Томат-масло - Учебный портал Российского университета

41
THE COMPLEX MORPHOBIOCHEMICAL METHOD FOR
THE DETERMINATION OF ACTIVITIES OF MEDICAL DRUGS
Biykov V.A., Dubinskaya V.A., Mineeva M.F.,
Siomkin V.I., Vinogradova E.V.
Science Research Center for biomedical technology,
Moscow, Russia
The new complex morpho-biochemical approach for the investigation of activities of
medical drugs was developed. Cell membranes of human subcutaneous fatty tissues
and anti-oxidative enzymes Glutation Reductase (GR), and Catalase (Cat) were used
to test activities of several anti-oxidants such as Dihydrokvertzegen (DKV), tocopherol (10-8-10-10), bemethyl (10-4-10-8M) which is a known actoprotector, and a
homeopathic drug Natrium Muriaticum (D1-D30).
It was showed earlier that DKV and -tocopherol activated GR and Cat within the
interval of investigated concentrations. Bemethyl increased the rate of enzymatic
reaction for both enzymes. The fastest rate was observed at the bemethyl
concentration 10-14M. Natrium Muriaticum inhibited GR and Cat. The rate of
inhibition did not change within the interval of dilution’s D3 to D30 Morphological
structure of fatty cell membranes specifically changed after treatment with each drug.
The specificity of changes remained the same after lowering drug concentrations.
РЕФЛЕКТОРНАЯ ФАЗА СПЕЦИФИЧЕСКОГО ДИНАМИЧЕСКОГО
ДЕЙСТВИЯ ПИЩИ (СДД) У ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ ОЖИРЕНИЕМ
Василевская Л. С, Орлова С.В., Попова ЮЛ.,
Федорцова А.С., Карушина ЛИ., Дёмин АВ.,
Белоусова А. С., Минагалиев Р.М, Холмогорова Я.Я.
РУДН,Москва,Россия
Предположение о существовании рефлекторной фазы специфического
динамического действия (СДД) пищи было сделано уже давно. Но только в 80ые годы 20 столетия независимо друг от друга канадскими исследователями
(Diamond P. с соавт.) и отечественными (Шлыгин Г.К. с соавт.) окончательно
было доказано на собаках с применением мнимого кормления мясом и
аспартама (вещества практически на несущего калорий) повышения
потребления кислорода после возбуждения ими вкусовых и обонятельных
рецепторов.
42
Прирост потребления кислорода у собак отмечается уже через 5-10 минут
от начала мнимого кормления. А через 10-15 минут оно увеличивается
приблизительно в 2 раза. Рефлекс берёт начало с рецепторов полости рта и
глотки, откуда импульсы идут к центрам головного мозга и далее по
эфферентным путям к периферическим тканям.
Также закономерность была прослежена и у практически здоровых людей с
нормальным весом. Прирост потребления кислорода после приёма пробного
завтрака составил у них в среднем 15-18% по сравнению с контролем.
Как известно, при энерго - зависимых процессах в организме большая часть
энергии переходит в тепло.
Поэтому перед нами встал вопрос “как сказывается на данном рефлексе
изменение баланса тепла в организме ?”.
В связи с этим мы предприняли исследование рефлекторного периода СДЦ
пищи у больных алиментарным ожирением. Выяснилось, что рефлекторный
период СДД пищи у них резко подавлен или совсем отсутствует. Приём
пробной пищи у большинства из них совсем не вызывал повышения
потребления кислорода.
Такое изменение, по-видимому, носит адаптивный характер. У больных
ожирением в результате отложения слоя жира в подкожной клетчатке
затрудняется передача тепла из внутренних областей тела к коже с
последующим выделением его во внешнюю среду. В этих условиях подавление
начального периода СДД пищи является одной из защитных реакций,
предупреждающих быстрое накопление избытка тепла в глубоких областях
тела, очень опасного для деятельности ЦНС.
Известно, что одним из главных путей теплоотдачи является выделение тепла
через кожу, поэтому мы провели исследование температуры глубоких слоев
кожи у больных алиментарным ожирением. Для этого использовался прибор
“Радиотермоскоп диагностический”, основанный на определении собственного
излучения кожи в СВЧ диапазоне, позволяющий определять среднюю
температуру столбика ткани вглубь кожи на 4-5 см. Температура определялась в
нескольких точках на поверхности тела. Выяснилось, что температурная
реакция у больных ожирением резко повышена по сравнению с реакцией у
здоровых тощих людей.
У здоровых людей прирост температуры после приёма пищи сравнительно
небольшой и составляет 0,5-0,7 °С, у больных алиментарным ожирением
наблюдается значительное повышение температуры после приёма пищи на 1,52,5 °С.
У больных с диэнцефальным синдромом, т.е. страдающих нарушением
промежуточного мозга, включающего таламус и гипоталамус, температурная
реакция на приём пищи оказалась выраженной очень слабо. Повышение
температуры у них
составило только 0,5-0,8 С, т.е. величины были близкими к наблюдаемым у
здоровых людей.
Эти данные позволяют предположить, что центры гипоталамуса при
диэнцефальном синдроме неспособны производить значительный адаптивный
43
сдвиг в кровообращении кожи в ответ на приём пищи, и их деятельность
остается на сравнительно низком, постоянном уровне.
REFLEX PHASE OF FOOD SPECIFIC DYNAMIC ACTION (SDA)
IN HEALTHY AND OBESE
Vasilevskaya L.S., Orlova S. K, Popova U.P,, Fedortsova L.P., KarushinaL.L
Dyomin A. V., Byelou-sova A.S., Mingaliyev P.M., Kholmogorova N. V.
Institute of Nutrition, Russian Academy of Medical Sciences Russian University
of Peoples Friendship, Moscow
The object of the study was the reflex phase ofthermogenesis in healthy subjects
and in obese patients.
It was demonstrated that after eating trial breakfast practically healthy people
show average 15-18% increase in oxygen consumption. Obese people show reduction
or total absence of that reflex. Looks like that change is of an adoptive nature.
The study of deep skin layers temperatures also showed changes in the obese
compared with the healthy. Healthy subjects after trial breakfast showed 0.5-0.7°C
increase of subcutaneous tissue temperature while in patients with alimentary obesity
subcutaneous tissue temperature increased by 1.5-2.5°C. Such changes are connected
with the work of hypothalamic centers.
If the changes are of more grave nature and affect diencephalon including
thalamus and hy-pothalamus (cerebral adiposity) the reactions described above
acquire different nature.
ОСОБЕННОСТИ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО СТАТУСА ПОДРОСТКОВ
С СЕМЕЙНЫМ АНАМНЕЗОМ ВНЕЗАПНОЙ СЕРДЕЧНОЙ СМЕРТИ
Виноградов И.В., Заварин В.В., Калинкин М.Н.
Тверская государственная медицинская академия, Тверь, Россия
Согласно рекомендациям Европейских экспертных групп (Prevention of
Coronary Heart Disease in Clinical Practice, 1994), "преждевременную"
ишемическую болезнь сердца (ИБС) у ближайших родственников следует
рассматривать как важнейший немодифицируемый фактор риска данного
заболевания. Наличие этого немодифицируемого фактора, имеющего, по
современным представлениям,
генетически детерминированную природу
(Перова Н.В., 1996), должно быть основанием для активного поиска и
устранения других, модифицируемых факторов риска ИБС. Реально
предположить, что у людей с генетически отягощенным по ИБС анамнезом
значительно повышается и риск наступления внезапной сердечной смерти
(ВСС).
44
Доказано,
что
атерогенные изменения липидного состава крови
являются обязательным компонентом во всех комбинациях факторов риска ИБС
и смертности от нее. При этом некоторые из этих обменных расстройств
признаются в качестве непосредственных "метаболических предикторов"
внезапной смерти от острой коронарной недостаточности (Калинкин М.Н.,
1997). В то же время следует отметить, что атерогенная дислипопротеинемия
является и наиболее частым фактором риска, обнаруживаемым у детей больных
"преждевременной" ИБС (Доборджгинидзе Л.М. и др., 1996). Данный факт не
является удивительным, поскольку факторы риска, способствующие развитию
ИБС, начинают формироваться уже в детском и подростковом возрасте (Lauer
R.M. et al., 1988). В связи с этим можно предположить, что в раннем возрасте
могут возникнуть и метаболические предпосылки будущего развития
электрической нестабильности сердца, составляющей электрофизиологическую
основу внезапной смерти от острой сердечной недостаточности.
Целью настоящего исследования явилось изучение особенностей
липидного состава плазмы крови подростков в возрасте 12-16 лет с семейным
анамнезом внезапной смерти от ИБС. У всех обследованных учащихся имелись
ближайшие родственники, умершие внезапно от ИБС.
У подростков из группы риска по ВСС обнаружена более высокая
плазменная концентрация всех основных липидных фракций: фосфолипидов,
свободного и эстерифицированного холестерина, триглицеридов и свободных
жирных кислот (СЖК). У учащихся данной группы выявлены также сдвиги в
фосфолипидном профиле крови. В наибольшей степени это касается
содержания сфингомиелинов, фосфатидилхолинов и фосфатидилинозитов. При
этом обращает на себя внимание следующее обстоятельство. Содержание
некоторых липидных фракций, а именно, триглицеридов и СЖК, в плазме крови
подростков с отягощенным по ВСС анамнезом имело отчетливую тенденцию к
преобладанию над аналогичными показателями у учащихся, имевших
родственников с "преждевременной" ИБС, оставшихся в живых. В то же время
из результатов ряда клинико-экспериментальных исследований, проведенных
еще в 70-80-е годы, известно, что триглицериды и, особенно, СЖК при их
избытке в крови оказывают на сердечную мышцу выраженное аритмогенное и
кардиотоксическое влияние. При этом указывается, что нарастание
концентрации плазменных СЖК является единственным отличием
липидограммы крови больных ИБС с экстрасистолией по сравнению с кровью
больных ИБС без аритмий.
Исследования секционного и экспериментального материала методом
инфракрасной спектроскопии доказали существование при внезапной смерти от
ИБС в крови, кардиомиоцитах и нейроцитах мозга изменений метаболической
активности важнейших биохимических группировок и структурных нарушений
внутриклеточной воды. Известно, что структурно-метаболические и
функциональные
изменения
клеток,
сопровождающие
различные
патологические процессы, определяются главным образом структурными
нарушениями вне- и внутриклеточной воды (Привалов П.Л., 1968). В связи с
этим полученные нами данные позволяют предположить, что изменение
45
физико-химического
состояния интрацеллюлярной воды является
ведущим фактором инициирования при атеросклерозе и ВСС обменных и
функциональных расстройств в тканях организма. Возможно, в данных
патологических условиях включается присущий водному компоненту
биосистем механизм "дальнодействия", который и формирует метаболические
предпосылки ВСС уже в раннем детском возрасте.
PECULIARITIES OF THE METABOLIC STATUS OF JUVENILES WITH
THE FAMILY ANAMNESIS OF SUDDEN CARDIAC DEATH
Vinogradov I.V., Zavarin V.V., Kalinkin M.N.
The blood plasma lipids of the children with the family anamnesis stating
sudden death from "premature" coronary heart disease were studied. The blood
plasma lipidogram of the children of the sudden cardiac death risk group is
characterized by increase of the concentration of all major lipid fractions, including
triglycerides and free fatty acids which posses cardiotoxic and arrythmogenic in
influence and a change in phospholipid blood profile. Taking into consideration the
results of tissue study in sudden death from coronary heart disease which were gained
by the method of infrared spectroscopy the speculation is offered of the important role
of the changes in physical and chemical condition of the intracellular water in forming
already at the early age of metabolic preconditions to sudden cardiac death.
ДЕЙСТВИЕ ЭНДОТОКСИНОВ НА РЕГУЛЯЦИЮ УЛЬТРАФИОЛЕТ
С - ИНДУЦИРОВАННОГО АПОПТОЗА НЕЙТРОФИЛОВ ЧЕЛОВЕКА
Винокуров М.Г., Юринская М.М., Долгачева Н.Н.,
Прохоренко И.Р., Косякова Н.И., Гражданкин Е.Б., Печатников В.А.
Институт биофизики клетки РАН, Институт фундаментальных проблем
биологии РАН, г. Пущино, Российский университет дружбы народов, ФПК,
Москва, Россия
В настоящее время хорошо известно, что одним из ключевых
механизмов, обеспечивающих поддержание структурно-функционального
постоянства как отдельных органов и тканей, так и всего организма в целом
является апоптоз. Значительный интерес представляет исследование
молекулярных механизмов апоптоза нейтрофилов, играющих важную роль в
норме и при различных патологических состояниях организма человека.
Нейтрофилы являются короткоживущими клетками. Время их циркуляции в
кровяном русле составляет около 10 часов, после чего они подвергаются
апоптозу и фагоцитируются моноцитами или уходят в ткани, где погибают
через 4-5 дней. Одной из основных функций нейтрофилов является защита
организма от бактериальной инфекции. В настоящее время известно, что
46
компоненты
клеточной
стенки грамотрицательных
бактерий
липополисахариды (эндотоксины), освобождающиеся из погибших бактерий,
ингибируют апоптоз нейтрофилов.
Одним из методов лечения различных заболеваний является
ультрафиолетовое облучение крови (УФОК). Этот метод в настоящее время
достаточно широко используется при лечении гнойно-септических, сердечнососудистых и других заболеваний. В медицинских целях чаще всего
используется ультрафиолетовое облучение диапазона С (УФС), однако
молекулярные механизмы его действия практически не выяснены. Ранее нами
было показано, что УФС вызывает ускорение апоптоза культивируемых in vitro
нейтрофилов человека. Известно, что в реализации действия УФС на апоптоз
клеток участвует Fas-зависимый путь внутриклеточной регуляции и
тирозинкиназный путь. Недавно было показано, что липополисахариды (ЛПС)
ингибируют апоптоз нейтрофилов и в этом процессе участвуют
внутриклеточные тирозинкиназы.
В настоящей работе проведено изучение совместного действия ЛПС и
УФС на динамику развития апоптоза культивируемых нейтрофилов с целью
выяснения роли различных путей внутриклеточной сигнализации в регуляции
апоптоза нейтрофилов человека.
Нейтрофилы выделяли из периферической крови здоровых доноров на 2-х
слойном градиенте фиколла-верографина. После этого клетки дважды отмывали
фосфатным буфером, рН 7,2 (PBS) и облучали УФ светом с длиной волны 254
нм на аппарате «Изольда» МФ-73М. Мощность дозы УФС составляла 80 Дж/м2.
После облучения клетки культивировали в среде RPMI-1640 с 10%
эмбриональной телячьей сывороткой («Sigma»), 1% L-глутамина, 1%
пенициллин и стрептомицин при 370С в атмосфере, содержащей 5% СО2
(концентрация клеток 1x106/мл). Концентрация ЛПС («Sigma» серотип 055:В5)
в пробах была равна 1 мкг/мл. После окончания культивирования клетки
отмывали от культуральной среды PBS и фиксировали 70% этанолом. Процент
апоптозных клеток определяли методами проточной цитометрии (с
использованием флуоресцентного зонда Hoechst-33258) и световой
микроскопии (окраска по Романовскому- Гимзе). Процент живых клеток
определяли методом проточной цитометрии. При культивировании
жизнеспособность клеток составляла 95 – 98%. Эксперименты по исследованию
действия эндотоксинов выполняли следующим образом. Одну порцию
выделенных нейтрофилов инкубировали в течение 3-х часов с ЛПС, затем
отмывали культуральную среду, облучали нейтрофилы УФС в дозе 80 Дж/м 2 и
затем культивировали в присутствии или в отсутствии ЛПС. Другую порцию
клеток сразу облучали УФС в дозе 80 Дж/м2, затем культивировали 3 часа и
добавляли ЛПС или не добавляли ЛПС. Время культивирования 3 часа было
выбрано в связи с тем, что активация клеток под действием ЛПС достигает
максимального значения в течение 3 часов. Кроме того, репарация однонитевых
разрывов в ДНК нейтрофилов при действии ультрафиолетового заканчивается
за 150 мин. Как следует из полученных экспериментальных данных ЛПС,
добавленный изначально к культивируемым клеткам практически отменял
47
ускоряющее действие УФС на апоптоз культивируемых клеток (регистрация
на 4,5 час культивирования клеток).
Полученные данные могут быть интерпретированы таким образом, что
добавленный изначально ЛПС, ингибируя тирозин-киназный путь, также
ингибирует частично и Fas-зависимый путь регуляции апоптоза. В том случае,
когда вначале проводится облучение, а затем добавляется ЛПС – происходит
общая активация как тирозин-киназного, так и Fas-зависимого пути регуляции
апоптоза нейтрофилов, в результате чего уровень апоптоза в предварительно
УФС-облученных нейтрофилах значительно выше, чем в необлученных.
В настоящее время известны только отдельные детали механизма
действия эндотоксинов на регуляцию апоптоза нейтрофилов. Неясен
конкретный путь передачи сигналов с CD14 рецепторов на тирозинкиназы,
участвующие в механизме этой регуляции. Вероятно, что в регуляции апоптоза
нейтрофилов ультрафиолетом С и эндотоксинов участвуют одни и те же
тирозинкиназы.
Представляется достаточно вероятным, что одним из механизмов
действия УФС при лечебном применении УФОК может быть обнаруженное
нами ускорение апоптоза нейтрофилов при УФ облучении крови. Известно, что
ЛПС оказывают праймирующее действие на нейтрофилы человека и, кроме
того, они значительно ингибируют апоптоз нейтрофилов. С этим, вероятно,
связан ряд осложнений в патогенезе многих заболеваний: активированные
клетки достаточно долго циркулируют в кровяном русле и атакуют собственные
клетки и ткани организма, осложняя течение ряда заболеваний. УФ облучение
крови приводит к сокращению времени циркуляции активированных
нейтрофилов и, вероятно, с этим связан лечебный эффект действия УФоблучения крови.
Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда
фундаментальных исследований, грант № 98-04-48303.
Symmari. The action of endotoxin and ultraviolet C on apoptosis of the human
neutrophils was investigated. It is supposed, that the action of ultraviolet C on the
apoptosis of neutrophils is realised through Fas- tyrosinekinasedependent pathway of
regulation. The obtained data testify that the activation of apoptosis in the Fasdependent pathways occurs much faster, than the inhibiting action of endotoxins on
apoptosis.
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ТИРЕОИДНЫХ АНТИТЕЛ
У БОЛЬНЫХ ДИФФУЗНЫМ ТОКСИЧЕСКИМ ЗОБОМ
Васина Л.В.
Санкт-Петербургский государственный медицинский университет
им. акад. И.П.Павлова, Санкт-Петербург, Россия
Аутоиммунная природа диффузного токсического зоба (ДТЗ)
предопределила поиски наиболее информативных иммунологических маркеров
48
заболевания, участвующих в реакциях клеточного
и
гуморального
иммунитета. К ним относятся антитела, направленные против различных
компонентов ткани щитовидной железы, таких как тиреоглобулин,
микросомальный антиген (тиреоидная пероксидаза), рецепторы тиреоидного
гормона, второй коллоидный антиген, клеточный поверхностный антиген.
Важными показателями аутоиммунного процесса в щитовидной железе
являются антитела к тиреоглобулину и тиреопероксидазе (Kidd A., Okita N.,
Row V., 1989).
В данной работе мы пытались определить значение исследования антител
к тиреоглобулину и тиреопероксидазе для клинической практики, изучив
частоту встречаемости и титры, проведя корреляционный анализ соответствия
их изменений с тиреоидным статусом у больных ДТЗ до лечения и в процессе
тиреостатической терапии.
Обследовано в динамике 47 больных ДТЗ (45 - женского и 2-мужского
пола) в возрасте 25-56 лет. Содержание гормонов трийодтиронина (Т3),
тироксина (Т4), ТТГ (тиреотропного гормона), а также уровень антител к
тиреоглобулину
и
тиреопероксидазе
определяли
твёрдофазным
иммуноферментным методом, используя коммерческие тест-системы фирмы
“Boehringer Mannheim”.
У 26 (55,3%) больных до лечения выявлены антитела к тиреоглобулину,
их содержание составило 347,8+42 IU/ml (норма 0 – 100 IU/ml). Антитела к
тиреопероксидазе были определены у 28 (59,5%) больных, что соответствует
данным литературы (Takaichi Y., Tamai H., 1989). Их содержание составило
75,5+15,4 IU/ml (норма 0-25 IU/ml).
Частота выявления антител к тиреоглобулину и их титры не зависели ни
от тяжести тиреотоксикоза (р0,1 для лёгкой, среднетяжёлой и тяжёлой формы),
ни от размеров зоба (р0,1 для I-II степени увеличения щитовидной железы и
III-IV степени зоба), в то время как выявляемость антител к микросомальной
фракции достоверно повышалась с увеличением зоба. Корреляционный анализ
антител к тиреоглобулину и тиреопероксидазе с уровнем тиреоидных гормонов
и ТТГ выявил отчётливую положительную связь между уровнем Т3 и титрами
антител к тиреоглобулину (r = 0,45; р0,01).
Таким образом, присутствие тиреоидных антител (антитела к
тиреоглобулину и тиреопероксидазе) лишь у половины больных ДТЗ и
отсутствие чёткой связи изменением содержания антител в динамике
клинического состояния больных свидетельствуют о том. что они не
определяют специфики заболевания, а являются показателем выраженности
иммунной атаки на орган.
В процессе лечения ДТЗ мерказолилом частота обнаружения и титры
тиреоидных антител снижались. Частота обнаружения антител к
тиреопероксидазе уменьшилась с 59,5% до 42,5%, выявляемость антител к
тиреоглобулину практически не изменилась и составила 51,0% (до лечения 55,3%). Титры антител также имели тенденцию к снижению (126,4+21,5 IU/ml
тиреоглобулину и 32,4+9,4 IU/ml для антител к тиреопероксидазе). Через 1 год
частота обнаружения антител уменьшилась до 25,5% и 19,1% соответственно.
49
Таким образом, при общей тенденции к снижению тиреоидные
антитела продолжали выявляться у ряда больных и через год непрерывного
лечения мерказолилом, несмотря на нормализацию тиреоидного статуса.
Следовательно, клиническая ремиссия при проведении тиреостатической
терапии наступает значительно раньше, чем нормализация иммунного статуса,
поэтому при отмене консервативного лечения необходимо учитывать не только
уровень тиреоидных гормонов, но и присутствие антител к тиреоидным
антигенам, так как антитела к тиреоглобулину и тиреопероксидазе могут
сохраняться в течение длительного срока и приводить к аутоиммунной
деструкции тиреоидной ткани, вызывая развитие тиреоидита и гипотиреоза.
CLINICAL SIGNIFICANCE OF THYROID ANTIBODIES IN PATIENTS
WITH DIFFUSE TOXIC GOITER
Vasina L.V.
I.P. Pavlov State Medical University of St.Petersburg, Ru s s i a
The recognition of an autoimmune nature of diffuse toxic goiter (DTG, Grave's
disease) has determined searches of most informative immunological markers of the
disease. In our operation we have tried to determine value of a number autoantibodies
in clinical practice.
Forty-seven patients (ages of from 25 to 56 years) with DTG was observed.
Definitions of the levels of hormones (T3, T4, TSH), antibodies to thyroglobulin
(ATG) and antibodies to thyroperoxidase (ATPO) was made with ELISA. ATG was
revealed in 55,3% of patients and its level made on the average 347,8±42 IU/ml.
ATPO was revealed in 59,5% of patients and its level made on the average 75,5±15,4
IU/ml. The precise dependence between titres of autoantibodies and levels of thyroid
hormones was detected (p<0,01, r=0,45). We did not find any dependencies between
titres of antibodies and clinical manifestation of disease. During treatment with
Mercazolilum the frequency of detection of autoantibodies was reduced down to
42,5% for ATPO and was not reduced for ATG. The titres of autoantibodies have
tendency to lowering.
ИЗМЕНЕНИЕ СУБПОПУЛЯЦИОННОГО СОСТАВА
ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК У БОЛЬНЫХ
ДИФФУЗНЫМ ТОКСИЧЕСКИМ ЗОБОМ
Васина Л.В., Митрейкин В.Ф., Фабричников С.В.
Санкт-Петербургский государственный медицинский университет
им. акад. И.П.Павлова, Санкт-Петербург, Россия
Иммунопатологические нарушения у больных ДТЗ характеризуются как
гиперпродукцией органоспецифических аутоантител, так и клеточными
50
иммунными
реакциями, направленными против компонентов
тиреоидной ткани, поэтому появление в сыворотке крови больных ДТЗ
различных тироидстимулирующих иммуноглобулинов не объясняет полностью
патогенез данного заболевания.
В соответствии с теорией Вольпе (1978) аутоиммунные заболевания
(аутоиммунный тиреоидит, диффузный токсический зоб) развиваются в
организме, имеющем дефект в системе “иммунологического выживания”. В
этих условиях выживают и пролиферируют Т-лимфоциты, возникающие в
результате спонтанной мутации и обладающие способностью реагировать с
органоспецифическими антигенами, в том числе и с антигенами щитовидной
железы, то есть появляются форбидные (“запрещённые”) клоны Т-лимфоцитов.
Целью данной работы является изучение субпопуляционного состава
лимфоцитов у больных ДТЗ на фоне тиреотоксикоза и в стадии ремиссии
заболевания.
Проведено обследование 19 больных (женщин) в возрасте 24-37 лет без
сопутствующей вирусной или бактериальной патологии, способной повлиять на
полученные результаты. Для подтверждения диагноза ДТЗ, кроме данных
клинического исследования, проводилось определение в крови содержания
гормонов (Т3, Т4, ТТГ) методом иммуноферментного анализа, используя тестсистемы фирмы “BOEHRINGER MANNGEIM”, Австрия. Иммунофенотипирование проводилось с помощью метода непрямой иммунофлуоресценции
и использования моноклональных антител “Дако”, Дания.
Размеры железы у всех больных соответствовали II-III степени
увеличения. Длительность заболевания составила от 4 месяцев до 2 лет.
Результаты исследования иммунного статуса показали, что при ДТЗ
отмечается снижение Т-клеток (СD3) в относительном значении у 73,7%
больных (среднее содержание 58,0+1,6% при норме 67-76%). Абсолютное
содержание составило 1,2+0,5x 10/л (норма 0,6-2,53x 10/л).
У 57,9% больных наблюдалось увеличение относительного уровня СD4+
клеток, среднее содержание которых было 53,0+1,2% при норме 43-48%, а
абсолютное приближалось к верхней границе нормы и составило 1,39+0,20x
10/л (норма 0,39-1,59x 10/л).
Относительное количество HLA DR+ клеток также было увеличено,
среднее содержание соответствовало 26,0+0,9% при норме 13-24%. Абсолютное
содержание находилось в границах нормального уровня и составило 0,24+0,10x
10/л (норма 0,09-0,79x 10/л).
Абсолютное и относительное содержание субпопуляций лимфоцитов с
кластерами дифференцировки CD8, CD20, CD16, CD14 было в пределах нормы.
У 47,8% больных в состоянии эутиреоза на фоне поддерживающей дозы
тиреостатиков относительное содержание СD3 практически не изменялось
(61,2+1,4%). Содержание субпопуляций активированных Т-лимфоцитов было в
пределах нормы.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о взаимосвязи
между нормализацией уровня тиреоидных гормонов и снижением
активированных лимфоцитов. Результаты проведённых исследований также
51
показывают, что снижение числа Т- клеток в крови больных ДТЗ
сочетается с избирательными нарушениями функциональной активности
отдельных субпопуляций Т-лимфоцитов и может быть причиной стимуляции
иммуноглобулинсекретирующей
функции
В-клеток.
Анализ
субпопуляционного состава лимфоцитов позволяет предположить, что
функциональная недостаточность антигенспецифических Т-супрессоров может
быть причиной нарушения равновесия между субпопуляциями Т-лимфоцитов,
приводящего к нерегулируемому синтезу тироидстимулирующих антител.
PECULIARITIES OF IMMUNOCOMPETENT CELLS SUBPOPULATIONS
IN PATIENTS WITH GRAVE'S DISEASE
Vasina L.V., Mitreikin V.Ph., Fabrichnikov S.V.
I.P. Pavlov State Medical University of St.Petersburg, Ru s s i a
According to the Volpe's theory (1978), autoimmune diseases (for example,
Diffuse toxic goiter (DTG, Grave's disease) develops in an organism with defects in
"immunological survival system". In this case develops the forbidden clones of Tlymphocytes. We studied the subpopulations of leukocytes in 19 patients with DTG
during remission and during thyrotoxicosis. The levels of T3, T4, TSH defined with
ELISA, subpopulations of leukocytes (CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, CD14, HLADR) counted with Indirect Immunofluorescent Assay.
The decrease of relative number of the T-cells (CD3-positive) in 73,7% of cases was
observed. The increase of relative number of the CD4-positive cells in 57,9% of cases
was observed. We also have found increase of a relative number of HLA-DR-positive
cells. At the patients during remission of disease, the quantitative indices of
immunocompetent cells subpopulations were within the limits of normal values.
Analyzing obtained data; it is possible to make conclusion, that here is an
interrelation between degree of activation of the immunocompetent cells and clinical
manifestation of disease. Activation of the autoreactive lymphocytes leads to
autoimmune destruction of the thyroid gland and to the non-controllable synthesis of
thyroid-stimulating antibodies.
ИЗМЕНЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ АУТОАНТИГЕНОВ
И ТИРЕОИДНЫХ АНТИТЕЛ
В КРОВИ ПРИ ДИФФУЗНОМ ТОКСИЧЕСКОМ ЗОБЕ
Васина Л.В., Митрейкин В.Ф.
Санкт-Петербургский государственный медицинский университет
им. акад. И.П.Павлова, Санкт-Петербург, Россия
Диффузный токсический зоб (ДТЗ), являясь аутоиммунным заболеванием,
сопровождается появлением в сыворотке крови больных антител к собственным
52
антигенам
тиреоидной
ткани. Наиболее часто среди них определяют
антитела к тиреоглобулину и тиреопероксидазе.
В настоящей работе проведёно сопоставление титра антител к
тиреоглобулину и тиреопероксидазе и содержания аутоантигена в крови у
больных с ДТЗ.
Исследовали сыворотку крови 75 больных (женщин) ДТЗ, из которых 55 лечились консервативно, а 20 - подверглись экстирпации щитовидной железы.
Диагноз
был
подтверждён
гормональными
исследованиями
и
послеоперационными гистологическими данными. Возраст больных колебался
от 19 до 65 лет. 37 человек (контроль) были без тиреоидных заболеваний.
Концентрацию тиреоидных гормонов, тиреоглобулина, антител к тиреоглобулину и тиреопероксидазе определяли методом твёрдофазного иммуноферментного анализа на автоматическом анализаторе ES-300 фирмы “BOEHRINGER MANNHEIM” (Австрия). Использовались тест-системы этой же фирмы.
Результаты исследований показали, что в контрольной группе
тиреоглобулин в сыворотке крови обнаруживался у 70%, что находится в
соответствии с данными о том, что тиреоглобулин имеется в сыворотке
здоровых лиц (Соболь В.Н., 1981), при этом его содержание было в пределах
33,7+5,9 нг/мл.
Частота выявления тиреоглобулина в сыворотке крови не оперированных
больных ДТЗ не отличалась от контрольной группы (р>0,05) и составила 70,9%
(у 39 из 55), вместе с тем его средняя концентрация была существенно (р  0,01)
выше, чем у здоровых и находилась в пределах 116,1+33,2 нг/мл.
Следовательно, полученные данные показали, что при ДТЗ, также как в
контроле, более чем в половине случаев (в 70,9%) в сыворотке крови
определяется тиреоглобулин, однако увеличение его содержания в 3,4 раза до
116,1+33,2 нг/мл (в контроле - 33,7+5,9 нг/мл), что является подтверждением в
концепции Fink J.N., Beall G.N. (1982) о роли в патогенезе аутоиммунных
заболеваний выхода в систему гемоциркуляции “забарьерных антигенов”.
Антитела к тиреоглобулину были определены у 75 больных ДТЗ, причём
чаще выявлялись у больных, не подвергавшихся оперативному вмешательству
(76%), чем у оперированных (53%). Средняя концентрация антител к
тиреоглобулину также была выше до операции (435,5+73,2 IU/ml), в то время
как у подвергшихся операции больных была в пределах 176,9+15,3 IU/ml
(нормальные значения от 0 до 100,0 IU/ml).
В контрольной группе (37 человек) частота выявления антител к
тиреоглобулину составила 19%, что совпадает с данными литературы
(Шевченко С.И., Якимова Т.П., Лозинская И.И., 1986).
Содержание антител к тиреопероксидазе исследовалось у 49 больных
ДТЗ, в 40% были получены положительные результаты. Их уровень составил
56,8+12,4 IU/ml у терапевтических больных и 36,9+11,8 IU/ml - при экстирпации
щитовидной железы (норма в пределах 0-25,0 IU/ml).
Таким образом, антитела к тиреопероксидазе при ДТЗ выявляются реже (в
40%), чем антитела к тиреоглобулину (76%). В группе больных ДТЗ была
53
установлена умеренная положительная корреляционная связь (r = 0,32) между
титрами антител тиреоглобулину и тиреопероксидазе.
Сопоставления содержания в крови тиреоглобулина и антител к
тиреоглобулину показали, что у больных ДТЗ между ними имеется умеренно
выраженная отрицательная корреляция (r = 0,3; р0,05). Выявленная обратная
корреляционная связь между антигеном (тиреоглобулином) и антителами к
тиреоглобулину свидетельствуют о том, что, хотя при ДТЗ концентрация
указанных белков повышается, но динамика их развития имеет
противоположную
направленность.
Характер
изменения
содержания
исследуемого белкового спектра позволяет предположить развитие в данном
случае патологического процесса аналогичного феномену “высокодозовой
толерантности” (Петров Р.В., 1982).
DEPENDENCIES BETWEEN THYROID ANTIBODIES AND THYROID
ANTIGENS DURING DIFFUSE TOXIC GOITER
Vasina L.V., Mitreikin V.Ph.
I.P. Pavlov State Medical University of St.Petersburg, Ru s s i a
Diffuse toxic goiter (DTG, Grave's disease) concerns to an autoimmune diseases that
the antibodies to own thyroid tissue are detected. In the given operation the analysis
of dependencies between titres of autoantibodies and levels of thyroid antigens carried
out.
Seventy-five patients (ages of from 19 to 65 years) with DTG was observed. A
definition of the levels of antibodies to thyroglobulin (ATG) and antibodies to
thyroperoxidase (ATPO) was made with ELISA. By virtue of technical difficulties we
determined only one autoantigen - thyroglobulin.
We detected that the ATG are detected more often then ATPO. We also have found
authentic moderate correlation link between titres of ATG and ATPO (p<0,05;
r=0,32). Unexpected there was that fact, that the found correlation between
concentration of an antigen (thyroglobulin) and antibodies has appeared return (r= 0,3; p<0,05). It is possible, that a phenomenon, similar to a phenomenon of "high dose
tolerance" in this case observed.
54
ДЕЙСТВИЕ ЭНДОТОКСИНОВ НА
РЕГУЛЯЦИЮ УЛЬТРАФИОЛЕТ
С- ИНДУЦИРОВАННОГО АПОПТОЗА НЕЙТРОФИЛОВ ЧЕЛОВЕКА
Винокуров М.Г., Юринская М.М., Долгачева Н.Н.,
Прохоренко И.Р., Косякова Н.И., Гражданкин Е.Б., Печатников В.А.
Институт биофизики клетки РАН, Институт фундаментальных
проблем биологии РАН, г. Пущино, Российский университет дружбы
народов, ФПК, Москва, Россия
В настоящее время хорошо известно, что одним из ключевых
механизмов, обеспечивающих поддержание структурно-функционального
постоянства как отдельных органов и тканей, так и всего организма в целом
является апоптоз. Значительный интерес представляет исследование
молекулярных механизмов апоптоза нейтрофилов, играющих важную роль в
норме и при различных патологических состояниях организма человека.
Нейтрофилы являются короткоживущими клетками. Время их циркуляции в
кровяном русле составляет около 10 часов, после чего они подвергаются
апоптозу и фагоцитируются моноцитами или уходят в ткани, где погибают
через 4-5 дней. Одной из основных функций нейтрофилов является защита
организма от бактериальной инфекции. В настоящее время известно, что
компоненты
клеточной
стенки
грамотрицательных
бактерий
липополисахариды (эндотоксины), освобождающиеся из погибших бактерий,
ингибируют апоптоз нейтрофилов.
Одним из методов лечения различных заболеваний является
ультрафиолетовое облучение крови (УФОК). Этот метод в настоящее время
достаточно широко используется при лечении гнойно-септических, сердечнососудистых и других заболеваний. В медицинских целях чаще всего
используется ультрафиолетовое облучение диапазона С (УФС), однако
молекулярные механизмы его действия практически не выяснены. Ранее нами
было показано, что УФС вызывает ускорение апоптоза культивируемых in vitro
нейтрофилов человека. Известно, что в реализации действия УФС на апоптоз
клеток участвует Fas-зависимый путь внутриклеточной регуляции и
тирозинкиназный путь. Недавно было показано, что липополисахариды (ЛПС)
ингибируют апоптоз нейтрофилов и в этом процессе участвуют
внутриклеточные тирозинкиназы.
В настоящей работе проведено изучение совместного действия ЛПС и
УФС на динамику развития апоптоза культивируемых нейтрофилов с целью
выяснения роли различных путей внутриклеточной сигнализации в регуляции
апоптоза нейтрофилов человека.
Нейтрофилы выделяли из периферической крови здоровых доноров на 2-х
слойном градиенте фиколла-верографина. После этого клетки дважды отмывали
фосфатным буфером, рН 7,2 (PBS) и облучали УФ светом с длиной волны 254
нм на аппарате «Изольда» МФ-73М. Мощность дозы УФС составляла 80 Дж/м2.
После облучения клетки культивировали в среде RPMI-1640 с 10%
55
эмбриональной телячьей сывороткой («Sigma»), 1% L-глутамина, 1%
пенициллин и стрептомицин при 370С в атмосфере, содержащей 5% СО2
(концентрация клеток 1x106/мл). Концентрация ЛПС («Sigma» серотип 055:В5)
в пробах была равна 1 мкг/мл. После окончания культивирования клетки
отмывали от культуральной среды PBS и фиксировали 70% этанолом. Процент
апоптозных клеток определяли методами проточной цитометрии (с
использованием флуоресцентного зонда Hoechst-33258) и световой
микроскопии (окраска по Романовскому- Гимзе). Процент живых клеток
определяли методом проточной цитометрии. При культивировании
жизнеспособность клеток составляла 95 – 98%. Эксперименты по исследованию
действия эндотоксинов выполняли следующим образом. Одну порцию
выделенных нейтрофилов инкубировали в течение 3-х часов с ЛПС, затем
отмывали культуральную среду, облучали нейтрофилы УФС в дозе 80 Дж/м2 и
затем культивировали в присутствии или в отсутствии ЛПС. Другую порцию
клеток сразу облучали УФС в дозе 80 Дж/м2, затем культивировали 3 часа и
добавляли ЛПС или не добавляли ЛПС. Время культивирования 3 часа было
выбрано в связи с тем, что активация клеток под действием ЛПС достигает
максимального значения в течение 3 часов. Кроме того, репарация однонитевых
разрывов в ДНК нейтрофилов при действии ультрафиолетового заканчивается
за 150 мин. Как следует из полученных экспериментальных данных ЛПС,
добавленный изначально к культивируемым клеткам практически отменял
ускоряющее действие УФС на апоптоз культивируемых клеток (регистрация на
4,5 час культивирования клеток).
Полученные данные могут быть интерпретированы таким образом, что
добавленный изначально ЛПС, ингибируя тирозин-киназный путь, также
ингибирует частично и Fas-зависимый путь регуляции апоптоза. В том случае,
когда вначале проводится облучение, а затем добавляется ЛПС – происходит
общая активация как тирозин-киназного, так и Fas-зависимого пути регуляции
апоптоза нейтрофилов, в результате чего уровень апоптоза в предварительно
УФС-облученных нейтрофилах значительно выше, чем в необлученных.
В настоящее время известны только отдельные детали механизма
действия эндотоксинов на регуляцию апоптоза нейтрофилов. Неясен
конкретный путь передачи сигналов с CD14 рецепторов на тирозинкиназы,
участвующие в механизме этой регуляции. Вероятно, что в регуляции апоптоза
нейтрофилов ультрафиолетом С и эндотоксинов участвуют одни и те же
тирозинкиназы.
Представляется достаточно вероятным, что одним из механизмов
действия УФС при лечебном применении УФОК может быть обнаруженное
нами ускорение апоптоза нейтрофилов при УФ облучении крови. Известно, что
ЛПС оказывают праймирующее действие на нейтрофилы человека и, кроме
того, они значительно ингибируют апоптоз нейтрофилов. С этим, вероятно,
связан ряд осложнений в патогенезе многих заболеваний: активированные
клетки достаточно долго циркулируют в кровяном русле и атакуют собственные
клетки и ткани организма, осложняя течение ряда заболеваний. УФ облучение
крови приводит к сокращению времени циркуляции активированных
56
нейтрофилов и, вероятно, с этим связан лечебный эффект действия УФоблучения крови.
Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда
фундаментальных исследований, грант № 98-04-48303.
Symmari
The action of endotoxin and ultraviolet C on apoptosis of the human
neutrophils was investigated. It is supposed, that the action of ultraviolet C on the
apoptosis of neutrophils is realised through Fas- tyrosinekinasedependent pathway of
regulation. The obtained data testify that the activation of apoptosis in the Fasdependent pathways occurs much faster, than the inhibiting action of endotoxins on
apoptosis.
СУПЕРОКСИД ВОЗДУХА В КОРРЕКЦИИ ЭНДОТОКСИКОЗА
Власов А.П., Дроздова Т.А., Аширов Р.З., Кильдюшов А.Н.
Саранск, Москва
А.Л.Чижевский (1919) выявил благотворное действие аэроионов воздуха
при лечении многих заболеваний. Установлено их влияние на тканевое
дыхание, обмен веществ, физико-химические свойства крови, кроветворение,
электрокинетический потенциал эритроцитов, соотношение белковых фракция
плазмы, митогенетический режим тканей и др. По мнению А.Л.Чижевского
(1959, 1960) универсальное положительное действие аэроионов,
главным
составляющим которых являются отрицательные ионы кислорода (донаторы
электронов), обусловлено их биокатализирующей способностью, благодаря
чему стимулируется и нормализуется метаболизм.
Целью работы явилось изучение влияния аэроионов кислорода на
эндотоксикоз при остром перитоните. На модели калового перитонита у собак
(n-24) (при соблюдении правил обращения с экспериментальными животными)
в опытной группе комплексное лечение включало аэроионотерапию. Для этого
использована люстра Чижевского, которая представляла классический тип
электроэффлювиального генератора.
Время аэроионизации - 1,5 часа,
интенсивность - 500 тысяч аэроионов в 1 см3 воздуха. Таким образом
аэроионотерапия проводилась дозой в 20 биологических единиц, которая и
рекомендована А.Л.Чижевским (1960). Контроль содержания аэроионов
кислорода в воздухе производили при помощи счетчика аэроионов "Сапфир-3к"
(Москва).
Нами установлено, что под влиянием аэроионов кислорода общее
содержание альбумина в крови в раннем послеоперационном периоде
существенно не изменялась. Эффективная же концентрация альбумина в крови
повышалась. Через сутки после операции по сравнению с контролем отмечалось
ее рост на 21,8 % (P<0,05), через 3 суток - на 18,8 % (P<0,05), а к 5 суткам она
возрастала еще больше - на 29,2 % (P<0,001). Резерв связывающей способности
57
альбумина под влиянием аэроионов кислорода по сравнению с контролем
возрастал: через сутки после операции - на 25,0 % (P<0,01), через трое - на 13,2
% (P>0,05), а через 5 суток - на 27,9 % (P<0,01). Индекс токсичности плазмы
при остром перитоните на фоне аэроионотерапии уменьшался. Через сутки
после операции значение этого показателя по сравнению с контролем
уменьшалось на 32,1 % (P<0,05), через трое – на 18,2 % (P<0,05), а через 5 суток
– на 39,3 (P<0,05).
Исследованиями установлено, что концентрация молекул средней массы
(при 250 и 280 нм) под влиянием аэроионов кислорода в плазме крови
уменьшалась. Через сутки после операции их уровень снижался по сравнению с
контролем соответственно на 12,0 и 14,9 % (P<0,01); через трое - на 14,6 и 13,5
% (P<0,01), а через 5 суток - на 14,1 и 21,1 % (P<0,01).
Выявлены изменения содержания весьма токсичных ТБК-активных
продуктов. Оказалось, что после первого сеанса их уровень уменьшался на 24,6
% (P<0,001), после третьего - на 35,3 % (P<0,001), а после 5 сеанса - на 33,8 %
(P<0,001).
Таким образом, исследования показали, что включение в лечение острого
экспериментального перитонита аэроионотерапии приводит к существенному
снижению уровня эндогенной интоксикации. Действие аэроионов кислорода
проявилось на всех исследованных показателях эндотоксикоза, причем как
гидрофильного, так и гидрофобного компонентов. Важно и то, что
благотворный эффект прослежен уже после первого сеанса. Следует отметить и
тот факт, что под влиянием аэроионов кислорода детоксикационная функция
печени возрастает. Об этом говорит не только повышение эффективной
концентрации альбумина, но и снижение до нормальных цифр уровня
среднемолекулярных олигопептидов, регистрируемых при длине волны в 280
нм, метаболизм которых, как известно, в основном связан с функцией печени.
ПЕРЕКИСНОЕ ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВ И АКТИВНОСТЬ
ФОСФОЛИПАЗЫ А2 В ДИНАМИКЕ
ОСТРОГО ВОСПАЛЕНИЯ БРЮШИНЫ
Власов А.П., Герасименко А.В., Конышева О.В.,
Кокарева И.В., Теричев А.Е.
Саранск
На модели острого перитонита нами изучена интенсивность свободнорадикальных реакций перекисного окисления липидов (ПОЛ), активность
фосфолипазы А2 в различных тканях собак.
Проведены опыты на 18 взрослых беспородных половозрелых собаках,
которым перитонит моделировали под тиопентал-натриевым наркозом (0,04 г/кг
массы) введением в брюшную полость 20% каловой взвеси из расчета 0,5 мл/кг
массы животного. Через сутки выполняли санацию брюшной полости. В
58
контрольные сроки (1,3,5 суток) выполняли релапаротомию, забор
крови, биопсию тканей.
Опыты показали, что при остром перитоните наблюдается
интенсификация процесса ПОЛ в плазме крови общего кровотока. Установлено,
что содержание диеновых коньюгатов по сравнению с исходом увеличивалось
на 75,5 % (P<0,001), триеновых коньюгатов - на 40,0 % (P<0,01), а ТБКактивных продуктов - на 115,5 % (P<0,001). Активность каталазы повышалась
незначительно - на 7,9 % (Р>0,05), а супероксиддисмутазы - падала 63,6 %
(Р<0,001)
Через сутки после операции интенсивность процессов перекисного
окисления липидов в плазме крови нарастала. Оказалось, что содержание начальных и вторичных продуктов повышалась еще больше. По сравнению с
нормой уровень диеновых коньюгатов возрастал на 99,4 % (P<0,001),
триеновых коньюгатов - на 64,2 % (P<0,001), а ТБК-реагирующих продуктов на 160,8 % (P<0,001). При этом активность каталазы возрастала на 35,8 %
(Р<0,001), а СОД - снижалась на 61,6 % (Р<0,001).
Спустя трое суток уровень молекулярных продуктов ПОЛ сохранялся
высоким. Содержание диеновых коньюгатов было выше исходных цифр на 114,2
% (P<0,001), триеновых коньюгатов - на 78,5 % (P<0,001), ТБК-активных
продуктов - на 143,2 % (P<0,001). Активность каталазы была выше нормы на
29,3 % (Р<0,01), а СОД - ниже на 37,8 % (Р<0,001).
Через 5 суток количество диеновых коньюгатов было выше нормы на
117,7 % (P<0,001), триеновых коньюгатов
- на 122,2 % (P<0,001), ТБКреагирующих продуктов - на 46,6 % (P<0,05). Активность первого
антиоксидантного фермента по сравнению с исходными данными сохранялась
повышенной на 33,6 % (Р<0,01), а второго - пониженной на 34,2 % (Р<0,001).
Опыты показали, что в плазме крови общего кровотока повышалась
активность и фосфолипазы А2. Через сутки после моделирования перитонита ее
активность возрастала более чем в 12 раз (Р<0,001). Через 1 и 3 суток после
санации брюшной полости активность энзима сохранялась высокой и по
отношению к исходу ее прирост был соответственно более чем в 10 и 8 раз
(P<0,001). Через 5 суток после хирургического вмешательства активность
фосфолипазы А2 уменьшалась и была выше исходного значения на 185,1 %
(P<0,001).
Во многом сопоставимая картина ПОЛ и активности фосфолипазы А2 в
динамике патологического процесса определялась на уровне тканей кишечника,
печени, сердца, плазмы крови висцерального кровотока.
Следовательно, одним из важнейших компонентов в патогенезе острого
перитонита выступают резкая активизация свободно-радикальных реакций ПОЛ,
снижение антиоксидантного энзимного потенциала, повышение фосфолипазной
активности. Наибольшие такого рода нарушения отмечены на уровне кишечника
и плазмы крови висцерального кровотока.
59
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ФАКТОРОВ
МАЛОЙ ИНТЕНСИВНОСТИ
В ТРАВМАТОЛОГИИ И ОРТОПЕДИИ
Возжеников П. С.
г. Лобня, Московской обл., Россия
Выявление уже существующего: групп воздействия, рассмотренных
наукой
теоретических
вопросов,
фундаментальных
механизмов,
экспериментальных данных ведущих специалистов и данных по реализации
малых по интенсивности физических полей, гальванических токов,
микроэлементов, гомеопатических средств, - легло в основу данного
направления.
Ясной целью и решаемой задачей в настоящее время является получение
простого средства, доступного врачам-травматологам, специалистам по
реабилитации, невропатологам и терапевтам- равно как и специалистам, чья
профессиональная деятельность связана с оказанием помощи там, где
существует критическая зависимость от дефицита времени и средств.
Первоначальным планом являлось купирование болевого синдрома у
больных получивших травматические повреждения легкой и средней степени
тяжести на всех этапах лечения. Оригинальные работы российских ученых
показали возможность расширения круга рассматриваемых мной вопросов.
Моральная ответственность перед научной общественностью предполагает
критическое отношение автора к результатам своей работы.
Хорошо известные схемы патогенеза основных ответных реакций
организма на повреждения и их механизмов в отдельных органах и тканях
свидетельствуют о том, что наиболее ранней и обязательной формой участия
нервной системы в патологии является ее защитно -приспособительная роль и
она же (н.с) оказывается наиболее ранимой.
Нарушение регуляторной функции нервной системы вызывает
рассогласование и в функциональных системах (сердечно-сосудистой,
эндокринной и др.). каждое звено рассогласованной системы является пусковым
механизмом построения новой, так называемой патологической функциональной системы (патологической доминанты по Ухтомскому). Процессы
интеграции для последующего саногенеза будут являться ключевыми.
Согласно теории П.К. Анохина вовлечение нервной системы в
патологический процесс почти при всех нозологических формах заболевания
предопределяет повреждение функционального элемента того или иного органа,
состоящего по данным А.М. Чернуха (1979) из системы специфических клеток,
микроциркуляторной единицы и окружающей соединительной ткани.
Впервые в отечественной литературе подробные данные о современных
представлениях и теоретическое обобщение о механизме действия методов
рефлексотерапии открываем в работе В.С. Гойденко (1990).
Структурно-функциональная теория механизма действия иглотерапии и
микроиглотерапии. Согласно представленной теории, при любой форме
60
рефлексотерапии
происходит взаимодействие
двух
систем:
патологической системы и системы, связанной с действием акупунктуры.
Системы взаимодействуют синергически или каждая из них способствует
распаду другой. Второй момент - это собственно группа воздействий на
организм физической и химической природы, объединенная в последнее время
названием как факторы малой интенсивности.Факторы малой интенсивности влияние сверхмалых (гомеопатических) количеств лечебных средств, слабых
гальванических токов и т.д. ,приобретающее характер сигнала то есть, имеет
место информационный тип воздействия на сложную систему, которой является
организм А.А. Подколзин (1995).
Модифицируя акупунктуру, соединив прижигающее воздействие
допустимых в здравоохранении веществ, которые при контакте с кожей
образуют соединения называемые гомеопатии нозодами и создавая слабый
гальванический ток, дополняя в ряде случаев сверхмалые (гомеопатические)
соединения, так же допустимые в здравоохранении- получим новый подход к
терапии многих патологических состояний.
Данный единый подход прост- новый и необходим для современности,
лишен магической «зашумленности», суть которого целостный взгляд на
единство всего сущего.
Для врачей, чье мнение и оценка в каждом конкретном случае будет
решающей, даже без первичной специализации по рефлексотерапии, незнаниене аргумент к не использованию представленного. Можно воспользоваться в
начале работы методической рекомендацией. Общекоррегирующая терапия
необходима в связи с развитием глобальных нарушений метаболизма органов и
тканей, когда изменяется сам тип реакций на нормальные агенты и лекарства.
Избранный тип воздействия показал высокую эффективность как в период
острых нарушений, происходящих при переломах, в частности области
голеностопного сустава, так и в восстановительном периоде.
ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КОМПОЗИЦИЙ,
СОДЕРЖАЩИХ ФИТОМАСЛА, НАНОЧАСТИЦЫ СЕРЕБРА, ЦИНКА,
АЛЮМИНИЯ, МЕДЬ И АНТИБИОТИКИ
Глущенко Н.Н., Богословская О.А., Володина Л.А., Карпенко Т.А.,
Ольховская И.П., Плетенёва Т. В.
Российский государственный университет дружбы народов,
медицинский факультет,
кафедра фармацевтической и токсикологической химии, Москва, Россия
Институт энергетических проблем химической физики РАН, Москва,
Россия
Несмотря на значительные успехи, достигнутые за последние годы в
области синтеза новых препаратов, обладающих регенерирующей активностью,
противовоспалительным и антимикробным действием, создание лекарственных
61
препаратов
широкого
спектра действия
остается
важной
и
актуальной задачей. В связи с этим, мы разработали серию препаратов,
фармакологическая активность которых определяется разной природой:
биологически активными компонентами из лекарственных растений и плодов
томата, комбинацией антибиотиков и металлов, металлами в виде наночастиц, однако с общим для всех свойством - многоцелевого действия.Учитывая, что
заживление ран и ожогов характеризуется комплексом реакций, чрезвычайно
сложных и взаимосвязанных между собой морфологических, физикохимических и биологических процессов, на каждой стадии требующих
применения лекарственных веществ разного назначения (антисептиков,
стимуляторов регенерации и т.д.), именно, модель
экспериментальных
полнослойных ран была выбрана нами для проверки фармакологической
активности препаратов. О влиянии препаратов на скорость заживления ран
судили по изменению площади ран и показателей - времени полузаживления и
времени полной регенерации ран. В таблице 1 приведены показатели качества
растительного масла «Олейна» (Венгрия), которое использовали для
приготовления масляных экстрактов «Кызылмай» и «томат-масла»,
вазелинового масла, использованного для приготовления новых лекарственных
форм, а также показатели качества самого полифитового масла «Кызылмай» и
«томат-масла» (любезно предоставленных фирмой «Кызылмай», г. Алма-Ата).
Таблица1.
Показатели качества растительного масла «Олейна», масла
вазелинового, «томат-масла» и полифитового масла «Кызылмай»
Образец
Количество
перекисей
х10-2 ммоль/г
масло 0,630,05
Растительное
«Олейна»
Вазелиновое масло
0,110,01
Полифитовое масло 1,720,06
«Кызылмай»
«Томат-масло»
7,240,18
Кислотное число
мг KOH/г
Йодное число
0,1280,016
12,531,42
0,0340,005
11,331,3
0,130,02
12,890,46
6,560,15
13,730,15
Сравнение показателей качества растительного и вазелинового масла дает
основание отдать предпочтение вазелиновому маслу, как основе
для
приготовления препаратов, поскольку оно содержит наименьшее количество
перекисей и имеет низкие значения кислотного и йодного чисел, что
обеспечивает стабильность препаратов. В таблице 2 приведены значения
антиокислительной активности (АОА) препаратов. Видно, что наибольшей
активностью обладает «томат-масло», далее полифитовое масло «Кызылмай»,
затем растительное масло «Олейна», наночастицы серебра, наночастицы
алюминия и цинка.
62
Таблица 2. Антиокислительная активность растительного и вазелинового
масел, фитомасел и композиций с наночастицами серебра, цинка, алюминия
Образец
РастиВазелительное
новое
масло
масло
«Олейна»
АОА 33030
13515
Полифито- «Томатвое масло масло»
«Кызылмай»
53060
65070
Композиции
с наночастицами
Ag
Zn
Al
215±20 150±10 165±
15
Изучение влияния препаратов на скорость заживления ран по показателю
времени полузаживления показало, что наибольшей регенерирующей
активностью обладают 10% «томат-масло» и полифитовое масло «Кызылмай» в
вазелиновом масле, наночастицы цинка в вазелиновом масле в концентрации
0,05%, наночастицы серебра в концентрации 0,06% и наночастицы алюминия в
концентрации 0,6%.
По показателю времени полного заживления ран препараты образуют
следующий ряд: 10% полифитовое масло «Кызылмай»  0,05%Zn  0,6%Al 
0,06%Ag = 10% “томат-масло”.
В качестве антисептиков при лечении ран широкое использование
антибиотиков породило новые проблемы: произошло изменение состава
микрофлоры, появились формы устойчивые к антибиотикам, условнопатогенная флора стала патогенной, произошло более широкое распространение
бациллоносительства антибиотико-устойчивых форм среди персонала в
стационаре. Поэтому поиск путей повышения действия антибиотиков на
бактериальные клетки является важной и актуальной задачей. Одним из путей
повышения эффективности антибиотиков на бактериальные клетки является
комбинированное действие меди и антибиотиков, которое приводит к
синергидному эффекту. В модельных экспериментах в опытах in vitro нами
установлено, что совместное воздействие стрептомицина, ампициллина,
эритромицина, неомицина и меди, взятой в нетоксичных или
ростстимулирующих концентрациях, на метаболизирующие клетки E.coli
сохраняет бактериостатическое действие антибиотиков при снижении их
концентраций в 4-10 раз. В основе синергидного усиления медью
антимикробной активности антибиотиков лежит увеличение накопления
клеткой антибиотика из среды инкубации, вследствие проницаемости
цитотоксической мембраны клеток ионами тяжелых металлов. Этот феномен
был установлен на примере стрептомицина сотрудниками лаборатории
(Кузовникова Т.А., Лебедев В.С.).
В докладе будут рассмотрены вопросы технологии приготовления
препаратов, обсуждена взаимосвязь физико-химических характеристик
63
препаратов со способностью их влиять на
экспериментальных полнослойных ран.
скорость
заживления
INVESTIGATIONS IN THE FIELD OF PHARMACOLOGICAL ACTIVITY
OF COMPOSITIONS CONTAINING PHYTOOILS, NANOPARTICALS OF
SILVER, ZINCUM, ALUMINIUM, COPPER AND ANTIBIOTICS
Gluschenko N. N., Bogoslovskaya O. A., Volodina L. A., Karpenko T. A.,
Olkchovskaya I . P., Pleteneva T. V.
Department of pharmaceutical and toxicological chemistry. Russian Peoples
Friendship University.
Moscow. Russia
Institute of energy problems of chemical physics. Science Academy of Russia
The regenerative activity of compositions with phytooils, with nanoparticals of
silver, zincum, aluminium is investigated on model of experimental wounds.
Intensifyng rate of an adhesion of wounds was fixed at daily applications on a surface
of wounds. The interrelation between rate of an adhesion of wounds and antioxidizing
activity of drugs was shown.
The synergism of activity of copper and antibiotics (Streptomycinum,
Ampicillinum, Erythromycinum, Neomycinum) on propagation of populations Е. coli
was established and resulted in to bacteriostatic activity fixed.
ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ СТРЕСС ПРИ ГИПЕРТОНИЧЕСКОМ КРИЗЕ,
ИНФАРКТЕ МИОКАРДА И ЕГО РЕГУЛЯЦИЯ
ВАЗОАКТИВНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ
П.П.Голиков, А.П.Голиков, Б.В.Давыдов, С.Б.Матвеев,
В.А.Рябинин, В.В.Марченко
НИИ скорой помощи им. Н.В.Склифосовского., г. Москва
Важным звеном патогенеза гипертонического криза и инфаркта миокарда
является окислительный стресс. При окислительном стрессе нарушается баланс
в системе прооксиданты-антиоксиданты в сторону прооксидантов, что приводит
к повреждению клеточных структур, особенно мембран клеток. В связи с этим в
настоящее время ведется интенсивный поиск фармакологических препаратов,
способных эффективно корригировать проявления окислительного стресса на
мембранном уровне. Наиболее корректно окислительный стресс оценивается по
уровню продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Lawson D.L. et al,
1997).
Известно, что в механизмах развития гипертонического криза и инфаркта
миокарда важное значение имеет состояние сосудистого русла и регуляторных
64
систем поддержания его тонуса. Тонус сосудов во многом определяется
соотношением уровня главного вазоконстриктора ангиотензина II и основного
вазодилятатора
оксида
азота,
состоянием
постсинаптических
α1адренорецепторов переферических сосудов и центральных серотониновых α1рецепторов сосудодвигательного центра продолговатого мозга. Увеличение
содержания ангиотензина II индуцирует активность синтазы оксида азота III
типа и одновременно вызывает значительное увеличение продукции
супероксидного анион-радикала, который разрушает вазодилятатор оксид азота,
продуцируемый клетками сосудистого эндотелия. При этом ослабляется
вазодилятаторный эффект оксида азота и усиливается действие
вазоконстрикторных факторов. Установлено, что при взаимодействии оксида
азота с супероксидным анион-радикалом образуется пероксинитрит,
обладающий выраженным токсическим действием на функции клеток.
В связи с этим целью работы явилось изучение влияния урапидила
(блокатора α1- адренорецепторов и стимулятора серотониновых α1- рецепторов)
и рамиприла (блокатора ангиотензинконвертирующего фермента) на
окислительный стресс у больных с гипертоническим кризом и инфарктом
миокарда.
Обследовано в динамике 42 больных с гипертоническим кризом, 57
больных с крупноочаговым трансмуральным инфарктом миокарда. У 25
больных острые проявления гипертонического криза купировали внутривенным
введением урапидила в суточной дозе 25-50 мг, а в последующем в течение 1
недели проводилась монотерапия этим препаратом (основная группа). 17
больным с гипертоническими кризами проводили терапию диуретиками, βблокаторами, антагонистами кальция без лечения урапидилом (контрольная
группа). На 2-й неделе всем больным с гипертоническим кризом проводилась
комбинированная терапия, направленная на окончательную стабилизацию
уровня артериального давления. 20 больных инфарктом миокарда, помимо
общепринятой терапии, получали рамиприл перорально по 2,5 мг 2 раза в день,
начиная с 1-х суток и далее, в течение всего периода наблюдения (основная
группа). 37 больных с инфарктом миокарда получали общепринятую терапию
(контрольная группа).
О выраженности окислительного стресса судили по состоянию процессов ПО
антиоксидантной системы (АОС). При этом в сыворотке крови определяли первич
(диеновые конъюгаты, ДК), вторичные (малоновый диальдегид, МДА) продукты П
степень окисленности липидов (СО), содержание эндогенного антиоксиданта ал
токоферола (ТФ) и внеклеточного антиоксидантного фермента церулоплазмина (ЦП)
Для оценки дисбаланса ПОЛ/АОС использован интегральный показател
коэффициент К окислительного стресса (Golikov P.P. et al., 1996). При этом получен
параметры ПОЛ и АОС были использованы для вычисления коэффициента К
формуле:
ДКi
МДАi
COi
ТФi
ЦПi
К = ( ----- х -------- х ------ ) : ( ----- х ------ ),
ДKn
МДАn COn
ТФn
ЦПn
65
где показатели с индексами i соответствуют значениям у больных,
показатели с индексом n – нормальным значениям. При сохранении баланса ПОЛ/А
коэффициент К равен 1. При усилении процессов ПОЛ коэффициент К возраст
Использование этого интегрального показателя позволяет одновременно оцен
состояние как процессов ПОЛ, так и АОС и выявить степень дисбаланса ПОЛ/АОС.
У больных с гипертоническим кризом оценка выраженности окислительн
стресса проводилась до купирования криза, после купирования криза, на 1, 3, 7 и
сутки, а у больных инфарктом миокарда - на 1, 3, 5, 10 и 20 сутки от начала заболеван
Установлено, что у больных с гипертоническим кризом до его купирования
коэффициент окислительного стресса достоверно превышал значение нормы.
После купирования гипертонического криза урапидилом выявлено
нормализующее действие на состояние окислительного стресса, тогда как у
больных контрольной группы нормализующий эффект отсутствовал. В
последующие сроки наблюдения как у больных основной группы, так и у
больных контрольной группы коэффициент окислительного стресса постепенно
возрастал. Однако у больных, получавших урапидил в течение 1-й недели
лечения, отмечалось менее выраженное повышение коэффициента
окислительного стресса на 1, 3 и 7 сутки.У больных инфарктом миокарда также
обнаружено увеличение коэффициента окислительного стресса на протяжении
всех сроков исследования. При этом у больных инфарктом миокарда,
получавших рамиприл, начиная с 3 суток исследований отмечалось снижение
коэффициента окислительного стресса по сравнению с больными контрольной
группы. Полученные данные свидетельствуют о том, что, несмотря на
повышение в сыворотке крови концентрации компонентов АОС - ТФ и ЦП у
больных с гипертоническим кризом и инфарктом миокарда, наблюдается
существенное повышение коэффициента окислительного стресса за счет
высокого уровня продуктов ПОЛ и СО липидов.Таким образом, включение в
комплексную терапию вазоактивных препаратов – урапидила у больных с
гипертоническим кризом и рамиприла у больных инфарктом миокарда –
уменьшает выраженность окислительного стресса. Однако в поздние сроки
наблюдения корригирующий эффект вазоактивных препаратов снижается.
Следовательно, при лечении инфаркта миокарда и гипертонической болезни,
осложненной кризами,
показана селективная антиоксидантная терапия,
направленная на ингибирование окислительного стресса.
OXIDATIVE STRESS IN HYPERTENSIVE CRISIS,
MYOCARDIAL INFARCTION, AND ITS REGULATION
BY VASOACTIVE DRUGS
P.P.Golikov, A.P.Golikov, B.V.Davydov, S.B.Matveyev, V.A.Ryabinin,
V.V.Marchenko, N.Yu.Nickolayeva, E.V.Semionova
N.V.Sklifosovsky Institute for Emergency Medicine, Moscow
66
An oxidative stress condition and
influence on it of vasoactive drugs, urapidil an
ramipril, in 42 patients with hypertensive crisis and in 57 patients with a multifocal
transmural myocardial infarction were studied in the work. To evaluate the oxidative
stress we used K oxidative stress coefficient, determined by lipid peroxidation
processes state and antioxidant system. It was demonstrated that urapidil in the patients
with hypertensive crisis and ramipril in the patients with myocardial infarction
decreased expression of the oxidative stress, but in the late terms (10-20 days)
from the beginning of the disease their correcting effect decreased. The obtained
data indicate that in treatment of hypertensive disease, complicated with crises
and of myocardial infarction an additional selective antioxidant therapy directed
to oxidative stress inhibition is necessary.
СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О МЕХАНИЗМАХ
ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ЭНДОТОКСИНА С КЛЕТКАМИ-МИШЕНЯМИ
Грачев С.В., Асташкин Е.И.
Московская медицинская академия им.И.М.Сеченова
По данным медицинской статистики США в этой стране ежегодно страдает
септическим шоком до 350000 человека, летальность варьирует от 40 до 80%.
Применение антибиотиков часто усугубляет этот процесс, способствуя
освобождению больших количеств липополисахаридного эндотоксина (LPS)
грам-отрицаетльных бактерий. В настоящее время нет эффективных
лекарственных средств, позволяющих подавлять развитие эндотоксинового
шока. В значительной степени это связано со сложной природой
взаимодействия амфифильных молекул эндотоксина с клетками-мишенями. За
биологическую активность эндотоксина, под которой понимают его
способность индуцировать образование каскада провоспалительных цитокинов,
активных метаболитов арахидоновой кислоты, фактора некроза опухоли (TNF), фактора активации тромбоцитов (PAF) и др., а также активировать
фагоцитоз, вызывать секрецию протеолитических ферментов, приводить к
дыхательному взрыву и образованию оксида азота, отвечает высоко
гидрофобный компонент липид А. Попав в кровь, эндотоксин взаимодействует
с липопротеинами высокой плотности (HDL) и белком, связывающим LPS
(LBP). В настоящее время считается, что LBP «катализирует» перенос
мономерной формы LPS на мембрану клетки-мишени (моноциты, нейтрофилы
), где происходит его связывание с белковым кластером дифференцировки
СD14. Этот белок , с одной стороны, выполняет функцию «рецептора»мусорщика, ответственного за удаление молекулы эндотоксина с поверхности
клетки с помощью эндоцитоза образовавшихся комплексов LPS-CD14, а с
другой – презентирует молекулы эндотоксина гипотетическому «истинному»
рецептору. CD14 не является трансмембранным белком, способным передавать
информацию о взаимодействии с LPS в цитоплазму и ядро клетки, что является
следствием его «заякоренности» в мембране с помощью гидрофобного хвоста.
67
В результате этого CD14 существует в двух формах – мембранной (mCD14) и
растворимой (sCD14). Первоначальное предположение о защитной функции
sCD14 не оправдалось, установлено, что тройные комплексы LPS-LBP-sCD14
способны действовать на клетки, не экспрессирующие mCD14, усугубляя
тяжесть эндотоксинового шока. В последнее время было высказано
предположение о том, что в качестве «истинного» рецептора эндотоксина
выступает изоформа 2 белка TLR (TLR2). Впервые эти белки были выявлены
на дрозофилах, где они выполняют разнообразные функции, в том числе
участвуют в защите от некоторых микроорганизмов. Необходимо, однако,
отметить отсутствие избирательности узнавания TLR2-белком молекул
липополисахарида, поскольку на эти «рецепторы» действуют и другие
бактериальные продукты, в том числе белковой природы. В ряде работ описаны
мембранные белки, выполняющие функцию рецептора для LPS. Такие белки
можно условно разделить на две большие группы. Сигнал активации с белков
первой группы первоначально поступает на систему тирозин киназ (Src, Lyn,
Hck, Fgr), а затем на каскад митоген активируемых протеин киназ (MAP киназ),
в состав которого входят белки р44, р423 и р38. Мишенями МАР киназ
являются факторы транскрипции, которые в результате активации
транслоцируются из цитоплазмы в ядро, где взаимодействуют с регуляторными
областями генов, ответственных за синтез
разнообразных цитокинов.
Рецепторные белки второй группы, как правило, взаимодействуют с LPS, когда
он выделяется из бактериальных клеток в высоких концентрациях. Сигнал
активации с этих белков трансформируется в форму инозитол трисфосфата
(InsP3) и диацилглицерина (DAG). InsP3 вызывает выход ионов Са2+ из
внутриклеточных Са2+ депо, опустошение которых приводит к переводу в
открытое состояние Са2+ каналов плазматических мембран клеток,
регулируемых депо (SOC каналы). Увеличение [Ca2+]i реализуется в цитоплазме
клетки через взаимодействие Са2+ с кальмодулином (СМ) и последующую
активацию Са2+-СМ протеин киназы и/или Са2+-зависимой фосфатазы
(кальцинеурин). В свою очередь DAG активирует протеин киназу С (ПКС),
также фосфорилирующую некоторые факторы транскрипции генов. В ряде
работ описано функциональное взаимодействие МАР киназного каскада с
сигналами, поступающими с ПКС и Са2+-СМ киназы. Анализ синтеза
бактериальной клеткой эндотоксина, его взаимодействия с транспортными
белками плазмы, с рецепторными белковыми компонентами клеток-мишеней, а
также различными ключевыми белками, участвующими в трансдукции сигналов
активации в цитоплазму и ядро клетки – все это позволяет выделить ряд
критических этапов, воздействие на которые способно подавить активацию
клеток-мишеней и тем самым нейтролизовать биологические эффекты
эндотоксинов.
GRAM-NEGATIVE ENDOTOXIN : LPS EFFECTS ON CELL SIGNAL
TRANSDUCTION
Grachev S.V., Astashkin E.I.
68
Sechenov Medical Academy, Moscow
Lipopolysaccharide (LPS, endotoxin) is the major pathogenic factor of gram-negative
bacteria. It induces endotoxic shock. LPS initiates a global activation of inflammatory
pathways tha can lead to tissue damage and death in humans. In this report, we
summarize the essentials of LPS biochemistry and also present recent data of
identifying surface receptor for LPS-LBP complexes, signal-transducing elements,
transcribtional factors, and key intracellular targets involved in the responce of
human cells to endotoxins
ВЛИЯНИЕ ПРОБЫ С ПИКОВЫМ РЕЗИСТИВНЫМ
СОПРОТИВЛЕНИЕМ ВДОХУ И ВЫДОХУ
НА ВНУТРИСЕРДЕЧНУЮ ГЕМОДИНАМИКУ У ПОДРОСТКОВ
Гулина О.П., Веневцева Ю.Л., Киркина Н.Ю., Хадарцев А.А.
НИЦ медицинского факультета ТулГУ объединенный
с НИИ новых медицинских технологий, г.Тула, Россия
Многочисленными исследованиями было показано, что срочное действие
дополнительного резистивного сопротивления (ДРС) на вентиляционный
аппарат сопровождается снижением легочной вентиляции, нарушением
газообмена и гемодинамики, что в дальнейшем усугубляется утомлением
дыхательных мышц. Феноменологический анализ поведения испытуемых в
период срочной адаптации к ДРС позволил выявить поведенческие признаки
эмоционального стресса. Нами же оценивалась внутрисердечная гемодинамика
в острой пробе с пиковым резистивным сопротивлением вдоху и выдоху.
Для создания пикового резистивного сопротивления вдоху и выдоху в
течение 30 сек. использовали тренажер дыхательной мускулатуры (ТДМ)
«ЭОЛ». Данная проба проведена 11 спортсменам (16,810,58 года), 20
нетренированным подросткам (18,850,60 года) и 18 студентам 4 курса
физкультурного факультета (21,30,43 года). Внутрисердечная гемодинамика
оценивалась по результатам проводимой ЭхоКГ.
Физиологические механизмы реакции на дыхание с ТДМ различались у
спортсменов и нетренированных лиц. Если у спортсменов размер правого
предсердия (ПП) как правило, не возрастал, однако увеличивалась скорость
предсердного наполнения правого желудочка (ПЖ), то у неспортсменов увеличивался размер ПП, скорость наполнения ПЖ не изменялась, а скорость
потока в легочной артерии (ЛА) снижалась. В группе спортсменов
увеличивалась скорость предсердного наполнения не только правого, но и
левого желудочка (ЛЖ) при отсутствии изменений у неспортсменов. Это
указывает на большие функциональные резервы у подростков с высоким
привычным уровнем двигательной активности. По результатам тестирования
функции внешнего дыхания студенты физкультурного факультета была
разделены на две группы: с высоким (все показатели - ЖЕЛ, фЖЕЛ, МОС -
69
были на 10-20% выше нормы) и средним (снижение фЖЕЛ, ОФВ1 и
ОВФ1/ЖЕЛ на 10-20% от нормативных параметров) уровнем. Различия в
параметрах внутрисердечной гемодинамики в выделенных группах в покое
(снижение скоростей наполнения ПП в диастолическую фазу и потока в ЛА,
отношения скорости раннего и позднего наполнения (Е/А) ЛЖ, а также
высокодостоверное увеличение относительной (на м2 ) объемной скорости
потока в ЛА (18,20,8 и 14,70,7 у.е.) во 2 группе определяли различный
характер реакции после использования ТДМ. Если у спортсменов 1 группы
существенных изменений в усредненных показателях
гемодинамики не
произошло, то у спортсменов 2 группы достоверно снизилась скорость
предсердного наполнения ПЖ, скорость регургитации в систему легочных вен,
возросло отношение Е/А ЛЖ. Более выраженное влияние на кинетику клапанов
оказывает ТДМ, вызывая регургитацию как на трикуспидальном клапане (ТК)
у спортсменов с высоким уровнем функциональных резервов, так и на
митральном клапане (МК) при снижении этого уровня. Более выраженная
реакция наблюдалась у нетренированных подростков и у спортсменов с
признаками сочетанного пролабирования клапанов или с «рыхлыми»
створками.
ВНУТРИСЕРДЕЧНАЯ ГЕМОДИНАМИКА
В УСЛОВИЯХ ГИПЕРВЕНТИЛЯЦИИ
Гулина О.П., Веневцева Ю.Л., Киркина Н.Ю., Корень Н.Н.
НИЦ медицинского факультета ТулГУ объединенный с НИИ новых
медицинских технологий, г.Тула, Россия
Глубокое форсированное дыхание ведет к повышению напряжения
кислорода и снижению - углекислого газа в альвеолярном воздухе. Это
приводит к расширению легочных сосудов. Кроме того, при гипервентиляции
(ГВ) отмечается гиперпродукция катехоламинов и сдвиг кривой диссоциации
Hb вправо. У лиц с вегетативной дисфункцией и высокой эмоциональной
лабильностью при ГВ легко возникают инверсии зубца Т и нередко снижение
сегмента ST (Маколкин В.И., Аббакумов С.А., 1985). ГВ в течение 1 минуты в
положении лежа проводилась у 53 подростков: 32 юношей (средний возраст
15,70,57 лет) и 21 девушки (17,40,8 года). Внутрисердечная гемодинамика
оценивалась по результатам проводимой ЭхоКГ. Мы изменяли размер правого
предсердия (ПП), скорости наполнения ПП, правого желулочка (ПЖ), размер и
скорость в легочной артерии (ЛА), скорости наполнения левого предсердия
(ЛП) и левого желудочка (ЛЖ). Отмечали наличие и выраженность
регургитации. Следует отметить, что данная проба не вызывала заметного
изменения ЧСС. В результате исследования получены следующие данные. На 3
% у юношей и 10% у девушек увеличился размер ПП. На 11,6% у девушек
70
снизилась скорость его наполнения в систолическую фазу и не изменилась у
юношей, скорость наполнения в диастолическую фазу не менялась в обеих
группах. Соответственно на 13% и 18% снизилась скорость обратного потока
в устье верхней полой вены. Скорость раннего наполнения ПЖ не изменилась,
на 35% у юношей и на 44% у девушек удлинилась фаза медленного
наполнения (ФМН) ПЖ. Соответственно на 9% и 18% снизилась скорость
предсердного наполнения ПЖ, на 12% и 10% укоротилось время замедления
потока позднего наполнения ПЖ На 3% юношей на 13% у девушек
увеличилось отношение скорости раннего и позднего наполнения (Е/А) ПЖ. На
6% у юношей и 9% у девушек снизилась скорость потока в ЛА и увеличилось
фаза изоволюметрического расслабления (ФИР) ПЖ.
Если наполнение ЛП у юношей на изменилось, то у девушек на 11%
снизилась скорость систолического и на 8% - его диастолического наполнения.
На 5% у юношей и на 8% у девушек снизилась скорость раннего и на 6% и
3% у девушек - скорость предсердного наполнения ЛЖ. Отношение Е/А, Е и
ФИР ЛЖ не изменились. На 3% у юношей и на 7% снизилась скорость потока в
Ао (аорте) , на 16% (P<0,05) у девушек увеличилась ФУ (фаза ускорения) этого
потока.
Наши данные подтверждает мнение других авторов о более выраженной
реакции на ГВ у девушек.
Однако выраженность реакции на эту функциональную пробу оказалась
различной в зависимости от исходного уровня функционирования, отражением
которой служит кинетика клапанов.
Общие закономерности, выявленные во всех группах: увеличение размера
ПП на 3,3% при регургитации на легочной артерии (РЛА) , на 14,5% при
пролапсе митрального клапана (ПМК),
снижение скоростей: позднего
наполнения ПЖ на 7-37% (наиболее существенно при изолированных РЛА и
ПМК), на 1,5 - 9,6% - раннего наполнения ЛЖ и потока в Ао ( на 1,4% при
пролапсе аортального клапана (ПАК) - 10,2% при ПМК).
Скорость систолического наполнения ПП больше всего снизилась при
РЛА (на 25,9%) и ПМК (на 21,9%) и не изменилась при ПМК в сочетании с
пролапсом трикуспидального клапана (ПТК) и ПАК. На 29,5% снизилась
скорость диастолического наполнения ПП при РЛА, а при ПТК - возросла на
30%. Скорость регургитации в систему полых вен уменьшилась на 8-20% во
всех группах, кроме ПТК, где наблюдалось увеличение на 9,5%.
Скорость раннего наполнения ПЖ наиболее существенно снизилась при
ПТК (15,2%), ПАК (на 9%) и ПМК (7,4%), а в остальных группах существенно
не изменилась. Соответственно увеличилось отношение E/A во всех группах.
Скорость потока в ЛА на 2-10% снизилась во всех группах.
Скорость систолического наполнения ЛП на 6-16% снизилась почти во
всех группах (наиболее существенно - при ПАК). Однако при ПТК этот
параметр не изменился, а у детей с ПМК в сочетании с ПТК - увеличился на
16%. Диастолическое наполнение ЛП в основном снизилось, однако при ПМК
и ПТК - увеличилось на 14-16%. Во всех группах, кроме ПМК в сочетании с
ПТК, снизилась скорость регургитации в систему легочных вен.
71
Скорость
предсердного наполнения
ЛЖ незначительно
снизилась во всех группах, кроме ПМК и ПМК в сочетании с РЛА. Отношение
E/A в большинстве случаев существенно не изменилось, однако при ПМК в
сочетании с РЛА снизилось на 26,9%, а при ПТК - возросло на 11,4%.
Регургитация на ЛА и ТК чаще всего сохранялась или даже усиливалась.
У детей с сочетанным ПМК и ПТК изчез ПМК, а при излированном ПМК он
сохранился в только в 28,6%.
ВЛИЯНИЕ НА ВНУТРИСЕРДЕЧНУЮ ГЕМОДИНАМИКУ ПРОБЫ
С ДЫХАНИЕМ В РЕДКОМ РИТМЕ
Гулина О.П., Веневцева Ю.Л., Киркина Н.Ю., Хадарцев А.А.
НИЦ медицинского факультета ТулГУ объединенный с НИИ новых
медицинских технологий, г.Тула, Россия
Проба с дыханием в контролируемом ритме (вдох - выдох - пауза 5 сек) проведена у 42 подростков (29 юношей, в том числе 12 спортсменов, и 13
девушек того же возраста) , внутрисердечная гемодинамика оценивалась по
результатам проведенной ЭхоКГ.
Следует отметить, что размер правого предсердия (ПП) у спортсменов и в
данной выборке был выше, чем у нетренированных юношей.
Дыхание в редком ритме не оказало влияния на среднюю длительность RR.
В результате исследований получены следующие данные. У спортсменов
(1 группа) на 8% увеличивался размер ПП, у нетренированных юношей (2
группа) - на 3% и не менялся у девушек (3 группа). На 3% в 1, на 6% во 2 и на 8%
- в 3 группе возросла скорость наполнения ПП в систолическую фазу. Скорость
диастолического наполнения ПП не изменилась в 1 и 3 группе и на 19% возросла
у нетренированых юношей. Скорость обратного потока в систему верхней полой
вены возросла на 19% в обеих группах юношей и не изменилась у девушек.
Фаза изоволюметрического расслабления (ФИР) правого желудочка (ПЖ)
на 13% укоротилась у спортсменов и не изменилась у нетренированных
подростков. Скорость быстрого наполнения ПЖ не изменилась у спортсменов и
снизилась соответственно на 4,4% и 6,4% во 2 и 3 группе. Длительность фазы
медленного наполнения (ФМН) возросла во всех группах на 50, 6,5 и 8%.
Скорость предсердного наполнения не изменилась в группах юношей и
снизилась у девушек на 24% (P<0,05). Отношение скорости раннего и позднего
наполнения (Е/А) ПЖ не изменилось в 1 и 2 группах и на 22% возросло у
девушек. Скорость потока в легочной артерии (ЛА) не изменилась у юношей и
на 4,4% снизилась у девушек.
Скорость наполнения левого предсердия (ЛП) в систолическую фазу
увеличилось у юношей (на 19,2% у спортсменов и на 6,6% у неспортсменов), а у
девушек - снизилось на 11,7%. Скорость диастолического наполнения ЛП не
изменилась у спортсменов, на 5,3% возросла у нетренированных юношей и на
14,8% снизилась у девушек. Скорость обратного потока в устье легочных вен у
72
спортсменов возросла на 6,3% и снизилась
у
нетренированных
подростков: на 21% у юношей и на 10,2% у девушек.
ФИР левого желудочка (ЛЖ) не изменилась во 2 и 3 группе и на 10%
укоротилась у девушек Скорость раннего наполнения не изменилась во всех
группах. ФМН увеличилась на 11,7% у спортсменов, не изменилась у
нетренированых юношей и укоротилась на 14,2% у девушек. Скорость
предсердного наполнения возросла на 5% у спортсменов и не изменилась во 2 и
3 группах. Отношение E/A ЛЖ на 10% снизилось у спортсменов и не
изменилось во 2 и 3 группах. На 18,8% (P<0,05) во 2 группе и на 6,2% в 3 укоротилось время замедления потока предсердного наполнения ЛЖ.
Длительность изгнания и скорость потока в аорте (Ао) не изменились.
Глубокое и редкое дыхание не оказало влияния на внутрисердечную
гемодинамику у подростков с нормальной кинетикой створчатых клапанов. При
исходном пролапсе митрального клапана (ПМК) на 5% снизились скорости
наполнения левого предсердия и достоверно (на 30%) уменьшилась скорость
обратного потока при его сокращении.
При исходном пролапсе трикуспидального клапана (ПТК) на 34%
снизилась скорость диастолического наполнения ПП, на 28,4% - скорость
обратного потока в систему полых вен и на 18% - скорость потока в легочной
артерии (ЛА). Разнонаправленно изменились скорости наполнения обоих
желудочков в фазу систолы предсердий: резко снизился вклад правого и
увеличился - левого предсердия, соответственно снизилось отношение Е/А
правого и возросло - ЛЖ при неизменной скорости потока в Ао. У подростков с
исходной регургитацией на легочной артерии (РЛА) на 24,8% снизилась
скорость раннего наполнения ПЖ, оптимизировалось наполнение ЛП.
При пролабировании аортального клапана в сочетании с другими
клапанными дисфункциями только незначительно снизилась скорость
диастолического наполнения ПП. В случае сочетания ПМК и РЛА возросла
скорость наполнения обоих предсердий, а ПЖ - снизилась.
При ПТК в сочетании с РЛА снизилась скорость наполнения ПП и
увеличилась - ПЖ и ЛП. В случае ПМК в сочетании с ПТК снизилась скорость
наполнения ПЖ и возросла - ЛЖ, однако на 8% снизилась скорость в Ао.
Полученные данные подтверждают тесную функциональную взаимосвязь
и взаимообусловленность работы обоих желудочков в системе большого и
малого круга кровообращения. Снижение скорости потока в Ао после глубокого
дыхания у подростков с ПМК в сочетании с ПТК указывает на низкие
регуляторные резервы и нелесообразность использования редкого глубокого
дыхания во время аутотогенной тренировки.
ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ САХАРНОГО ДИАБЕТА
НА ИСХОД РОДОВ
Галина Т.В., Плаксина Н.Д., Гагаев Ч.Г.
РУДН, кафедра акушерства и гинекологии (зав.- проф.В.Е.Радзинский)
73
Россия, г.Москва
Сахарный диабет имеет ряд особенностей при гестации, связанных с
функционирование фетоплацентарной системы, следствием чего является
лабильное течение заболевания, прогрессирование диабетической ангиопатии и
гипоксии, присоединение акушерских осложнений, в частности гестоза.
С целью оценки особенностей течения беременности и исхода родов у
беременных с различными формами сахарного диабета нами был проведено
исследование 46 пациенток. Беременных с сахарным диабетом (СД) 1 типа было
23, с СД II типа – 11, с гестационным сахарным диабетом – 12. Все беременные
находились под динамическим наблюдением акушера-гинеколога и
эндокринолога. Течение настоящей беременности осложнилось угрозой
прерывания у каждой седьмой, а ранним токсикозом более, чем у каждой пятой
пациентки. Во втором триместре обострение хронического пиелонефрита
произошло у 5 беременных, угрозой прерывания - у 5, многоводием - у 2. В
третьем триместре, кроме угрозы прерывания и обострения хронического
пиелонефрита течение беременности осложнилось присоединением позднего
гестоза более, чем у каждой второй пациентки, причем частота данной
патологии преобладала у женщин с гестационным сахарным диабетом, имела
более низкое значение при СД 1 типа, и встречалась значительно реже при СД II
типа.
Роды закончились рождением 46 детей, из которых 2 погибли
антенатально, 1 – в первые сутки жизни (по одному из каждой группы
обследованных). Преждевременные роды произошли у каждой третьей с СД 1
типа. У каждой четвертой с СД II типа, у каждой шестой с гестационным
сахарным диабетом. Однако, при анализе состояния новорожденных,
родившихся в гестационном сроке 37 и более недель, выявлено значительное
преобладание плодов с макросомией в группе пациенток, страдающих
гестационным сахарным диабетом.
THE INFLUENCE OF DIFFERENT TYPES OF DIABETES MELLITUS (DM)
ON THE PREGNANCY OUTCOME
Galina T.V., Plaksina N.D., Gagaev Ch.G.
(Peoples’ Friendship University, Dep. Obst./Gyn.)
The course of pregnancy and labor outcome in 23 cases (I) with type I Insulindependent DM, 11 (II) - type II insulin-independent DM and 12 (III) - type III
gestational carbohydrate intolerance have been analyzed. According to the anamnesis
the incidence of stillbirths was almost in 1/3 of cases. Despite of close observation
and intensive medical care ketonuria was observed in each fifth case in group I, in
each third case - in group III. In almost half of the cases in group I the course of
disease was unstable with episodes of hyperglycaemia, besides in 18.2 % cases
hyperglycaemia persisted through pregnancy. Furthermore congenital fetal defects
(CFD) was diagnosed in two cases. In group III no correlation was found between the
74
incidence of CFD and hyperglycaemia during pregnancy. Preterm labor occurred
in every third case in group I, in every forth case in group II and only in every sixth
case in group III. Of the 46 newborns there were 2 cases of macerated stillbirth and
one case of early neonatal death. The rate of perinatal mortality was 6.5 %. The
average birth weight (BW) of newborns in group I, II and III were respectively
3132.6 +
167.5 g, 3313.0 + 242.9 g and 3962.5 + 113.3 g. Irrespective of the GA fetuses
with macrosomia predominated in group III. These figures demonstrate that in group
III DM the BW is considerably influenced by several factors such as the clinical type
of diabetes during pregnancy in particular its labile form with such manifestations as
highly frequent episodes of hyperglycaemia, ketonuria, hydramnios and macrosomia.