Министерство здравоохранения Республики Беларусь Учреждение образования «Гомельский государственный медицинский университет» Кафедра клинической лабораторной диагностики, аллергологии и иммунологии Реферат Диагностика вирусного гепатита, вызванного вирусом Sеn V Выполнила: студентка 4 курса Медико-диагностического факультета Группы Д-405 Литвинко Елизавета Игоревна Проверила: преподаватель Барсукова Екатерина Анатольевна Гомель 2021 Содержание Введение…………………………………………………………………………...…2 Характеристика вируса Sen V…..…………………………………………………. 5 Диагностика гепатита, вызванного Sen V………………………….………….. 6 Список литературы…………………………………………………………………..7 1 Введение Парентеральный вирусный гепатит – это воспалительное заболевание печени, которое вызывают вирусы, проникающие в организм человека через нарушения и повреждения целостности кожных и слизистых покровов. Инфицирование наступает при контакте с зараженной кровью или другими биологическими жидкостями. Этиология К группе парентеральных вирусов относятся вирусы гепатита В, D, С, F, G, TTV, Sen V. Устойчивость вирусов в окружающей среде чрезвычайно высокая – при комнатной температуре на предметах и поверхностях инфекционность вирусов сохраняется от 3 до 6 месяцев, в замороженном виде – 15-25 лет. Источник инфекции Источником инфекции парентерального вирусного гепатита является человек - больной острым, хроническим гепатитом или носитель вируса, у которого клинические проявления заболевания отсутствуют. Вирус содержится во всех биологических жидкостях источника инфекции: крови, сперме, вагинальном секрете. В меньших концентрациях - в слюне, моче, грудном молоке, поте, желчи. Для заражения достаточно мельчайшей капли крови (10-6 – 10-7 мл. крови), порой даже невидимой невооруженным глазом. Пути передачи инфекции Заражение происходит естественными и искусственными путями. Естественные пути реализуются при (1) половом контакте, (2) от матери к ребенку (внутриутробно через плаценту или во время родов при прохождении через родовые пути). Важное место имеет (3) контактно-бытовой путь передачи инфекции. Контактно-бытовой путь реализуется: А) при использовании общих с больным предметов личной гигиены (бритвенных приборов, маникюрных принадлежностей, мочалок, расчесок, постельных принадлежностей); Б) при соприкосновении с любыми поверхностями помещений и предметов, загрязненными кровью (при наличии у контактных порезов и микротравм); В) возможно заражение и во время уличных драк; 2 Искусственные пути передачи в настоящее время чаще всего реализуются при проведении (4) немедицинских парентеральных вмешательств, в частности – во время инъекционного введение наркотиков с использованием общих шприцев, игл или уже инфицированного наркотика. Существует риск заражения во время проведения татуировок, пирсинга, маникюра и педикюра загрязненным инструментарием. Некоторый риск заражения существует и при проведении медицинских манипуляций: при переливании крови, во время гемодиализа, при различных хирургических вмешательствах. Однако в нашей стране этот риск сведен к минимуму, т.к. для проведения инъекций и манипуляций используются одноразовые сте-рильные шприцы, инструментарий и перевязочный материал, а для предупреждения заражения через донорскую кровь- вся кровь при каждой кроводаче исследуется на маркеры ПВГ. О симптомах заболевания Заболевание может протекать в клинически выраженной и бессимптомной форме. Инкубационный период (период от момента заражения до первых клинических проявлений) в среднем составляет от 6 недель до 6 месяцев. В течение этого времени вирус размножается и его концентрация в организме увеличивается. Наступает преджелтушный период (4-10 дней), в течение которого возникает чувство общей слабости, усталости, появляется тошнота, рвота, ухудшается аппетит, вплоть до его отсутствия, беспокоят боли в крупных суставах, особенно в утренние часы, внешне суставы не изменяются, возможен и гриппоподобный вариант начала заболевания. Постепенно увеличивается печень и селезенка, появляется зуд кожи, моча темнеет и становится «цвета пива», кал обесцвечивается. Иногда может появляться сыпь типа «крапивницы». И, наконец, наступает желтушный период, длительностью от 2 недель до 1,5 месяца. Вначале желтеют глаза, слизистая оболочек твердого неба и уздечки языка, позднее окрашивается кожа. Желтуха сопровождается кожным зудом и ухудшением общего состояния, нарастают симптомы интоксикации (головная боль, сонливость, повышение температуры). Возникает чувство тяжести и ноющие или приступообразные боли в правом подреберьи, особенно усиливающиеся при пальпации печени. Изменяются биохимические показатели печени. Далее желтуха постепенно угасает и наступает период выздоровления. Однако острая инфекция у части больных переходит в носительство маркеров ПВГ либо в хронический 3 гепатит. Если для гепатита В характерна хронизация процесса в 5-10% случаев, для гепатита В+Д – в 60% случаев, то для гепатита С - в 80-90% случаев. Развитие цирроза печение и гепатоцеллюлярной карциномы – итог длительного персистирования вируса в организме. Профилактика. Основой профилактических мероприятий по предотвращению инфици-рования вирусом гепатита В является вакцинация. В г. Минске в рамках приказа Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 05.12.2006 №913 «О совершенствовании организации проведения профилактических прививок» прививаются против гепатита В: Новорожденные дети 13-летние подростки Дети и взрослые, в семьях которых есть носитель hbsag, больной ост-рым или хроническим гепатитом в. Дети и взрослые регулярно получающие кровь и ее препараты, а так-же находящиеся на гемодиализе и онкогематологические больные. Лица, у которых произошел контакт с материалом, контаминированным вирусом гепатита в. Медицинские работники, имеющие контакт с кровью и другой биологической жидкостью человека. Лица, занятые в производстве иммунобиологических препаратов из донорской и плацентарной крови. Студенты медицинских университетов и учащиеся средних медицинских учебных заведений. Пациенты перед плановой операцией, ранее не привитые К очень важным профилактическим мероприятиям относятся меры по предупреждению рискованного поведения: Необходимо избегать случайных половых связей, иметь одного надёжного полового партнёра. Использовать презерватив при половом контакте; Никогда не экспериментировать и не употреблять наркотики; Косметические процедуры (татуировки, пирсинг, маникюр, педикюр) проводить только в специальных учреждениях, имеющих лицензию на их проведение. 4 Пользоваться только индивидуальными предметами личной гигиены: бритвенными и маникюрными принадлежностями, ножницами, расческами, мочалками, полотенцами. Характеристика вируса Sen V Вирус SEN (SEN-V) - это недавно идентифицированный вирус с одноцепочечной кольцевой ДНК из семейства Circoviridae . Два варианта SEN-V (SENV-D и SENV-H) были проанализированы с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), чтобы изучить их роль в возникновении гепатита, связанного с переливанием крови. Исследование группы в США показало, что частота инфицирования SENV после переливания составила 30% (86 из 286) по сравнению с 3% (3 из 97) среди контрольной группы, не получавшей переливания (P <0,001). Риск трансфузии увеличивался с увеличением количества перелитых единиц (P <0,0001), и связь донор-реципиент для SEN-V была показана гомологией последовательностей. Распространенность SEN-V у 436 добровольцев-доноров составила 1,8%. Среди пациентов с гемотрансфузионным гепатитом не от A до E, 11 из 12 (92%) были инфицированы SEN-V во время переливания, по сравнению с 55 из 225 (24%) реципиентов, у которых не развился гепатит (P <0,001). Не наблюдалось влияния SEN-V на тяжесть или устойчивость сопутствующей инфекции вируса гепатита С (ВГС). У 31 инфицированного реципиента SEN-V сохранялся более 1 года у 45% и до 12 лет у 13%. SEN-V-специфическая РНК (возможный репликативный промежуточный продукт) была выделена из ткани печени. Таким образом, SENV-D и -H присутствовали почти у 2% доноров в США, однозначно передавались при переливании крови и часто сохранялись. У подавляющего большинства реципиентов, инфицированных SEN-V, гепатит не развился. У 31 инфицированного реципиента SEN-V сохранялся более 1 года у 45% и до 12 лет у 13%. SEN-V-специфическая РНК (возможный репликативный промежуточный продукт) была выделена из ткани печени. Таким образом, SENV-D и -H присутствовали почти у 2% доноров в США, однозначно передавались при переливании крови и часто сохранялись. 5 Диагностика гепатита, вызванного Sen V Выделение ДНК SENV: Сыворотку крови (100 мкл) смешивают с 300 мкл буфера для лизиса (13,3 ммоль/л Трис-HCl [pH 8,0], 6,7 ммоль/л этилендиаминтетрауксусной кислоты, 0,67% додецилсульфата натрия, 133 мкг/мл протеиназы-К) и инкубировали при 56°C в течение 4 ч. После двух фенолхлороформных экстракций следовала одна хлороформная экстракция, и ДНК осаждали этанолом. Осадок растворяли в 25 мкл буфера ТЕ (10 ммоль/л трисHCl [pH 8,0], 1 ммоль/л этилендиаминтетрауксусной кислоты). Обнаружение ДНК SENV: ДНК SenV определяется методом ПЦР с использованием праймеров, Для общего скрининга SenV использовалась пара праймеров к консервативной области среди всех генотипов SENV A-I со смысловым праймером AI-1F и антисмысловым праймером AI-1R. ПЦР смесь состоит из 0,5 мкМ прямого праймера и 0,5 мкМ обратного праймера в 50 мкл смеси, содержащей ПЦР буфер, 0,25 ммоль/л dNTPs, 2,5 ммоль/л хлорида магния, 1,25 U Taq полимеразы (Promega, Madison, Wis., USA) и 5 мкл экстрагированной ДНК. Амплификация ПЦР состояла из одного цикла 60 сек при 95°C для денатурации, затем 35 циклов амплификации при 95°C в течение 30 сек, 68°C в течение 60 сек. Для обнаружения SENV-D праймеры D10S и L2AS используются в 50 мкл ПЦР-смеси, содержащей ПЦР-буфер, 0,25 ммоль/л dNTPs, 2,5 ммоль/л хлорида магния, 1,25 U Taq-полимеразы (Promega) и 5 мкл выделенной ДНК. ПЦР проводили в термоциклере (Eppendorf Mastercycler, Гамбург, Германия) по следующему протоколу: 40 циклов 94°C в течение 1 мин, 58°C в течение 1 мин и 72°C в течение 1,5 мин, затем реакция удлинения при 72°C в течение 10 мин. Выявление SENV-H проводилось с использованием праймеров C5S и L2AS (Таблица 1) и тех же условий ПЦР, что описаны выше. Продукты ПЦР разделяли на 2% агарозном геле и окрашивали бромистым этидием. 6 Список литературы 1. Аллен, Ж.-П., Томас, И. и Сауледа, С. (2002): Нуклеиново-кислотное тестирование для выявления новых вирусных инфекций. Трансфуз. Med., 12, 275-283; 2. Умемура, Т., Йео, А.-Э.-Т., Соттини, А., Моратто, Д., Танака, Й., Ванг, Р.Й.-Х., Ших, Ж.-В.-К., Донахью, П., Прими, Д. и Альтер, Х.-Дж. (2001): Инфекция вируса SEN и ее связь с гепатитом, связанным с переливанием крови. Гепатология, 33, 1303-1311; 3. Kojima, H., Kaita, K.-D.-E., Zhang, M., Giulivi, A. andMinuk, G.-Y. (2003). Геномный анализ недавно идентифицированного вируса (вирус SEN) и генотипов D и H с помощью полимеразной цепной реакции. Antiviral Res., 60, 27-33; 4. Пировано, С., Беллинцони, М., Баллерини, К., Кариани, Е., Дузе, М., Альбертини, А. и Имберти, Л. (2002): Передача вируса SEN от матерей к их детям. J. Med. Virol., 66, 421-427. 5. Yoshida, H., Kato, N., Shiratori, Y., Shao, R., Wang,Y., Shiina, S. and Omata, M. (2002): Слабая связь между виремией вируса SEN и заболеванием печени. J. Clin. Microbiol., 40, 3140-3145. 7
