кишки относительно контрольной группы животных. Введение
экспериментальным животным комбинации способствовало более раннему
(начиная с 5-х суток) восстановлению микроциркуляции в стенке тонкой кишки
до уровня интактных животных (р>0,05) по сравнению с монотерапией ДГК, в
которой уровень интактных животных достигался на 10-е сутки (рис. 2).
Комбинация препаратов Мексикор®+Галавит®, а также монотерапия
препаратом Мексикор® и в меньшей степени монотерапия препаратом
Галавит® при моделировании распространенного перитонита у крыс приводит
к эффективному повышению уровня регионарного кровотока в стенке тонкой
кишки по сравнению с контрольной группой. Введение экспериментальным
животным комбинации способствовало (начиная с 7-х суток) восстановлению
микроциркуляции до уровня интактных животных (р>0,05) в отличие от
монотерапии препаратом Мексикор® и препаратом Галавит®, на фоне
введения которых уровень интактных животных достигнут не был (рис. 3).
В наших экспериментах показано, что нарушения микроциркуляции
возникали уже на реактивной стадии перитонита и сопровождались
дистрофическими изменениями тонкой кишки и других органов-мишеней,
достигшими в токсической фазе максимальной выраженности.
Морфологические изменения у крыс с нелеченным перитонитом
заключались в развитии распространенных нарушений кровообращения,
дистрофических и воспалительных изменений в кишечнике, печени, почках и
легких. Описанный морфологический симптомокомплекс свидетельствует о
развитии при перитоните у крыс полиорганной недостаточности.
Морфологические
исследования
подтвердили
высокую
органопротективную активность монотерапии дигидрокверцетином в дозе
7,7 мг/кг/сут и препаратом Мексикор® в дозе 60 мг/кг/сут в сторону регресса
гистоморфологических изменений в париетальной брюшине, в тонком и
толстом кишечнике, печени, почках и легких, вызванных моделированием
распространенного
перитонита
(рис. 4-5).
К
концу
эксперимента
обнаруживаемые в контрольной группе нарушения кровообращения,
дистрофические и воспалительные изменения не определяются.
Кроме этого на фоне применения дигидрокверцетина 7,7 мг/кг/сут
выявляются признаки стимуляции лимфоидной ткани в кишечнике и селезенке
(рис. 6), что может быть обусловлено иммуномодулирующим действием
дигидрокверцитина.
При введении препарата Галавит® в дозе 8,6 мг/кг/сут в тонком и
толстом кишечнике (рис. 7), легких и селезенке (рис. 8) отмечается выраженная
гиперплазия
лимфоидной
ткани,
что
может
быть
обусловлено
иммуномодулирующим действием препарата Галавит®.
Также
морфологические
исследования
подтвердили
высокую
органопротективную
активность
комбинаций
ДГК+Галавит®
и
®
®
Мексикор +Галавит на фоне моделирования распространенного перитонита.
17
Рис. 4. Перитонит на фоне введения ДГК,
4 сут. Воспалительная инфильтрация
ворсин тонкого кишечника с их
заметным утолщением, язв нет. Окраска
гематоксилином и эозином. х 56.
Рис. 5. Перитонит на фоне введения
препарата
Мексикор®,
2
сут.
Мелкокапельная жировая дистрофия
гепатоцитов. Окраска гематоксилином
и эозином. х400.
Рис.6. Перитонит на фоне введения
ДГК 7,7 мг/кг, 10 сут. Гиперплазия
лимфоидных фолликулов селезенки.
Окраска гематоксилином и эозином.
х56.
Рис. 7. Перитонит на фоне введения
препарата
Галавит®,
7
сут.
Выраженная гиперплазия лимфоидного
аппарата тонкой кишки. Окраска
гематоксилином и эозином. х 56.
Рис. 8. Перитонит на фоне введения
препарата Галавит®, 10 сут. Лимфоидные фолликулы селезенки крупные,
имеются реактивные центры. Окраска
гематоксилином и эозином. х 70.
Рис. 9. Перитонит на фоне введения
комбинации ДГК+Галавит®, 10 сут.
Тонкий
кишечник,
гиперплазия
лимфоидной ткани. Окраска гематоксилином и эозином. х 56.
18
При этом на фоне применения комбинации ДГК+Галавит®
морфологические изменения в париетальной брюшине, кишечнике, печени,
почках, легких и селезенке были в целом аналогичны таковым у крыс,
получавших монотерапию дигидрокверцетином. В то же время на фоне
введения комбинации Мексикор®+Галавит® патологические изменения в
структуре изученных органов были выражены в меньшей степени, чем в группе
монотерапии препаратом Мексикор®.
Следует отметить значительную гиперплазию лимфоидной ткани тонкого
кишечника в результате применения комбинации ДГК+Галавит® (рис. 9).
Можно
предположить,
что
полученный
результат
связан
с
иммуномодулирующим действием испытуемых препаратов.
В отличие от группы животных, получавших лечение препаратом
Мексикор®, при комбинированной терапии Мексикор®+Галавит® отмечается
выраженная гиперплазия лимфоидной ткани тонкого кишечника, что, вероятно,
связано с иммуномодулирующим действием препарата Галавит®.
3. Изучение влияния дигидрокверцетина в сравнении с препаратом
Мексикор®, а также их комбинаций с иммуномодулятором Галавит® на
летальность при моделировании распространенного перитонита у крыс.
Одним из основных и наиболее информативных критериев,
характеризующих эффективность лечения, является оценка уровня летальности
в ходе эксперимента. В результате проведенного исследования видно, что
фармакологическая коррекция распространенного перитонита препаратом
Галавит® привела к снижению показателя общей летальности на 16%
относительно контрольной группы животных, в то время как эффективность
монотерапии препаратом Мексикор® была несколько выше, что
подтверждалось снижением данного показателя на 22%.
Рис. 10. Влияние дигидрокверцетина 7,7 мг/кг, препарата Мексикор®
60 мг/кг, Галавит® 8,6 мг/кг, а также комбинаций препаратов
дигидрокверцетин 7,7 мг/кг+Галавит® 8,6 мг/кг и Мексикор® 60 мг/кг+
Галавит® 8,6 мг/кг на показатель общей летальности крыс при моделировании
распространенного перитонита.
19
Комбинированное использование препаратов Мексикор®+Галавит®
значительно сократило количество павших животных и, тем самым, снизило
летальность на 28%, в то время как монотерапия ДГК привела к аналогичному
результату, снизив общую летальность на 30%. Преимущество комбинации
ДГК+Галавит® подтвердилось максимальным снижением общей летальности
на 36% относительно контрольной группы животных. Таким образом,
представляется возможным расположить исследуемые препараты и их
комбинации по степени снижения общей летальности в следующем порядке:
ДГК+Галавит® < ДГК < Мексикор®+Галавит® < Мексикор® < Галавит®
(рис. 10).
В заключение необходимо отметить, что перспективным направлением в
послеоперационной интенсивной терапии распространенного перитонита,
наряду с общепринятыми хирургическими и фармакологическими методами,
является
дополнительное
применение
природного
флавоноида
дигидрокверцетина, который приводит к нормализации показателей
свободнорадикального окисления, активирует антиоксидантную систему
защиты, нормализует иммунологические показатели гуморального звена
иммунитета, снижает уровень провоспалительных цитокинов, способствует
снижению избыточного синтеза оксида азота, восстанавливает уровень
регионарного кровотока в стенке тонкой кишки. Приведенные в данной работе
результаты патоморфологических исследований и оценки общей летальности
также
свидетельствуют
об
эффективности
дигидрокверцетина
и
целесообразности проведения дальнейших целенаправленных доклинических и
клинических испытаний при лечении распространенного перитонита.
ВЫВОДЫ
1. Введение комбинаций дигидрокверцетина 7,7 мг/кг + Галавит® 8,6 мг/кг
и Мексикор® 60 мг/кг + Галавит® 8,6 мг/кг при моделировании
распространенного перитонита в эксперименте оказывает более выраженное
корригирующее действие на показатели оксидантно-антиоксидантного статуса,
провоспалительных цитокинов и NO-продуцирующую функцию эндотелия по
сравнению с монотерапией, где наиболее сопоставимую положительную
динамику на показатели МДА, СОД, ИЛ-6, ФНО-α и NOx продемонстрировала
монотерапия дигидрокверцетином 7,7 мг/кг.
2. Применение комбинаций дигидрокверцетина 7,7 мг/кг + Галавит® 8,6
мг/кг и Мексикор® 60 мг/кг + Галавит® 8,6 мг/кг, а также монотерапии
препаратом Галавит® оказывает выраженное стимулирующее влияние на
гуморальное звено иммунной системы крыс, что проявлялось в достоверном
повышении концентраций иммуноглобулинов IgG, IgM, IgA по сравнению с
контрольной группой животных, а также превышало значения интактных крыс.
Монотерапия дигидрокверцетином оказывает иммуномодулирующее действие
и сохраняет относительную стабильность IgG, IgM, IgA на уровне интактных
животных,
проявляя
тенденцию
к
повышению
концентраций
иммуноглобулинов всех фракций.
20
3. Дигидрокверцетин 7,7 мг/кг, Мексикор® 60 мг/кг и Галавит® 8,6 мг/кг в
качестве монотерапии, комбинации дигидрокверцетин 7,7 мг/кг + Галавит® 8,6
мг/кг и Мексикор® 60 мг/кг + Галавит® 8,6 мг/кг при моделировании
распространенного перитонита у крыс способствовали повышению уровня
регионарного кровотока в стенке тонкой кишки относительно контрольной
группы.
Введение
экспериментальным
животным
комбинаций:
дигидрокверцетин 7,7 мг/кг + Галавит® 8,6 мг/кг и Мексикор® 60 мг/кг +
Галавит® 8,6 мг/кг приводило к более раннему (начиная с 5-х и 7-х суток,
соответственно) восстановлению микроциркуляции в стенке тонкой кишки до
уровня интактных животных (р>0,05) по сравнению с монотерапией
дигидрокверцетином 7,7 мг/кг, в которой уровень интактных животных
достигался на 10-е сутки.
4. Морфологические
исследования
подтвердили
высокую
органопротективную активность комбинаций: дигидрокверцетин 7,7 мг/кг +
Галавит® 8,6 мг/кг и Мексикор® 60 мг/кг + Галавит® 8,6 мг/кг, а также
монотерапии дигидрокверцетином 7,7 мг/кг и препаратом Мексикор® 60 мг/кг
при
моделировании
распространенного
перитонита.
Введение
дигидрокверцетина 7,7 мг/кг и комбинаций: дигидрокверцетин 7,7 мг/кг +
Галавит® 8,6 мг/кг и Мексикор® 60 мг/кг + Галавит® 8,6 мг/кг приводило к
выраженной гиперплазии лимфоидной ткани в кишечнике и селезенке,
характерной для монотерапии иммуномодулятором Галавит® 8,6 мг/кг.
5. Комбинированное лечение дигидрокверцетин 7,7 мг/кг + Галавит® 8,6
мг/кг, Мексикор® 60 мг/кг + Галавит® 8,6 мг/кг и монотерапия
дигидрокверцетином 7,7 мг/кг привело к максимальному снижению общей
летальности с 62% в контрольной группе до 26%, 34% и 32%, соответственно.
Монотерапия препаратами Мексикор® 60 мг/кг и Галавит® 8,6 мг/кг
способствовала снижению общей летальности на 22% и 16%, соответственно.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Для коррекции нарушений в системе антиоксидантной защиты и
иммунобиологического статуса при распространенном перитоните у животных
рекомендовано в качестве дополнения к стандартной терапии применение
природного антиоксиданта из лиственницы – дигидрокверцетина в дозе 7,7
мг/кг/сут 1 раз в день внутрижелудочно в течение 10 суток.
2. Материал диссертационной работы может быть рекомендован для
использования:
– в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических
занятий на биологических, ветеринарных, медицинских факультетах высших
учебных заведений;
– при написании соответствующих разделов учебников, монографий,
справочных руководств и пособий по биохимии, ветеринарной микробиологии,
вирусологии, эпизотологии, микологии с микотоксикологией и иммунологии;
– при проведении научно-исследовательских работ аспирантами, научными
сотрудниками биологического и ветеринарного профиля.
21
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Экспериментальное обоснование применения дигидрокверцетина при
распространенном перитоните / А.Н. Чмыхова, Е.Б. Артюшкова, О.Б.
Сеин, Е.В. Артюшкова // Вестн. Курск. ГСХА. – 2013. – № 6. – С. 71-75.
2. Влияние флавоноида природного происхождения дигидрокверцетина на
биохимические показатели крови при экспериментальном перитоните. Т. 15.
Лекарство / А.Н. Чмыхова, Е.В. Артюшкова, О.Б. Сеин, И.Ю. Уханова //
Научният потенциал на света : материалы 9 Междунар. науч. практ. конф.
(София, 17-25 сент. 2013 г.). – София, 2013. – С. 59-61.
3. Исследование влияния дигидрокверцетина на уровень микроциркуляции и
морфологические показатели при перитоните (экспериментальное
исследование). Т. 15. Лекарство / А.Н. Чмыхова, Е.Б. Артюшкова, О.Б. Сеин,
В.С. Барсуков // Научният потенциал на света : материалы 9 Междунар. науч.
практ. конф. (София, 17-25 сент. 2013 г.). – София, 2013. – С. 62-66.
4. Оценка эффективности применения антиоксидантов дигидрокверцетина
и Мексикора® в комплексном лечении распространенного перитонита в
эксперименте [Электронный ресурс] / А.Н. Чмыхова, Е.Б. Артюшкова,
О.Б. Сеин, Е.В. Артюшкова // Современные проблемы науки и
образования. – 2013. – № 6. – Режим доступа: http://www.scienceeducation.ru/113-11043, свободный (дата обращения: 09.12.2013).
5. Чмыхова, А.Н. Перспектива применения природного флавоноида
дигидрокверцетина и его комбинации с иммуномодулятором Галавит® в
комплексном лечении распространенного перитонита в эксперименте /
А.Н. Чмыхова, Е.Б. Артюшкова, Е.В. Артюшкова // Вестн. Курск. ГСХА.
– 2014. – № 1. – С. 62-65.
6. Чмыхова, А.Н. Экспериментальное обоснование комбинированного
применения дигидрокверцетина и Галавита® при распространенном
перитоните / А.Н. Чмыхова // Проблемы и перспективы инновационного
развития животноводства : материалы Междунар. науч.-произв. конф. (15-16
мая 2013 г.). – Белгород, 2013. – С. 72.
7. Фармакологическая
коррекция
биохимических
изменений
при
распространенном перитоните в эксперименте / А.Н. Чмыхова, Е.Б.
Артюшкова, О.Б. Сеин // Интегративные тенденции в медицине и
образовании: материалы Междунар. науч.-практ.. конф. – Москва, 2013. – С.
97-99.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ДГК – дигидрокверцетин
ИЛ-6 – интерлейкин 6
КАТ – каталаза
МДА – малоновый диальдегид
ОАА – общая антиоксидантная
активность
NO – оксид азота
22
РГП
– распространенный гнойный
перитонит
СОД – супероксиддисмутаза
ФНО-α – фактор некроза опухоли- α
IgА
– иммуноглобулин А
IgM
– иммуноглобулин М
IgG
– иммуноглобулин G
Формат 60х84 1/16. Бумага для множительных аппаратов.
Печать на копировальном аппарате КГСХА.
Усл. печ. л. 1,0. Уч.-изд.л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 115.
23
24