моделирование папилломавирусной инфекции

МОДЕЛИРОВАНИЕ ПАПИЛЛОМАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ IN
VITRO И ИЗУЧЕНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ
ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ПРОТЕФЛАЗИД® НА
РЕПРОДУКЦИЮ ВИРУСА ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА[1]
В настоящее время общепризнанным считается, что вирусы папилломы
человека (ВПЧ) не имеют экспериментальных моделей in vitro и in vivo.
Однако существующие исследования свидетельствуют о том, что
культивирование кусочков кондилом, содержащих ВПЧ 11 типа, на
поверхности фибробластов, а также заражение методом трансфекции
керахоцитов ДНК из клеток, инфицированных вирусом папилломы 16,
приводило к включению вирусной ДНК в геном клетки и экспрессии
ВПЧ. Для подтверждения этих результатов нами были продолжены
исследования по культивированию вирусов папилломы методом
трансфекции.
В результате проведенных исследований получена экспериментальная
модель культивирования вируса папилломы человека. Продуцирующая
ВПЧ-культура клеток получена методом трансфекции ДНК,
выделенных из инфицированных клеток больных, суспензионных
культур клеток МТ-4 (суспензионная культура лимфобластоидных клеток
человека) и перевиваемых клеток ВНК (клетки почки хомяка).
Тестирование ВПЧ осуществляли методом ПЦР, по цитопатическому
действию вируса и цитологической характеристике клеток митотический индекс и аномальные митозы. Было показано, что
изоляты ВПЧ тестировались праймерами к ВПЧ 16 (1 образец),
праймерами к 31, 35, 39, 59, 18, 33, 45, 52, 58, 67 генотипам (4 образец).
Отличительной чертой цитопатического действия культивируемых ВПЧ
является разный характер воздействия на клетки. Высокие дозы вирусов
вызывали дегенерацию клеток, а низкие приводили к образованию
фокусов трансформации.
Изучение цитологической характеристики инфицированных ВПЧ клеток
ВНК позволило установить, что одной из главных характеристик
инфицированных клеток является их способность к пролиферации и
высокий уровень аномальных митозов.
Предпосылкой для изучения специфического влияния препарата
Протефлазид®на ВПЧ стало изучение результатов механизмов
действия биологически активного вещества экстракта Протефлазид.
Показано, что биологически активное вещество экстракта
Протефлазид является активным индуктором α-интерферона, который
стимулирует экспрессию генов PRK и РНКазы L, значительно (на
20%) превышающую уровень экспрессии этих генов высокоактивным
индуктором интерферона polyI: polyC. Биологически активное
вещество экстракта Протефлазид эффективно ингибирует синтез РНК
в модельной системе транскрипции бактериофага Т7 и синтеза ДНК в
условиях ПЦР (Tag-полимераза). Методами компьютерной биологии
1
очерчен вероятный механизм угнетения синтеза РНК - образование
стабильного комплекса: лиганд с участком энзима - сайтом
связывания субстрата.
Биологически активное вещество экстракта Протефлазид в высоких
дозах (150 мкамоль/л) тормозит рост клеток, индуцируя в них апоптоз,
при этом процесс апоптоза связан с активизацией каспазы-9 [2].
Полученные данные свидетельствуют о том, что лекарственный
препарат Протефлазид® способен поражать в инфицированных
клетках мишени – РНК и ДНК-полимеразы.
Для определения влияния препарата Протефлазид® на репродукцию
ВПЧ использовали разные схемы обработки препаратом: одновременное
введение препарата и вируса, введение препарата через 1 час после
заражения вирусом, трехкратное введение препаратов через 1 сутки после
инфицирования ВПЧ.
Обработка препаратом Протефлазид® в течение короткого срока
культивирования (4-5 суток) не приводила, по данным определения ДНК
ВПЧ в ПЦР, к ингибиции репродукции культивируемого ВПЧ.
Длительное культивирование вируса с препаратами в клетках ВНК (до 15
суток) приводило к угнетению репродукции ВПЧ на 2 Ig ID50.
Цитологическими исследованиями установлено, что под действием
препарата Протефлазид® уровень аномальных митозов инфицированных
ВПЧ клеток был такой же, как и у интактных клеток. Результатом
воздействия препарата Протефлазид® являлось существенное уменьшение
митотической активности и уровня аномальных форм митозов
инфицированных ВПЧ клеток. Эти результаты свидетельствуют об
угнетении пролиферативного и деструктивного действия ВПЧ на клетки,
чтобы предполагать о клинической эффективности специфического
действия препарата Протефлазид® на онкогенные папилломовирусы
человека.
Литература
1. ОТЧЕТ «Доклиническое изучение препарата Протефлазид® на
модели папилломавирусов».
Государственное учреждение «Институт эпидемиологии и инфекционных
болезней им. Л.В. Громашевского Академии медицинских наук Украины»
Руководитель НИР - зав. лабораторией экспериментальной химиотерапии
вирусных инфекций ГУ «ИЭИБ АМНУ» доктор мед. наук С.Л. Рыбалко
Киев- 2010
2. ОТЧЕТ о научно-исследовательской работе «ИЗУЧЕНИЕ
МЕХАНИЗМОВ ДЕЙСТВИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ
ВЕЩЕСТВ ЛЕЧЕБНОЙ СУБСТАНЦИИ ПРОТЕФЛАЗИДА».
2
Академия медицинских наук Украины
Государственное учреждение «Институт эпидемиологии и инфекционных
болезней им. Л.В. Громашевского»
03680, г. Киев, ул. Амосова, 5
Научный руководитель работы - д-р мед. наук. С.Л. Рыбалко
Киев -2010
3