ВГС и иммуноблот

Опыт использования наборов
«RecomBlot HCV IgG» Mikrogen
Diagnostik(Германия) в качестве
подтверждающего теста в
диагностике HCV инфекции.
Гасилова Наталья Александровна
Врач КДЛ «ИНВИТРО-Москва»
ООО «Независимая лаборатория ИНВИТРО»
ВИРУС ГЕПАТИТА С
Семейство Flaviviridae
Геном РНК, 9500 н
Размер вируса - 50нм
Поверхностный гликопротеин Е1 / Е2
Нуклеокапсид (core)
Линейная РНК
СТРУКТУРА ГЕНОМА HCV
СТРУКТУРНЫЕ
сore
•
•
•
•
•
E1 E2/NS1
НЕСТРУКТУРНЫЕ
NS2
NS3
NS4
NS5
NS3- белок с активностью протеазы, хеликазы
NS4- неизвестная функция
NS5 – ферменты, в том числе РНК полимераза
Core –белки нуклеокапсида
Е1, Е2 – белки оболочки
Диагностика ВГС
Иммунохимическая
Молекулярнобиологическая
Анти ВГС сумм.
Анти-ВГС IgG
Анти ВГС IgM
Core Ag
РНК ВГС кач.
РНК ВГС кол. (вирусная
нагрузка)
Генотипирование
Определение устойчивости к
препаратам
( прямое секвенирование)
ПРИМЕНЕНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМ В
ДИАГНОСТИКЕ ВГС , ВГВ.
Приказ № 322
от 21.10.2002 г. МЗ РФ
«О применении в практике здравоохранения иммуно-ферментных тест-систем
для выявления антигена вируса гепатита В (HBsAg) и антител к вирусу
гепатита С (анти ВГС) в сыворотке крови человека»
• Обязательное использование подтверждающих тестов при
выявлении положительного результата
• Использовать для подтверждения положительного
результата анти ВГС тест-системы содержащие полный
спектр структурных и неструктурных белков
• Чувствительность тест-систем для определения HBsAg не
менее 0,1 нг/мл
• Список тест-систем допущенных к использованию на
территории РФ (прошли сравнительные испытания)
ПОДТВЕРЖДЕНИЕ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ
РЕЗУЛЬТАТОВ СКРИНИНГА анти ВГС (total)
• Национальный институт здоровья США
консенсус 2002 г.
– Высокая специфичность и чувствительность тестов
ИФА (99%), позволяет отказаться от проведения
подтверждающих тестов в группах риска
– Отрицательный результат является достаточным у
иммунокомпетентных лиц для исключения ВГС
– Ложноположительные результаты возможны у лиц
с аутоиммунной патологией, рекомендуется
проведение ПЦР
– RIBA полезное дополнение при исследовании
донорской крови
СХЕМА ПОДТВЕРЖДЕНИЯ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ
РЕЗУЛЬТАТОВ анти ВГС (total)
в практике «ИНВИТРО»
• Высоколожительный результат анти ВГС (total), с S/CO >
5 на « Architect» Abbott , подтверждается повторным
исследованием методом ИФА
• Слабопожительный результат анти ВГС (total), с S/CO < 5
подтверждается методом ИБ
ИММУНОБЛОТ (иммунный блоттинг) :
относится к методам серологической диагностики.
Этот метод позволяет определять антитела
различных классов (IgG/IgM) к отдельным
антигенам возбудителя (вирусы, бактерии,
простейшие), а не суммарно, как это происходит
при других методах (ИФА, РНГА, РПГА и т.д.)
Преимущества метода ИБ перед ИФА :
• Более специфичный метод , но менее
чувствительный.
• Позволяет сделать прогноз развития инфекции, в
зависимости от наличия антител к тем или иным
белкам ( при ВИЧ : полоса к р24, начало инфекции)
• Позволяет косвенно судить о
ложноположительном результате в ИФА при ВГС :
наличие только полос к NS5, признак
ложноположительного результата.
• Предположительно судить о времени
возникновения инфекции (токсоплазмоз)
«Recom Blot HCV IgG 2.0»
Mikrogen Diagnostika , Германия
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ ИБ
Оценка результата иммуноблота для
метода «Recom Blot HCV IgG 2.0»
+/-
+ или ++
NS3
0
3
Хеликаза
0
3
NS5-12
0
2
NS4
0
4
Core Ag
5
8
Сумма баллов
оценка
<5
отрицательный
6-9
пограничный (сомнит.)
>10
положительный
РЕЗУЛЬТАТ ИММУНОБЛОТА ВГС
• Положительный (комм: Рекомендуется
выполнить тест №321 – РНК ВГС кач.)
• Сомнительный (комм: Рекомендуется
повторить через 30 дней)
• Отрицательный
•
•
•
•
•
•
Программа «RecomScan»
Mikrogen Diagnostik, Германия
обеспечивает следующие этапы :
Сканирование и сохранение протокола
иммуноблота в виде файла.
Оценка наличия полос, в сравнении с
контрольным стрипом
Оценка интенсивности окрашивания полос
в баллах
Выдача заключения согласно сумме баллов
Возможность электронного сохранения
результата и автоматической передачи
результата в ЛИС
АППАРАТ BeeBlot
Bee Robotica Ltd, U.K.
«Recom Blot HCV IgG 2.0»
в практике «ИНВИТРО» с 2009 г.
• Исследовано более 6000 положительных в
скрининге ВГС пациентов
• Положительный результат скрининга
подтвержден методом иммуноблота в 72 %
• Выявлено ложноположительных
результатов– 28 %
КП (ИП) = ОПобр./ ОПкрит.
• Коэффициент позитивности – позволяет
увеличить информативность лабораторного
сообщения
• КП (ИП)-соотношение оптической плотности
исследуемого образца к критической
оптической плотности (cut off)
• ПК> 9, вероятность ВГС-инфекции около
92,6%
• КП <1,5 вероятность ложноположительных
результатов 11,8%
А.А.Потапов,Е.Б.Редченко,П.Г.Богуш,Л.К.Ковальчук «Иммунодиагностика вирусного гепатита С»
2008г.
Зависимость частоты ложноположительных
результатов скрининга ВГС от КП в практике
«ИНВИТРО»
8%
№ ПРОБ 1420
6%
21 %
КП 1-2
65 %
КП 2-3
КП 3-4
КП 4-5
Неопределенный результат
иммуноблота
• В группе «неотрицательных результатов» ИБ
составил - 42 %
• Возможен у лиц с недавней инфекцией ВГС
• Встречается у лиц в прошлом имевших контакт
с ВГС, но не заболевшим.
• Может рассматриваться, как
ложноположительный результат в группе лиц с
низким риском ВГС (аутоиммунная патология,
другие вирусные инфекции)
Благодарю за внимание!