Эффективность неинвазивных тестов для диагностики
advertisement
Mastertitelformat bearbeiten Барышникова Н. В. ПСПбГМУ им. И.П. Павлова Эффективность неинвазивных тестов для диагностики инфекции Helicobacter pylori Неинвазивные методы диагностики инфекции Helicobacter pylori 1. Дыхательные тесты: А. Уреазный дыхательный тест (13С,14С мочевина) Б. Аммонийный тест 2. Серологический метод 3. Исследование кала: А. Молекулярно-генетический метод (полимеразная цепная реакция) – исследование кала Б. Иммуноферментный анализ Слайд 2 Основные показания • Неинвазивные методы: скрининговое обследование взрослых обследование детей с жалобами на периодическую абдоминальную боль - оценка успешности эрадикации при отсутствии показаний к проведению контрольной фиброгастродуоденоскопии - научные показания (оценка распространенности инфекции, изучение ассоциации между наличием H. pylori и экстра-пищеварительными нарушениями и др.) - Слайд 3 Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori: дыхательные тесты Радиоизотопный уреазный дыхательный тест с мочевиной, меченой радиоактивным углеродом С13 или С14: считается наиболее точным для диагностики H. pylori из неинвазивных методов и известен с 1987 года Специфичность: 93-100% Чувствительность: 95-97% Основа метода: биохимический метод определения инфицированности H. pylori слизистой оболочки желудка по уреазной активности микроорганизма, а именно способности уреазы разлагать мочевину до NH4+ и HCO3- с последующим образованием из HCO3- СО2, который, попадая в кровоток, затем выделяется через легкие и может быть определен в выдыхаемом воздухе Слайд 4 Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori: дыхательные тесты Радиоизотопный уреазный дыхательный тест с мочевиной, меченой радиоактивным углеродом С13 или С14: (+): - точность и быстрота получения результатов -простота в исполнении Слайд 5 Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori: дыхательные тесты Радиоизотопный уреазный дыхательный тест с мочевиной, меченой радиоактивным углеродом С13 или С14: (-): -используемые реактивы достаточно дороги - результаты зависят от физической активности пациента -специфичность и чувствительность метода у детей до 5-8 лет может существенно снижаться -требуется специальное оборудование и подготовка медперсонала Слайд 6 Аммонийный «Хелик®-тест» разработан в России в 1997 году ООО «АМА» (Санкт-Петербург, рег. удостоверение № ФС 062б2002/0101-04 от 13.07.2004) Определение базального уровня паров аммиака в выдыхаемом воздухе Слайд 7 Прием раствора карбамида (мочевины): 0,5 г карбамида в 50 мл негазированн ой питьевой воды Гидролиз мочевины под действием уреазы H. pylori (NH2)2CO + H2O ↔ 2NH3↑ + CO2↑ Определение нагрузочного уровня паров аммиака в выдыхаемом воздухе Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori: дыхательные тесты «ХЕЛИК® -тест» (+): -быстрота получения результатов: результат доступен сразу -показатели не зависят от возраста, физической активности пациента и характера гастродуоденальной патологии -более дешевый и безопасный метод по сравнению с радиоизотопным уреазным дыхательным тестом с мочевиной, меченой радиоактивным углеродом С13 или С14 Слайд 8 Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori: дыхательные тесты «ХЕЛИК® -тест» (+): -Без привлечений лаборатории -Обследование «у постели больного» -Не требуется транспортировка дыхательных проб -Обследования силами среднего медицинского персонала -Тест-системы компактны и портативны Слайд 9 Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori: дыхательные тесты «ХЕЛИК® -тест» (-): -относительная сложность выполнения у детей в возрасте до 5 лет Слайд 10 График, полученный при обследовании H. pylori-негативного пациента с использованием ХЕЛИК®-аппарата Слайд 11 График, полученный при обследовании H. pylori-позитивного пациента с использованием ХЕЛИК®-аппарата Слайд 12 Картина, полученная при обследовании H. pylori-позитивного пациента с использованием ХЕЛИК®-индикаторных трубок Слайд 13 Цель работы Определить чувствительность и специфичность неинвазивного аммонийного теста «Хелик-тест» в диагностике инфекции Helicobacter pylori Слайд 14 Материалы и методы • 171 пациентов с диспепсией в России • 69 пациентов с диспепсией в Белоруссии • Подтверждение наличия инфекции HP гистологическим методом (анализ биоптатов из тела и антрального отдела желудка) • Проведение неинвазивного аммонийного теста • За 2 недели до проведения обследования пациентам не назначались антибиотики, препараты висмута, ингибиторов протонной помпы Слайд 15 Совпадение результатов гистологического исследования и аммонийного теста 100 100 97 88 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Hystological method Слайд 16 Breath ammonium test in Russia Breath ammonium test in Belarus Чувствительность и специфичность аммонийного теста 97 100 92 97 93 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Sensitivity in Russia Слайд 17 Specificity in Russia Sensitivity in Belarus Specificity in Belarus ? Может ли аммиак из желудка достигать ротовой полости в достаточной концентрации Слайд 18 Цель работы Оценить эффективность модифицированного аммонийного теста как метода определения наличия уреазапродуцирующей микрофлоры в желудке Слайд 19 Материалы и методы 1. Случайным отбором была образована группа из 14 пациентов (8 - женщин, 6 – мужчин) гастроэнтерологического отделения стационара в возрасте от 20 до 76 лет. 2. Каждому из пациентов была проведена фиброгастродуоденоскопия с взятием двух биоптатов по одному из антрального отдела и тела желудка для последующего гистологического исследования (метод контроля) Слайд 20 Материалы и методы 3. На заключительном этапе эндоскопического исследования, каждому из пациентов было проведено ополаскивание стенок желудка 1% водным раствором карбамида в объеме 50 мл. 4. До начала проведения эндоскопического исследования и после его окончания, у каждого из пациентов в течение 9 минут измерялся уровень аммиака в воздухе ротовой полости при назальном дыхании. Слайд 21 Результаты По результатам морфологического исследования биоптатов установлено, что 9 из 14 пациентов (64.3%) оказались инфицированными бактерией Helicobacter рylori при разной степени обсемененности. По результатам исследования изменений уровня аммиака в воздухе ротовой полости установлено, что статистически достоверный (p < 0.001) прирост концентрации аммиака наблюдался у 12 из 14 пациентов (85.7%). Слайд 22 Динамика концентрации NH3 в воздухе ротовой полости до и после ополаскивания стенок желудка раствором карбамида 60 Уровень концентрации NH3 (у.е.) Базальный уровень Нагрузочный уровень 50 40 30 20 Пациент 086. Женщина 44 года. Диагноз: гастрит. По данным гистологического обследования HP-статус отрицательный. Обследована 14.08.2013. 10 0 1 61 121 181 241 301 361 Время обследования (сек) Слайд 23 421 481 541 Обсуждение • Установлено наличие стабильного выхода свободного аммиака из желудка в ротовую полость. • При ополаскивании стенок желудка раствором карбамида, частота «положительных» результатов (0.86), свидетельствующих о протекании процесса гидролиза карбамида в гастродуоденальной области, превосходит частоту обнаружения инфекционного агента при гистопатологическом исследовании (0.64). Слайд 24 Acta Gastroenterol Latinoam. 2015 Mar;45(1):12-7. Пилотное исследование по детекции Helicobacter pylori с использованием аммонийного дыхательного теста Daino DF, Soifer L, Pedestá J, Rome J. • Измерение аммиака в ротовой полости до и после приема мочевины неизмененного изотопного состава применимо для диагностики инфекции НР • Специфичность - of 88.9% • Чувствительность - 71.43% Слайд 25 J Breath Res. 2015 Dec 15;9(4):047111. Важность развития нового поколения дыхательных тестов Kushch I, Korenev N, Kamarchuk L, Pospelov A, Kravchenko A, Bajenov L, Kabulov M, Amann A, Kamarchuk G. • При проведении уреазных дыхательных тестов могут быть получены как ложно-позитивные, так и ложнонегативные результаты • Существует необходимость разработки нового поколения дыхательных тестов для детекции H. pylori и дифференцирования непатогенных и патогенных штаммов • Проведено пилотное исследование по оценке диагностического потенциала нового метода, базирующегося на определении «не-уреазных» продуктов жизнедеятельности H. pylori в выдыхаемом воздухе Слайд 26 J Breath Res. 2015 Dec 15;9(4):047111. Важность развития нового поколения дыхательных тестов Kushch I, Korenev N, Kamarchuk L, Pospelov A, Kravchenko A, Bajenov L, Kabulov M, Amann A, Kamarchuk G. • Были определены характеристики дыхания подростков с H. pylori-позитивной и H. pylori-негативной функциональной диспепсией с анализом статуса cytotoxin-associated gene A (сagA) с использованием инновационного наносенсора на основе солей органического проводника тетрацианохинодиметана. • Обнаружено, что время восстановления сеснсора имеет диагностическую ценность при диагностике H. pyloriассоциированных заболеваний: значимое удлинения времени восстановления сенсора была установлена для сagA-позитивных штаммов по сравнению с сagAнегативными штаммами. Слайд 27 Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori: определение микроорганизма в кале Для определения H. pylori в кале используется иммуноферментный анализ выявления антигена H. pylori и молекулярно-генетический метод (полимеразная цепная реакция). Иммуноферментный анализ выявления антигена H. pylori в кале является высокочувствительным и специфичным методом, однако малоинформативен при замедлении эвакуации каловых масс в связи с разрушением антигенов. Полимеразная цепная реакция в кале – относительно новый метод, чувствительность (61-96%) которого четко не определена. Слайд 28 Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori: серологический метод Специфичность: 93-94% Чувствительность: 59-71% Основа метода: определение антител IgG к H. pylori и IgG к цитотоксину CagA H. pylori в сыворотке крови (+): -удобство проведения скринингового обследования в популяции (-): -мало информативен у детей в связи со слабым иммунным ответом -невозможность различить прошедшую или текущую инфекцию, следовательно, метод не может быть рекомендован для оценки эффективности эрадикации H. pylori Слайд 29 Метод газовой хроматографии – масс-спектрометрии (ГХ-МС) В отличие от других известных способов диагностики инфекции, ГХ-МС метод универсален в отношении различной микрофлоры, не требует прекультивирования пробы, а также использования специфического биологического тестового материала: ферментов, сывороток, меток, питательных сред, экспериментальных животных и т.п. В анализе используются химические реактивы и аппаратура, общеупотребимая при хроматомасс-спектрометрическом рутинном анализе Слайд 30 ОБНАРУЖЕНИЕ 3-ГИДРОКСИСТЕАРИНОВОЙ КИСЛОТЫ – МАРКЕРА HELICOBACTER PYLORY В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ ЧЕЛОВЕКА • Клетки человека не производят 3-гидроксикислот . • В биологических жидкостях человека присутствует 3гидроксиоктадекановая кислота (h18), встречающаяся в клетках грамотрицательных микроорганизмов в составе липида-А липополисахарида клеточной стенки. • Helicobacter pylori содержит кислоту h18. • С помощью чувствительного метода газовой хроматографии - масс-спектрометрии (ГХ-МС) по селективным ионам возможно определение наличия h18 непосредственно в крови и/или моче. Осипов Г.А., Бойко Н.Б. Слайд 31 Слайд 32 32 Цель работы Провести определение некоторых микробных маркеров в крови и моче после успешной эрадикации Helicobacter pylori. Слайд 33 Материалы и методы 10 пациентов с хроническим гастродуоденитом, ассоциированным с H. pylori, у которых через два месяца после проведения тройной эрадикационной терапии имела место успешная эрадикация (определение микроорганизма осуществлялось с помощью дыхательного уреазного теста, гистологического исследования и полимеразной цепной реакции). Определение микробных маркеров в крови и моче проводилось методом газовой хроматографии масс-спектрометрии Слайд 34 Содержание микробных маркеров бифидобактерий в крови и моче, кл/г×10⁵ 6000 5067 5067 5000 4000 3000 кровь норма в крови моча норма в моче 2522 2000 1000 74 0 бифидобактерии Слайд 35 Содержание микробных маркеров лактобацилл в крови и моче, кл/г×10⁵ 7000 6613 6000 5000 4339 кровь норма в крови моча норма в моче 4000 3000 2000 1598 1000 233 0 лактобациллы Слайд 36 Содержание микробных маркеров грибов рода Candida в крови и моче, кл/г×10⁵ 600 549 500 400 кровь норма в крови моча норма в моче 300 194 200 109 100 83 0 грибы рода Candida Слайд 37 Содержание микробных маркеров Helicobacter pylori в крови и моче, кл/г×10⁵ 18 17 16 14 14 12 кровь норма в крови моча норма в моче 10 8 6 4 2 0 0 0 Helicobacter pylori Слайд 38 Обсуждение Значимое снижение уровня бифидобактерий и лактобацилл как в крови, так и в моче может быть следствием развития дисбиотических изменений желудочно-кишечного тракта после курса антибактериальной терапии. Отсутствие избыточного роста дрожжеподобных грибов может говорить о низком риске развития кандидозного дисбиоза кишечника после курса стандартной антихеликобактерной терапии. Слайд 39 Обсуждение Наличие микробных маркеров H. pylori в моче при отсутствии их в крови требует дальнейшего изучения с целью исключения транслокации микроорганизма из желудочно-кишечного тракта в мочевыделительную систему. Слайд 40 Детекция H. pylori в биологических жидкостях • Определение анти-H. pylori антител в моче • Определение анти-H. pylori антител в слюне • Исследование подъязычной биопленки, дентальных карманов, желудочного сока и аденотонзилярной ткани Слайд 41 NB! Пациенты, получающие ингибиторы протонной помпы, антибиотики, к которым чувствителен H. pylori, препараты висмута, должны отменить их за 2 недели до предполагаемого исследования по выявлению H. pylori, т.к. эти препараты могут стать причиной ложнонегативных результатов для всех диагностических тестов, за исключением серологического метода. Слайд 42 Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori: выводы NB! Контроль эрадикации H. pylori должен осуществляться не ранее, чем через 1-2 месяца после окончания терапии и преимущественно за счет неинвазивных методов, если нет необходимости в проведении контрольной фиброгастродуоденоскопии, что особенно актуально в детском возрасте Слайд 43 СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ Слайд 44 44
