Шафикова А.Х. Ординатор 2 года обучения по специальности эпидемиология. Задача 1. Из гнойного отделяемого больного с подозрением на острую гонорею приготовлен фиксированный мазок. Вопрос: 1. Назовите сложный метод окраски, который Вы используете в данном случае и реактивы для этого способа. 2. Перечислите свойства микроорганизмов, которые можно определить при микроскопии этого мазка. 3. Обоснуйте необходимость знаний вышеперечисленных свойств микроорганизмов. 4. Опишите морфологию возбудителей гонореи и их расположение по отношению к лейкоцитам. 5. Назовите процесс и его этапы, результатом которого может явиться такое расположение бактерий. Ответ: 1. Используется основной сложный дифференциальный метод окраски – метод Грама. 2. Морфология, тинкториальные свойства. 3. Знание морфологических и тинкториальных свойств позволяет дифференцировать микроорганизмы между собой. 4. Возбудитель гонореи – гонококки – это кокки в виде кофейных зерен, располагаются попарно вогнутыми сторонами друг к другу. В мазках наблюдается внутри- и внеклеточное расположение диплококков в лейкоцитах. 5. Внутриклеточное расположение бактерий обусловлено фагоцитозом. Этапы фагоцитоза: хемотаксис, адгезия, эндоцитоз, внутриклеточное переваривание. Задача 2. Для проведения бактериологического исследования получено задание на приготовление питательных сред. Вопрос: 1. 2. 3. 4. Назовите требования, которым должны отвечать питательные среды. Укажите требования, предъявляемые к используемой посуде. Опишите технику определения рН среды. Укажите этапы приготовления питательных сред. 5. Перечислите методы контроля питательных сред. Ответ: 1. Любая среда для культивирования бактерий должна быть питательной, иметь оптимальные влажность, вязкость, рН, быть изотоничной, стерильной, по возможности прозрачной. 2. Посуда, используемая для приготовления питательных сред, должна быть сухой и химически чистой; лучше всего пользоваться стеклянной, эмалированной или алюминиевой посудой. Перед применением посуду необходимо тщательно вымыть, прополоскать и высушить. Посудой, предназначенной для приготовления сред, запрещается пользоваться в других целях (хранение химреактивов, дезрастворов) 3. Определение рН среды проводят ориентировочно с помощью индикаторных бумажек, окончательное установление рН проводят потенциометрически. 4. Этапы приготовления сред: а) варка; б) установление величины рН; в) осветление; г) фильтрация; д) розлив; е) стерилизация; ж) контроль. 5. Готовые питательные среды подвергаются контролю на стерильность, химическому и биологическому контролю. Задача 3. При лабораторном исследовании мокроты больного в микропрепарате обнаружены тонкие, длинные, окрашенные в красно-рубиновый цвет палочки, располагающиеся в виде «кос». Вопрос: 1. 2. 3. 4. 5. Назовите возбудителя заболевания. Укажите метод диагностики, которым выявлен возбудитель. Опишите этот метод обнаружения возбудителя. Назовите этапы окраски по Цилю-Нильсену. Назовите фактор, который придает микроколлониям вид «кос». Ответ: 1. Туберкулезная палочка – М. tuberculosis. 2. Ускоренный метод микрокультур Прайса. 3. Мокроту наносят на несколько стерильных предметных стекол. Подсушивают стекла, сухие мазки погружают на 15–20 мин в 2% раствор серной кислоты, затем промывают раствором хлорида натрия и помещают в кровяную среду. Инкубируют при t 37-38°С . Результаты учитывают на 1, 15 и 30-й день. Мазки окрашивают по ЦилюНильсену. Положительными будут посевы, в которых на стекле выявляются микроскопические колонии в виде "жгутов", "кос" и "пауков". 4. На фиксированный мазок кладут фильтровальную бумагу и наливают на нее карболовый фуксин Циля, мазок подогревают над пламенем горелки до появления паров, охлаждают, затем, добавив новую порцию красителя, опять подогревают (2-3 раза). Снимают фильтровальную бумагу. Препарат обесцвечивают путем погружения или нанесения на него 5% раствора серной кислоты и тщательно промывают водой. Докрашивают мазок водно-спиртовым раствором метиленового синего 3-5 мин., промывают водой, высушивают. 5. Вид "кос" микроколониям придает липидная фракция микобактерий (корд-фактор – димиколат трегалозы).
