BioWhittaker Training Courses Краткая история метода
advertisement
Краткая история метода определения эндотоксинов Часть 1 BioWhittaker Training Courses История В течение 2,500 лет жар считали и наказанием и благословением Гиппократ считал, что жар способствовал выведению излишней жидкости из организма (в те времена это считалось причиной болезней) Около 500 лет до н.э. Parmenides 500 B.C. Сказал: “Если бы я знал способ вызвать жар, я бы смог вылечить все болезни” BioWhittaker Training Courses 2 Исследования причин жара Ранние исследования причин жара происходили на основе наблюдения случаев жара вследствие потребления испорченных продуктов В 1809 и 1822 Ouch Gaspard ввел собаке протухший продукт, вызвавший повышение температуры и болезнь BioWhittaker Training Courses 3 Исследования причин жара В 1823 Francois Magendie заметил, что загрянения припортовых районов могут быть причиной распространения тифа, холеры, дизентерии и др. Magendie заметил, что протухшая рыбная вода в особенности способна вызвать жар ? = BioWhittaker Training Courses 4 Лечение Pyresis Жар по-гречески Pyros а лихорадка Pyreto В начале 19 века французские фармацевты Pelletier и Caventue смогли выделить хинин из коры хинного дерева Обнаружены жаропонижающие свойства хинина BioWhittaker Training Courses 5 Определение механизма возникновения жара В понимании механизма возникновения жара и в частности роли бактерий сыграли роль несколько факторов: Гигиена и санитарный контроль инфекционных болезней Исследования бактериальных токсинов Возникновение такого явления как жар после инъекций Разработка терапевтического лечения жара Определена связь инъекционных препаратов и возникновением жара BioWhittaker Training Courses 6 Открытие эндотоксина Датский исследователь профессор Panum определил, что вещество, вызывающее жар имеет следующие свойства: Термоустойчивость Растворимость в воде Нерастворимость в спирте Отличается от живых бактерий Все эти качества присущи веществу, которое сегодня известно как эндотоксин BioWhittaker Training Courses 7 Эндотоксин Два европейских ученых независимо друг от друга изучали бактериальные токсины В 1892 Pfeiffer открыл, что в Vibrio Cholerae два вида токсинов: Термонестабильный экзотоксин Термоустойчивое вещество, образующееся в результате распада клеточной стенки Pfeiffer назвал второе вещество эндотоксином, что было некорректно, т.к. эндотоксин формирует внешнюю клеточную стенку бактерии BioWhittaker Training Courses 8 Эндотоксин Ученый из Болонского университета Centanni выделил термоустойчивый токсин из Salmonella Typhi Centanni назвал это вещество “Pyrotoxina” и смог выделить стерильный белый порошок путем спиртового фракционирования из ряда бактерий, включая E.Coli. Это и оказалось эндотоксином К сожалению, большинство его работ были востребованы намного позже BioWhittaker Training Courses 9 Инъекционная лихорадка В начале 20 века в результате появления парентеральных препаратов, например глюкозы, привело к появлению такого явления как инъекционный жар В 1912 Hort и Penfold опубликовали результаты исследований «микроорганизмы и их влияние на возникновение жара», из которых следовало, что токсичность ассоциируется только с грамотрицательными бактериями Они открыли первый метод определения пирогенной реакции – предшественника тестирования пирогенности на кроликах по USP в 1942 BioWhittaker Training Courses 10 Инъекционная лихорадка Работа Hort и Penfold была недооценена до 1923, когда Francis Siebert из США исследовал причины пригенности дистиллированой воды Она доказала, что бактериальное загрязнение действительно являлось причиной возникновения жара Стало ясно что в грам-отрицательных бактериях содержатся высокомолекулярные эндотоксинные комплексы, которые вызывают токсичную, пирогенную и иммунологическую реакцию BioWhittaker Training Courses 11 Фармацевтическое производство L. Rademacher подтвердил правильность выводов Siebarts и доказал необходимость предотвращения бактериального загрязнения на каждом этапе фармацевтического производства Он доказал, что стерильность не является гарантией апирогенности Однако, потребовалось 20 лет для того, чтобы NIH и 14 фармпроизводителей ввели тестирование пирогенности, в результате чего появился тест пирогенности на кроликах. BioWhittaker Training Courses 12 Современные исследования После определения природы эндотоксинов ученые занялись исследованиями молекулы эндотоксина Первыми молекулу эндотоксина выделили Westphal и Luderitz (Max Planck Institute) – безпротеиновый липополисахарид Данный препарат для кроликов оказался пирогенным в нанограммных дозах BioWhittaker Training Courses 13
