№ 1 – Непосредственно перед посевом берут среднюю пробу почвы весом 1 г (взависимости от требуемого исходного разведения). 2 – Для получения исходного разведения образца: 1 г почвы помещают в колбу со 100 мл стерильной воды: а – для этого 1 г почвы растирают пестиком в ступке со стерильной водопроводной водой в течение 3-5 мин (1 г торфа – 5-7 мин) б – колбу с почвенной суспензией ставят на орбитальный встряхиватель и выдерживают в течение 10-15 мин 3 – Подписать пробирки с стерильной водой (№ образца, № разведения, т.е. 1, -3; 1, -4 ...) и чашки Петри (название среды, № образца, № разведения, т.е. МПА, 1, -3; …) 3 – В боксе из полученной почвенной суспензией готовят водные разведения: а – для этого из колбы отбирают 1 мл суспензии и переносят в первую пробирку (с подписью 1, -3) , сбрасывают наконечник б – встряхивают пробирку в – отбирают 1 мл суспензии и переносят в следующую пробирку (с подписью 1, -4) , сбрасывают наконечник г – … до 10–8 , т.е. 1, - 8 В первом случае в качестве исходного будет получено стократное разведение почвенного образца или 1 : 10– 2, т.е. 2-е разведение. Во втором случае будет получено разведение почвы 1 : 1000 или 1 : 10–3 , т.е. 3-е разведение. … до 1 : 10–8 , т.е. 8-е разведение. 4 – Приступают к посеву полученных суспензий: а – для этого из пробирки (с подписью 1, -5) отбирают 50 мкл суспензии и переносят на чашку Петри (с подписью 1, -5), при последовательном отборе суспензии от 10–8 до 10–2 разведений можно не менять наконечник б – обжечь шпатель Дригальского, втерают суспензию на всю поверхность чашки (в течение 0,5-1 мин), если необходимо перевернуть чашку в – переносят чашки в термостат с необходимым температурным режимом № 1 – Параллельно анализируемые пробы отбирают в металлические бюксы для определения влажности почвы : а – в таблицу вносят номер и шифр бюкса б – определяют вес пустого бюкса (на прогретых аналитических весах) в – берут среднюю пробу почвы весом 1 г, записывают в таблицу вес бюкса с влажной почвой г – открытые бюксы ставят в сушильный шкаф и выдерживают 2-3 часа при t = 105 °С д – закрытые бюксы отсуживают при комнатной температуре 10-15 мин, а затем 20-30 мин в эксикаторе (без доступа воздуха) е – определяют вес бюкса с сухой почвой (пункты г, д, е повторяют 3-5 раз - пока 3-я цифра после запятой будет постоянной), записывают вес в таблицу 2 – Определяют рН почвы: а – для почвы берут среднюю пробу почвы весом 20 г + 50 мл дистиллированной воды (1 : 2,5) – для торфа берут среднюю пробу почвы весом 5 г + 125 мл дистиллированной воды (1 : 25) б – перемешивают 15-20 мин в – фильтруют почвенную суспензию г – определяют рН (на прогретом рН-метре) № Оценка всхожести семян: 1 – В каждый флакон (пробирку) отсчитывают по 50 шт. семян (в 9 колб отбирают по 470 семян) 2 – Стерилизуют семена: а – в каждый флакон (пробирку) вносят по 5 мл 3%-ной Н2О2, выдерживают 1-2 мин (в колбу – 20-30 мл 3%-ной Н2О2) б – промывают стерильной водой в – в каждый флакон (пробирку) вносят по 5 мл 70%-ного этилового спирта, выдерживают 1-2 мин (в колбу – 20-30 мл 70%-ного этилового спирта) г – 3-4 раза промывают стерильной водой д – в каждый флакон (пробирку) вносят по 10 мл культуральной жидкости, выдерживают 20 мин (в колбу – 20-30 мл культуральной жидкости) 3 – Готовят растворы тестируемого вещества Б и Р: а – в мерную пробирку вносят 1 г (1 мл) вещества и доливают до 10 мл растворителя, встряхивают (получен раствор с концентрацией 10 %) б – из раствора с концентрацией 10 % отбирают 1 мл и переносят в следующую пробирку, доливают до 10 мл растворителя, встряхивают (раствор с концентрацией 1 %) в – из раствора с концентрацией 1 % отбирают 1 мл и переносят в следующую пробирку, доливают до 10 мл растворителя, встряхивают (раствор с концентрацией 0,1 %) г – из раствора с концентрацией 0,1 % отбирают 1 мл и переносят в следующую пробирку, доливают до 10 мл растворителя, встряхивают (раствор с концентрацией 0,01%) 4 – Готовят чашки Петри с фильтрами: а – вносят пинцетом стерильный фильтр, добавляют 2 мл стерильной Н2О 5 – Вносят пинцетом 2-ой стерильный фильтр, раскапывают равномерно по всей поверхности фильтра 0,5 мл раствора с концентрацией 0,01 % 6 – Подписать чашку Петри (№ образца, концентрация, т.е. 1; 0,01% Б или Р) 7 – Раскладывают на фильтр 50 семян (лучше группами по 2-4 шт.)
