Задачка про составление рестрикционной карты v2.0.

HindIII (H)
Pst I (P)
EcoRI (RI)
BamHI (B)
Полилинкер
= MCS
Дано: Плазмида размером 3000 п.о.; В полилинкере (MCS) между H и B сайтами
встроена вставка 1700 п.о. Плазмиду со вставкой подвергли гидролизу
эндонуклеазами рестрикции (Э.Р.), затем провели фракционирование
получившихся фрагментов ДНК в 1% агарозном геле и окрасили бромистым
этидием (флуоресцирует в UV свете). Размер получившихся фрагментов узнавали
путем сравнения с маркером молекулярного веса.
На основании полученных результатов (сл. слайд) построить рестрикционную
карту плазмиды со вставкой, т.е. определить: куда встроена вставка (между
какими сайтами Э.Р. в полилинкере); есть ли сайты H, P, RI и B во вставке и, если
есть, то на каком расстоянии от концов вставки.
Например, гидролиз плазмиды со вставкой эндонуклеазой рестрикции Hind III дает
три линейных фрагмента ДНК, длинной 3300 и 1400 п.о. (первая строчка) и т.д. Если в
результата гидролиза получается два фрагмента с одинаковым размером, то эта
полоса будет более интенсивно окрашиваться, что показано жирным шрифтом.
Э.Р.
Размер линейных фрагментов ДНК
H
3300
1400
B
3200
1100
RI
3600
1100
P
4700
RI+P
3000
1100
600
B+H
3000
1100
300
B+RI
3200
700
400
B+P
3000
1100
400
200
RI+H
3000
800
600
300
H+P
3300
1400
400
200
100