SBT – типирование при помощи наборов Protrans Наборы Protrans Стрипы с леофилизированными праймерами Буфер для ПЦР Праймеры для секвенирующей реакции Первый этап – пцр со специфическими праймерами LSA – локус-специфичные праймеры GSA – групп-специфичные праймеры Наборы содержат индивидуальные стрипы с LSA и GSA праймерами, для каждого локуса стрип имеет свой цвет S3 наборы S4 наборы За счет разделения гаплотипов возможно дальнейшее секвенирование без неопределенностей 8 7 6 5 4 3 2 1 8 7 6 5 4 3 2 1 16 15 14 13 12 11 10 9 Нумерация лунок S4 Локус А Локус В Локус С Локус DRB1 Локус DQB1 Нумерация лунок S3 Очистка от нуклеотидов и праймеров после ПЦР (не специфическая реакция) Секвенирующая реакция (реакция обрыва цепи) • локус-cпецифический праймер • синтез в каждой лунке происходит в одном направлении • флуоресцентные нуклеотиды, останавливающих рост цепи (для каждого нуклеотида свой цвет) Генетический анализатор (капиллярный электрофорез) Спасибо за внимание! Схема локуса I класса Схема локуса II класса HLA Diagnostic Sequencing – Conception, Application and Automation, R. Blasczyk, 2003. Transfusion- and Tranplantationsmedizin.
