Азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе
advertisement
Азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе - для окрашивания образцов крови и костного мозга, парафиновых срезов и клиникоцитологических образцов. Азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе используется для исследования гематологических, гистологических и клинико-цитологических образцов в медицинской диагностике. Принцип Окрашивающий раствор по Гимзе часто используется для гематологических и гистологических исследований. Для диагностики гематологических образцов раствор по Гимзе используется в сочетании с другими окрашивающими растворами, например, с раствором Май-Грюнвальда для окрашивания по Паппенгейму. С помощью этого раствора ядра окрашивают в красный цвет, что происходит за счет молекулярного взаимодействия между эозином Y и комлексом азур В-ДНК. Оба красителя соединяются в комплекс Эозин Y - Азур B-ДНК , при этом интенсивность окрашивания зависит от содержания Азура В и соотношения Эозин Y: Азур B. Помимо этого, результат окрашивания может зависеть от фиксации, времени окрашивания, значения рН растворов или буферных субстанций. В гистологических и клинико-цитологических исследованиях раствор Гимзе используется без дополнительных красителей. При этом цвет различных клеточных компонентов зависит от предварительной обработки образца. В частности, цвет ядра может принимать различные оттенки синего, а ацидофильные компоненты – оттенки красного. Образцы Срезы фиксированных формалином и залитых парафином тканей (парафиновые срезы толщиной 3 – 4 мкм) или свежие образцы, мазки крови или костного мозга, клинико-цитологические образцы, например, седимент мочи, мокрота, импринты, смывы, образцы биопсии, полученные тонкоигольной аспирацией. Реактивы 109204 Азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе для микроскопии 100 мл, 500 мл, 1 л, 2,5 л Дополнительно необходимо: - для окрашивания мазков, высушенных на воздухе: 106009 Метанол для анализа EMSURE® ACS,ISO,Reag. Ph Eur 1 л, 2,5 л, 5 л 109468 Таблетки для приготовления буф.раствора с рН 7.2 для окрашивания по Вейзе 111374 Таблетки для приготовления буф.раствора с рН 6,8 для окрашивания по Вейзе 100 таблеток 100 таблеток - для окрашивания парафиновых срезов 100063 Уксусная кислота (ледяная), 100 %, безводная, для анализа EMSURE® ACS,ISO,Reag. Ph Eur 1 л, 2,5 л 109634 2-Пропанол для анализа EMSURE® ACS,ISO,Reag. Ph Eur 1 л, 2,5 л, 5 л - для окрашивания по Паппенгейму 101424 Эозин-метиленовый синий раствор Май-Грюнвальда для микроскопии 100 мл, 500 мл, 1 л, 2,5 л Подготовка образца Отбор образцов должен быть осуществлен квалифицированным персоналом. Все образцы должны быть четко маркированы. Для отбора и подготовки образцов должны быть использованы подходящие инструменты. При их использовании следуйте инструкциям производителей. Депарафинизация и регидратация срезов осуществляется стандартными методами. Примечания для окрашивания парафиновых срезов по Гимзе Всегда используйте чистый ксилол или NEO-CLEAR® (Cat. No. 109843) для промывочных растворов, т.к. любые следы этанола в растворах могут привести к обесцвечиванию в процессе подготовки. Предварительная обработка костного мозга и биоптата гребня подвздошной кости Оптимальный результат может быть достигнут при использовании мягкого декальцинирующего раствора OSTEOSOFT® (101728). Чтобы бережно удалить кальцификат, фиксированный биоптат сначала помещают в OSTEOSOFT® на 6 часов, после чего подвергают обработке в гистопроцессоре. Блоки тщательно нарезают и если требуется дополнительно помещаются в OSTEOSOFT® еще на 20 минут. Подготовка реактивов Азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе Окрашивающий раствор поставляется в виде концентрата и перед использованием должен быть разбавлен так как указано ниже. После разбавления его также необходимо отфильтровать. Буферный раствор Для приготовления прибл. 1000 мл раствора: 109468 Таблетки для приготовления буф.раствора с рН 7.2 или 111374 Таблетки для приготовления буф.раствора с рН 6,8 – в зависимости от требуемого цвета реакции Дистиллированная вода 1 таблетка 1000 мл Разбавление окрашивающего раствора по Гимзе для ручного окрашивания Для приготовления прибл. 200 мл раствора: Азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе 10 мл Буферный раствор 190 мл Всё хорошо перемешать, дать отстояться в течение 10 минут и отфильтровать, если это необходимо Разбавление окрашивающего раствора по Гимзе для автоматического окрашивания Для приготовления прибл. 300 мл раствора: Азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе 25 мл Буферный раствор Всё хорошо перемешать, дать отстояться в течение 10 минут и отфильтровать, если это необходимо 275 мл Уксусная кислота 0,1 % водная Для приготовления прибл. 1000 мл раствора: Уксусная кислота 100% Дистиллированная вода 1 мл 1000 мл Окрашивание по Гимзе Процедура для образцов, высушенных естественным путем Окрашивание вручную После каждого этапа окрашивания с предметных стекол нужно давать стечь избытку раствора, чтобы избежать перекрестного окрашивания растворов. Для достижения оптимальных результатов нужно придерживаться указанного времени окрашивания. Предметные стекла с образцами, высушенными на воздухе Метанол Разбавленный окрашивающий раствор Гимзе для ручного окрашивания Буферный раствор Буферный раствор Высушивание на воздухе (например, в течение ночи или при 50°С в сушильном шкафу) 3 мин 20 мин 1 мин 1 мин Окрашивание в окрашивающем автомате Предметные стекла с образцами, высушенными на воздухе Метанол Разбавленный окрашивающий раствор Гимзе для автоматического окрашивания Буферный раствор Проточная вода Сушка Время Станции Погружение 3 мин 20 мин 2 3 Вкл Вкл 1 мин 2 мин 3 мин 4 5 6 Вкл Вкл Для хранения гематологических образцов в течение нескольких месяцев рекомендуется использовать безводные заливочные среды (например, Neo-Mount®, Entellan®, DPX new, или Entellan® new) и покровные стекла. Если окрашенный образец не заливать, он остается стабильным около 3 дней, а при покрытии иммерсионным маслом – всего несколько часов. Для анализа окрашенных образцов при увеличении микроскопа >40x рекомендуется использовать иммерсионное масло. Результат - базофильные гранулоциты Буферный раствор рН 6.8 Красный до фиолетового Плазма голубая Плазма серо-голубая Плазма светло фиолетовая Гранулы красноватые до красно-коричневого Гранулы темно фиолетовые Тромбоциты Эритроциты Паразиты крови Фиолетовые Красноватые Ядро клетки светло красные Ядро клетки Лимфоциты Моноциты: - нейтрофильные гранулоциты - эозинофильные гранулоциты Буферный раствор 7.2 фиолетовый Плазма голубая Плазма серо-голубая Плазма светло фиолетовая Гранулы красноватые до красно-коричневого Гранулы темно фиолетовые Фиолетовые Красновато-коричневатые Ядро клетки светло красные Окрашивание по Паппенгейму (С растворами Май-Грюнвальда и Гимзе) Процедура для образцов, высушенных естественным путем Окрашивание в окрашивающих ячейках (кюветах) Чтобы избежать получения неадекватных результатов окрашивания, предметные стекла нужно быстро погружать и перемещать из раствора в раствор. После каждого этапа окрашивания с предметных стекол нужно давать стечь избытку раствора, чтобы избежать перекрестного окрашивания растворов. Для достижения оптимальных результатов нужно придерживаться указанного времени окрашивания. Предметные стекла с образцами, высушенными на воздухе Окрашивающий раствор по Май-Грюнвальду Разбавленный окрашивающий раствор Гимзе для ручного окрашивания Буферный раствор Буферный раствор Высушивание на воздухе (например, в течение ночи или при 50°С в сушильном шкафу) 3 мин 20 мин 1 мин 1 мин Окрашивание на окрашивающих стойках (штативах) Для достижения оптимальных результатов нужно придерживаться указанного времени окрашивания. Предметные стекла с образцами, высушенными на воздухе Окрашивающий раствор по Май-Грюнвальду Покрыть полностью 3 мин Буферный раствор 1 мл Смешать Разбавленный окрашивающий раствор Гимзе для Покрыть полностью 20 мин ручного окрашивания Буферный раствор Промыть Высушивание на воздухе (например, в течение ночи или при 50°С в сушильном шкафу) Для хранения гематологических образцов в течение нескольких месяцев рекомендуется использовать безводные заливочные среды (например, Neo-Mount®, Entellan®, DPX new, или Entellan® new) и покровные стекла. Если окрашенный образец не заливать, он остается стабильным около 3 дней, а при покрытии иммерсионным маслом – всего несколько часов. Для анализа окрашенных образцов при увеличении микроскопа >40x рекомендуется использовать иммерсионное масло. Результаты Ядро клетки Лимфоциты Моноциты: - нейтрофильные гранулоциты - эозинофильные гранулоциты - базофильные гранулоциты Тромбоциты Эритроциты Буферный раствор рН 6.8 Пурпурный до фиолетового Плазма голубая Плазма серо-голубая Плазма светло фиолетовая Гранулы кирпично-красные Гранулы темно фиолетовые до черного Фиолетовые Красноватые Буферный раствор 7.2 фиолетовый Плазма голубая Плазма серо-голубая Плазма светло фиолетовая Гранулы краснокоричневые Гранулы темно фиолетовые до черного Фиолетовые Красновато-серые Окрашивание по Гимзе Процедура Парафиновые срезы Окрашивание в 60 мл кювете (по Хеллендалю) После каждого этапа окрашивания с предметных стекол нужно давать стечь избытку раствора, чтобы избежать перекрестного окрашивания растворов. Депарафинизация гистологических образцов осуществляется обычным способом, а регидратация с помощью серии спиртовых растворов. Для достижения оптимальных результатов нужно придерживаться указанного времени и дегидратация окрашивания. Всегда используйте чистый ксилол или NEO-CLEAR® (Cat. No. 109843) для промывочных растворов, т.к. любые следы этанола в растворах могут привести к обесцвечиванию в процессе подготовки. Предметное стекло с гистологическим образцом Дистиллированная вода 10 сек Окрашивающий раствор Гимзе 15 мин (неразбавленный, фильтрованный) Уксусная кислота 0,1 % 10 сек Дистиллированная вода 10 сек 2-Пропанол 10 сек 2-Пропанол 10 сек 2-Пропанол 10 сек Ксилол или NEO-CLEAR® 5 мин Ксилол или NEO-CLEAR® 5 мин Закрепите с помощью среды Neo-Mount® влажные предметные стекла, обработанные NEOCLEAR®, или, например, с помощью среды Entellan® влажные предметные стекла, обработанные ксилолом, а также используйте покровные стекла После дегидратации и осветления ксилолом или с помощью NEO-CLEAR®, гистологический образец должен быть покрыт безводной заливочной средой и покровным стеклом. Лишь после этого он может храниться в течение длительного срока. Для анализа окрашенных образцов при увеличении микроскопа >40x рекомендуется использовать иммерсионное масло. Результат Ядро клетки, клетки Коллаген, остеоид Эозинофильная гранула Кислотные мукополисахариды, гранулы мастоцитов, хрящевая матрица Ацидофильные вещества Голубой до темно-синего Бледно-голубой Красный Красновато-фиолетовый Оранжево-красный Хранение Хранить азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе для микроскопии нужно при температуре от + 15°С до + 20°С.
